SU410082A1

SU410082A1 -

Info

Publication number: SU410082A1
Application number: SU1768668A
Authority: SU
Priority date: 1972-04-05
Filing date: 1972-04-05
Publication date: 1974-01-05

Description

1one

Изобретеиие относитс к микробиологии, а точнее к способам по.чучеии биодеградативиой Ь-треоииндегидратазы.The invention relates to microbiology, and more specifically, to methods for the biodegradation of b-threoine dehydratase.

Известеи сиособ иолучеии биодеградативиой L-треоииидегидратазы иутом культивироваии ее иродуиеитов, иаиример Escherichia coli на водион минеральной питательной среде, содержаихей DL-треоиип в аиаэробиых услови х .Limes are biodegradable with L-threo-iide dehydratase and cultivated by its culture, and Escherichia coli iairimer on water is a mineral nutrient medium containing DL-threoiip under aaaerobic conditions.

Цель изобретени - увеличение выхода L-треониндегндратазы н повышение ее активности .The purpose of the invention is to increase the yield of L-threonine dendratase and increase its activity.

Это достигаетс тем, что перед культивированием в аиаэробиых услови х осуществл ют предварительное культгпзирование этого продуцента в аэробных услови х на водиой минеральной среде, содержан1,ей глюкозу.This is achieved by the fact that, prior to cultivation under aaaerobic conditions, preliminary cultivation of this producer under aerobic conditions is carried out on a water mineral medium containing 1 glucose.

Пример. Клетки бактерий Escherichia соИ штамма К-12 выранишалп вначале в аэробных услови х в среде следуюи1,его состава , %:Example. Bacteria cells of Escherichia coli strain K-12, first under aerobic conditions in the next medium, its composition,%:

Na2HPO4-12П2ОNa2HPO4-12P2O

КП2Р04KP2P04

MgCl2 6Н2ОMgCl2 6H2O

(NH4)2SO4(NH4) 2SO4

FeSO4-71-1.0FeSO4-71-1.0

Глюкоза Среда имела рП 7,0.Glucose Medium had a pp 7.0.

Клетки выраи1ивали в 100 мл среды в колбах Эрлепмейера объемом 750 .ил на качалке при 30°С в суток.Cells were grown in 100 ml of medium in Erlepmeyer flasks with a volume of 750.il on a rocking chair at 30 ° C per day.

Пр1 таких услови х роста иолучали достаточную биомассу клеток (около 1 г сырого веса клеток со 100 мл среды), одиако ие обладаюп 1 ,ую искомой фермеитиой активпостью. Клетки отдел ли иептрифугпроваппем, отмывали li переносили в 1,5 объема (к исходпомуPr1 of such growth conditions yielded a sufficient biomass of cells (about 1 g wet weight of cells with 100 ml of medium), however, it has 1, the desired fermeity activity. The cells were separated by iptrifugrovappen, washed li transferred in 1.5 volumes (to the end

объему среды) среды того же миперального со:тава, что и иа иервой стадии с пептоном (2%) и DL-треопипом (1.10 М); из среды исключали глюкозу.the volume of the medium) of the medium of the same miperal co: tava as in the first stage with peptone (2%) and DL treotype (1.10 M); glucose was excluded from the medium.

Все операции ироводилп в стерильных услоВИЯХ . Клетки выраигивали одни сутки при 37°С н стациоиариых услови х в колбах, доверху наполнетшых средой.All operations are conducted under sterile conditions. Cells were expressed one day at 37 ° C under steady-state conditions in flasks filled to the top with medium.

Полученную массу сусиенднровалн в онределепном объеме буфера, разрушали ультразвуком и определ ли ферментативиую активность биодеградативной L-треоииндегидратазы сиектрофотометрнческим способом с исиользованнем лактат дегндрогеназы в качестве вспомогательного фермента. Расчет1г1 удельпой и общей активиости ировод)1ли с учетом содер/каии белка в экстракте клеток.The resulting mass was suspended in a specific volume of the buffer, sonicated, and the enzyme activity of the biodegradable L-treiine dehydratase was determined by the spectrophotometric method using the dendrogenase lactate as an auxiliary enzyme. Calculation of 1gl of the specific activity and the total activity of the conductor) 1l taking into account the content / protein in the extract of the cells.

В таблице ириводитс сравпеиие выращивани клеток известиым и пред,лагаемым сиособом .In the table, cell growth is carried out with lime and before, by means of a sioosom.

8.0 0.88.0 0.8

122,0 1147,5122.0 1147.5

П р е д м е т и з о б р е т е и и PRIOR DIRECTORSHIP and

Способ получени биодеградативпой Lтреонипдегидратазы путем культивировани ее продупептов, например Escherichia на минеральной питательной среде, содержаи 1ей 1),Ь-треоии 1 в анаэробных услови х , огличаю1цийс тем, что, с целью увеличени выхода L-троонипдегидратазы и повышени ее активности, перед культивированием в анаэробных услови х на среде с 13,Ь-треонином осун1ествл ют предварительное культивировапне этого продуцента в аэробных усло15НЯХ на 1 одно| минеральной среде, содержапдей ГЛЮКОЗ/.The method of producing biodegradative L-treonipdehydratase by cultivating its prodeppets, for example, Escherichia on a mineral nutrient medium, containing 1 1), L. Anaerobic conditions on the medium with 13, L-threonine are pre-cultivated by this producer under aerobic conditions by 1 one | mineral medium containing glucose /.