SU382682A1 - Питательная среда для выращивания микроорганизмов - Google Patents
Питательная среда для выращивания микроорганизмовInfo
- Publication number
- SU382682A1 SU382682A1 SU1675773A SU1675773A SU382682A1 SU 382682 A1 SU382682 A1 SU 382682A1 SU 1675773 A SU1675773 A SU 1675773A SU 1675773 A SU1675773 A SU 1675773A SU 382682 A1 SU382682 A1 SU 382682A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- medium
- brucella
- vaccine
- casein
- hydrolyzate
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
1
Изобретение относитс к области ветериларии .
Известно использование питательной среды дл выращивани микроорганизмов, приготовленной из м са, рыбы, частично из казеина.
Однако такие питательные среды дороги, трудоемки в приготовлении, нестандартны, так как м со дл этих целей чаще всего используетс мороженое.
Предлагаема питательна среда дл выращивани бруцеллезных микробов с целью увеличени концентрации микробных тел, обладающих длительной жизнеспособностью и иммуногенными свойствами, содержит гидролизаты из обрата молока и казеина, в ее состав введен кукурузный экстракт и компоненты вз ты в следующем количестве (на 1 л), гидролизата обрата молока и казеина (ка амин«ый азот) 100-120 мг/°/о в равных соотношени х , пептона сухого 5 г, поваренной соли 5 г, глицерина 10 мл, глюкозы 10 г, кукурузного экстракта 5-7 мл (в зависимости от содержани процента фосфора), водопроводной воды до 1 л.
приготовление гидролизата из обрата. 1 л обрата молока подогревают до 45° С, подщелачивают 20%-ным раствором соды (ГхаНСОз) до рН 7,8 и добавл ют 1 г сухого панкреатина или 10 г измельченной поджелудочной железы крупного рогатого скота.
Фермент предварительно развод т в небольшом количестве теплой водопроводной воды. Через 15-20 мин после внесени панкреатина или поджелудочной железы добавл ют
10 мл хлороформа, затем бутыли закрывают резиновыми пробками, завернутымн в марлевые салфетки, и став т в термостат при 40° С на четверо суток. Содержимое бутылей перемеШИвают через каждые 5-б час.
В процессе гидролиза ел едневно провер ют рП н, в случае снижени его до 7,2-7,4, снова подщелачивают 20%-;ным раствором воды до рН 7,6-7,8. Пробку после встр хивани бутылей слегка приоткрывают дл удалени паров хлороформа. Через 4 суток бутыли вынимают из термостата, содерл нмое фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают нейтральный рН или слабощелочной (7,0-7,2), стерилизуют при 0,5 атм 30 мин.
Хран т при 5-8° С в бутыл х, закрытых резиновой пробкой, и используют но мере надобности дл приготовлени питательных сред. В готовом гидролизате должно содержатьс аминного азота 400-500 .«г/%, оби .;егэ азота - 700-800 лгг/%.
Приготовление гидролизата из казеина. Берут 1 кг пищевого кислотного казеина ТУ-15354, заливают 10 л дистиллированной ли Бодопроводной воды, подогретой до 40° С,
Б };оторой предварительно раствор ют 100 г
углекислого натри (NaaCOs). Казеин тщательно перемешивают до полного растворени , поддержива при этом температуру около 40° С, добавл ют 300 г фарша поджелудочной железы, устанавливают рН 7,6-7,8 20%ным раствором едкого натра (NaOH) и добавл ют 100 мл (%) хлороформа. Гидролиз ведут при 37° С в течение 14-16 суток, при этом содержимое бутылей ежедневно перемешивают и коитролируют рН, который должен быть в пределах 7,4-7,6. Регулируют рН 20%-ны;м раствором едкого натра.
В конце гидролиза рН снижаетс до 7,0-7,2, а амидный азот повышаетс до 700- 900 жг/%. Если аминный азот достиг указанного уровн , бутыли охлаждают до комнатной температуры, затем на трое суток помеш ,ают в холодильник при 5-7° С дл отстаивани . Отсто вшийс гидролизат декантируют и фильтруют через ватно-марлевый фильтр или полотно бельтинг. К остатку нерасшепленных белков прибавл ют дистиллированной или водопроводной воды столько, сколько было декантировано гидролизата, затем подкисл ют сол ной кислотой до 1рН - 6,3 и кип т т в течение 10 мин. После кип чени охлаждают , отстаивают, фильтруют сначала через вату, потом через полотно бельтинг.
