SU248566A1 - METHOD OF MANUFACTURE OF 5'-INOSINE ACID - Google Patents

METHOD OF MANUFACTURE OF 5'-INOSINE ACID

Info

Publication number
SU248566A1
SU248566A1 SU912271A SU912271A SU248566A1 SU 248566 A1 SU248566 A1 SU 248566A1 SU 912271 A SU912271 A SU 912271A SU 912271 A SU912271 A SU 912271A SU 248566 A1 SU248566 A1 SU 248566A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
atcc
acid
brevibacterium ammoniagenes
manufacture
ribose
Prior art date
Application number
SU912271A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Яошиаки Кавамори Куиизо Мизухара Яошинобу амура Такео Сузуки Шукуо Киношита
Лимитед Иностранна фирма Каиова Хакко Когаио Ко
Publication of SU248566A1 publication Critical patent/SU248566A1/en

Links

Description

Известеи способ -получени  б-инозйновой кислоты путем выращивани  микроорганизмов , нродуцирующих ее составные части - гипоксантин и 0-рибозу-5-фосфорную кислоту «а нитательной среде, содержащей источник углевода, необходимые минеральные соли и стимул торы роста с последующим смешиванием этих составных частей и .выделеиием 5-инозино1ВОй кислоты из полученной смешанной культуральной жидкости одилм из известных способов, например при номощи ионообменных смол.The lime method of obtaining b-inosinic acid by growing microorganisms that produce its constituents — hypoxanthin and 0-ribose-5-phosphoric acid — in a nitrous medium containing a source of carbohydrate, essential mineral salts and growth stimulants, followed by mixing these constituents and Selection of 5-inosinic acid from the obtained mixed culture liquid from one of the known methods, for example, using ion-exchange resins.

Предлагаемый способ позвол ет увеличить выход б-инозиновой кислоты.The proposed method allows to increase the yield of b-inosinic acid.

Дл  этого в качестве .продуцентов используют штамм Brevibacterium ammoniagenes № 7209-1 АТСС №. 15454 и АТСС № 15187, а в качестве продуцента 0-рибозы-5-фос(|)ор.ной кислоты - Brevibacterium ammoniagenes АТСС № 6872, обладающий активностью (нуклеотид лирофосфорилазы.For this, Brevibacterium ammoniagenes No. 7209-1 ATCC No. is used as producers. 15454 and ATCC No. 15187, and as a producer of 0-ribose-5-phosph (|) organic acid, Brevibacterium ammoniagenes ATCC No. 6872, which has activity (lymphosphorylase nucleotide.

Способ -получени  5-инозиновой кислоты заключаетс  IB том, что микроорганизм Brevibacterium ammoniagenes № 7209-1 (АТСС JVb 15454 или Brevibacterium ammoniagenes АТСС № 15187) сначала выращивают в водной (Питательной среде, содержащей источники углевода, например глюкозу, амилодекстрин , отходы мелассы; источники азота, например , мочевину, аммиак или аммиачные соли.The method of obtaining 5-inosinic acid is IB, in that the microorganism Brevibacterium ammoniagenes No. 7209-1 (ATCC JVb 15454 or Brevibacterium ammoniagenes ATCC No. 15187) is first grown in an aqueous (Nutrient medium containing carbohydrate sources, such as glucose, amylodextrin, waste materials, waste, amylodextrin, waste materials, waste materials, nutrients, carbohydrate sources, carbohydrates, for example, glucose, amylodextrin, waste materials, and nitrogen sources such as urea, ammonia or ammonia salts.

источники фосфора, кали , например двухосновный фосфат кальци , одноосновный фосфат кальци , сульфат магни , сульфат калил, хлорид натри  и хлорид кальци , а такжеsources of phosphorus, potassium, such as dibasic calcium phosphate, monobasic calcium phosphate, magnesium sulphate, potassium sulphate, sodium chloride and calcium chloride, and

стимул торы роста, например дрожнсевой экстракт, казеин, гидролизат соевого жмыха, лептой, биотин, аденин.growth stimulants, such as yeast extract, casein, soybean meal hydrolyzate, lepta, biotin, adenine.

