SU575353A1 - Method of obtaining carboxypepiidase - Google Patents

Method of obtaining carboxypepiidase

Info

Publication number
SU575353A1
SU575353A1 SU7602318310A SU2318310A SU575353A1 SU 575353 A1 SU575353 A1 SU 575353A1 SU 7602318310 A SU7602318310 A SU 7602318310A SU 2318310 A SU2318310 A SU 2318310A SU 575353 A1 SU575353 A1 SU 575353A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
acetate
protein
calcium
buffer containing
ammonium sulfate
Prior art date
Application number
SU7602318310A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Александр Соломонович Цыперович
Наталья Ивановна Поликарпова
Анна Соломоновна Пилявская
Original Assignee
Институт Биохимии Им.А.В.Палладина Ан Украинской Сср
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт Биохимии Им.А.В.Палладина Ан Украинской Сср filed Critical Институт Биохимии Им.А.В.Палладина Ан Украинской Сср
Priority to SU7602318310A priority Critical patent/SU575353A1/en
Application granted granted Critical
Publication of SU575353A1 publication Critical patent/SU575353A1/en

Links

Landscapes

  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

1one

Изобретеиие относитс  к способу получени  протеолитйческог о фермеита карбоксипептндаэы (КФ 3.4.12), примен емой в пищевой, текстильной и медицинской промывшейиости, а также в научной и лабораторной практике.The invention relates to a method for producing a proteolytic fermoite carboxypeptindaea (EC 3.4.12) used in food, textile and medical washing, as well as in scientific and laboratory practice.

В промышленном масштабе карбоксипептидаэу получают из сырь  животного происхождени  - поджелудочной железы крупного рогатого скота - путем многостадийной очистки и выделени  фракции, содержащей карбоксипептидазу. В результате получают суспензию фермента, весьма нестойкую при хранении.On an industrial scale, carboxypeptidae is obtained from animal raw materials - the bovine pancreas - by multistage purification and separation of the fraction containing carboxypeptidase. The result is a suspension of the enzyme, very unstable during storage.

В насто щее врем  наиболее перспе тивн1 О4И  вл ютс - способы получени  ферментов из микробных источников дешевого сырь  и мощного продуцента ферментов со специфическими свойствамиCurrently, the most promising O4I are methods for producing enzymes from microbial sources of cheap raw materials and a powerful producer of enzymes with specific properties.

Одним из таких способов  вл етс  получение карбоксипептидазиой фракции из проназы - ферментного комплекса актиномицета Streptomyce&grisetis (str . ) путем осаждени  белков сол ми , например сульфатом дк 1они , и органическими растворител ми, фракционировани  белков на ионообменных смолах и молекул рных ситах с выделением смеси ферментов, вход щих в состав One such method is to obtain the carboxypeptidase fraction from the pronase – enzyme complex of Streptomyce & grisetis (Str.) Actinomycete by precipitating proteins with salts, for example dimethyl sulphate, and organic solvents, fractioning proteins on ion exchange resins and molecular sieves with separation of the mixture enzymes that are part of

проназы, и кх хроматографировани  на колонке с амберлитом.pronase, and kx chromatography on an amberlite column.

Белок карбоксипептидазной фракции осаждают из раствора сульфатом ак юни , осадок раствор ют в буфере и лл лее диализуют с получением фермеита в виде раствора.The protein of the carboxypeptidase fraction is precipitated from the solution by sulphate of akuni, the precipitate is dissolved in a buffer and then dialyzed to obtain fermitic in the form of a solution.

К недостаткам известного способа относ тс  низкий выход целевого продукта и получение фермеита с ииэкими| удельными активностью и стабильность при хранении.The disadvantages of this method include the low yield of the target product and the production of a fermitite with iekimi | specific activity and storage stability.

Цель изобретени  - повышение стабильности фермента, его удельной активности и выхода - достигаетс  тем, tTO из культуральной жидкости актинов мидета Str. fHeeus после фильтровани  осаждают белки добавлением сульфата аммони  до полного насыщени , а полученную после диализа карбоксипепг тидазу лиофилизируют в ацетатном буфере , содержащем ионы кальци , предпочтительно в 0,05 М ацетатном буфере , содержащем 0,01 М ацетат кальци The purpose of the invention is to increase the stability of the enzyme, its specific activity and yield - by tTO from the culture fluid of actin midin Str. After filtration, the fHeeus precipitates the proteins by adding ammonium sulfate until complete saturation, and the carboxypepididase obtained after dialysis is lyophilized in acetate buffer containing calcium ions, preferably in 0.05 M acetate buffer containing 0.01 M calcium acetate

