SU837329A3 - Способ получени протеина - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к области микробиологии, а в частности к пол чению протеина путем микробиосинтеза . Известен способ получени  белка с помощью аэробного культивировани  при температуре 45-65°С в водной ср де, содержащей источники углерода азота и .миниральных веществ и .Penlcillium notatum-chrysogenumCl. Недостатком известного способа  вл етс  невысокий выхсад протеина. . Целью изобретени   вл етс  повыш ние выхода протеина. Поставленна  цель достигаетс  те что g качестве исходной культуры микроорганизма дл  получени  протеина используют термофильную смешанную культуру NRRL В-8158. Термофильна  смешанна  культура бактерий состоит из трех отдельны видов бактерий. Эти бактерии классифицируютс  (1) крупные грамположительные изогнутые палочки, подтип бактерии, класс SchTzomycet отр д Enbacteriales, семейство Bacillaceae род Bacillus,- (2) крупные грамотрицательные палочки, подтип бактерии, класс Schii omycete -гр д Enbacteriales, семейство Ва- , cillaceae, род Bacillus; (3) мелкие грс1мотрицательные папочки, подтип бактерии, класс Schizomycetes. Смешанна  тремофильна  культура про вл ет ценные свойства. Эта- смешанна : культура (Мр) растет лучше при высоких температурах, чем при обычных, с большим выходом клеток и уменьшейной тенденцией к пенообразованию в услови х ферментации. Эта смешанна  культура  вл етс  термофильной, растет эффективно с высокой продуктивностью на сырье из окисленных угпеводородов, в часчастности , низших спиртов, наиболее предпочтительно из метанола или. этанола, при таких температурах, при которых большинство других известных видов бактерий либо относительно непродуктивны, либо просто не могут существовать, либо непродуктивны и нетолеранты к сырью из окисленных углеводородов. Термофильна  смешанна  культура сдана на хранение в Министерство сельского хоз йства США, Служба сельскохоз йственных исследований, Северно-центральный район. Северный региональный .исслеловательский центр,. 1815 North University Street Peoria, Ollinois 61604, в количестве тридцати лиофильных препаратов смешанной культуры до подачи насто щей за вки, и ей присвоен номер NRRL В-8158/ Эта смешанна  культура М  вл етс  высокопродуктивной при сравнитель «о высоких температурах ферментации и продуцирует требуемые и ценные одноклеточные протеиновые продукты с .высоким содержанием протеина в виде, аминокислот требуемого типа и в требуемом соотношении. Термофильна  смешанна  культура имеет посто нный состав. Смешенна  культура, примен ема  дл  лиофилизации , была выделена из серии фермента ционных испытаний и лиофилизована пр обычных услови х, которые заключаютс  в быстройм замораживании микробны клеток при. очень низкой температуре с последующим быстрым обезвоживанием в высоком вакууме.и хранении при ком натной температуре . С целью определени  жизнеспособности некоторых лио филизированных образцов лиофилизированные смешанные культуры были зате реактивированы и подвергнуты выращиванию в таких же услови х, которые примен лись ранее. Последующа  ферf jjHTauHH с применением реактивирован ной Mg культуры показала, что в вос становленной культуре имеютс  те же три разновидности микроорганизмов в той же форме и в той же взаимосв зи , как и в источнике ферментации. Культура обеспечивает достижение больших скоростей получени  одноклеточного протеина при уменьшенной пот ребности в охлаждении, при выращивании на питательной среде, котора  в качестве источников углерода и энергии представл ет собой окислен ный углеводород,предпочтительно низший спиртJ более предпочтительно метанол или этанол, лучше предпочтителен метанол или содержаща  в основ ном метанол питательна  среда. При использовании смешанной культуры достигаетс  большой выход клето который определ етс  в граммах полученных клеток на 100 г использованного источника углерода и энергии, например метанола. Смешанна  культура способна продуцировать одноклеточный протеин, который представл ет собой смесь нескольких разновидностей клеток, поэтому получаемые из М, микробные клетки характеризуютс  лучшими соотношени ми аминокислот, чем продукты , получаемые из одной чистой культуры . Был вз т образец почвы на глубине 6Д см от поверхности земли, покрывающей паропровод в Bartlesville, Oklahoma, Research Center of phillips Petro,leum Co. Была применена обычна  методика обогащени  в присутствии метанола дл  выделени  отдельных или особых культур. Получена стабильна  по сЬставу смешанна  культура термофильных микроорганизмов. Термофильна  смешанна  культура состоит из трех отдельных микроорганизмов . Три типа бактерий в стабильной по составу термофильной смешанной культуре описаны как (1) крупные грамположительные изогнутые палочки, (2) крупные грамотрицательные палочки и (3) мелкие грамотрицательные палочки. На рифленых пластинах получили изолированные колонии всех трех микроорганизмов на минеральном агаре, содержащем метанол. Однако, когда выделенные колонии были перенесены в водные среды дл  дальнейшего роста с метанод},ом в качестве источника углерода и энергии, роста культуры не было. Совместный рост этой смешанной культуры указывает на симбиотическую смесь всех трех видов микроорганизмов . По-видимому, продукт или продукты обмена микроорганизмов по меньшей мере одного вида служат питательной средой, необходимой дл  роста микроорганизмов другого или других видов . Природа этого продукта обмена в точности пока еще не известьГа. Можно предположить, что этот продукт обмена токсичен дл  микроорганизма , .