SU1152366A1

SU1152366A1 - Device for electric elution of deoxyribonucleic acid from gel

Info

Publication number: SU1152366A1
Application number: SU823439011A
Authority: SU
Inventors: A P Chernov; V A Mikheev
Original assignee: Inst Biokhim I Fiziol Mikroorg
Priority date: 1982-05-24
Filing date: 1982-05-24
Publication date: 1986-10-15

Description

Изобретение относится к области генной инженерии и может быть использовано в микробиологической, медицинской и химической промышленности.The invention relates to the field of genetic engineering and can be used in the microbiological, medical and chemical industries.

Известно устройство для электроэлюции ДНК из геля, состоящее из двух камер, расположенных одна над другой с электродами, и вертикально установленной цилиндрической ячейки, в днище которой установлена диализная мембрана.A device for electroeluting DNA from a gel is known, consisting of two chambers, one above the other with electrodes, and a vertically mounted cylindrical cell, in the bottom of which a dialysis membrane is installed.

Недостатками устройства являются низкий выход ДНК из геля, обусловленный сорбцией на большой поверхности мембраны, а также невозможность контроля за полнотой электроэлюции ДНК.The disadvantages of the device are the low yield of DNA from the gel, due to sorption on a large membrane surface, as well as the inability to control the completeness of DNA electroelution.

Целью изобретения является повышение выхода ДНК из геля и контроль за повышением выхода ДНК из геля.The aim of the invention is to increase the yield of DNA from the gel and to control the increase in the yield of DNA from the gel.

Поставленная цель достигается тем, что в устройстве для электроэлюции ДНК из геля, содержащем две камеры, расположенные одна над другой с электродами, и вертикально установленную цилиндрическую ячейку, в днище которой установлена диализная мембрана, ячейка выполнена в виде двух емкостей, расположенных одна над другой, нижняя емкость выполнена из кварцевого стекла и закреплена посредством уплотнительной манжеты в днище верхней камеры, а в верхней ёмкости размещен вкладыш с сеткой.This goal is achieved by the fact that in the device for electroelution of DNA from a gel containing two chambers located one above the other with electrodes, and a vertically installed cylindrical cell, in the bottom of which a dialysis membrane is installed, the cell is made in the form of two tanks arranged one above the other, The lower container is made of quartz glass and fixed by means of a sealing cuff in the bottom of the upper chamber, and an insert with a grid is placed in the upper container.

На чертеже изображено устройство для электроэлюции ДНК из геля, общий вид.The drawing shows a device for electroelution of DNA from a gel, a general view.

Устройство состоит из верхней 1 и нижней 2 камер для электрофоретического буферного раствора, снабженных токоведущими клеммами 3. В верхней камере закреплены четыре стеклянные трубки 4, служащие ем•2366 2The device consists of the upper 1 and lower 2 chambers for an electrophoretic buffer solution, equipped with current-carrying terminals 3. In the upper chamber four glass tubes 4 are fixed, which serve as a 2366 2

костями для введения пробы. Внутрь трубок вставлены вкладыши с сеткой 5, которые служат для удержания пробы. Внутренний объем стеклянныхbones for the introduction of the sample. Inserts are inserted into the tubes with a grid of 5, which serve to hold the sample. Internal volume of glass

₅ трубок сообщается с внутренним объемом кварцевых трубок 6, закрепленных в днище верхней камеры 7 посредством уплотнительной резиновой манжеты 8. Кварцевые трубки имеют на конце полу10 проницаемую диализную мембрану 9, ₅ tubes communicate with the internal volume of the quartz tubes 6, fixed in the bottom of the upper chamber 7 by means of a sealing rubber cuff 8. The quartz tubes have a permeable dialysis membrane 9 at the end of the semi10,

закрепленную с помощью полиэтиленового кольца 10 и служат емкостями для отбора пробы.fixed with a polyethylene ring 10 and serve as containers for sampling.

Устройство работает следующим об15 разом.The device works as follows 15 times.

В процессе электроэлюции ДНК, находящаяся в геле 11, поступает внутрь кварцевой трубки 6 и накапливается на внутренней поверхности мембраны 20 9 тонким слоем. При изменении направления тока на противоположное ДНК отделяется от поверхности мембраны и движется по кварцевой трубке в обратном направлении. Процесс снятия ДНК с мембраны и ее реверсивного движения в кварцевой трубке контролируют, освещая трубку источником УФ-лучей, по флуоресценции комплекса ДНК с бромидом этидия. Для этого в нижний буферный раствор добавляют бромид этидия до концентрации 0,00002%.In the process of electroelution, the DNA in the gel 11 enters into the quartz tube 6 and accumulates on the inner surface of the membrane 20 9 in a thin layer. When the direction of the current changes to the opposite, DNA separates from the membrane surface and moves along the quartz tube in the opposite direction. The process of removing DNA from the membrane and its reverse movement in the quartz tube is controlled by illuminating the tube with a source of UV rays by fluorescence of the DNA complex with ethidium bromide. To this end, ethidium bromide is added to the lower buffer solution to a concentration of 0.00002%.

По окончании снятия ДНК с мембраны кварцевую трубку вынимают из прибора и отбирают пипеткой раствор ДНК.At the end of the DNA removal from the membrane, the quartz tube is removed from the instrument and the DNA solution is pipetted.

Таким образом, предлагаемое устройство позволяет значительно снизить затраты времени и труда при элюции ДНК из агарозного и полиакриламидного гелей. Оно одинаково применимо при вщцелении как больших, так и малых количеств ДНК и не требует дополнительного расхода реактивов за счет электрофоретического снятия ДНК с диализной мембраны.Thus, the proposed device can significantly reduce the time and labor costs in the elution of DNA from agarose and polyacrylamide gels. It is equally applicable to the assembly of both large and small amounts of DNA and does not require additional consumption of reagents due to electrophoretic removal of DNA from the dialysis membrane.

Claims

DEVICE FOR ELECTROELUTION OF DNA FROM GEL, consisting of two chambers located one above the other with electrodes, and a vertically installed cylindrical cell, in the bottom of which a dialysis membrane is installed, characterized in that in order to increase the yield of DNA DNA, the cell is made in the form of two containers arranged one above the other, the lower container is made of quartz glass and fixed by means of a sealing cuff in the bottom of the upper chamber, and in the upper container there are deposits w with mesh.

. λ 1 11