SU702029A1 - Способ разделени белков шерсти овец - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ ШЕРСТИ ОВЕЦ

,. 1 Изобретейие относитс  к улучшенно му способу разделени  белков шерсти овец, который может найти применение в лабораторной практике при изучении химической структуры, химического состава и качества шерхзти овец Известен способ выделени  из шерсти овец тирозин-содержащих белков 1, который состоит в растворении шерхзти в смеси 6 М мочевины и 0,2 М тиогликол та натри  при рй11, алкилировании иодацетатом сульфглдрильных групп, выделении-.богатых тирозином белков в виде S-карбоксиметилпроизводньлх фракционированным осаждением и диализом. Однако этот метод позвол ет выдел ть из шерсти овецТОЛЬКО фракцию белков богатых, тирозином, к ,тому же обработка шерст тиогликол том сопровождаетс  длитель ной очисткой белков от мочевины с применением мелкопористых диализных мембран, Наиболее близким к за вл емому  вл етс  способ разделени  белков шерсти овец 2, включающий: окисление шерсти 1, надуксусной кислотой в течение 48 ч при 25,промывку и высушивание шерсти.последующее растворение окисленной шерсти в едкой щелочи (24 ч при 25°), отделение нерастворившейс  части шерсти, представл ющей собой бета-кератозу, . фильтрованием, определение содержани  в фильтрате общего .белка и альфа-ке .ратозы, и, наконец, расчет содержани  гамма-кератрзы как разницы между общим белком и альфа-кератозой. Таким способом белки, выделенные из шерсти овец, были разделены на три группы: бета-кератозы, г редставл ющие собой кутикулу и остатки клеточньк оболочек шерст ного волокна; альфа-кератозы - белки высокого молекул рного веса с низким содержанием серы и га№ла-кератозы - нйзкомолекул рные белки с высоким содержанием серы. При этом лишь одна группа белков (бета-кератозы) может быть получена в чистом виде, Однако этот способ позвол ет разделить белки шерсти овец лишь на три группы, причем тирозин-содержащие белки присутствуют во всех трех фракци х в виде примесей и преп тствуют определению истинного содержани  белка в каждой фракции.

Цель насто щего изобретени  - повшиение селективности разделени  белков шерсти овец.

Поставленна  цель достигаетс  описываемым способом разделени  белков шерсти овец, заключающимс  в том, что осуществл ют обработку шерсти 40-кратным объемом надмуравьиной кислоты в течение 25-35 мин при охлаждении с последующей нейтрализацией охлажденного надмуравьиного экстракта 20%-ым раствором едкого натра до рН 6.0-7,0, последующим диализом против водопроводной воды через оберточный целлофан и удалением выпавших в сгсадок белков.

Шерсть, после отделени  надмуравьинокислого экстракта, окисл ют 1,6%-ой надуксусной кислотой при комнатной температуре в течение 48 ч промывают дистиллированной водой,просушивают , раствор ют в едкой щелочи (24 ч, комнатна  температура),нераствор ив 1ии ее   белки отдел ют фильтрованием .

Отличительными признаками способа ЯВЛЯЮТСЯ: обработка шерсти 40кратным объемом надмуравьиной кислоты в течение 25-35 мин при охлаждении с последующей нейтрализацией охлажденного надмуравьиного экстракта едким натром, диализом против водопроводной воды через оберточный целлофан и удалением выпавших в осадок белк ов .

Использование насто щего способа позвол ет разделить белкишерсти овец на 4 фракции, одна из которых представл ет собой тирозинсодержащйе белки, а остальные три - бета-кератозы , альфа-кератозы - белки высокого молекул рного веса с низким содержанием серыми гамма-кератозы - низкомолекул рные белки свысоким содержанием серы. Последние три типа белков свободны от тирозин-богатых белков.