которые его вырабатывает, поэтому дл  продолжени  нормального роста этого микроорганизма необходимо присутствие другого микроорганизма , который потребл ет этот токсичный дл  первого микроорганизма продукт обмена . Другим подтверждением такого симбиоза  вл етс  тот факт, что при ферментации с применением М., образуетс  значительно меньше пены в типовых услови х аэробной ферментации по сравнению с количеством пены, образующейс  обычно в равноценных типичных услови х аэробной ферментации , но с применением чистых термофильных бактерий рода Bacillus. Возможно , что М не образует такого большого количества пены, которое следовало бы ожидать, потому что при ферментации с применением М внеклеточный продукт, веро тно протеиновог о характера, поглощаетс  микроорганизмами , по меньшей мере, одного из симбиотических видов, таким образом этот продукт,  вл ющийс  пенообразователем , непрерывно выводитс  из ферментационной смеси. Источником углерода и энергии (или питатель.ной средой)  вл етс  окисленный углеводород. Окисленные углеводороды включают спирты, кетоны , сложные и простые эфиры, кислоты и адельгиды, которые в основном  вл ютс  водорастворимыми и предпочтительно содержат до 10 атомов углеро да в молекуле. Например, метанол, этанол, пропа , бутанол, пентанол, гексанол, 1,7-пентандиол 2-гептанол, 2-метил 4-пентанол, пентанова  кислота, 2-метил-бутанова  кислота, 2-пентанол , 2-метил-2-пропанол, 2-пропанол муравьина  кислота, уксусна  кислот пропанова  кислота, формальдегид, ацетальдегид, пропаналь, бутаналь, 2-метилпропаналь, бутанова  кислота 2-метилпропанова  кислота, пентанова  кислота, глутарова  кислота, ге санова  кислота, 2-метилпентанова  кислота, гептандикарбонова  кислота гептанова  кислота, 4-гептанон, 2-гептанон , окатанова  кислота, 2-этилгексанова  кислота, глицероль, этиленгликоль, пропиленглико ь, 2 .-пропанон, 2-бутанон, диэтиловый эфир, метилэтиловый эфир, диметилов эфир, ди-п-пропиловый эфир, п-пропил изопропиловый эфир, включа  смеси лю бых двух или более из этих веществ. Нефт ные газы, например природный газ, метан, иЛи другие газы, например этан, могут быть окислены дл  получени  смесей с преобладающим содержанием соответствующих спиртов, а также, небольимх количество кетонов альдегидов, простых эфиров и кислот Предпочтительны спирты с С, -Cj в молекуле. К ним относ тс  спирты как с линейной, так и с разветвленной цепью, первичные, вторичные и третичные, одноатомные и многоатомные . В качестве примеров спиртов можно привести метанол, этанол, пропанол, бутанол, пентанол, гексанол, 1,7-гептандиол , 2-гептанол, 2-метил-4-пентанол , 2-пентанол, 2-метанол-4-б танол, 2-метиЛ-З-бутанол, 2-бутачол , 2-метил-1-пропанол, 2-метил-2-пропанол , 2-пропанол, глицероль, этиленгликоль, пропиленгликоль, вклю ча , смеси любых двух или более иэ этих веществ . Наиболее предпочтительными спирта ми  вл ютс  спирты,содержащие в молекуле,.особенно одноатомные спирты, вследствие их доступности, водорастворимости и экономичности. Особенно предпочителен метанол, потому что относительно дешев,легко доступен.1 и растворим в воде, Как правило, подвод молекул рного кислорода к водной ферментационной реакционной смеси может быть осуществлен путем пропускани  адекватны объемов воздуха или обогащенного кис лородом воздуха или отдельно воздуха и чистого кислорода в возрастающем количестве через ферментационный сосуд. Отход щие газы могут быть регенерированы и при необходимости поданы на рециркул цию с целью максимального использовани  кислорода, например, путем отгонки углекислого газа и отход щих газов и рециркул ции. .Расход подаваемого в ферментационную смесь воздуха 0,1-10, чаще 0,72 ,5 объемов воздуха в 1 мин на объем жидкости в ферментационном аппарате , или, в пересчете на кислород соответственно 0,02-2,1 и 0,14-0,55. Давление может измен тьс  в очень широком интервале, например 0,1100 атм/10,13-10132 кПа/, чаще 130 атм/101,3-3039 кПа/, предпочтительно 1-5 атм/101,3-506,5 кПа/. Давление выше атмосферного имеет то преимущество , что оно приводит к увеличению содержани  растворенного кислорода в водной ферментационной среде, что в свою очередь способствует ускоренному росту микроорганизмов. Целесообразно примен ть давление выше атмосферного особенно так, как высока  температура, при которой ведетс  термофильна  ферментаци , вызьгеает понижение растворимости кислорода в водной ферментационной среде. Выраицивание М, смешанных бактерий из сырь  из окисленн 1лх углеводородов может быть успешно осуществлено при 45-65°С,, предпочтительно, дл  достижени  оптимальной скорости роста, 50-60с. Более низкие температуры подавл ют рост бактерий. Высокие концентрации некоторых из описанных источников углерода и энергии , например метанола, могут подавл ть нормальный рост микроорганизмов или быть даже токсичными дл  микроорганизмов, примен. емых дл  ферментации с использованием смешанной культуры, и их следует избегать. : Процесс ферментации может быть осуществлен периодически или непрерывным способом. Непрерывный способ особенно выгоден, когда источником углерода и энергии  вл етс  низший спирт, например метанол или этано/ расход которого может быть легко автоматизирован. Применение таких микроорганизмов и такого сырь  в периодическом ферментационном процессе считаетс  неэкономичным. Однако при непрерывном процессе ферментации такие питательные среды высокоэффективны и экономичны. При ферментации, после того как в ферментаторе надлежащим образом произведен посев смешанной культуры, окисленный углеводород может быть добавлен в виде отдельного потока, либо он может быть смешан с водой в виде водного потока с целью ее стерилизации или с минеральной средой с целью ее стерилизации или же могут быть осуществлены всеэти варианты сразу. Обычно окисленный углеводород подаетс  отдельно дл  удобства регулировани  концентрации в поступающем в ферментатор потоке в интервале 2,5-35 вес.%, чаще 10-15 вес.%.

