Claims (1)
Изобретение относитс к способам получени концентрата гонадотропных гормонов, обладающих фолликулостимулирующим и лютеинизирующим действием, из сыворотки жеребых кобыл (СЖК) и может быть использовано в животноводческой И ветеринарной практике с цель стимул ции половой функции и при эндокринных нарушени х у сельскохоз йственных животных. Известные в насто щее врем производственные способы получени гонадотропииов из СЖК основываютс на методах фракционировани сывороточных (балластных) белков и последующего отделени гормоиов с помощью этилового спирта LIJ . Недостатком известных способов вл етс невысока степень очистки гормоиов . Активность получаемых такими способами препаратов, как правило, не превышает 80-100 м.е./мг сухого вещес тва (м.е. - мышина единица). Многократное переосаждение гормоиов спиртом обеспечивает более высоку степень очистки гормонов из СЖК и получение препаратов с активностью в пределах 300-600 м.е./мг и выие. Однако усложнение схем очистки гормонов приводит к удорожанию препарата и ограничивает возможности его массового производства дл применени в животноводческой и ветеринарной практике. целью изобретени вл етс упрощение процесса очистки и сокращение времени получени концентрата гоиадотропных гормонов из СЖК при. одновременном повышении степени очистки препарата и увеличении выхода гормонов по биологической активности. Цель достигаетс тем, что удаление балластных белков (общего белка) из СЖК осуществл ют вначале 12-15%-ным раствором риванола (2-этокси-6,9диамино-акридии лактата), добавл емым в количестве 1 объема к 9 объвмг№1 СЖК. Выпавшие в осадок балластные белки отдел ют . Вторичное осаждение общего белка провод т ацетоном при значении рН 8,5-9,0. Охлажденный ацетон добавл ют в количестве, равиом 90-95% объема сыворотки, оставшегос после обработки ривоиолом. Выделение концентрата гормонов провод т путем добавлени к очищенной СЖК ацетона до концентрации 70-75% и выдерживани в течение 30-60 минут при комнатной температуре. Полученный осадок отдел ют, прокывгиот спиртом и эфиром, раствор ют в дистиллированной воде и лиофилизируют. Активность препарата 220 м.ё./мг. Пример . К- 900 мл СЖК (консервированной 0,02% мертиолатом) с активност 2.00 м.е.. /МП добавл ют при помешивани Ло мл 12-15%-ного раствора риванола JpH 5,8) и выдерживают смесь при комнатной температуре в течение 15-20 ми Обильный осадок отдел ют центрифугированием при 3500 об/мин в течение 30 мин. Риванол из раствора удал ют добавлением хлористого натри из расчета 10 г на литр путем отстаивани в течение 30 мин при температуре - -4-С. СЖК фильтруют через фильтровальную бу магу или центрифугируют в течение 15м при 3000 об/мин рН фильтрата по вышают до 8,5-9,6 добавлением 1 нормального раствора едкого натра. После этого добавл ют охлажденный (42-.+ 4) ацетон в количестве 90-95% к оставшемус объему сыворотки. Смесь выдерживают при комнатной температуре (+18+2 в течение 30-60 мин. Выпавшие в осадок неактивные белки отдел ют центрифугированием (15мин при ЗОООоб/мин или фильтрованием через бумажный фильтр. К очищенной CXCK добавл ют охлажденный ацетон до 17-75%-но концентрации. Через 30-60 мин смесь центрифугируют (15-20мнн при ЗОООоб/м дл отделени гормонсодержащего ос ка. Осадок последовательно промыва ют 20 мл 96%-ного этилового, спирт и эфира, раствор ют в дистиллированной воде .лиофилизируют. Полученный KOHtieHTpaT гормонов сос тавл ет 0,7 г сухого вещества с актив ностью 220. м.е./мг. Использование предлагаемого способа получени концентрата гонадотропинов (Оваритропина) из сыворотки зкеребых кобый обеспечивает по сравнению с существующими способами следующие преимущества: более высокую степень очистки гонадотропинов (в 2-3 раза) без применени этилового-спирта; увеличение выхода гонадотропинов на 20-25%; сокращение времени производства препаратов с 2-3 суток до 1 рабочего дн (7-6 часов); исключение необходимости длительного осаждени СЖК ацетоном на холоду . Проверка аллергенных свойств препарата на морских свинках в реакции пр мой пассивной анафилаксии показала отсутствие анафилактических признаков при введении гормонов в количестве 1200 м.е, на одно животное. Экономический эффект предлагаемого изобретени состоит в обеспечении возможности создани массового производства концентрата гонадотропинов СЖК, характеризующегос более высокой степенью очистки от сывороточных белков и пригодного дл широкого использовани в животноводческой и ветеринарной практике, а также в снижении стоимости изготовлени препарата на 15-20% по сравнению с известным способом , Формула изобретени способ получени препарата гонадотропинов из сыворотки жеребых кобьш, включающий осаждение балластных белков из сыворотки и последующее выделение из нее гонадотропинов, о т л и чающийс тем, что, с целью уп .