SU910667A1 - Способ получени препарата иммобилизованного субтилизина - Google Patents
Способ получени препарата иммобилизованного субтилизина Download PDFInfo
- Publication number
- SU910667A1 SU910667A1 SU802995303A SU2995303A SU910667A1 SU 910667 A1 SU910667 A1 SU 910667A1 SU 802995303 A SU802995303 A SU 802995303A SU 2995303 A SU2995303 A SU 2995303A SU 910667 A1 SU910667 A1 SU 910667A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- subtilisin
- solution
- preparation
- immobilized
- film
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ИММОБИЛИЗОВАННОГО
I
Иэофетение относитс к обпастн химин пога1м юв, а именно к способу попуп чени препарата, вммобилкзованного субтипиэина .
Препарат иммобилизованного субтилизина используют в мед1шине при лечении гнойшлх ран.
Известен способ получени препарата икшобипизованного субтилизнна путем ковалентной иммобилизации субтилИдина на природном полимере til
Дл этого к 1ОО мг диазотированного аминоарильного производного крахма ла, суспензированного в 4 мл О,1 М фосфатного буфера (рН 7,8), медленно .прибавл ют 3 мл О,5%-нсво раствора субтилизина в том же буфере. Реакцию провод т при п емваив;ании в течение 1в ч при 4 С. Дл отделени неиммобипизованного белка нерастворимый препарат отфильтровывают на воронке Бюхнера, промывают раствором КС , а затем оистиллированной водой. Полученные препараСУБТИЛИЗИНА
ты содержат 1-1,5 мг фермента на грамм носител .
Недостатками этого способа вл ютс сложна технологи , невыюкое содерн ание субтилизина в препарате, а также то, что смола на основе крахмала не вл етс пленкообразующей и биоразлагаемой.
Известен способ получени препарата иммобилизованного субтилизина путем ковалентной иммобилизации субтипизина
to на карбоксиметилцеллюлозе Г2 .
Дл этого гидразид кислоты, полученной из нерастворимой карбсжсимегшщеплюпозы , содержащей 3,2 миллиэквивалента карбоксильных групп на грамм препаIS рата, суспензируют в 0,5 N НС2, а затем к суспензии по капл м при интенсивном перемеишвании добавл ют 5%-ный водный раствор NqNOf npH . По прошествии 20 мин реакцию заканчивают,
Claims (3)
- промыва целлюлозный порошок на ф лътре холодной дистиллированной водой. Полученный активированный носитель сразу помешают в 1%-ный раствор субтилизина при рН 8,5. Реакнию провод т в течение 2 ч при перемешивании. Препарат иммобилизованного субтипизина промывают на фильтре раствором NOW и дистиллированной водой. Препарат содержит 60 мг субтилизина на грамм носител . Недостатками этого способа вл ютс сложна технологи , невысокое содержание субтилизина, а также то, что используемый носитель не вл етс плёнкообразующим и биоразлагаемым. I. Наиболее близким по технической сущности и достигаемым результатам (базовый объект) вл етс способ получени препарата иммобилизованного субтилизина путедл ковалентной иммобилизации субтилизина на природном полимере диэтиламиноэтилсефадексе t3 . -ДЭАЭ-сефадекс, предварительно активированный бромцианом, помещают в 1%-ный раствор субтилизина при ,рН 10,0 Реакцию провод т в течение 20 час при 4 С и посто нном перемешивании. Полученный продукт промывают IMNqCC, 0,1М НаНСО и дистиллированной водой. Препарат иммобилизованного субтили&ина содержит 23 мг фермента на грамм носител . Недостатками этого способа вл ютс сложна технологи , включающа использование токсичного бромциана, невысокое содержание субтилизина в препарате и то что ДЭАЭ-целлюлоза не вл етс пленкообразующей и биоразлагаемой. Целью изобретени вл етс получени биоразлагаемого пленкообразующего препарата , повышение содержани субтилизина в препарате и упрощение технологии процесса. Цель достигаетс тем, что в способе получени препарата иммобилизованного .