Рост микроорганизмов осуществл етс  в ВОДНОЙ питательной среде, содержащей водный раствор минеральной соли, источник углерода и энергии, молекул рный кислород и исходный посевной материал смешанной культуры

MO.

Скорость ферментационного роста

можно регулировать путем регулировани  подачи окисленного углеводорода. Скорость подачи источников углерода и энергии в ферментатор следует регулировать так, чтобы она в основном была равна скорости потреблени  его микроорганизмами во избежании значительного накоплени  в ферментаторе, в частности, каких-нибудь токсически веществ, Удовлетворительный контроль может быть достигнут также путем гфоверки содержани  непрореагированного питательного материала в выход щем из ферментаторов потоке, оно долно составл гь 0-0,2 вес.%.

Обычно, при вышеприведенных услови х , врем -нахождени  микробных клеток в ферментаторе при непрерывном процессе составл ет приблизительно 2-4 ч , хот  оно не имеет решающего значени .

Кроме вьаиеописан ных молекул рного кислорода и источника углерода и энергии, культуре М требуютс  также минеральные питательные вещества и источник усво емого азота. Источником азота может быть любое азотсодержащее соединение, способное выдел ть азот в виде, удобном дл  обменного поглощени  организмами. Хот  могут примен ть различные органические источники азота, например другие протеины, мочевина или т.п., но обычно неорганические источники азота более экономичны и удобны дл  практического применени . В качестве примера таких неорганических азотсодержащих соединений можно привести аммиак или гйдроксид аммони , а также различные соли аммони , например карбонат аммони , цитрит аммони , фосфат аммони , сульфат аммони  и пирофосфат аммони .. Удобно примен ть газообразный аммоний, который можно барботировать в соответст .вующих количествах через водную ферментационную среду.

