Claims (1)
К ,4. Затем 10%-ный в зки( раствор казеина охлаждают до температуры 48-50 С и внос т в него по одной части кормовых дрожжей и фарша подже3 лудочной железы (активностью 20 ед/м по Фульд-Гроссу). После тщательного перемешив -ш устанавливают рН 7,2 7,4 с помощью 30%-ного раствора едкого натри . Ферментативный гидроли провод т в течение 4 ч, при темпера туре 48-50 С и при рН 7,2-7,4. После истечени указанного време ни гидролизат подкисл ют концентрированной сол ной кислотой (уд. вес. 1,14) до ,6-3,8, затем довод т до кипени и фильтруют. После этого кислый гидролизат подщелачивают до рН 7,6-7,7, кип т т 10-15 мин и про вод т вторую фильтрацию. В полученный фильтрат внос т хлористый натри и углекислый натрий (80% и 13,4%, с ответственно, к содержанию сухих веществ в гидролизате. После растворени внесенных солей гидролизат фильтруют и при температуре 60С высушивают на распьиштельной сушилке . Приготовление сухой основы среДЫ . В шаровую трехлитровую мельницу помещают 10 фарфоровых шаров, затем внос т 10,2-11,0 г тафуинского порошковидного агар-агара с проч ностью 400-500 г/см, 40,8-44,0 г. сухого казеиново-дролсжевого гщр,ролизата и 0,005-0,014 г аммонийной соли 5,5 дибром-о-крезолсульфофталеин добавл ют еще 15 фарфоровых и 1 металлический шар. Мельницу закрывают и прокручивают в течение 25-30 мин. Готовую основу расфасовывают. Приготовление среды. Навеску сухой основы 51-55 г перемешивают в 1000 мл дистиллированной воды, став т на медленный огонь, кип т т до по влени крупных пузырей и разливают в скл нки, автоклавиру при 115 С в течение 2030 мин. Затем основу остужают до 40-45°С и добавл ют нормальную лошадиную или бычью сыворотку, 1015% дл менингококкаи 20% дл гонококка , перемешивают и разливают по 20-25 мл в чашки Петри и по 5 мл в пробирки (дл скошенного агара)„ Среда имеет светло-зеленоватый цвет Содержание всех вьш1еперечисленных ингредиентов в среде в следующем соотношении, г/л: Казеиново-дрожжевой гидролизат 40,8-44,0 Агар-агар10,2-11,0 Сыворотка лошадина или бычь I00,0-200„О Аммонийна соль 5,5-дибром-о-кре0 ,005-0,014 золсульфофталеина Дистиллированна Остальное вода (что дает кислотность рН - 7,2-7-,4) Среда в чашках Петри и в пробирках используетс дл посева первичного материала, подозреваемого на содержание менингококка в спинно-мозговой жидкости от больных менин- гитом и носоглоточной слизи носителей , или гонококка в отдел емом из уретры и шейки матки от больных с подозрением на гонорею, дл культивировани и изучени чистых культур этих микроорганизмов. Пример 1. 0,1 МП взвеси менингококка или гонококка, содержащей условно 10 микробных клеток ( по кишечному стандарту ШСК нанос т на поверхность 5 чашек Иетри с сывороточным агаром, приготовленном на предложенной среде. Дл контрол делают посев на известную среду дл менингококка или м со-пептонный агар с добавками дл гонококка. Учет результатов производ т через 20-24 ч инкубации при З7с. Сравнительное исшз1тание сред дл менингококка приведено в табл. I. Таблица 1 ства колоний на 5 агаровых пластинах в двухопытах Приведенные в табл. 1 данные показывают , что предлагаема среда (КДА) вл етс более оптимальной дл развити менингококка, чем агар О Так, при коэффициенте вариации (./i не превьш1ающем 20%, средн арифметическа (Х) числа выросших колоний двух штаммов менингококка на предложенной среде составл ет 111171 колоний, тогда как известна среда - агар D обеспечивает рост колоний в пределах 70-82. При срав нении полученных данных разница оказалась значимой . (t 2) в пользу предлагаемой среды. Как видно из данных табл. 2, на предложенной среде средн арифметическа выросших колоний превышает таковое на известной среде сьтороточном м со-пептонном агаре с добавками. При посевной дозе 1000 микробных клеток на предложенной среде вырастает. 12-276. колоний , известной - 107-185 колоний Разница мелщу средними показател ми сравниваемых сред оказалась зна чимой в пользу предложенной среды (штамм Богомолов), дл штамма 2 ср ды оказалась равнозначной. В табл. приведено сравнительное исгытание сред дл вьщелени гонококка. Т а б л иц а 2 Богомолов Пример 2. 220 проб носогл точной слизи от лиц, бывших в конт те с больными менингококковым мени гитом, параллельно высевают в чашк Петри на предложенную и известную среды. При посеве чередовались. Вс го вы влено 90 носителей. На предл женной вы влено 88 положительных находок, а на известной всего 48, причем совпадений на обеих средах было 46. Предложенна среда дала 47,7% дополнительно положительных находок к известной среде. Пример 3. 35 образцов гно из уретры и шейки матки от больных с подозрением на острую гонорею па раллельно засевают на предложенную и известную среды. Пробирки с засе нными средами помещают в зксикатор , содержащий 5-7% углекислого газа. Из 35 посевов одновременно на опытной и контрольной средах было получено 27 совпадающих положительных находок. Предложенна среда обеспечила дс полнительно еще 4 положительных результата. Пример 4. Штаммы менингококка , подлежащие серологическому группированию , параллельно культивируют в пробирках на предложенной и известной средах. 