субтипизина путем ковалентной иммобилизации субтилизина на природном полимере О,О2-5%-ный водный раствор субтилизина смешивают с О,5-2,5%-ным . водным раствором коллагена в объемном отношении 0,25-20, воду удал ют испарением при 17-25° С, и полученную плен ку обрабатывают 1-10%-ным водным раствором глутаровогб альдегида в течение 30-60 с при рН 7-8 и 17-25°С. Перед использованием дл удалени низкомолекул рных примесей раствор кол лагена отдиализовывают против дистилли рованной воды. Пример 1. 2,5%-ный раствор коллагена, предварительно отдиализованный против дистилл1фованноЙ воды, смешивают с О,0.2%-ным водным раствором субтилизина, шт. 72, в объемном соотношении , равном 0,25. Полученный раствор перенос т в кювету из плексиглаза и сушат при в течение 2 дней. Высушенную пленку, содержащую субтилизин, погружают в 1%-ный раствор глутарового альдегида в фосфатном буфере (рН В,О) на 30 с при . Пленку от-. мывают от избытка глутарового альдегида дистиллированной водой. Полученный препарат иммобилизованного субтилизина содержит 1О мг фермента на 1 г коогшагена . Иммобилизованный субтилизин хран т в сухом виде при 4° С. П р и м е р«2. 0,5%-ный раствор коллагена , предварительно отдиализованный против дистиллированной воды, смешивают с 0,32%-ным раствором субтилизина, шт. 72, в объемном соотношении, равном 2О. Полученный раствор перенос т в кювету из. плексиглаза и сушат при 17° С в течение 5 дней. Высушенную пленку, содержащую субтилизин, погружают в 10%-ный раствор глутарового альдегида в фосфатном буфере (рН 7,0) на 6О с при . Пленку отмывают от глутарового альдегида дистиллированной водой. Получен1и.1Й препарат иммобилизованного субтилизина содержит 12 мг активного фермента на 1 г коллагена. Иммобилизованный субтилизин хран т в сухом виде при 4°С. П р и м е р 3. 0,6%-ный раствор коллагена, предварительно отдиализованный против дистиллированной воды, смешивают с водным раствором субтили-, зина, шт. 72, в объемном соотношении, равном 4. Полученный раствор перенос т в кювету из плексвглаза и сушат при 20®С в течение 3 Ш1ей. Высушенную пленку, содержащую субтипизин, погрузка ют в 10%-ный раствор глутарового аль дегида в фосфатном буфере (рН 7,8) на 30 с при . Пленку отмывают от избытка глутарового альдегида дистиллированной водой. Полученный препарат им мобилизованного субтшшзина содержит 34О мг активного фе(де1гга на 1 г коллагена . Иммобилизованный субтилизин хран т в сухом виде при Полученные препараты иммобилизованного субтилизина используют при лечегНИИ плоскостных кожно-мышечных гнойных ран в межлопаточной области кроликов . Все препараты полностью раствор ютс в течение одних суток, уменьша врем очищени и заживлени раны. Таким образом п, оведение процесса по способу изобретени позвол ет ynpocxv тить технологию получени препарата иммобилизованного субтилизина, повысить содержание субтилнзина в прш1аратв к получать биоразпагаемые ппенхообрвзукх ише препараты. Формулаизобретенй Способ получени Препарата иммобилизованного субтилизина путем ковалеит ной иммобилизации субтилизина на природном полимере, отличающийс тем, что, с целью получени биоразлагаемого пленкообразующего пр 1арата, повыщени содержани субтилизина в пре парату и упрощени технологии процесса, О,02-5,О%-ный ВОШ1ЫЙ раствор субтилизина смешивают с 0,5-2,5%-ным водным раствором коллагена в объемном соотношении 0,25-20, воду удал ют испарекием при 17-25°С и полученную пленку обработывакуг водным раствором глутарового альдегида в тенённе 30-60 с при рН 7-8 и 17-25 С. Источники информашш, прин51тые во вннмавве прн экспертизе/ KL.Goldstein and others.Water insbluble enzymes. Synthesis of a new cacrier and Us utilization for preparation of insoluble derivatives of papaln, trypsin and subttlopeptldase A, Biochemistry, 1970, 9, 2322233 ..
