SU515471A3 - Method for quantitative determination of hydrolytic enzymes - Google Patents
Method for quantitative determination of hydrolytic enzymesInfo
- Publication number
- SU515471A3 SU515471A3 SU1819712A SU1819712A SU515471A3 SU 515471 A3 SU515471 A3 SU 515471A3 SU 1819712 A SU1819712 A SU 1819712A SU 1819712 A SU1819712 A SU 1819712A SU 515471 A3 SU515471 A3 SU 515471A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- solution
- buffer
- trypsin
- substrate
- enzymes
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНЗИМОВ ГИДРОЛИТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ(54) METHOD OF QUANTITATIVE DETERMINATION OF HYDROLYTIC ACTION ENZYMES
центраций SHsmvia в гомогенных средах, (таких, как сыворотка или экстракты тканейconcentration of SHsmvia in homogeneous media (such as serum or tissue extracts
К метоксипированным соединени м пре; почтительно добавл ть буфер, обеспечиваю-. .щий поддержание оптимального или близкого к нему значени водородного показател дл данного энзима.Если нужно содействовать процессу солюбилизации соединени ,, то можно также добавл ть пропиленгликоль. Эту смесь смешивают с гомогенатом, содер жащим энзим, подлежащий определению, после чего дают энзиму обеспечивать гиде-. ролиз соединени .To methoxypated compounds pre; respectfully add buffer, provide-. Maintaining an optimal or close to its pH value for a given enzyme. If the compound is solubilized, it is also possible to add propylene glycol. This mixture is mixed with a homogenate containing the enzyme to be determined, after which the enzyme is provided to provide hydro-. roliz connection.
После проведени гидролиза в течение определенного промежутка времени добав л ют денатурирующее соединение, такое как хлористоводородна или трихлоруксусна кислота, дл прекращени гидролиза. После удалени осадка любого вида, который мо жет образоватьс , добавл ют средство, способное образовывать краситель с любым 4- метоксип.2 афтиламином, который имеетс в наличии вследствие энзиматического гидролиза субстрата.After hydrolysis is carried out for a certain period of time, a denaturing compound, such as hydrochloric or trichloroacetic acid, is added to stop the hydrolysis. After removing any type of precipitate that may form, add a means capable of forming a dye with any 4-methoxy 2 aphthylamine, which is available due to enzymatic hydrolysis of the substrate.
Типичными средствами дл образовани красител служат прочный синий (тетра™ зотированный ди лЛ анизидин), прочный гарнет (диазотированный 4 Ог- гоидазо о. толуидин), прочный синий (диазотированны 4.-лминс 2,5-диэтоксибензинилид)и гекса зотированный парарозанилин.Typical agents for dye formation are durable blue (tetra ™ zoated dlL anisidine), durable garnet (diazotized 4 Ogidazo o. Toluidine), durable blue (diazotized 4.-lmins 2,5-diethoxybenzinilide) and hexotonic pararosaniline.
YlociK образовани .красител определ ют, концентрацию Красител: фотометрически посредством пропускани светового луча заданной интенсивности через смесь, согдержащую краситель, после чего измер ют интенсивность светового луча, прощедщего через смесь. Данную концентрацию энзима определ ют путем сравнени со стандарт™ ной кривой, полученной путем проведени р да аналогичных определений с известными концентраци ми энзимов.YlociK dye formation is determined by the dye concentration: photometrically by passing a light beam of a given intensity through the mixture holding the dye, after which the intensity of the light beam passing through the mixture is measured. This enzyme concentration is determined by comparing with a standard ™ curve obtained by making a series of similar determinations with known enzyme concentrations.
Пример, Подлежащую инкубированию смесь готов т, слива 1,5 мл субстрат -буфера одного из типов, перечисленныхExample: The mixture to be incubated is prepared by draining 1.5 ml of the substrate — buffer of one of the types listed.
