Изобретение относитс к медицине, в частности к способам количественного определени полиэтиленоксида, и мо жет быть использовано в терапии, хирургии , экспериментальной к клинической фармакологии, в биологии, в том числе криобиологии. Наиболее близким к предлагаемому изобретению вл етс способ количественного определени полиэтиленоксида путем инкубации пробы с нитратпикратом натри с последующей экстракцией органическим растворителем и фотометрии полученного продукта, основанный на спектрофотометрическом определении комплексов полиэтиленоксйдов с катион ми натри после экстракции их в виде пикратов в I,2-дихлорэтан. 50 мл водной пробы перенос т в делительную воронку на 250 мл со стоп-краном, добав л ют 50 мл нитратпикрата натри (56,6 г нитрата натри и 0,92 г высушенной в эксикаторе под вакуумом с п тиокисью фосфата пикриновой кислоты раствор ют в 0,1 н.растворе едкого натра в мерной колбе на 100 мл, объем довод т до метки), перемешивают и дают посто ть в течение 1 ч.Затем добавл ют 5 мл 1,2-; ихлорэтана, энергично взбалтывают в течение 3-х мин,органи ческий слой перенос т в коническую центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 10 мин при 2000 об/мин. Параллельно став т контроль с 50 мл дистиллироЬанной воды. Спектрофотометрируют при 378 км в 1-2 см кварцевых кюветах против контрол . Чувствительность способа 1-0,1 мг/л с точностью от - 6 до «8% по анализам в воде t Известный способ разработан на примере п-тертнонилфенилового эфира полиоксиэтилёна и не пригоден дл определени полиэтиленоксида в сложных биологических субстратах, например, крови, растительных соках и, следовательно, не обеспечивает возможности определени токсико- и фармакокинетики, фармакодинамических свойств введенного полиэтиленоксида в организм животного Или человека. Воспроизведению способа мешают имеющиес в этих биологических сч.тсмах белки и некоторые сахара, обладающие способностью обраэовьгоать комплексы с нитратпикратом натри , а также красный цвет гемоглобина. К недостаткам способа относитс и невозможность добитьс полного растворени пикриновой кислоты и нитрата нат ри в 0,1 н.едком натре в указанных соотношени х, Цель изобретени - определение поли этиленоксида в биологических жидкост х Поставленна цель достигаетс тем, что в предлагаемом способе количественного определени полиэтиленоксида путем инкубации пробы с нитратпикратом натри с последующей экстракцией органическим растворителем и фотометрии полученного раствора, к пробе перед инкубацией последовательно добавл ют хлорид бари , 1-2,5%-ного раство ра гидроокиси бари , 5-6%-ного раствора сульфата цинка, образовавшийс осадок удал ют, а супернатант обрабатывают 10-20%-ным раствором сульфата меди, 12-25%-ным гидроокиси кали , затем смесь инкубируют 15-20 мин при перемешивании и полученньй осадок уда л ют. Способ осуществл ют следующим обра зом. К 0,5-1 мл биологического материала , содержащего полиэтгиленоксид дл осаждени белков, последовательно добавл ют 0,5-1 мл 20-10%-ного хлорида бари , 1-2 мл 1-2,5%-ной гидроокиси бари , }-2 мл 5-6%-ного сульфата цинка . Смесь перемешивают после добавлеНИН каждого реагента, оставл ют сто ть 10-15 мин и затем центрифугируют 15-20 мин при 2500-3000 об/мин. Недостаток перенос т в другую пробирку и дл осаждени Сахаров добавл ют 24 мл 20-10%-ного сульфата меди CuSO/ и 2-4 мл 25-12%-ной гидроокиси кальци Са(ОН)2, смесь энергично взбалтывают 15-20 мин, затем центрифугируют 510 мин при 2000-3000 об/мин. Лишенньй белков и Сахаров надосадок перенос т в другую пробирку и добавл ют 3-5 мл комплексообразующего реагента нитратпикрата натри (1,5-2,2 М нитрата нат ри и 0,015-0,01 М пикриновой кислоты на 0,15-0,1 н.едком натре), смесь взбалтывают и экспонируют в течение 50-60 мин. Затем прибавл ют 4-5 мл 8 274 1,2-дихлорэтана, энергично взбалтывают втечение 3-5 мин. Центрифугируют 1015 мин при 2000-2500 об/мин. Органический слой перекос т в другую пробирку и определ ют оптическую плотность спектрофотометрически при 378 нм. Расчет католичества ПЭО провод т по калибровочной кривой. Пример. К 1 мл крови, вз той из вены после внутривенного введени ПЭО-3500, последовательно добавл ют 1 мл 10%-ного хлорида бари , 2 мл 255%-ной гидроокис.ч бари , 2 мл 5%-ного сульфата цинка. Смесь перемешивают после добавлени каждого реагента и спуст Ш мин после прибавлени последнего из них центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Недостаток перенос т в другую центрифужную пробирку, добавл ют 2 мл 20%-ного сульфата меди и 2. мл 25%-ной гидроокиси кальци , смесь взбалтывают первые 5 мин непрерывно и последующие 10 мин периодически, затем центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин. Надосадок перенос т в другую пробирку, добавл ют 5 мл реагента нитратпикрата натри . Смесь тщательно перемешивают, выдерживают в течение 1 ч при комнатной температуре, Затем добавл ют в 5 мл I,2-дихлорэтана , энергично взбалтывают в течение 3-х мин и центрифугируют 10 мин при 2000 об/мин. Оптическую плотность органического экстрата определ ют спектрофотометрически (на спектрофотометре СФ-16) при 378 нм и толщине сло I см. Плотность исследуемого образца составл ет 0,115, что по калибровочной кривой соответствует 0,046 мг ПЭО-1500 в данном объеме крови. Предлагаемый способ обеспечивает возможность определени полиэтиленоксида в малых объемах (до I мл) слож-г ных биологических материалов (например , кровь, стекловидное тело, соки растений, амниотическа жидкость и др.). Способ специфичен - положительную реакцию дают только вещества, содержащие оксиэтильные (CHjj--CH2-О) группы . Положительной реакции не дают спирты, альдегиды, кетоны. Способ высокочувствителен обеспечивает определение полиэтиленоксида в концентраци х 0,0025-0,01%. Предлагаемый способ позвол ет повысить точность определени токсикои фармакокинетики и фармакодинамических свойств полиэтиленоксидов при
введении их в организм человека и животных и тем самьм способствовать разработке национальных доз препарата при его парентеральном введешш.