26 культур менингококка были испытаны на их способность агглютинироватьс (РА) группоспецифическими антисыворотками и в реакции преципитации (РП) на содержание группоспецифического полисахаридного антигена. В РП удалось определить серогруп- пу у 19 штаммов, причем у 14 из них на обеих средах результаты группировани совпали, у 4 штаммов серо-группу определ ют во взвеси культуры , выращенной на предложенной и только у 1 - на известной. В РА удалось группировать 20 культур, в 11 случа х совпали результаты на двух средах, в 5 - с опытной среды и в 4 - только с контрольной. Следовательно, культурирование штаммов менингококка на предложенной среде не снижает их способность группироватьс антисыворотками в РА и РП по сравнению с культурами, выращенными на известной среде. Пример 5. Сахаролитические свойства менингококка и гонококка на предложенной среде с добавлением сыворотки, 0,9% углеводов (глюкоза, мальтоза, сахароза, левулеза), и фенолово-красного индикатора про вл лись более четко, чем на контрольных средах того же состава, но приготовленных на основе перевара Хоттингера или агара D дл менингококка и м со-пептонном агаре с добавител ми дл гонококка. Преложенный способ позвол ет повысить ростовые свойства среды. Обща экономическа эффективность при вьшуске предлагаемой среды взамен сред, рекомендуемых практически лаборатори м дл вьщелени менингококка и гонококка составит 237250 руб Формула изобретени Питательна среда дл выделени патогенных нейссерий, содержаща питательную основу, сыворотку крови, агар-агар и воду, отличаю 9070698K, 4. Then 10% viscous (casein solution is cooled to a temperature of 48-50 ° C and poured yeast and minced meat is poured into it one portion of the forearm (activity 20 u / m according to Fuld-Gross). After thorough mixing, it is established pH 7.2 7.4 with a 30% sodium hydroxide solution. The enzymatic hydrolysis is carried out for 4 hours, at a temperature of 48-50 ° C and at a pH of 7.2-7.4. After the indicated time has elapsed, the hydrolyzate acidified with concentrated hydrochloric acid (sp. weight, 1.14) to 6-3.8, then brought to a boil and filtered. After that, the acidic hydrolyzate is They are cooled to pH 7.6-7.7, boiled for 10-15 min and a second filtration is carried out. Sodium chloride and sodium carbonate (80% and 13.4%, respectively, are added to the resulting filtrate to dry substances in the hydrolyzate. After dissolving the added salts, the hydrolyzate is filtered and dried at a temperature of 60 ° C in a dry-top dryer. Preparation of a dry base medium 10 porcelain balls are placed in a three-liter ball mill, then 10.2-11.0 g of tafuinska powder agar-agar are added. strength 400-500 g / cm, 40.8-44.0 g. of dry casein-drolsev gsr, rolizat and 0,005-0,014 g ammonium salt of 5,5-dibromo-krezolsulfoftalein further added 15 1 of porcelain and metal ball. The mill is closed and scrolled for 25-30 minutes. Prepared basis packaged. Cooking environment. A portion of the dry basis of 51-55 g is mixed in 1000 ml of distilled water, put on a slow fire, boiled until the appearance of large bubbles and poured into bottles, autoclave at 115 C for 2030 minutes. The base is then cooled to 40-45 ° C and normal horse or bovine serum, 1015% for meningococcus and 20% for gonococcus are added, mixed and poured into 20-25 ml in Petri dishes and 5 ml in test tubes (for skewed agar) The medium has a light greenish color. The content of all the listed ingredients in the medium is in the following ratio, g / l: Casein-yeast hydrolyzate 40.8-44.0 Agar-agar10.2-11.0 Horse serum or bovine I00.0-200 „ O Ammonium salt 5,5-dibromo-o-cre0, 005-0,014 zolsulfoftaleina Distilled The rest of the water (which gives acidity pH - 7.2-7-, 4) The medium in Petri dishes and in test tubes is used for seeding the primary material suspected of containing meningococcus in the cerebrospinal fluid from patients with meningitis and nasopharyngeal mucus carriers, or gonococcus in the urethra and neck uterus from patients with suspected gonorrhea, for cultivating and studying pure cultures of these microorganisms. Example 1. 0.1 MP of suspension of meningococcus or gonococcus containing conditionally 10 microbial cells (according to the intestinal standard, SSC is applied on the surface of 5 Ietri plates with serum agar prepared on the proposed medium. For control, make a culture of the known medium for meningococcus or peptone agar with gonococcal additives. Results are recorded after 20–24 h of incubation at 37 ° C. Comparative synthesis of meningococcal media is given in Table I. Table 1 of the colony on 5 agar plates in two experiments The data in Table 1 are shown It is recognized that the proposed medium (KDA) is more optimal for the development of meningococcus than agar O. So, with a coefficient of variation (./i not exceeding 20%), the average number of grown colonies of two meningococcal strains on the proposed medium is 111171 colonies, while agar D is known, it provides for the growth of colonies between 70 and 82. When comparing the obtained data, the difference was significant (t 2) in favor of the proposed medium. As can be seen from the data table. 