ниже, О,3 мл препарата ткани или сьто- ротки и 1,2 мл 0,85 н. солевого раство ра в пробирки.below, O, 3 ml of the preparation of tissue or sterotka and 1.2 ml of 0.85 n. saline solution in test tubes.
Пробирки закрывают колпачком и инкубируют 2 час при 37°С на вод ной бане,The tubes are capped and incubated for 2 hours at 37 ° C in a water bath,
После инкубировани снимают колпачки и прекращают реакцию с энзимом путем добавлени 0,5 мл раствора трихлсруксусной кислоты, причем образующийс осадок удал ют центрифугированием,After incubation, remove the caps and stop the reaction with the enzyme by adding 0.5 ml of trichloroacetic acid solution, and the resulting precipitate is removed by centrifugation,
В каждую пробирку ввод т 1,0 мл водного раствора, в 1 мл которого содержите, с 1 мг крастгел прочного синего .1.0 ml of an aqueous solution was introduced into each tube, and contained in 1 ml of 1 mg Crastel durable blue.
Затем пробирки .подвергают вибрационному воздействию в течение 15-30 сек, Then the tubes are subjected to vibration for 15-30 seconds,
после чего спуст 5 мин производ т спектл рофотометрическое определение при 520 ммк по отношению к пустой пробе,. Ко личество высвободивщегос 4вметоксИ 2- нафтиламина отсчитывают по ранее приготовленной стандартной кривой, отградуиг рованной по 4-А1етокси™2 нафтиламину в присутствии рецептур, содержащих сыворотку или ткани,then, after 5 minutes, spectrophotometric determination was performed at 520 mmk relative to the empty sample. The amount of 4-naphothyme released and 2-naphthylamine is counted using a previously prepared standard curve, graded with 4-A1toxy ™ 2 naphthylamine in the presence of formulations containing serum or tissues,
В приведенном процессе можно использовать следующие субстрат-буферы.In the above process, the following substrate buffers can be used.
Дл определени общей активности ами нопентидазь: примен ют лейцил-41 1етокс№ ,2-нафтиламид, 32,3 мг упом нутого соединени добавл ют к 50 мп воды и сме шиванот с одинаковым объемом О, 2 М фосфного буфера, рН 7, О, дл образовани субстрат-буферного раствора.To determine the total activity of aminopentidase: leucyl-41 1-tox-2, 2-naphthylamide, 32.3 mg of the above compound are added to 50 mp of water and mixed with the same volume of O, 2 M phosphate buffer, pH 7, O, to form a substrate buffer solution.
Дл определени активности дипепт& диламичопетидазь (степень активности П) найденной в лизо1.;ах клеток иитовидной желзы , примен ют лизилаланйл1...4-метокси-2-. нафталамид, 43,4 , мг упом нутого соединени добавл ют к 50 мл воды и смешивают с равным объемом О, 2 М натрий какодилатного буфера, рН 5,5, содержащего Ои.5 мл хлористоводородной соли меркаптоэтиламина в виде 1,О М раствора, дл образовани субстрат-буферного раствора,Lysyl lanyl1 ... 4-methoxy-2- is used to determine the activity of dipept & dilimichopetidase (activity level P) found in lyso1; ah cells of imitation gland. naphthalamide, 43.4, mg of the above compound is added to 50 ml of water and mixed with an equal volume of O, 2 M sodium cacodylate buffer, pH 5.5, containing Ou. 5 ml of mercaptoethylamine hydrochloride salt in the form of a 1, O M solution, to form a substrate buffer solution,
Дл определени активности дипептиди- ламинопейтидазы (степень активности 1 катепсин С) примен ют пропиларгинил.4- метокси-2-нафтиламид, 52, О мг упом нутого соединени добавл ют к 50 мл воды и -смешивают с равным объемом О, 2 М натрийкоксдилаткого. буфера, рН 5,5,содержащего О, 5 мл 0,1 М раствора хлористоводородной соли меркаптоэтиламина, дл образовани субстрат-буферного раствора .To determine the activity of dipeptidyl-aminoputidase (activity level 1 cathepsin C), propylargynyl.4-methoxy-2-naphthylamide, 52, O mg of the above compound is added to 50 ml of water and -mixed with an equal volume of O, 2 M sodium coxidine. buffer, pH 5.5, containing 0.5 ml of a 0.1 M solution of mercaptoethylamine hydrochloride, to form a substrate-buffer solution.
