(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКА ЛАКТОЦИДА ПРИ СПИРТОВОМ БРОЖЕНИИ
Изобретение относитс к спиртовой промышленности, в частности к способам определени активности анти биотика лактоцида,.используемого в качестве антисептика при спиртовом брожении. Лактоцид вл етс специфическим антибиотиком молочно-кислых бактерий . Эти кислотообразующие бактерии могут развиватьс при спиртовом брожении, угнетать развитие дрожжей и оказывать ингибирующее действие на ферменты. Поэтому применение лактодида , подавл ющего жизнеде тельность кислообразующих бактерий, имеет большое значение в спиртовой промышленности . Повышаетс эффективность производства за счет снижени потерь углеводов, которые затрачиваютс на развитие кислотообразующих бактерий,и уменьшени количества несброженных углеводов в бражках. Известны способы определени акти ности, лактоцида, заключающиес в, том что культивируют молочнокислую бакте рию в присутствии разного количеств лактоцида и его отсутствии и опреде л ют при каком количестве вз того а тибиотика подавл етс им жизнеде те ность бактерий по прозрачности среды визуальным способом fl. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому эффекту вл етс способ определени активности антибиотика лактоцида при спиртовом брожении, предусматривающий культивирование молочнокислых бактерий в присутствии и отсутствии лактоцида и определение в опытной и контрольной пробах степени подавлени лактоцидом жизнеде тельности молочнокислых бактерий по количеству продуцируемой бактери ми молочной кислоты, титруемой раствором гидроксида в присутствии фенолфталеина с последующим расчетом активности лактоцида . .В качестве молочнокислых бактерий используют hermobacteгiurn cereale Zafar штамм УП, культивирование осуществл ют на солодовой питательной среде в течение 4 : при 32°С Г2. Недостатком данного способа вл етс сложность прихотовлени питательной среды - солодовой, Hcnojiiisye мой дл культивировани , образование недостаточного количества молочной кислоты, продуцируемой бактери ми Dhermobacteгiurn cereale Zafar. что требует применение разбавленных сантинормальных растворов гидроксида так как применение более концентриро ванных - децинормальных, снижает точ ность анализа, вследствие малого рас хода титранта на определение. Цель изобретени - повышение точности определени , упрощение и ускорение процесса. Цель достигаетс тем, что согласно способу определени активности ан тибиотика лактоцида при спиртовом брожении, предусматривающему культивирование молочнокислых бактерий в присутствии и отсутствии лактоцида и определение в опытной и контрольной пробах степени подавлени лактоцидом жизнеде тельности молочнокислых бактерий по количеству продуцируемой бактери ми молочной кислоты, титруемой раствором гидроксида в присутствии фенолфталеина с последую щим расчетом активности лактоцида, и молочнокислых бактерий используют L ас t оЬа с te i urn bulgaricum, культивирование их осуществл ют на обезжирен ном молоке при температуре 38-40°С, а определение количества продуцируемой бактери ми молочной кислоты ведут путем титровани всего количества культуральной жидкости опытной и Рконтрольной проб, содержащих молочну кислоту, децинормальным раствором гидроксида в присутствии фенолфталеи на . Способ осуществл ют следующим об разом. Готов т питательную среду. Дл этого отвешивают 90 г сухого обезжи ренного молока и раствор ют его в 1 л воды. Вначале 100-150 мл водопр водной воды нагревают до и заливают ею Осадок молока, прилива к нему воду маленькими порци ми, тщательно перемешива воду с сухим молоком так, чтобы не образовалось ко ков. Затем суспензию фильтруют чере 4 сло марли на большой воронке. Остальной порцией водопроницаемой воды (900-850 мл) количественно омы вают емкость, где раствор лось моло ко (ступка, стакан или друга посуда ) , эти сливы фильтруют через тот же фильтр, одновременно раствор о тавшиес на фильтре комочки молока. Получают 1 л обезжиренной молочной среды. Эту среду по 100 мл разливаю в колбы 250 мл и по 20 мл - в пробирки емкостью 50 мл. Затем пробирки и колбы закрывают ватномарлевыми пробками и стерлизуют в течение 20 мин при давлении 1 МПа (1 атм). В качестве тест-организма молочнокислых бактерий используют Lactobaс .terium bulgaricum. Посевную молочнокислую бактерию готов т следующим образом. 100 мл приготовленной молочнокис лой среды стерильно заливают культу ой молочнокислых бактерий и инкубиуют в течение 4-ч при . Дл подержани культуры бактерии в активом состо нии ее пересеивают на свеую среду через каждые 10-15 дней. л пересеивани берут 10 мл культуы бактерий и инкубируют, как было казано.. Полученную культуру бактерии хран т в холодильнике. Дл проведени анализов требуетс свежа культура бактерии, котора олжна быть пересеена на сутки до проведени опыта и инкубировани . После инкубации перед использованием бактерии хран тс в холодильнике до следующего дн . На следующий день перед использованием культуры бактерии в опыте ее из холодильника перенос т в термостат с температурой , там ее разогревают в течение 1,5-2,0 ч и используют дл определени активности . Приготовление 0,05%-ного раствора препарата лактоцида в воде. На аналитических весах отвешивают 100 мг препарата лактоцида и раствор ют в 100 мл кип щей дистиллированной воды в колбе вместимостью 250 мл, закрывают колбу ватномарлевой пробкой , помещают в кип щую вод ную баню, где вьщерживают в течение 5 мин. Затем содержимое колбы перемешивают и в гор чем состо нии фильтруют через бумажный пластный фильтр. Если получилс мутный фильтрат его вторично фильтруют через тот же фильтр до образовани прозрачного фильтрата. Этот фильтрат разбавл ют в два раза холодной дистиллированной водой. Полученный 0,05%-ный водный раствор лактоцида используют сразу дл определени активности. Дл проведени анализа активности испытуемого препарата берут две пробирки вместимостью 50 мл и наливают в каждую по 20 мл стерильной молочной среды, нагретой до 40°с. В каждую пробирку в стерильный услови х приливают по 2 мл раствЬра культуры бактерии Lactobacteгiurn bulgaricum. Содержимое пробирок перемешивают, в одну добавл ют 1 мл 0,05%-ного раствора препарата лактоцида и 2 мл стерильной дистиллированной воды. В другую пробирку добавл ют 3 мл такой же воды, эта проба вл етс контрольной. Пробирки закрывают ватномарлевыми пробками, энергично перемешивают и инкубируют в термостат-е при 40°С в течение 4 ч. По истечении этого времени пробирки с опытными и контрольными пробами вынимают из термостата и содержимое каждой пробирки перенос т в две конические колбы вместимостью 200 мл.Пробирки споласкивают 50-55 мл дистиллированной воды и ополоски помещают в колбы с реакционной жидкостью. В колбы добавл ют по 3-4 капли раствора фенолфталеина и образовавша с