SU524376A1

SU524376A1 - Method for separation of choleraic vibrio neiraminesade enzyme

Info

Publication number: SU524376A1
Application number: SU7502125729A
Authority: SU
Inventors: Г.В. Самсонов; Л.К. Шатаева; Г.Д. Кобринский; Н.Н. Кузнецова; В.Д. Соловьев; И.В. Домарадский
Original assignee: Институт Высокомолекулярных Соединений Ан Ссср
Priority date: 1975-04-18
Filing date: 1975-04-18
Publication date: 1977-08-25

Description

Полученный элюат концентрируют в 10 раз на установке дл упьтрафильтрации с целлофаном в качестве фильтрующего материала. Концентрат гельхроматографируют по принципу груттового разделени на колонйе с сефадексом Г-50. Гельхроматосрафию провод т в О,85%-ном хлористом натрнв в присутствии С,1%-ного хлористого кальдег . Собирают первую белковую фрикцию, котора содержит высокоактивйук нейраминиааау, Выход продукта составл ет 38%,The eluate obtained is concentrated 10 times in a plastic filtration unit with cellophane as a filtering material. The gelchromatographic concentrate is based on the principle of groove separation on a colony with Sephadex G-50. Gelchromatoscopy is carried out in O, 85% sodium chloride in the presence of C, 1% caldeg chloride. Collect the first protein friction, which contains a highly active neuraminiaaau, the product yield is 38%,

П D и м е D 2. В ирнообразную колонку {диаметр 2,1; высота 8,О см) помёшакгг катионит КМТ в водородной форме с коэффициентом набухани 3,5; размер зерен 0,1-ОДб ммГ Через колонку пропускают 6ОО мл культуральной жидкости холерных вибрионов при рН 5,1 со скоростью 15 О мл/ч. Нейраминидааа полностьло сорбируете на катйони-те, о чем можно судить по отсутствию нейраминидазной активности в фильтрате ва в ходе из коловки. Затем колонку промывают О,2 М ацетатным буфером с рН 5,0 в присутствии 0,5%-нЬго хлористого кальци со скоростью .iOO мл/ч при 25 С. Расход буфера составл ет 300мл на колонку данных размеров. Десорбцию нейраминидазы провод т при 5 С 0,15 М раствором фосфатного буфера в присутст ВИИ 0,ОО1%-ного ацетонитрила при рН 6,4 со скоростью 39-45 мл/ч.P D and m e D 2. In irregular column {diameter 2.1; height 8, O cm) scrambled cation exchanger KMT in hydrogen form with a swelling ratio of 3.5; grain size 0,1-ODb mmG 6OO ml of culture liquid of Vibrio cholerae at pH 5.1 are passed through the column at a rate of 15 O ml / h. Neuraminide is completely sorbed on the catonies, which can be judged by the absence of neuraminidase activity in the filtrate in the course of the collar. The column is then washed with O, 2 M acetate buffer with a pH of 5.0 in the presence of 0.5% calcium chloride at a rate of .iOO ml / h at 25 C. The consumption of the buffer is 300 ml per column of these sizes. Neuraminidase desorption is carried out at 5 C with a 0.15 M phosphate buffer solution in the presence of VII 0, OO1% acetonitrile at pH 6.4 at a rate of 39-45 ml / h.

Выход активности нейратлинидазы при есорбции с колонки составл ет 40%, а конентрирование в пике происходит в 4 раза по сравнению с активностью в исдамнойThe yield of neurathlinidase activity during the adsorption from the column is 40%, and the peak concentration occurs 4 times compared with the activity in the amide

кульггуральной жидкости. Полученный элюат концена 5ируют в 8 раз на установке дл ультрафильтрации, в качестве фильтрующего материала используют ацетатоеллюлознзто . Концентрат гельхроматографируют на колонке с сефадексом Г-50 при 5°С в ОД М растворе хлористого натри в присут ствин ОД%-«ого хлористого кальци . Собирают nepsyjp белковую фракцию, котора содержит 32% активности от всей вз той на рааделвние активности нейраминидазы культуральной жидкости.kulgural fluid. The resulting eluate is concentrated 5 times on an ultrafiltration unit, and acetocellulose is used as the filtering material. The gel chromatography concentrate is carried out on a column with Sephadex G-50 at 5 ° C in an OD M solution of sodium chloride in the presence of OD% - “th calcium chloride. The nepsyjp protein fraction is collected, which contains 32% of the activity of all the cultured liquid taken at the time of neuraminidase activity.

Форм у. л а изобретени Form u. l invention

Способ выделени фермента нейрамини .дааы холерных вибрионов путем ионообменной 20 сорбции н десорбции, отличающийс тем, что, с целью повышени выхода Еррду кта. и сокращени времени, культуральную жидкость тфопускают через карбоксиль ный катионит в водородной форме при 1525 25 С/ рН 5,1, колонку с катионитом промывают 0,1-О,2 М ацетатным буфером, рН 5,6 с добавлением хлористого кальци , десорбируют фермент с колонки 0,1-О,2 М фосфатг ным б5гфером, рН 6,0-6,5 при 5С в присутствии стаби71изатора 0,001-О,ОО2%-ного адетонитрила и из элюата гельхроматогра-, .фией выдел5пот конечный продукт.A method for isolating the neuramini enzyme. Choi cholerae vibrio by 20 ion sorption and desorption, characterized in that, in order to increase the yield of Errdu. and shorten the time, the culture liquid is allowed through a carboxylic cation exchanger in hydrogen form at 1525 25 C / pH 5.1, the column with cation exchanger is washed with 0.1-O, 2 M acetate buffer, pH 5.6 with the addition of calcium chloride, the enzyme is desorbed from a 0.1-O, 2 M column of phosphate b5 gferomy, pH 6.0-6.5 at 5 ° C in the presence of a stabilizer 0.001-O, OO2% adetonitrile, and a final product from the gelchromatographic eluate.

Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе:., 35 1. I. Атпеь Ctte-rn-Soc, i960, 82,4113.Sources of information taken into account in the examination:., 35 1. I. Atpe Ctte-rn-Soc, i960, 82,4113.