Пример. Шерсть заливают охлажденной до 0°надмуравьиной кислотой (на единицу веса шерсти 40 часРезультаты разделени  шерсти овец асканийской тонкоруной породы и австралийского мериноса. Соотношение различных групп белк ов (%)

Австралийский, меринос 5,4

той надмуравьиной кислоты) и вццерживают 30 мин при 0°.

Надмуравьинокислый экстракт отдел ют фильтрованием через стекл нный фильтр. Остаток шерсти на фильтре промывают небольшим количеством муравьиной кислоты, затем дистиллированной водой до нейтральной реакции, .Промывку муравьиной кислотой и надмуравьинокислый экстракт объедин ют, охлаждают до О и медленно нейтрализуют JiacTBopoM едкого натра.

Нейтральный раствор диализуют че .рез оберточный целлофан против дистиллированной воды в течение 12 ч. Выпавщиев осадок белки центрифугируют и промывают дистиллированной водой .

Остаток шерсти, после обработки последней надмуравьиной кислотой помещают в колбу, заливают стократным объемом 1,6%-ой надуксусной кислоты, плотно закртлвают и окисление провод т при комнатной температуре в течение 48 ч при непрерывном встр хивании .

Окисленный остаток- шерсти тщательно прсмьшают на стекл нном.фильтре дистиллированной водой, затем заливают стократным объемом 0,02 М раствором едкого натра и раствор ют при комнатной температуре, непрерывно встр хива  в течение 24 ч.

Нерастворившиес  белки отдел ют фильтрованием. К фильтрату добавл ют лед ную уксух:ную кислоту до конечной концентрации 5% и оставл ют на 24 ч в холодильнике. Выпавший осадок, (бед ные серЬй белки) отдел ют фильтрованием .

В фильтрате, представл ющем собой раствор богатых серой белков, шерсти содержание белка определ ют по Кьельдалю или спектрофотометрически при 272 нм. Белки сушат лиофилизацией.

Результаты разделени  белков овец асканийской тонкоруной породда и австралийского мериноса, а такke аминокислотный состав этих белков приведены в табл. 1-3.

Таблица 1

55,7

24,4

14,5

Содержание серы в различных группах

Богатые тирозином

Нерастворимые в

Аминокислотный состав белковых фракций шерсти по данным хроматографии на бумаге кислотных гидролизатов (%)

Аминокислоты 1. Фракции асканийской Цистеинова  кислота Лизин Гистидин Аргинин Аспарагинова  кислота , глицин, серин Глутсминова  кислота , треонин Алании Тирозин Валин, метионин Фенилаланин Лейцин, изолейдин 2. Фракции австралийской Цистеинова  кислота 10,8 12,3 Лизин8,8 4,2 Гистидин5,2 2,5 Аргинин5,2 9,4

7020296

Таблица 2 ; белков шерсти (%)

2,04

2,21

Таблица 9,0 7,1 4,6 7,2

.. .-M ivi6Wit.Jt - -формула изобретени 

Способ разделени  белков шерсти овец, вк|г1ючающий обработку шерсти карбоновыми надкислотами, растворение в щелочи и фракционное оса здение, р т л и ч а ю щ и и с   тем, что, с целью повышени  селективности разделени , осуществл ют обработку шёрсги 4 О-к ратным объемом надмуравьинЬЙ кислоты в течение 25-35 мин гфи сасла эдёнии, с последующей нейтрализацией Охлажденного надмуравьйного экстракта 20%-ым раствором едкого

Продолжение табл.3

натра до рН 6,0-7,0, последующим диализом против водопроводной воды через оберточный целлофан и удалением выпавших в осадок белков.

Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе

1.Ргагег R.D.B.,Giteesrpie J.A.,fAacT aeT.P. T rosine-ficti proteins i« keratihs Couip B ocliem a«d Pirssiot.,-1971,844,943.

2 .DziatosMnsVi U, MotciejeNWBka M ,Meto6a Dznacrqinia ir-acji KeratozoxN cti wetnx.ov/czvTclieniia ooiae-styma,-1964,9, 447(прототип) . .