2, on the proposed medium, the arithmetic average of the grown colonies is greater than that on the known recurrent medium peptone agar with additives. At a seed dose of 1000 microbial cells on the proposed medium grows. 12-276. Colonies known - 107-185 colonies. The difference between the averages and the average indicators of the compared media turned out to be significant in favor of the proposed medium (the Bogomol strain), for the strain of 2 ranks it turned out to be equivalent. In tab. Comparative testing of gonococcal media is given. Tblitsa 2 Bogomolov Example 2. 220 samples of nasoglasm of exact mucus from persons who were in contact with patients with meningococcal meninges are sown in parallel in a Petri dish on the proposed and known medium. When sowing alternated. A total of 90 carriers have been identified. 88 positive finds were found on the proposed one, and only 48 are known, and there were 46 coincidences in both media. The proposed medium yielded 47.7% of additionally positive finds to the known medium. Example 3. 35 samples of pus from the urethra and cervix from patients with suspected acute gonorrhea are sown in parallel on the proposed and known medium. The test tubes with inoculated media are placed in a detox containing 5-7% carbon dioxide. Out of 35 crops at the same time, 27 coincident positive findings were obtained in experimental and control environments. The proposed environment provided 4 additional positive results for the DS. Example 4. Meningococcal strains to be serologically grouped in parallel are cultured in test tubes on the proposed and known media. 26 meningococcal cultures were tested for their ability to agglutinate (RA) with group-specific antisera and in a precipitation reaction (RP) for the content of a group-specific polysaccharide antigen. In the RP, it was possible to determine the serogroup in 19 strains, and in 14 of them on both media the results of grouping coincided, in 4 strains the gray group was determined in suspension of the culture grown on the proposed one and only in 1 strain on the known one. In RA, it was possible to group 20 cultures in 11 cases, the results coincided in two environments, in 5 - from the experimental environment and in 4 - only with the control. Therefore, culturing meningococcal strains on the proposed medium does not reduce their ability to group with antisera in RA and RP compared with cultures grown on a known medium. Example 5. The saccharolytic properties of meningococcus and gonococcus on the proposed medium with the addition of serum, 0.9% carbohydrates (glucose, maltose, sucrose, levulose), and the phenol-red indicator appeared more clearly than on control media of the same composition, but prepared on the basis of Hottinger's parvar or agar D for meningococcus and meso-peptone agar with additives for gonococcus. The proposed method allows to increase the growth properties of the medium. The overall economic efficiency in the delivery of the proposed medium instead of the media recommended practically by the laboratories for meningococcus and gonococcus would be 237250 rubles.
щ а с тем, что, с целью повы- Сыворотка крови 100,0-200,0 тени ростовых свойств среды, она до- Аммонийна соль полнительно содержит аммонийную5-5 дибром-о-кресоль 5i5 дибром-о-крезолсульфофтале- золсульфофталеина 0,005-0,014 ина, в качестве питательной основы s Агар-агар10,2-11 ОBecause, in order to increase the serum of the blood 100.0-200.0, the shade of the growth properties of the medium, the ammonium salt additionally contains ammonium 5-5 dibromo-o-cresol 5i5 dibromo-o-cresolsulfophlethalene sulphophthalein 0.005- 0,014 ina, as a nutritional basis s Agar-Agar 10,2-11 O
она содержит казеиново-дрожжевойИсточники информации,it contains casein yeast sources of information
гидролизат при следующем количест-прин тые во внимание при экспертизе венном соотношении компонентов,.1, Лабинска А.С. Микробиологи hydrolyzate with the next quantity taken into account in the examination of the ratio of components, .1, Labinsk, AS Microbiologists
г/л воды:с техникой микробиологических исслеКазеиново-дрожжевойЮдований . М., Медицина, 1972,g / l of water: with the technique of microbiological studies of Kazeino-yeast Judgment. M., Medicine, 1972,
гидролизат 40,8-44,0с. 447, пр. 26.hydrolyzate 40.8-44.0s. 447, av. 26.