Дл определени активности дипептидиламинопентидазы (степень активности 1У) примен ют глицилпpoпиI -4.-A eтoкcи-2-на у™ тиламид. 43,0 мг упом нутого соединени добавл ют к 50 мл воды и смешивают с равным объемом 0,1 М трис-хлористоводородного буфера, рН 7, 5, дл получени субстрат-буферного раствора (трис озн. чает 2-амина-2-оксиметил 1,3-пропандиол, поставл емый иностранной фирмой Истмен Кемикелс).To determine the activity of dipeptidyl-aminopentidase (activity level 1U), glycylpropi-I-4 is used. A-etoxy-2-y ™ tilamide. 43.0 mg of the above compound is added to 50 ml of water and mixed with an equal volume of 0.1 M Tris-HCl buffer, pH 7,5, to obtain a substrate-buffer solution (Tris 2-amine-2-hydroxymethyl 1,3-propandiol, supplied by a foreign firm, Eastman Chemicals).
Дл определени активной дипептидиламинопептидазы (степень активности III) пра меншот аргиниларгинил- .4-метокси-2i ac. таламид, 59,5 г упом нутого соединени To determine the active dipeptidyl-aminopeptidase (activity level III), arginylaryl-.4-methoxy-2i ac. thalamide, 59.5 g of the said compound
добавл ют к 5О мл воды и смешивают с равным объемом трис-хлористоводородногоis added to 5 O ml of water and mixed with an equal volume of Tris-HCl
Claims (1)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US17228071A | 1971-08-16 | 1971-08-16 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU515471A3 true SU515471A3 (en) | 1976-05-25 |
Family
ID=22627041
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU1819712A SU515471A3 (en) | 1971-08-16 | 1972-08-15 | Method for quantitative determination of hydrolytic enzymes |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
JP (2) | JPS5621400B2 (en) |
CA (1) | CA1007555A (en) |
CH (1) | CH569281A5 (en) |
DE (1) | DE2239936C2 (en) |
FR (1) | FR2150146A5 (en) |
GB (1) | GB1404195A (en) |
SE (1) | SE401738B (en) |
SU (1) | SU515471A3 (en) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4215047A (en) * | 1977-06-06 | 1980-07-29 | Ajinomoto Company Incorporated | 7-(Arginylamino)-4-methylcoumarins |
CA1087075A (en) * | 1977-08-05 | 1980-10-07 | Robert J. Gargiulo | Composition and method for determining transferase and protease activity |
JPS54103078A (en) * | 1978-01-31 | 1979-08-14 | Eon Denki Keiki Kk | Movable coil type indication electric instrument |
DE2905531A1 (en) * | 1979-02-14 | 1981-01-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | DIAGNOSTIC AGENT FOR DETECTING LEUCOCYTES IN BODY LIQUIDS |
JPS58142014U (en) * | 1982-03-19 | 1983-09-24 | キヤノン株式会社 | X-ray imaging device |
JPS5925699A (en) * | 1982-08-03 | 1984-02-09 | Torii Yakuhin Kk | Determination of enzymatic activity |
JPS59192724A (en) * | 1983-04-16 | 1984-11-01 | Toyobo Co Ltd | Preparation of synthetic yarn having light resistance |
JPS6088130A (en) * | 1983-10-14 | 1985-05-17 | Toyobo Co Ltd | Production of colored fiber |
JPS60158598A (en) * | 1984-01-30 | 1985-08-19 | Hotsukusu Denshi Kogyo Kk | Remote control/monitor device |
JPS647800U (en) * | 1987-07-01 | 1989-01-17 | ||
JP2000086305A (en) * | 1998-09-17 | 2000-03-28 | Nippon Sheet Glass Co Ltd | Glass panel |
US6833186B2 (en) | 2002-04-10 | 2004-12-21 | Ppg Industries Ohio, Inc. | Mineral-filled coatings having enhanced abrasion resistance and wear clarity and methods for using the same |
