Claims (3)
КАЛЬЦИЯ оказываетс на себестоимости техническо о 2-кето-Д-глюконата кальци , поскольку выход иродукта при окислении на этой среде относительно невысок и составл ет 72%. Целью изобретени вл етс разработка способа получени 2-кето-Д-глюконата кальци из доступного сырь , с достаточно высоким выходом, при одновременном сокращении длительности процесса ферментации и удешевлении целевого продукта. Это достигаетс тем, что в качестве источника углерода используют осахаренный кукурузный крахмал в количестве 8-10% в пересчете на Д-глюкозу, а в качестве источника азота - ацетат аммони в количестве 0.100 ,12%, при этом процесс культивировани недут при рН 6,0-6,5. Сущность изобретени состоит в том, что в качестве исходного иродукта дл получени 2-кето-Д-глюконата кальци микробиологическим окислением исиользуют осахаренный кукурузный крахмал с содержание.м Д-глюкозы 40-45%, который может быть получен или ферментативным, или кислотным гидролизом. Использование осахаренного кукурузного крах .мала позвол ет зиачительно снизить (в два раза) затраты на 11сходное сырье, так как исключаютс технологические операции но крис таллизации и выделению «пищевой Д-глюкозы из крахмала. Кроме того, осахаренный кукурузный крахмал содержит некоторые количества аминокислот (до 0,12%). Поэтому не требуетс добавлени в питательную среду таких компонентов, как кукурузный экстракт и мочевииа . В качестве источника азота в состав среды добавл ют ацетат аммони в количестве, не превышающем 0,12%. Введение ацетата аммони в питательную среду позвол ет также стабилизировать рН среды в интервале 6,0-6,5, что обеспечивает оптимальные услови образованн 2-кето-Д-глюконата кальци и таким образом сокращает продолжительпость процесса до 18 час. Окисление осахаренного кукурузного крахмала провод т культурой Ps. fluorescens, использу питательную среду следующего состава: осахаренный кукурузный крах.мал концентрацией 8-10% в нересчете на Д-глюкозу; аиетат аммони 0,10-0,12%; однозамещенный фосфат кали 0,05°/о; сульфат магни (гидрат ) 0,03%, углекислый кальций 1,3%. Процесс формеитации недут при температуре 28 30 С, при аэрации и через 18 час получают в результате осаждени и фильтрации 2-кето-Д-глюконат кальци с выходом 85%. Содержание 2-кето-Д-глюконата кальци в культуральной жидкости и в выделенном техническом продукте, который используетс дл дальнейщего синтеза без очистки, определ ют спектрофотометрическим методом, измер значение интенсивности поглощени света продукта реакции 2-кето-Д-глюкоиата кальци с о-фенилендиа.мином при длине волны 348 им. Данные анализа показывают, что накопление 2-кето-Д-глюконата кальци в культуральной жидкости достигает 95-98%, содержание его в выделенном продукте 90%. Пример I. Окисление осахаренного кукурузного крахмала провод т в ферментере е.мкостью 100 л, содержа;цем 40 л питательной среды следующего состава (в %); осахаренный кукурузный крахмал в пересчете на Д-глюкозу 8; ацетат ам.мони 0,10; одпозамещенный фосфат кали 0,05; сульфат магни (гидрат) 0,03; углекислый кальций 1,3; рН среды 6,0, температуре 28-30°С, при аэрации воздуха 1 л воздуха/1 л среды в 1 мин (сульфитное число 1,57) в течение 18 час. Посевным .материалом елужит 36-часова культура Pseudomonas fluorescens, выращенна на среде, состо щей из Д-глюкозЬ)1 (1%), пептона (0,5%) и дрожжевой воды (1% сухих веществ). Посевной материал внос т в питательную среду в количеетве lOVo (по объему ). . Культуральную жидкость по окончании процесса ферментации (объемо.м 40 л) центрифугируют дл отделени биомассы, обрабатывают активированны.м уг.те.м марки А (1% по объему ) в течение 30 мин при перемещивании, затем фильтруют. Полученный фильтрат упаривают до 1/5-1/6 начального объема, после чего 2-кето-Д-глю.конат кальци выпадает в осадок. Получают после фильтрации 2-кето-Д-глюконат кальци с выходом 84,8% (в расчете на Д-глюкозу, содержащуюс в осахаренном кукурузно.1 крахмале). Содержание 2-кето-Д-глюконата кальци в полученном продукте 90%. Пример CALCIUM is at the cost of technical 2-keto-D-gluconate calcium, since the yield of the product during oxidation on this medium is relatively low and is 72%. The aim of the invention is to develop a method for obtaining calcium 2-keto-D-gluconate from available raw materials, with a sufficiently high yield, while reducing the duration of the fermentation process and the cheapening of the target product. This is achieved by using 8-10% saccharified corn starch as a carbon source in terms of D-glucose, and 0.100, 12% ammonium acetate as a nitrogen source, while the cultivation process is not at pH 6, 0-6.5. The essence of the invention is that as a starting material for obtaining calcium 2-keto-D-gluconate, saccharified corn starch with a content of D-glucose of 40-45%, which can be obtained by either enzymatic or acid hydrolysis, is used by microbiological oxidation. The use of saccharified corn collapse .mala makes it possible to reduce (twice) the cost of raw materials, since it eliminates the technological operations but crystallization and the release of food D-glucose from starch. In addition, saccharified corn starch contains some amino acids (up to 0.12%). Therefore, it is not necessary to add components such as corn extract and urea to the nutrient medium. As a nitrogen source, ammonium acetate is added to the medium in an amount not exceeding 0.12%. The introduction of ammonium acetate into the nutrient medium also makes it possible to stabilize the pH of the medium in the range of 6.0-6.5, which