SU704180A1 - Способ получени мутантов холерных вибрионов - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к области медицины, а именно микробиологии. Известен способ получени  мутанто холерных вибрионов путем выращивани  исходной культуры в жидкой питательной среде, приготовлени  микробной суспензии, обработкой ее нитрозомети мочевиной, пересевом на плотную пита тельную среду и отбором колоний мутантов 1 . Однако известный способ  вл етс  довольно сложным. Целью изобретени   вл етс  упрЪщение отбора мутантов. Эта цель достигаетс  тем, что сус пензию обрабатывают нитрозометилмоче виной в концентрации 0,1 - 0,5 мг/мл и отбирают мутанты по коричневой окраске колоний. Способ осуществл етс  следующим образом. Засевают петлю суточной агаровой культуры холерного вибриона в 5 мл дрожжевого бульона. После двукратного отмывани  1-суточной бульонной культуры физиологическим раствором к осадку добавл ют 1 мл его. В 0,1 мг/мл НММ внос т 0,1 мл отмытой культуры холерного вибриона. Раствор нитрозометилмочевины готов т путем добавлени  1 мг НММ в 1 мл физио.лЬгическ6 гб раствора. 0,1 мл препарата перенос т в 0,9 мл физиологического pacTBOpja, в который добавл ют 0,1 мл культуры. После контакта с препаратом в течение 15 минут производ т высев на питательную среду слейующего состава (г/л) : экстракт дрожжевой (аминный азот 30 мг %) - 10,0 пептон Мартека (соотношение 1:1 к объему дрожжевого экстракта) - 5,0 агар Корсаковский - 20,0 Посевы выращивают при 37 и наблюдают за образованием пигментных колоний 10 сут. Пигментную колонию пересевают на чашку с агаром. Через 1-2 сут выращивани  газон выросшей культуры приобретает шоколадный цвет. Селекционированные этим способом мутанты стойко сохран ют способность образовывать пигмент. Способ иллюстрируетс  следующим примером. 1 мг нитрозометилмочевины раствор ют в 1 мл физиологического раствора . О,1 мл препарата перенос т в 0,9 мл физиологического раствора, в который . добавл ют О,1 мл Vibrioeltor 381-В. Штамм готов т путем посева 1

петли суточной агаровой культуры в п1р1б6ирку с 5 мл бульона. Через сутки выраащвани  при 37 центрифугируют

и Удал ют надосадочную жидкость. К осадку добавл ют по 5 мл физраствора и 01ткывают центрифугированием дважды , удал   недостаточную жидкость. Затем к осадку добавл ют 1 .мл того же раств рра. Смесь НИМ с культурой холерных вибрионов помещают в термостат на 15 мин. при. 37 . Затем 0,1 пробы перенос т в 10 мп бульона и пс 0,5 мл последовательно раститровывают в шести пробирках с 4,5 мл бульо на. Из каждой пробирки высевают по 0,1 мл на 3 чашки с агаром дл  получени  изолированных колоний. Через

ёу Шгйрсхвйд т повторное титр овйние культуры из всех пробирок по 0,5 мп и высевают на 3 чашки с агаром по 0,1 мл из 5, б, 7 пробирок. Все посевы сохран ют при в течение 10 суток. Колонии коричневого цвета перёсевают на чашку с агаром и через 1 сут. выращивани  газон культуры имеет шоколадный цвет. Остальные свойства пигментной культуры Vibrio-

eltor 381 П не отличаютс  от исходного штамма.

Использование изобретени  позволит упростить отбор мутантов холерных вибрионов при проведении генетических исследований.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  мутантов холерных вибрионов путем выращивани  исходной культуры в жидкой питательной среде, приготовлени  микробной суспензии обработкой ее нитрозометилмочевиной , пересевом на плотную питательную среду и отбором колоний мутантов , о т л и ч а ю щ и и с   тех что, с целью упрощени  отбора мутантов , суспензию обрабатывают нитрозометилмочевиной в концентрации 20 0/5 мг/мл и отбирают мутанты по коричневой окраске колоний.

   Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Проблемы особо опасных инфек25 ций, 1972, в. 4(26), стр.- 95-99.