SU413188A1 - - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к способам получени  нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов и может быть использовано в различных област х биохимии и медицины.

Известен способ получени  нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов путем биологического фосфорилировани  фосфорилируюи1,ей смеси, состо щей из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого кали , хлористого магни , воды нри рН 6,5-7,0 в присутствии биологического катализатора, с последующей очисткой продукта.

Целью изобретени   вл етс  увеличение выхода и чистоты продукта, а также упрощение процесса и сокращение времени ферментации.

Достигаетс  это тем, что в качестве биологического катализатора используют экстракт водорослей, который ввод т в фосфорилирующую смесь в соотнощении 1:1 или 1,2:1.

Способ осуществл ют следующим образом.

В качестве источника ферментов используют экстракт водорослей, приготовленный размельчением водорослей (в соотпощении сухие водоросли против воды как 1:3), и выдерживают при температуре 4° С 3 час. Используютс  водоросли вегетативного периода (созревани ).

Экстракт водорослей, используемый в качестве сырь  дл  получени  нуклеозидфосфатов

и сахарофосфатов, прибавл ют в фосфорилирующую смесь, котора  состоит из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов , неорганических фосфатов, хлористого кали , хлористого магни , воды при температуре 37° С и рН 6,5-7,0.

Соотношение экстракта водорослей и фосфорилирующей смеси 1 : 1 или 1,2: 1. Реакци  продолжаетс  0,5-1,5 час. Дл  прекращени  реакции фосфорилировани  используют 10%ный раствор трихлоруксусной кислоты при -7° С, вз той в объеме 25 мл на 200 мг аденозина .

Дл  осаждени  нуклеозидфосфатов примен ют метиловый снирт или этиловый спирт в 7-10-кратном объеме. Очистку нуклеозидов осуществл ют путем ионообменной хроматографии .

Применение экстракта водорослей взамен дрожжей как источника ферментов качественно и принципиально улучшает способ получени  нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов.

Пример 1. 200 мг аденозина раствор ют в 7,6 мл воды. К раствору прибавл ют Na2HP04-12Н20 (натрий фосфорнокислый двухзамещенный) и КН2РО4 (калий фосфорнокислый однозамещенный) в весовых соотношени х 3,5% :1%- Затем внос т 0,014 г KCI, 0,14 г MgCbSHsO и 9,5 мл экстракта зеленых водорослей.

Врем  ферментации 0,5-1,5 час при температуре 37° С и рН 6,5-7,0. Дл  прекращени  реакции прибавл ют 1 г трихлоруксусной кислоты цри 0°С. Раствор центрифугируют. К фильтрату прибавл ют 10-кратный объем метилового спирта, а осадок раздел ют на ионообменной колонке.

Выход: 0,176 г 96% АТФ (аденинтрифосфорна  кислота).

Пример 2. 200 мг аденозин-5-монофосфорной кислоты раствор ют в 7,6 мл воды. К раствору прибавл ют Na2HPO4-121120 и КН2РО4 в весовых соотношени х 2,5%: 0,7%. Затем добавл ют 0,014 г КС1, 0,014 г MgCl2-6H2O и 9,5 мл экстракта зеленых водорослей.

Процесс далее ведетс  аналогично примеру 1.

Выход: 0,18 г 95% АТФ.

Пример. 3 200 мг гуанозин-5-монофосфорной кислоты раствор ют в 7,6 мл воды. К раствору прибавл ют Na2HPO4-12Н2О и КН2РО4 в весовых соотношени х 2,5%: 0,7%. Затем добавл ют 0,014 г КС1, 0,014 г MgCl2-6H2O и 95 мл экстракта зеленых водорослей.

Далее - аналогично примеру I.

Выход: 0,12 г 90% ГТФ; 0,13 г 90% ГТФ.

Пример 4. К 54 г сахара прибавл ют 16,5 г фосфорнокислых солей, 300 мл воды, 400 мл экстракта водорослей.

Раствор перемешивают 2-3 мин, затем выдерживают в течение 15 мин при температуре 36°-37° С.

Врем  ферментации 0,5-1,5 час. Процесс прекращают прибавлением 25 мл 50%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Центрифугируют . К центрифугату добавл ют 21 г Ва(СНзСООП)2 и насыщенный раствор Ва(ОН)2 до слабо-розового окрашивани  по фенол-фталеину. Реакционную смесь центрифугируют .

Бариевую соль дифосфата фруктозы промывают один раз 50%-ным спиртом и один раз 96%-ным спиртом. Сушат в вакуумном эксикаторе .

Выход: 53 г бариевой соли 1,6-дифосфата фруктозы.

Предмет изобретени 

Claims (2)

1.Способ получени  нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов путем биологического фосфорилировани  фосфорилирующей смеси, состо щей из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов , хлористого кали , хлористого магни , воды при рН 6,5-7,0 в присутствии биологического катализатора, с последующей очисткой продукта, отличающийс  тем, что, с целью ускорени  и упрощени  процесса, а также увеличени  выхода и чистоты продукта, в качестве биологического катализатора используют экстракт водорослей.

2.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что экстракт водорослей ввод т в фосфорилирующую смесь в соотношении 1 : 1 или 1,2: 1.