Обе порции фильтратов смешивают, консервируют прибавление.м 1 % хлороформа, хран т при 5-7° С в бутыл х, закрытых резиновой пробкой, и используют по мере надобности дл приготовлени питательной среды.
В готовом гидролизате должно содерл атьс , жг/%:
Аминного азота 700-850,
Обшего азота 1100-1200.
Приготовление жидкой обрато-казеиновой питательной среды.
Компоненты среды вз ты в следующих количествах на 1 л:
Гидролизата обрата молока и казеина (да алшнный азот) в равных соотнощени х 100-120 .
Пептона (сухого)5 г
Поваренной соли (NaCl)5 г
Глицерина Q мл
Кукурузного экст1ракта (в зависимости от его качества)5-7 мл
Глюкозы на сухое вещество10 г
Водопроводной водыдо 1 л
Примечание: При добавлении 2,5-3,5% агарагара получают плотную среду. Прк добавлении 1,5-1,7% агар-агара получают среду, пригодную дл определени количества живых бруцелл в сухой бруцеллезной вакцине культуральным методом.
До стерилизации смесь перечисленных компонентов подщелачивают 10%-ным раствором едкого натра и устанавливают рН до 6,7-6,8. После стерилизации в готовой среде
рН должен быть 6,5-6,6. Количество необходи .мого гидролизата дл приготовлени 1 л среды в расчете на амииный азот вычисл ют по формуле:
5V « 1000
л мл,
где а - количество мг1% аминного азота, необходимого дл приготовлени среды;
b - количество лгг/э/о аминного азота, содержащегос в примен е.мом гидролизате;
X - искомое количество гидролизата.
,.гг 100- 1000 „„„
1оПример. 200 мл; или
оОи
„ 120 1000 ... 500 -240л....
Определ е.м, какое количество гидролизата обрата следует вз ть на 1 л среды, если в нем содержитс лг/Vo аминного азота. В данном случае 200 мл, но так как его
берут в равном соотношении с гидролизато .м из казеина, то следует вз ть на 1 л ореды 100 мл.
Все компоненты среды, за исключением глюкозы, смешивают в варочном котле, подщелачивают 10%-ным раствором едкого натра до рН 6,7 - 6,8. Смесь кип т т при помешивании до полного растворени всех компонентов , затем к смеси прибавл ют гор чую водопроводную воду до первоначального
объема. Готовую среду фильтруют через фильтр-пластины и одновременно перекачиваЕот в реактор дл стерилизации. Стерилизуют среду при 120° С (1 атм) 40-45 мин. После стерилизации в жидкой среде рН
должен быть 6,4 - 6,6.
По сравнению с м сными средами, предлагаема среда имеет более однородный состав белка. Готова ареда по содержанию а.минокислот приближаетс к полусинтетической и
используетс дл выращивани микробов без пеногасител , так как при культивировании почти не пенитс . Использование достаточно полного набора аминокислот в среде обеспечивает полноценное физиологическое и морфологрмеское развитие микробной клетки, что обусловливает сравнительно высокий выход микробной м.ассы с единицы объема питательной среды, т. е. 55-60 млрд микробных тел в 1 мл, а в лабораторном реакто)ре с автоматическим регулированием рН накопление микробной массы составл ло 70-80 млрд микробных тел в 1 мл по бруцеллезному стандарту мутности при наличии высокого процента живых бруцелл типичной морфологии .
В цел х подтверждени стабильности результатов по накоплению микробной массы, получаемой при глубинном выращивании бруцеллезной культуры, готов т шесть серий
ферментативного гидролизата из обрата (2, 4,
6, 7, 8, 9) и три серии ферментативного гидролизата казеина (1, 3, 5), из которых в дальнейшем готов т жидкую питательную среду дл глубинного культивировани вакционного штамм.а бруцелла абортус 19. Как опытна , так и контрольна среда содержит 100-120 уиг/% аминного азота; в обоих средах после стерилизации устанавливаетс рН 6,4 - 6,6 (дл жидкой среды). В качестве контрол используют гидролизат Хоттингера и пептон MiapTcna, примен емый обычно в производстве. Материалом дл засева реакторов служит 36-часова бруцеллезна культура производственного вакционного штамма № 19. Посевна доза составл ет не менее 100-150 млн микробных тел на 1 мл питательной среды по бруцеллезному стандарту мутности ГКИ.