рН водной микробной ферментационной смеси 5,5-7,5 предпочтительно 6-7. Подача аммиака способствует поддержанию требуемых значений рН, так как иначе водна  среда становитс  слабо кислой. Вообще интервал препочтительнь х значений рН дл  микроорганизмов в какой-то степени зави сит от примен емой среды, поэтому предпочтительный интервал значений

рН может измен тьс  незначительно при изменении минеральной среды.

Кроме источников кислорода, азота и углерода и энергии, необходимо к питательной среде добавл ть выбранные минеральные питательные вещества в необходимых количествах и соотношени х, чтобы обеспечить правильный рост микроорганизмов и максимальное усвоение окисленного углеводорода клетками в процессе микробной конверсии.

Источники фосфат-ионов или других ионов фосфора, а также ионов магни , кальци , натри , маргагЩа, молибдена и меди обеспечивают потребность

5 в основных минеральных веществах. Дл  ферментационного процесса целесообразно примен ть приведенную ниже минеральную питательную среду (ГМ-12), котора  содержит еще в ка

0,честве компонента раствор, содержавший следы минеральных веществ.

Количество

Компонент

35 Раствор, содержащий следы минеральных веществ

Дистиллированна  40 вода

Раствор, содержащий следы минеральных веществ, приведенниже.

Количество

Компонент

Дистиллированна 

До 1 л 65

Могут примен тьс - также и другие концентрации минеральной среды. Значени  которых приведены в примерах.

До начала работы либо в периодическом либо в непрерывном режиме все оборудование - реакторы или устройство дл  ферментации, сосуды или сборники, циркул ционные или охладительные устройства и т.п. - должно быть стериализовано, например, паром при температуре по меньшей мер IZl-C в течение нескольких минут, например 15 мин. Затем стерилизованный реактор засеваетс  культурой в присутствии всех требуемых питательных веществ, включа  подачу молекул рного кислорода и окисленfioro углеводорода.

Могут примен тьс  контрольноизмерительные приборы дл  изменени  плотности клеток, рН, содержани  растворенного кислорода, концентрации окисленного углеводорода в ферментаторе, температуры , скоростей подачи и т.п. Предпочтительно чтобы подаваемые в ферментатор материалы были стерилизованы до поступлени в ферментатор. Если окисленныйуглеводород представл ет собой вещество, способное стерилизовать другие матералы , например этанол или метанол, то целесообразно добавл ть его в другие потоки,например в минеральную среду в достаточном дл  стерилизации количестве .

Следует избегать добавлени  противопенных веществ к ферментационной смеси, так как противопенные добавки , например силиконы, могут оказывать вредное д-ействие на содержание растворенного кислорода при рекомендемых повышенных температурах ферментции и могут вызвать замедление роста микроорганизмов или их гибель. Пена, образуема  культурой М(, не вредит росту и определенно благопри тствует поддержанию микроорганизмов в cpiCTeMe с высоким содержанием растворенного кислорода. Пена способствует поддержанию относительно большой поверхности раздела на границе газ/ жидкость. Таким образом, ферментаци  улучшаетс  и улучшаетс  теплопередача ее регулирование, равномерность и отсутствие точек перегрева .

При желании можно примен ть пенообразователи , например детергенты, предпочтительно неионные.

Выделение микробных клеток может быть осуществлено обычными способами , например путем подкисле.ни  вытекающего из- ферментатора потока до рН приблизительно 4 и 1 агрева подкисленного потока до температуры убивающей микроорганизмы, например приблизительно до. , причем нагревать следует медленно, чтобы не повредить протеиновый продукт.

Затем вытекающий поток можно центрифугировать ,, промыть, снова центрифугировать дл  отделени  микробных гклеток от вытекающего из ферментатора потока. Клетки М9гут быть обработаны , чтобы вызвать разложение с целью облегчени  извлечени  из,них протеина и других веществ. В tlpoцессе ферментации образуютс  также нужные побочные продуктьз, которые могут быть извлечены из вытекающей

0 из ферментатора жидкости. Эти внеклеточные продукты могут повысить экономичность процесса в целом, так как среди них имеютс  ценных продукты , например полисахариды, амино5 кислоты, например глутаминова  кислота , энзимы, витамины и т.п.