рощени процесса и повышени выхода гормона, осаждение балластных белков провод т путем обработки сыворотки вначале 12-15%-ным раствором риванола , добавленным к сыворотке в соотношении 1:9, в течение 15720 мин при, комнатной температуре, затем рН оставшегос объема сыворотки довод т до 8,5-9,0 и добавл ют к ней охлажденный ацетон в количестве 90-95% по отношению к объему, после чего смесь выдерживают в течение 30-60 мин при комнатной температуре, а вьаделение гонадотропинов провод т при дальнейшем довелении в сыворотке концентрации ацетона до 70-75% и выдерживании смеси в течение 30-60 мин при комнатной температуре, Источники информации , прин тые во внимание при экспертизе: 1, Авторское свидетельство №296573, кл, А 61 К 35/24, 1971,The invention relates to methods for producing gonadotropic hormone concentrate with follicle-stimulating and luteinizing action from the serum of foals (FFA) and can be used in animal and veterinary practice for the purpose of stimulating sexual function and in endocrine disorders in farm animals. Currently known production methods for the production of gonadotropies from FFAs are based on methods for the fractionation of whey (ballast) proteins and the subsequent separation of hormone using ethyl alcohol LIJ. A disadvantage of the known methods is the low degree of purification of the gormous. The activity of preparations obtained by such methods, as a rule, does not exceed 80-100 IU / mg of dry substance (IU is a mouse unit). Repeated reprecipitation of hormone with alcohol provides a higher degree of purification of hormones from FFA and obtaining drugs with an activity in the range of 300-600 IU / mg and vyie. However, the complication of hormone purification schemes increases the cost of the drug and limits the possibilities of its mass production for use in livestock and veterinary practice. The purpose of the invention is to simplify the purification process and reduce the time required to obtain a concentrate of goiadotropic hormones from FFA when. at the same time increasing the degree of purification of the drug and increasing the release of hormones for biological activity. The goal is achieved in that the removal of ballast proteins (total protein) from FFA is carried out first with a 12-15% solution of rivanol (2-ethoxy-6.9 diamino-acridium lactate), added in an amount of 1 volume to 9 vol. . The precipitated ballast proteins are separated. Secondary precipitation of total protein is carried out with acetone at a pH of 8.5-9.0. The cooled acetone is added in an amount, raviom, of 90-95% of the volume of serum remaining after treatment with rivoiol. The hormone concentrate was isolated by adding acetone to a purified FFA to a concentration of 70-75% and incubating for 30-60 minutes at room temperature. The resulting precipitate is separated, scrubbed with alcohol and ether, dissolved in distilled water and lyophilized. The activity of the drug 220 ME / mg. An example. K-900 ml of FFA (canned 0.02% merthiolate) with an activity of 2.00 i.e. / MP is added while stirring Lo-ml of a 12-15% solution of rivanol JpH 5.8) and keeping the mixture at room temperature for 15-20 mi A rich precipitate is separated by centrifugation at 3500 rpm for 30 minutes. Rivanol is removed from the solution by adding sodium chloride at a rate of 10 g per liter by settling for 30 minutes at a temperature of -4 ° C. FFA is filtered through filtering paper or centrifuged for 15 m at 3000 rpm. The pH of the filtrate rises to 8.5-9.6 by adding 1 normal caustic soda solution. After that, chilled (42 -. + 4) acetone is added in an amount of 90-95% to the remaining volume of serum. The mixture is kept at room temperature (+ 18 + 2 for 30-60 minutes. The inactive proteins precipitated are separated by centrifugation (15 min at ZOOO / min or filtered through paper filter. Chilled acetone is added to purified CXCK to 17-75%). but concentrations. After 30-60 minutes, the mixture is centrifuged (15-20 ppm at ZOOOob / m to separate the hormone-containing axes. The precipitate is washed with 20 ml of 96% ethyl, alcohol and ether and dissolved in distilled water. Lyophilized. The resulting KOHtieHTpaT hormones is 0.7 g of dry matter per act 220 mU / mg. The use of the proposed method for the preparation of gonadotropins concentrate (Ovaritropina) from serum of cereals provides for the following advantages compared to existing methods: a higher degree of purification of gonadotropins (2-3 times) without the use of ethyl alcohol ; an increase in the yield of gonadotropins by 20–25%; a reduction in the production time of preparations from 2–3 days to 1 working day (7–6 hours); eliminating the need for prolonged precipitation of FFA with acetone in the cold. Checking the allergenic properties of the drug in guinea pigs in the reaction of direct passive anaphylaxis showed the absence of anaphylactic signs when hormones were administered in an amount of 1200 Ie per animal. The economic effect of the proposed invention is to provide the possibility of creating mass production of FLC gonadotropin concentrate, characterized by a higher degree of purification from whey proteins and suitable for widespread use in animal and veterinary practice, as well as in reducing the cost of manufacturing the drug by 15-20% compared with the known method, the claims of the method of obtaining the preparation of gonadotropins from the serum of foals, including the deposition of ballast proteins from Serum and the subsequent release of gonadotropins from it, which is due to the fact that, in order to improve the process and increase the hormone yield, the deposition of ballast proteins is carried out by treating the serum with a 12-15% solution of rivanol, added to the serum 1: 9, for 15720 min at room temperature, then the pH of the remaining volume of the serum is adjusted to 8.5-9.0 and cooled acetone is added to it in an amount of 90-95% relative to the volume, after which the mixture incubated for 30-60 minutes at room temperature, and vydelenie onadotropins are carried out with a further increase in serum acetone concentration to 70-75% and keeping the mixture for 30-60 min at room temperature. Sources of information taken into account during the examination: 1, Copyright certificate №296573, A, K 61 35/24, 1971,