Перед засевом реактора в среду стерильно добавл ют глюкозу в виде 40%-ного раствора из расчета 0,5% к объему среды. Культуру выращивают при 36-37° С в реакторах ем.костью 480 л, содержащих 100-250 л среды . Аэрацию осуществл ют подачей стерильного воздуха из расчета 1,5-2 л воздуха на 1 л/лшн среды механическим перемешиванием со скоростью 260 об/мин. Выращивание продолжаетс в течение 32-34 час.
В процессе выращивани бруцеллезной культуры определ ют рН среды. Дл поддержани на определенном уровне рН через 16-18 час культивировани в среду повторно добавл ют глюкозу в количестве 0,2-0,5 г. Через 24-32 или 34 час отбирают пробы, в которых определ ют оптическую концентрацию микробной взвеси цо бруцеллезному стандарту мутности количество живых бруцелл цветным методом с помощью краски метиленовой сини.
Каждую пробу взвеси бруцелл контролируют па чистоту роста и типичность морфологии путем просмотра под микроскопом окрашенных по Граму мазков, а также высевом на питательные среды и бульон).
Чистую культуру бруцелл осаждают в течение 18-24 час, цадосадочную жидкость удал ют. Концентрированную микробную массу сливают в стерильные баллоны, определ ют оптическую концентрацию микробных тел в 1 мл, затем добавл ют в зависимости от полученной концентрации среду высушивани . Из полученной стерильной микробной массы готов т сухую живую бруцеллезную вакцину (в соответствии с требо вани ми инструкции по изготовлению и контролю сухой живой бруцеллезной вакцины).
Как показывают исследовани , выращивание вакцинного бруцеллезного штамма 19 в жидкой обрато-казеиновой среде не оказывает вли ни на его морфологию, антигенные и иммуПОгенные свойства. При длительном хранении (18-25 мес.) в сухой вакцине сохран етс высокий процент живых бруцелл, типичных по своей морфологии.
6
В опытах па морских свинках устанавливают высок}Ю иммуногенность сухих вакцин серий (1, 4, 14, 15), полученных из культур, Быращен.ных на предлагаемой среде.
Результаты сравнительного испытани интенсивности роста вакцинного бруцеллезного штамма 19 на обрато-казеиновом, мартеновском и хоттингеровско: 1 бульонах при глубинном методе выращивани приведены в таблице.
20
25
30
Оптическа концентраци бруцелл определ етс по бруцеллезному стандарту мутности; кол ичество бруцелл - цветны.м методом с помощью краски метиленовой сини. Накопление мимробной массы с 1 мл среды в среднем в два раза больше, чем на средах из м сных гидролизатов.
Высушивают 15 экспериментальных серий из вакционного штам,ма бруцелла абортус 19. В качестве контрол высушивают 12 серий бруцеллезной вакцины, изготовленной из культур , выращенных на плотной агаровой среде, основу которых составл ют м сные гидролизаты .
На основании регул рных сравнительных исследований сухой бруцеллезной вакцины, хран щейс при 4-6° С в течение 18-25 мес. со дн изготовлени , зстанавливают, что вакцина сохран ет морфологические, антигенные и иммуногенные свойства. Вакцина, полученна из культур, выращенных в жидкой среде, по своему качеству не уступает вакцине, выращенной на агаре. Эта вакцина вполне отвечает требовани м действующей инструкцил по изготовлению и контролю сухой живой бруцеллезной вакцины.