- 2.W.Bruffiroer and,orhers,Preparat Ipn and properties of carrier-bond enzymes , Eur.J. Blochee., 1972, 25, 129135 .
- 3. E. Svenssoo, Preparation and enzymatic properties of subtMlsIn Novo chemically attached to soluble DEAE-dextran and Insoluble DEAE-sephadex , Biochem. Btophys. Acta, 1978, «92, .
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU802995303A SU910667A1 (ru) | 1980-10-29 | 1980-10-29 | Способ получени препарата иммобилизованного субтилизина |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU802995303A SU910667A1 (ru) | 1980-10-29 | 1980-10-29 | Способ получени препарата иммобилизованного субтилизина |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU910667A1 true SU910667A1 (ru) | 1982-03-07 |
Family
ID=20922738
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU802995303A SU910667A1 (ru) | 1980-10-29 | 1980-10-29 | Способ получени препарата иммобилизованного субтилизина |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU910667A1 (ru) |
-
1980
- 1980-10-29 SU SU802995303A patent/SU910667A1/ru active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Mathur et al. | Chitin and chitosan, versatile polysaccharides from marine animals | |
US4004979A (en) | Preparation of active proteins cross-linked to inactive proteins | |
US5558861A (en) | Modified microbially-produced cellulose gel with human epidermal cells adsorbed thereon for use as a skin graft or vulnerary cover | |
US4226938A (en) | Method for immobilizing enzymes | |
EP1241178A1 (en) | Process for producing functional silk fibroin and utilization of the same | |
US4983524A (en) | Method of immobilizing enzymes on a support with iridoid aglycone cross-linking agents | |
US4337313A (en) | Immobilization of biocatalysts | |
JPS59113889A (ja) | 固定化酵素もしくは固定化微生物菌体の製造方法 | |
US4656130A (en) | Collagen coated cell growth plates | |
SU910667A1 (ru) | Способ получени препарата иммобилизованного субтилизина | |
DE2417265A1 (de) | Traegergebundene enzyme | |
CA2178396A1 (en) | Enhancing keratinocyte migration and proliferation with clostridiopeptidase-a-collagenase | |
US3833555A (en) | Polysaccharide cyclic carbamate containing compounds | |
JP2606213B2 (ja) | 修飾された微生物産生セルロースのゲルおよび動物細胞膜との複合体 | |
SU586182A1 (ru) | Способ получени иммобилизованной амилазы | |
Jancsik et al. | Enzyme immobilization by poly (vinyl alcohol) gel entrapment | |
Epton et al. | [7] Enzymes covalently bound to polyacrylic and polymethacrylic copolymers | |
ASTRUP et al. | Protein Metabolism of Tissue Cells in vitro | |
SU767208A1 (ru) | Способ получени глюкозы | |
JPS58205496A (ja) | 微生物の固定化方法 | |
GB1183258A (en) | The Production of a Polymer having Dihalo-S-Triazinyl Groups Bound Thereto | |
RU686377C (ru) | Способ получени препарата иммобилизованной протеазы BACILLUS SUBTILIS | |
SU1634715A1 (ru) | Способ получени иммобилизованных клеток, обладающих глюкозоизомеразной активностью | |
SU1326616A1 (ru) | Способ получени иммобилизованной рибозофосфатизомеразы | |
Sroková et al. | Study of the photochemical immobilization of alkaline proteinase and chymotrypsin on the solid phase of O-hydroxyethylcellulose |