Одноклеточный протеиновый продукт  вл етс  ценным источником протеина как дл  людей, так и дл  животных . Дл  питани  людей клетки при

0 желании можно обработать с целью уменьшени  содержани  нуклеиновой кислоты, но дл  питани  животных в такой обработке нет необходимости.

Пример 1. Проведена опыт5 на  непрерывна  ферментаци  с применением термофильной смешанной культуры . В ферментатор емкостью 7л, оборудованный аэратором, мешалкой, прибором дл  регулировани  подачи

0 кислорода и устройствами дл  изменени  и регулировани  температуры и рН ферментационной смеси, загрузили в качестве посевного материала около 500 мл ферментационной реакцион5 ной смеси из предыдущей опытной - ферментации с применением термофильной минеральной питательной среды М-12.

В ходе опыта поддерживают скорости перемешивани  1000 об/мин и рН 6,20 6,35 путем добавлени  при необходи- мости раствора гидроксида аммони . Расход подаваемого в ферментатор воздуха бьш 2 л/мин во врем  опыта. Через б ч в ферментатор стали подавать

5 также в основном чистый кислород со скоростью 0,5 л/мин,через 11В часов расход довели до 0,75 л/мин, через 174ч - до 1,5 л/мин и через 190 ч - до 2 л/мин.

0

Через 22 ч минеральнуюсреду заменили водным составом, содержащим 7,5 об.% метанола в дополнение к среде FM-12 плюс 0,75 г хлорида кали ,

5 удвоенное против нормального колигчества следов минеральных веществ, утроенное против нормального коли чёства марганца (все даетс  в расчете на 1 л) и не содержащим хлорида натри . После 166 ч питательна  г

0 среда была згиленена водным средством , содержащим 10 об.% метанола, 2,5. мл фосфорной кислоты (85%) на 1 л 2 г/л.хлорида кали , 1,75 г/л MgSQ4.7HgO, 0,25 г/л ,

5

20 мл/л водного раствора (О Зг/л) ,jO и 35 мл/л ранее описанного раствора, содержащего следы минеральных веществ.

Скорость подачи среды составл ла of 700 мл/ч в первые 22 часа до 817 мл/ч через 118 ч, 781 мп/ч через 166 ч и 763 мл/ч через 382 ч.

Пробы вытекающей ферментационной жидкости отбирались врем  от времени дл  извлечени  из них клеток. Полученные значени  содержани  клеток в расчете на сухой вес клеток в граммах иа 1 л, вычисленные значени  продуктивности в граммах клеток на 1 л в 1 ч, вычисленный выход предоставлены в табл. 1.

Таблица 1

2,36 26,36 27,13 27,04 35,21 35,53 35,57

Твердые вещест-

на, г/л26,82 27,66. 27,87 35,5 36,66 36,76

Приблизительно через 126 ч были отобраны пробы ферментационной смеси которые были подготовлены дл  лиофилизации микробных клеток по известно методике. Затем эти лиофилизованные пробы хранились дл  последующего испол эовани  в опытной ферментации и дл  передачи на хранение образцов НТВ-53 хранителю микроорганизмов, уполномоченному Министерством сельского хоз ства США. Северна  региональна  исследовательска  лаборатори  в Пеории штат Иллинойс

Периодически пробы отбирались так же из ферментационной реакционной смеси с целью микроскопического ис- следовани  морфологии клеток. Такое микроскопическое исследование показало , что культура М состоит из крупных грамположительных изогнутых палочек, крупных грамотрицательных палочек и мелких грамотрицательных палочек. Изредка наблюдались также крупные грамположительные (не изогнутые ) палочки, но можно думать, что это временный вариант крупных изогнутых грамположительных палочек.

а) Значение получено путем выпаривани  при 10. мл пробы вытека.ю щей из ферментатора жидкости и вычитани  веса минеральных твердых веществ , содержащихс  в 10 мл среды:

в) значение получено путем центрифугировани  100 мл пробы вытекающей из ферментатора жидкости, повторного суспендировани  твердых веществ в дистиллированной воде и повторного центрифугировани  дл  отделени  твердых веществ, которые затем высушивались в течение ночи при

2,27 2,38 2,83 2,33 2,43

c)значение получено путем делени  количества извлеченных твердых веществ (г/л) на количество введенного метанола (г/л к 100;

d)значение получено путем делени  извлечейных твердых веществ (г/л на продолжительность нахождени  смеси в ферментаторе (ч).