При добавлении 2,5-3,5% агар-агара к жидкой обрато-казеиновой среде, получаетс плотна агарова среда, котора может быть использована в производстве дл выращивани вакцинного штамма бруцелла абортус 19. Накопление микробной массы на плотной обрато-казеиновой среде на 15-20% больше, чем на агаровой печеночной и м сной средах. При проверке на стабильность в пробе с трИпа:фтави.но.м и в реакции термопреципитации бруцеллезной культуры вакцинного штамма 19, хранившейс в пробирках на скошенном обрато-казепновом агаре при 4-6° С в течение 3 мес. (врем проверки), культура этого штамма остаетс стабильной и не имеет признаков диссоциации. При испытании той же культуры, сохранившейс в тех же услови х на печеночно-глюкозо-глицериновом и мартеновском агарах, в пробе с трипафтавином отмечаетс положительна реакци агглютинации , что доказывает (наличие диссоциации . Дл плотной среды рН до стерилизации устанавливают 7,1-7,2, стерилизуют при 115° С в течение 30 мин. Эта же среда может быть использована дл определени количества живых бруцелл в бруцеллезной вакцине, если к жидкой обрато-казеиновой среде добавить 1,5-1,7% агар-агара. 8 Предмет изобретени 1.Питательна среда дл вь раш;ивани кроорганиамов, например бруцелл, содераш ,а .пептон, поваренную соль, глицерин, юкозу, отличающа с тем, что, с целью еличени концентрации микробных клеток, ладающих длительной жизнеспособностью иммуногенными свойствами, она содержит дролизаты из обрата молока и казеина. 2.Среда по п. 1, отличающа с тем, что, целью ускорени процесса делени микробй клетки (бруцелл), в нее введен кукурузй экстракт. 3.Среда по пп. 1 и 2, отличающа с тем, о ее компоненты вз ты в следующих колиствах (на 1 л среды): Гидролизата обрата молока и казеина (на аминный азот) 100-120 лгг/О/о в равных соотношели х Пептона сухого Поваренной соли Глицерина Глюкозы Кукурузного экстракта в зависимости от содержа5-7 мл ни процента фосфора до 1 л.Водопроводной воды
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU1675773A SU382682A1 (ru) | 1971-06-18 | 1971-06-18 | Питательная среда для выращивания микроорганизмов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU1675773A SU382682A1 (ru) | 1971-06-18 | 1971-06-18 | Питательная среда для выращивания микроорганизмов |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU382682A1 true SU382682A1 (ru) | 1973-05-25 |
Family
ID=20481075
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU1675773A SU382682A1 (ru) | 1971-06-18 | 1971-06-18 | Питательная среда для выращивания микроорганизмов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU382682A1 (ru) |
-
1971
- 1971-06-18 SU SU1675773A patent/SU382682A1/ru active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105028388A (zh) | 保存液及其制备方法 | |
CN115261302B (zh) | 一种基质胶及其制备方法和应用 | |
RU2412240C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
RU2580028C1 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования бруцелл | |
SU382682A1 (ru) | Питательная среда для выращивания микроорганизмов | |
CN110643522A (zh) | 禽多杀性巴氏杆菌的培养基、培养方法及其应用 | |
RU2415923C1 (ru) | Способ получения ферментативного гидролизата из свежей белокочанной капусты и питательная среда для культивирования лактобактерий на его основе | |
Little et al. | A practical liquid medium for cultivation of Trypanosoma cruzi in large volumes | |
RU2702174C1 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И СБОРА БИОМАССЫ ВАКЦИННОГО ШТАММА ЧУМНОГО МИКРОБА Y.pestis EV | |
RU2396335C1 (ru) | Способ приготовления плотной питательной среды | |
CN115011546B (zh) | 一种鱼类细胞体外三维培养、诱导分化和冷冻保存方法 | |
RU2745504C1 (ru) | Питательная среда жидкая для выращивания и сброса биомассы вакционного штамма чумного микроба yersinia pestis ev | |
SU1397481A1 (ru) | Питательна среда дл выделени микоплазм | |
RU2348686C2 (ru) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов | |
RU2644248C2 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования и выращивания туляремийного микроба | |
RU2425871C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
CN114381386B (zh) | 一种发酵生产阿维菌素的培养基 | |
RU2728217C1 (ru) | Жидкая питательная среда для культивирования vibrio cholerae во флаконах и бутылях | |
Sterges | Adaptability of silica gel as a culture medium | |
RU2087532C1 (ru) | Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий | |
RU2642316C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота | |
RU2333948C2 (ru) | Питательная среда для выращивания возбудителя туляремии | |
RU2022008C1 (ru) | Способ приготовления основы для питательных сред для выращивания микроорганизмов | |
RU2528069C1 (ru) | Среда высушивания жидкая для стабилизации биомассы вторичного сбора чумного микроба вакцинного штамма ev | |
RU2093569C1 (ru) | Питательная среда для культивирования плесневых грибов рода aspergillus и mucor |