provides optimal conditions for the formation of calcium 2-keto-D-gluconate and thus reduces the duration of the process to 18 hours. The oxidation of saccharified corn starch is carried out with a Ps culture. fluorescens, using a nutrient medium of the following composition: saccharified corn starch with a concentration of 8-10% in terms of D-glucose; ammonium aietate 0.10-0.12%; monobasic potassium phosphate 0.05 ° / o; magnesium sulfate (hydrate) 0.03%, calcium carbonate 1.3%. The process of formatization is not done at a temperature of 28–30 ° C, with aeration and after 18 hours, calcium precipitate and filtration is obtained as a result of precipitation and filtration with a yield of 85%. The content of calcium 2-keto-D-gluconate in the culture fluid and in the isolated technical product, which is used for further synthesis without purification, is determined by a spectrophotometric method, measuring the value of the light absorption intensity of the product of calcium 2-keto-D-glucoate with o-phenylenedia .min at a wavelength of 348 to them. The analysis data show that the accumulation of calcium 2-keto-D-gluconate in the culture fluid reaches 95-98%, its content in the selected product is 90%. Example I. The oxidation of saccharified corn starch is carried out in a 100 liter fermenter with a content of 40 l of nutrient medium of the following composition (in%); saccharified corn starch in terms of D-glucose 8; ammonium acetate 0.10; single potassium phosphate 0.05; magnesium sulfate (hydrate) 0.03; calcium carbonate 1,3; pH 6.0, temperature 28-30 ° C, with aeration of air 1 liter of air / 1 l of medium per 1 minute (sulfite number of 1.57) for 18 hours. A 36-hour culture of Pseudomonas fluorescens grown on a medium consisting of D-glucose 1 (1%), peptone (0.5%), and yeast water (1% dry matter) is cultivated with sowing material. The seed is introduced into the nutrient medium in quantities of lOVo (by volume). . At the end of the fermentation process (culture volume, 40 l), the culture fluid is centrifuged to separate the biomass, treated with activated carbon materials of grade A (1% by volume) for 30 minutes while being transported, then filtered. The obtained filtrate is evaporated to 1 / 5-1 / 6 of the initial volume, after which 2-keto-D-glu. Calcium calcium precipitates. After filtration, 2-keto-D-gluconate calcium is obtained with a yield of 84.8% (based on D-glucose contained in saccharified corn.1 starch). The content of calcium 2-keto-D-gluconate in the resulting product is 90%. Example
2. Процесс ферментации провод т аналогично примеру 1, но на питательной среде следующего состава (в %): осахаренный кукурузный крахмал 10 (в переечете на Д-глюкозу ); ацетат а.ммони 0,12; однозамещенный фосфат кали 0,05; сульфат магни (гидрат) 0,03; углекислый кальций 1,3; рН среды 6,5. Выделение продукта осуществл ют аналогично способу, описанному в примере 1, и получают 2-кето-Д-глюконат кальци с выходом 85,2% и содержанием 90%. Так как 2-кето-Д-глюконат кальци будет использован дл производства изоаскорбината натри с расходным коэффициентом около 2 кг, то экономи по сырью дл этого продукта будет составл ть 2 руб. 80 коп. на каждый килогра.мм. Формула изобретени Способ получени 2-кето-Д-глюконата кальци путем культивировани бактерий рода Pseudomonas на питательной среде, содержащей источник углерода, азота и необходимые минеральные соли в услови х аэрации с последующим выделением продукта, отличающийс тем, что, с целью сокращени продолжительности процесса, повыщени выхода продукта и его удещевлени , в качестве источника углерода , используют осахаренный кукурузный крахмал в количестве 8-10% в пересчете на Д-глюкозу, а в качестве источника азота -2. The fermentation process is carried out analogously to example 1, but on a nutrient medium of the following composition (in%): saccharified corn starch 10 (in the case of D-glucose); ammonium acetate 0.12; potassium phosphate monobasic 0.05; magnesium sulfate (hydrate) 0.03; calcium carbonate 1,3; pH 6.5. Isolation of the product was carried out similarly to the method described in Example 1, and calcium 2-keto-D-gluconate was obtained in a yield of 85.2% and a content of 90%. Since calcium 2-keto-D-gluconate will be used for the production of sodium isoasorbate with a consumption ratio of about 2 kg, the savings in raw materials for this product will be 2 rubles. 80 kopecks per kilogram. The invention of the method for producing calcium 2-keto-D-gluconate by cultivating bacteria of the genus Pseudomonas on a nutrient medium containing a source of carbon, nitrogen and necessary mineral salts under aeration conditions, followed by isolation of the product, characterized in that to increase the yield of the product and its supply, as a carbon source, use saccharified corn starch in the amount of 8-10% in terms of D-glucose, and as a source of nitrogen -
5603659g5603659g
ацетат аммони в количестве 0,10- 0,, при1. Патент США Nb 3282795, кл. 195- -47,ammonium acetate in the amount of 0.10-0, pri1. U.S. Patent No. 3,282,795, cl. 195-47,
этом процеес культивировании ведут при рН1966.this process cultivation is carried out at pH 1966.
6,0-6,5.2. Патент C11JA Л 3255093, кл. 195 47,6.0-6.5.2. Patent C11JA L 3255093, cl. 195 47,
Источники информации, прин тые во вни-Sources of information taken into account
3. Патент США N° 2277716, кл. 19о- 47,3. US patent N ° 2277716, cl. 19- 47
мание при экснертизе:1942.mania during exertizis: 1942.