Claims (2)

Пример. 1,5 л культуральной жидкое ти ьктиномицета Str. seus штамм С-5 полученной с Киевского завода медпр паратов , фильтруют, добавл ют к филь рату сульфат аммони  до полного насы щени  (700-720 г соли на 1 Л фильтра та), центрифугируют (4000-6000 об/ми на холоду в течение 1 час и суспенди руют осадок в 50 мл воды, содержащей 0,001 М ацетат кальци . Затем смесь диалиэуют 4-5 час проTHS проточной воды и 12 час против дистиллированной воды с добавлением 0|OQ1 М ацетата кгшьци . Объем жидкости после диализа увеличиваетс  до 100 мл. Диализат нанос т на колонку {5 х X 40 см) I заполненную натрийкарбокси метилцеллюлозой с емкостью 0,7 мг-эк Белковые фракции элюируют линейным градиентом хлорида натри  (в одном сосуде 0,005 М ацетатный буфер, содержащий 0,001 И ионов кальци , а в другом 500 мл 0,35 М раствора хлорида натри  в буфере). Полученную после хроматографии гре тью фракцию осаждают насыщенным рас твором (98%) сульфата аммони , центрифугируют на холоду, раствор ют в минимальном количестве 0,05 М ацетат ного буфера, содержащего 0,01 М гщетат кальци , и диализуют 2 час проти проточной воды 12 час против буфера. Полученный диализат нанос т на колонку (2 X 30 см) с амберлитом СУ-50 в Ма форме, уравновешенную тем же буфером, и элюируют белковые фракции линейным градиентом ацетата натри  ( в одном сосуде 500 мл 0,05 М ацетатного буфера, содержащего 0,01 М ионов кальци , в другом 1 М раствор ацетата натри  в этом же буфере). Полученную после хроматографии тре тью фракцию, содержащую карбоксипептидазу , осаждают сульфатом аммони , диализуют против ацетатного буфера и лиофилизируют в 0,05 М ацетатном буфере, содержащем 0,01 М ацетат кальци . Получают препарат карбокснпептидаг|ы, гомогенной при рехроматографии на колонке с амберлитом СУ-50, при электрофорезе в полиакриламидном геле и пд N-концевому анализу (аланин). К преимуществам предлагаемого способа относ тс  получение высокоактивного , с.табильного (лиофилкэированный препарат, содержащий 5-10% белка, сохран ет свою активность в течение нескольких лет) препарата карбокси- : пептидазы с высоким выходом (выход по белку от белков культуральной згиАкости 4-5%, по активности 10-20%) из микробного сырь ,  вл ющегос  отходом при производстве антибиотиков. Формула изобретени  1.Способ получени  карбоксипептида ,зы из белкового сырь  актиномицета Straptomvces , включахнций , извлечение из сырь  белков осаждением сульфатом аммони , фракционирование белков ионообменной хроматографи ей с последующим диализом, отличающийс  тем, что, с целью по вшиени  стабильности фермента, его удельной .активности и выхода, в качестве белкового сырь  используют культуральную жидкость актиномицета, из которой после фильтровани  осаждают белки добавлением сульфата аммони  до полного насыщени , а полученную после диализа карбоксипептидазу лиофилизируют в ацетатиом буфере, содержащем иоиы кальци . Example. 1.5 l of culture liquid liquid octomycete Str. seus strain C-5 obtained from the Kiev medical plant, filtered, ammonium sulphate was added to the filtrate until complete saturation (700-720 g of salt per 1 L of filter), centrifuged (4000-6000 rpm in cold for 1 hour and the precipitate is suspended in 50 ml of water containing 0.001 M calcium acetate. Then the mixture is dialyzed for 4-5 hours with THS running water and 12 hours against distilled water with 0 | OQ1 M acetate per kg. The volume of the fluid after dialysis is increased to 100 ml Dialysate is applied to a {5 x X 40 cm column) I filled with sodium carboxy methylcellulose with a capacity 0.7 mg-ec Protein fractions are eluted with a linear gradient of sodium chloride (0.005 M acetate buffer containing 0.001 AND calcium ions in one vessel, and another 500 ml of a 0.35 M solution of sodium chloride in the buffer). The fraction obtained after chromatography with hydrogen is precipitated with a saturated solution (98%) of ammonium sulfate, centrifuged in the cold, dissolved in a minimum amount of 0.05 M acetate buffer containing 0.01 M calcium calcium, and dialyzed 2 hours against running water 12 hour vs buffer. The resulting dialysate is applied to a column (2 x 30 cm) with amberlite SU-50 in Ma form, equilibrated with the same buffer, and protein fractions are eluted with a linear sodium acetate gradient (in one vessel 500 ml 0.05 M acetate buffer containing 0, 01 M calcium ions, in another 1 M sodium acetate solution in the same buffer). The third fraction containing carboxypeptidase obtained after chromatography is precipitated with ammonium sulfate, dialyzed against acetate buffer, and lyophilized in 0.05 M acetate buffer containing 0.01 M calcium acetate. A carboxne peptidag preparation is obtained, homogeneous with rechromatography on a column with amberlite SU-50, with electrophoresis in polyacrylamide gel and in the N-terminal analysis (alanine). The advantages of the proposed method include the preparation of a highly active, stable (lyophilized preparation containing 5-10% protein, retains its activity for several years) of a carboxy-: peptidase preparation with a high yield (protein yield from culture protein 4- 5%, by activity 10-20%) from microbial raw materials, which is a waste in the production of antibiotics. Claim 1. Method for producing a carboxypeptide, protein from actinomycete Straptomvces protein raw material, including choros, extraction of proteins from raw material by ammonium sulfate precipitation, fractionation of proteins by ion-exchange chromatography with subsequent dialysis, characterized by its specific activity. and yield, as a protein raw material, actinomycete culture fluid is used, from which, after filtration, proteins are precipitated by adding ammonium sulfate to complete saturation, and the resulting after dialysis carboxypeptidase is lyophilized in acetated buffer containing calcium supplements. 2.Способ ПОП.1, отличающийс  тем, что лиофилизацию провод т в 0,05 М ацетатном буфере, содержгицем 0,01 М ацетат кальци .2. Method POP1, characterized in that the lyophilization is carried out in 0.05 M acetate buffer containing 0.01 M calcium acetate.
SU7602318310A 1976-01-22 1976-01-22 Method of obtaining carboxypepiidase SU575353A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU7602318310A SU575353A1 (en) 1976-01-22 1976-01-22 Method of obtaining carboxypepiidase