-
1972
- 1972-08-01 CA CA148,465A patent/CA1007555A/en not_active Expired
- 1972-08-10 GB GB3735972A patent/GB1404195A/en not_active Expired
- 1972-08-14 DE DE19722239936 patent/DE2239936C2/en not_active Expired
- 1972-08-15 CH CH1207172A patent/CH569281A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1972-08-15 SU SU1819712A patent/SU515471A3/en active
- 1972-08-16 JP JP8149072A patent/JPS5621400B2/ja not_active Expired
- 1972-08-16 SE SE1064772A patent/SE401738B/en unknown
- 1972-08-16 FR FR7229379A patent/FR2150146A5/fr not_active Expired
-
1979
- 1979-08-16 JP JP10451379A patent/JPS5533475A/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2150146A5 (en) | 1973-03-30 |
SE401738B (en) | 1978-05-22 |
CA1007555A (en) | 1977-03-29 |
JPS4829497A (en) | 1973-04-19 |
DE2239936C2 (en) | 1983-02-10 |
DE2239936A1 (en) | 1973-03-01 |
GB1404195A (en) | 1975-08-28 |
JPS5621400B2 (en) | 1981-05-19 |
JPS5533475A (en) | 1980-03-08 |
CH569281A5 (en) | 1975-11-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SU515471A3 (en) | Method for quantitative determination of hydrolytic enzymes | |
CA2077451C (en) | Improved immunohistochemical staining method and reagents therefor | |
CN109239061A (en) | A kind of liquid-type Antiprothrombin antibodies assay kit | |
US5250418A (en) | Process and reagent for determining the activity of chymotrypsin and trypsin in feces | |
Rinderknecht et al. | New methods for the determination of elastase | |
EP0259857A2 (en) | Method of assaying physiologically active substances | |
JPS62215400A (en) | Detection reagent of esterase and/or protease using chromosome amino acid ester and peptide ester | |
Warshaw et al. | Electrophoretic identification of an isoenzyme of amylase which increases in serum in liver diseases | |
IE840743L (en) | Determination of activated partial thromboplastin time | |
EP0455733A1 (en) | Rapid assay for functional human alpha 1?-proteinase inhibitor | |
Kaplan et al. | The determination of serum alkaline phosphatase activity | |
US4155916A (en) | Fluorescence method for enzyme analysis which couples aromatic amines with aromatic aldehydes | |
JPH03500369A (en) | Methods for monitoring periodontal disease by monitoring endotoxins and inflammatory substances | |
ES2200197T3 (en) | IMPROVED PROCEDURE FOR THE DETERMINATION OF A LIPASE. | |
CN111778312B (en) | Kit for determining glycylproline dipeptidyl aminopeptidase in serum | |
US4206280A (en) | Determination of acid phosphatase | |
EP0292708A2 (en) | Detection of Bacteroides gingivalis | |
US4229528A (en) | Fluorescence method for enzyme analysis which couples aromatic amines with aromatic aldehydes | |
Saini et al. | A clinical assay for prostatic acid phosphatase using choline phosphate as a substrate: comparison with thymolphthalein phosphate | |
Dolbeare | Fluorescent staining of enzymes for flow cytometry | |
Kallos et al. | A colorimetric method for serum chymotrypsin determination | |
US20010055816A1 (en) | Urinary trypsin inhibitor assay containing a chelating agent | |
RU2169925C1 (en) | Method for determining leucine aminopeptidase activity | |
US5470715A (en) | Composition for determination of chloride ion | |
CN117737192A (en) | Leucine aminopeptidase detection kit and detection method |