SU434984A1

SU434984A1 - DEVICE FOR ELECTROPHORESIS

Info

Publication number: SU434984A1
Application number: SU1939651A
Authority: SU
Original assignee: И. И. Довгалевич Сектор геронтологии Белорусской ССР
Priority date: 1973-07-06
Filing date: 1973-07-06
Publication date: 1974-07-05

Description

1one

Изобретение относитс к конструкци м приборов, используемых дл электрофоротического разделени гомогенатов тканей, суспензий вирусов и микроорганизмов на отдельные фракции.The invention relates to the design of devices used for the electrophoretic separation of tissue homogenates, virus suspensions and microorganisms into separate fractions.

Известен прибор дл электрофореза в гел х , содержащий верхний и нижний электродные сосуды, между которыми размещен блок кювет-секций с носителем.A device for electrophoresis in gels is known, comprising upper and lower electrode vessels, between which a cuvette-section unit with a carrier is placed.

Прибор известной конструкции не пригодн дл проведени препаративного электрофореза и разделени гомогенатов тканей на отдельные субклеточные фракции.A device of known design is not suitable for preparative electrophoresis and the separation of tissue homogenates into separate subcellular fractions.

С целью устранени указанных недостатков предложен прибор дл электрофореза, в котором носитель размещен в трубках, снабженных в нижнем конце полупроницаемой мембраной , например, из целлофановой пленки и вмонтированных в дно верхнего электродного сосуда. Дл повыщени эффективности разделени трубки дл носител могут быть выполнены в виде усеченного конуса с больщим нижним основанием. Прибор может быть размещен в емкости, заполненной охлаждающим агентом.In order to eliminate these drawbacks, an electrophoresis device is proposed in which the carrier is placed in tubes provided at the lower end with a semipermeable membrane, for example, from cellophane film and mounted in the bottom of the upper electrode vessel. To increase the separation efficiency, the carrier tubes can be made in the form of a truncated cone with a large lower base. The device can be placed in a tank filled with a cooling agent.

На чертеже представлен предлагаемый прибор дл электрофореза в разрезе, вид сбоку.The drawing shows the proposed device for electrophoresis in section, side view.

Емкость 1, заполненна охлаждающим агентом, снабжена подающим 2 и отвод щим 3 патрубками. В емкости 1, размещен нижнийThe container 1, filled with a cooling agent, is provided with a supply 2 and a discharge pipe 3. In the tank 1, placed lower

электродный сосуд 4, в котором установлен верхний электродный сосуд 5, оснащенный стойками 6. В дно сосудов 4 и 5 вмонтированы платиновые непол ризующиес электроды: 5 катод 7 и анод 8. Верхний электродный сосуд 5 выполнен с крышкой 9. В дно верхнего электродного сосуда 5 герметически вмонтированы (ввинчены) трубки 10 дл носител , которые расположены на одном рассто нии отelectrode vessel 4, in which the upper electrode vessel 5 is installed, equipped with supports 6. Platinum semi-polarizable electrodes are mounted in the bottom of vessels 4 and 5: cathode 7 5 and anode 8. Upper electrode vessel 5 is made with a cover 9. In the bottom of the upper electrode vessel 5 tubes 10 for the carrier, which are located at the same distance from

0 катода 7. На нижнем конце трубок 10 закреплена полупроницаема мембрана И, например , из целлофановой пленки. Дл визуального наблюдени за процессом электрофореза емкость 1, электродные сосуды 4 и 5,0 cathode 7. At the lower end of the tubes 10 secured semipermeable membrane And, for example, made of cellophane film. For visual observation of the electrophoresis process, capacitance 1, electrode vessels 4 and 5,

5 трубки 10 выполнены прозрачными, например , из оргстекла.5 tubes 10 are made transparent, for example, from plexiglas.

Работает предлагаемый прибор следующим образом.Works proposed device as follows.