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU7602318310A SU575353A1 (en) 1976-01-22 1976-01-22 Method of obtaining carboxypepiidase

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU575353A1 true SU575353A1 (en) 1977-10-05

Family

ID=20646908

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU7602318310A SU575353A1 (en) 1976-01-22 1976-01-22 Method of obtaining carboxypepiidase

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU575353A1 (en)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Morse et al. A new approach to the study of urinary macromolecules as a participant in calcium oxalate crystallization
Tager Concentration, partial purification, properties, and nature of staphylocoagulase
CN112724242B (en) Method for producing recombinant human-like collagen and host cell protein by using pichia pastoris
SU1012786A3 (en) Method for preparing proteinaceous complex stimulating secretion of insulin
CN101104635A (en) Method for purifying recombination human alpha-whey albumin from transgene cow milk
SU575353A1 (en) Method of obtaining carboxypepiidase
Berridge et al. 516. A simple method for preparing crystalline rennin
DE1292609B (en) Process for the production and recovery of lipoprotein lipase by culturing microorganisms
Richardson et al. The phosphoprotein of rabbit incisors
US4027012A (en) Process for the extraction of components having anticoagulant activity "in vivo" from snake venoms and products obtained
EP1306383B1 (en) Method of purifying a calcium ion-binding protein
US4960756A (en) Lectin like protein substance, method of obtaining same and anti-tumor agent comprising same
SU535912A3 (en) Method of producing orgotein
SU1280546A1 (en) Method of producing leukocytic beta sub 1 - glycoproteide
SU411867A1 (en)
SU1487817A3 (en) Method of extracting carboxypeptidase b from adrenal gland of mammals
SU508509A1 (en) Method for isolating enzymes of microbial bee mass
EP0042560A2 (en) A process for producing and obtaining anaphylatoxin- and cocytotaxin-containing leucotaxine preparations and of anaphylatoxin and cocytotaxin proteins in molecularly homogeneous, biologically active form
Lundblad et al. Purification of cathepsin B from oocytes and mature eggs of the sea urchin Brissopsis lyrifera by means of gel filtration
SU1655987A1 (en) Method for preparation of purified neuraminidase of choleric vibrio
SE7506666L (en) PROCEDURE FOR CULTIVATION OF FOODS-ENCELLS PROTEINS WHILE EXTENSIVE ACTIVE SUBSTANCES FROM THE WATER.
RU2175195C1 (en) Method of isolating anigiogenin-rich protein fraction
RU2634408C1 (en) Method for production of active pharmaceutical substance of recombinant bismetionilystone h1.3
RU1526226C (en) Method of obtaining collagenaze
SU1223913A1 (en) Method of obtaining galactosidase