Пример 2. Приблизительно через 1 мес. одна ампула с диофилизированной микробной культурой НТВ-58, полученной при опытной ферментации, описанной вшве в примере 1, была вскрыта обычнЕФи способом в асептических услови х и добавлена к 100 мл ферментационной среды, обозначенной 1М2, котора  тоже содержала 0,5% метанола. Состав среды 1М2 приведен ниже.

Раствор, содержащий следы минеральных веществ Дистиллированна  Колбу, загруженную оживленной диофилиэированной культурой, подвергали инкубации при при встр хивании. Через 24 ч в колбе наблюдалс  хороший рост культуры и 5 мл.этой смеси перенесли в 10 мл среды 1М2, содержащей тоже 1,5 об.% метанола. Через 24 ч наблюдалс  хороший рост и был сделан третий перенос в ту же среду в две колбы, кажда  из которых содержала 500 мл среды 1М2 плюс 1,5 об.% метанола . Третий перенос заключалс  в том что в каждую из этих колб ввели по 100 мл культуры. Культуру оставили расти в течение 32 ч и затем использовсши как посевной материал дл  опыт ной непрерывной ферментации в устройстве , описанном выше в примере 1, В ферментатор загрузили 100 мл среды FM-12 и 1000 мл посевного материала, к которому было добавлено 10 мл метанола. Поддерживали температуру , в рН 6,25-6,4 регулировали путе непрерывного добавлени  раствора гид

Продолжительность роксида аммони , как описано раньше. Сначала, пока культура была оставлена в ферментатора дл  акклиматизации, мешалка работала со скоростью 300 об/мин, а воздух подавалс  со скоростью 0,5 л/мин, ерез 7 ч началась непрерывна  подача питательной среды в вышеприведенном примере 1, Кроме того,расход воздуха увеличили до 2 л/мин, а скорость мешалки увеличили до 1000 об/мин. Спуст  30 ч расход воздуха уменьшили до 1,75 л/мин и стали подавать кислород в количестве 0,75 л/мин, затем после 54 ч довели количество кислорода до 1 л/мин, после 198 ч - до 1,5 л/мин. Из вытекающей фермен ационной жидкости периодически отбирали пробы дл  определени  содержани  клеток в граммах на 1 л в расчете на сухой вес, а также выхода и продуктивности процесса ферментации . Данные, полученные при проведении опыта, представлены в табл. 2. Таблица2

В тавл. приведено содержа.ние аминокислот в микробных клетках, полученных при другой опытной ферментации с применением смешанной термофильной культуры. Дл  сравнени  в табл. 4 приведено также содержание

Примечание Значени  химических показаний,

Содержание аминокислот в термофильных .культурах, выраженных на метаноле в расчете на средний резуль-«: ,.-4-. Заменимые амино-продукта

йминокислот в чистой культуре термофильного микроорганизма, полученной при выделении термофильных микроорганизмов из исходного образца почвы, .опис;анного ранее.

содержание незаменимых аминокислот в  ичном белке такого же веса прин то за 100..

тат из п ти опытов с чистой термофильной культурой приведено в табл. 4 .

Содержание аминокислот, г/100 г

Содержание аминокислот, г/100 г

SEOffiKja

Пролин

Серин

Общее содержание незаменимых аминокислот

Общее содержание аминокислот

.сырой протеин

Можно видеть, что общее содержа-ние незаменимых аминокислот несколько выше у продукта смешанной культуры (47%), чем у продукта полученного из чистой культуры (46%). Далее если 11|езаменимые с ер у содержащие аминокислоты вводитс  путем добавлени  син тётического метионина, то значени  химических-показаний указывают на то, что продукт, полученный на смешанной культуре, вдвое лучшес точки зрени  питательной ценности продукта , полученного на чистой культуре в расчете на ближайшее низшее значение химических показаний дл  незаменимых аминокислот.

Продолжение табл. 4

I

смешанна  кульчиста  культура (НВТ-7) тура {НВТ-42)

2,38 1,75

32, Id

67,88 84,4

Claims (1)

1. Патент СССР 572209, кл. С 12 D 13/06, 1977.