SU582283A1

SU582283A1 - Method of obtaining cell culture for revaccination

Info

Publication number: SU582283A1
Application number: SU7402066799A
Authority: SU
Inventors: Зинаида Петровна Наумец
Priority date: 1974-10-11
Filing date: 1974-10-11
Publication date: 1977-11-30

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КУЛЬТУРЫ(54) METHOD FOR OBTAINING A TRAINED CULTURE

КЛЕТОКCELL

Концентрацию клеток устанавливают равной 1QOOOO кл./мл и высевают в матрасы Ру. В этой стадии клетки обладают активным метаболизмом, о чем свидетельствует быстрое подкисление среды (изменение рН от 7,2 до 6,8). Клетки веретенообразные, фибробластоподобного типа, плотно прилегают одна к другой и образуют монослой на 3-й - 4-ые сутки .The cell concentration is set equal to 1QOOOO cells./ml and seeded in mattresses Py. In this stage, the cells have an active metabolism, as evidenced by the rapid acidification of the medium (pH change from 7.2 to 6.8). Cells spindle-shaped, fibroblast-like type, tightly fit one to another and form a monolayer on the 3rd - 4th day.

Дл пересева клетки со стекла снимают 0,02%-ным раствором версена, иногда с добавлением 0,5%-ного раствора трипсина. Второй период жизни первичных клеток, начина со 2-ой субкультуры, характеризуетс постепенным замедлением роста. В это врем осуществл етс перестройка генетического аппарата клетки применительно к новым услови м жизни вне организма. Замедленному росту клеток во второй период более соответствует среда с пониженным до 5% содержанием сыворотки . Кроме того, дл создани условий постепенной перестройки клеточного метаболизма и адаптации клеток к жизни in vitro замен ют среду частично -- к 2/3 объема свежей среды добавл ют 1/3 объема старой.To pass the cell, remove the glass from the 0.02% Versene solution, sometimes with the addition of a 0.5% Trypsin solution. The second period of life of the primary cells, starting from the 2nd subculture, is characterized by a gradual slowdown in growth. At this time, the genetic apparatus of the cell is reorganized in relation to new conditions of life outside the body. The slow growth of cells in the second period is more consistent with the medium with reduced serum content to 5%. In addition, to create conditions for gradual restructuring of cell metabolism and adaptation of cells to life in vitro, the medium is partially replaced — 1/3 of the volume of old is added to 2/3 of the volume of fresh medium.

Регул рные пересевы клеток провод т после образовани клетками моносло через 7- 14 дней с использованием густого посева суспензии клеток 1 :2 или 1:1. Этим исключаетс фаза дегенерации культуры. Первичные клетки получают возможность размножени , и тем самым увеличиваетс процент по влени трансформированных клеток.Regular cell subcultures are carried out after the formation of a monolayer by the cells after 7-14 days using a thick seeding cell suspension of 1: 2 or 1: 1. This eliminates the phase of culture degeneration. Primary cells are able to multiply, and thereby the percentage of transformed cells increases.

Через мес ц наступает треть стади в жизни культуры клеток - трансформаци . Этот период характеризуетс множественным по влением колоний клеток полигональной формы среди моносло веретенообразных. С наступлением трансформации метаболизм клеток повышаетс , что сопровождаетс быстрым подкислением среды.In a month, a third stage occurs in the life of a cell culture — transformation. This period is characterized by the multiple appearance of polygonal cell colonies among monolayer spindles. With the onset of transformation, cell metabolism increases, which is accompanied by rapid acidification of the medium.

Клетки не нуждаютс больше в добавлении старой питательной среды, и ее исключают из обращени . Питательна среда содержит равные количества 0,5%-ного раствора гидролизатлактальбумина и среды 199, 10% сыворотки молодн ка крупного рогатого скота, пенициллин и стрептомицин по 100 ед/мл.The cells no longer need to add the old nutrient medium, and they are excluded from circulation. The nutrient medium contains equal amounts of a 0.5% solution of hydrolyzate-lactalbumin and medium 199, 10% serum of young cattle, penicillin and streptomycin in 100 units / ml.

Из шести попыток получени перевиваемых клеточных линий все были успешными. Клетки культивируютс в лаборатории более 2-х лет с посто нным сохранением своих свойств.Of the six attempts to obtain transplantable cell lines, all were successful. Cells are cultivated in the laboratory for more than 2 years with a constant preservation of their properties.

Claims

1. Gavrilov V. I. Transferable cells in 5 virology. M., 1964, p. 49.

2. Kaplina, A.I., et al. Experience in obtaining transplantable tissue culture cells. - Proceedings of the Dnepropetrovsk Research Institute of Epidemiology, Microbiology and Hygiene. N.F. Gamalei, 1962, v. 5, p. 65-68.