В трубках 10 размером 20X1 см нижнийIn tubes 10 of size 20X1 cm bottom

0 конец которых закрыт пленкой из целлофана, создают градиент плотности сахарозы, последовательно наслаива друг на друга растворы сахарозы с уменьщающейс концентрацией от 1,2 до 0,32 М по 2,5 мл. Растворы сахарозы готов т на трис-буфере с рН 7,4, содержащем хлористого натри . Используют следующие мол рные концентрации сахарозы: 1,2; 1,0; 0,9; 0,8; 0,7; 0,6; 0,5; 0,32М. Затем в колонки 10 с помощью щпри0 Ца с пластмассовым наконечником внос тThe end of which is covered with a film of cellophane creates a density gradient of sucrose, successively laminating sucrose solutions with a decreasing concentration from 1.2 to 0.32 M by 2.5 ml. Sucrose solutions are prepared in Tris buffer pH 7.4 containing sodium chloride. The following molar sucrose concentrations are used: 1.2; 1.0; 0.9; 0.8; 0.7; 0.6; 0.5; 0.32M. Then in columns 10 with the help of a syringe with a plastic tip are introduced

0,5-1,0 мл окрашенного цитохромом С или метиленовым синит гомогената ткани и наверх наслаивают еще 0,25 М раствора сахарозы .0.5-1.0 ml of cytochrome C stained or methylene synitic tissue homogenate and another 0.25 M sucrose solution is layered on top.

Нижний сосуд 4 заполн ют на /з объема фосфатным буфером с рН 7,4, устанавливают в него верхний сосуд 5 с трубками 10 и сосуд 5 также заполн ют фосфатным буфером с рН 7,4 в таком количестве, чтобы уровень его был выше трубок 10. При этом необходимо следить, чтобы в электродных сосудах 4 и 5, в трубках 10 не оставалось пузырьков воздуха . Затем сосуд 4 с установленным внутри сосудом 5 помещают в емкость 1 дл охлаждени , подключают патрубок 2 к магистрали с холодной водой, а патрубок 3 к сливному шлангу. Катод 7 и анод 8 подсоедин ют к соответствующим полкзсам выпр мител УИП-К. Электрофюрез провод т при напр жении 8 вольт/см, при силе тока ЗмА на трубку 10, при температуре О-4°С в течение 1,5-2,0 час. О местоположении субклеточных фракций суд т по положению диска красител , молекулы которого продвигаютс во фропте подвижных ионов.The lower vessel 4 is filled up by volume of phosphate buffer with pH 7.4, the upper vessel 5 with tubes 10 is installed in it, and vessel 5 is also filled with phosphate buffer with pH 7.4 in such quantity that its level is higher than tubes 10 At the same time it is necessary to ensure that in the electrode vessels 4 and 5, in the tubes 10 there are no air bubbles. Then the vessel 4 with the vessel 5 installed inside is placed in the container 1 for cooling, connect the pipe 2 to the cold water main, and the pipe 3 to the drain hose. The cathode 7 and the anode 8 are connected to the appropriate polarity of the IPT-K rectifier. The electrofusion process is carried out at a voltage of 8 volts / cm, with a current of 3mA per tube 10, at a temperature of about -4 ° C for 1.5-2.0 hours. The location of the subcellular fractions is judged by the position of the dye disc, the molecules of which are advanced in the mobile ion propte.

Предлагаемый прибор позвол ет разделить гомогенат различных тканей (мозг, печень и др.), а также суспензии вирусов и других микроорганизмов на р д четких фракций. Предлагаемый прибор возможно использовать также дл разделени белков.The proposed device allows the separation of the homogenate of various tissues (brain, liver, etc.), as well as suspensions of viruses and other microorganisms into a number of distinct fractions. The proposed device may also be used for the separation of proteins.

Предмет изобретени Subject invention

Claims

1. A device for electrophoresis containing upper and lower electrode vessels, a carrier and electrodes, characterized in that, in order to enable preparative electrophoresis and the separation of tissue homogenates into separate subcellular fractions, the carrier is placed in tubes equipped with a semipermeable membrane below, for example, from cellophane film and mounted in the bottom of the upper electrode vessel.

2. The apparatus according to claim 1, characterized in that, in order to increase the separation efficiency, the tubes for the carrier are made in the form of a truncated cone with a large lower base.