SU787032A1

SU787032A1 - Способ получени гиалуронидазы

Info

Publication number: SU787032A1
Application number: SU782728195A
Authority: SU
Inventors: Зинаида Романовна Кускова; Альбина Львовна Бийчанинова; Людмила Александровна Грачева
Original assignee: Томский Ордена Трудового Красного Знамени Научно-Исследовательский Институт Вакцин И Сывороток
Priority date: 1978-12-26
Filing date: 1978-12-26
Publication date: 1980-12-15

Description

1

Изобретение относитс к биологии и медицине и касаетс получени ферментных препаратов.

Известен способ получени гиалуронидазы путем экстрагировани раэмель-5 ченной плаценты, осаждени целевого продукта и очистки 1J.

Однако известный способ сложен, длителен и трудоемок из-за использовани колоночных методов очистки. Ю

Цель изобретени - упрс цение способа .

Указанна цель достигаетс тем, что в качестве источника сырь используют плацету; человека, которуй экст-|5 Ьагируют бидистиллированной водой, подщелачивают, раствор обрабатывают ацетатным буферным раствором, полученный осадок обрабатывают водой при рН 6,3-6,4, добавл ют гель .фосфата 20 кальци , центрифугируют и лиофилиэируют .

Кроме того, добавл ют гель фосфата кальци , содержёцций сухого остатка гел к белку в соотношении 25 0,6-0,7:1.

Способ осуществл ют следующим образом .

Пример. Свежую или свежезамороженную плаценту размельчают на 30

Claims

электрической м сорубке, отмывают охлажденным физиологическим раствором от пигментов крови до получени однородной массы бледно-розового цвета. К 300 г полученной массы добавл ют 450 мл (1,5 объема) бидистиллированной воды, рИ взвеси довод т до 9,01 н. раствором МаОН. Экстрагирование гиалуронидазы провод т в течение 18-24 ч при при периодическом перемешивании . Далее взвесь центрифугируют при 4000 об/мин и 4-10°С в течение 30 мин. Из супернатанта осаждают фермент путем снижени рН раствора до 5,0 с помощью 2М ацетатного буферного раствора с рН 4,0; Осадок формируетс в течение 30 мин при 3-4 С. Далее осадок отмывают от остатков гемпигмента бидистиллированной водой (рН 6,2-6,4), фермент осаждают центрифугированием и раствор ют в бидистнллированной воде с рН - 7,0, объем которой составл ет 1/10 от исходного объема экстракта. Полученный раствор соедин ют с гелем фосфата кальци в соотношении 0,60-0,70 г сухого остатка гел на 1 г белка вьадерживают при комнатной температуре в течение 20 мин, гель удал ют центрифугированием при 4000 об/мин в течение 30 мин. Нсщосадочную жидкость, представл ющую собой раствор гиалуронидазы, стерилизуют фильтрацией, определ ют однородность содержание беЛка и специфическую акти ность и лиофилизируют. Предлагаемый способ получени гиал ронидазы технологически прост и досту пен , предусматривает утилизещию ценного сырь , препарат, полученный предлагаемом способом, содержит минимальное количество балластных бепков , следовательно, не будет визывать нежелательных побочных реакций, Формула изобретени 1. Способ получени гиалуронидазы путем экстрагировани размельченной плаценты, осаждени целевого продук-та и очистки, отличающийс тем, что, с целью упрощени способа, в качестве источника сырь используют плаценту человека, которую экстрагируют бидистиллированной водой, подщелачивают, раствор обрабатывают ацетатным буферным раствором, полученный осадок обрабатывают водой при рН 6,3-6,4, добавл ют гель фосфата кальци , центрифугируют и лиофилизируют .
2. Способ по П.1, о т л и ч: а юai И И С Я тем, что добавл ют гель фосфата кальци , содержащий сухого остатка гел к белку, в соотношении 0,6-0,7:1, Источники инфop зaции, прин тые JBO внимание при экспертизе 1. Э;.- BiochevT 1977,V.78ljp. 485-494.