Культивирование происходит в аэробных услови х при температуре 30°С в течение 16-Cultivation occurs under aerobic conditions at a temperature of 30 ° C for 16-

24 час. Затем выращенные клетки пересеивают в свежую питательную среду вышеописанного состава дл  накоплени  гипоксантина.24 hours Then, the grown cells are subcultured into fresh nutrient medium of the above composition to accumulate hypoxanthine.

Культивирование производ т в услови хCultivation is performed under conditions

аэрации при темнературе 28-40°С, рН среды 6,0-8,0 в течение 2-4 дней. Значение рМ среды устанавливают с помощью мочевины или аммиака. Ферментацию провод т до тех нор, иока не накопитс  3-8 мг гипоксантннаaeration at teperature 28-40 ° C, pH 6.0-8.0 for 2-4 days. The value of the pM medium is set using urea or ammonia. Fermentation is carried out until those holes, iok does not accumulate 3-8 mg hypoxantna

на 1 мл среды.per 1 ml of medium.

Одновременно выращивают микроорганизм Brevibacterium ammoniagenes АТСС N° 6872, способный продуцировать 0-рибозу-5-фосфорную кислоту, обладающий активностью нуклеотид пирофосфорилазы, IB две стадии, на такой же питательной среде, при тех же услови х.At the same time, the microorganism Brevibacterium ammoniagenes ATCC N ° 6872, capable of producing 0-ribose-5-phosphoric acid, having the activity of a pyrophosphorylase nucleotide IB, is grown in two stages, on the same nutrient medium, under the same conditions.

Затем культуральную жидкость, содфжащую гипоксанти , .при перемешивании смешивают с культуральной жидкостью, содержаш ,ей нуклеотид иирофосфо-рилазы и О-рибозу5-фосфорную кислоту в соотношепии от 1 : 1 до 2:1, целесообразно 1 : 1, в результате чего гипоксантин .вступает в реакцию с D-рибозой-5-фосфо:рной кислотой в присутствии ферментов , при это,м образуетс  5-инозинова  кислота. Дл  стимулировани  образовани  последней в полученную смесь можно добавл ть различйые сахариды. Процесс длитс  в течение 24--36 час.Then, the culture fluid, containing hypoxante, is mixed with the culture fluid with stirring, containing the nucleotide iirophosphoryrylase and O-ribose 5-phosphoric acid in a ratio from 1: 1 to 2: 1, it is advisable 1: 1, resulting in hypoxanthine. reacts with D-ribose-5-phosphoric acid in the presence of enzymes; in this case, 5-inosinic acid is formed. In order to stimulate the formation of the latter, different saccharides can be added to the resulting mixture. The process lasts for 24--36 hour.

После максимального накоплени  кислоты клетки удал ют одним из известных способов, например центрифугированием, а 5-инозиновую кислоту Получают из центрифугата путем пропуска его через ионообменную смолу. Пример 1.After maximum accumulation of the acid, the cells are removed by one of the known methods, for example, by centrifugation, and 5-inosinic acid is obtained from the centrifugate by passing it through an ion exchange resin. Example 1

Штамм Brevibacterium ammoniagenes 7209-1 (АТСС № 15454) .вырашивают на питательной среде, содержащей, %:The strain Brevibacterium ammoniagenes 7209-1 (ATSS No. 15454). Is grown on a nutrient medium containing,%:

глюкозы3glucose3

дрожжевого экстракта2yeast extract2

пептона1peptone1

хлорида натри 0,25sodium chloride 0.25

Среду стерилизуют при температуре 120°С в течение 15 мин.The medium is sterilized at a temperature of 120 ° C for 15 minutes.

Культи вир 01ва.ние провод т в течение 24 час при температуре 30°С и постожнном встр хивании . Полученную маточную культуру в количестве 300 мл пересеивают в стерильную питательную среду, содержащую, %:Cultured vir 01va.ni are held for 24 hours at a temperature of 30 ° C and shaken with a post-shake. The resulting stock culture in an amount of 300 ml is transferred to a sterile nutrient medium containing,%:

глюкозы10glucose10

дрожлсевого экстракта0,5yeast extract0.5

двухосновного фосфатаdibasic phosphate

.кали 0,4.kali 0,4

одноосновного фосфатаmonobasic phosphate

-кали 0,4-kali 0,4

сульфата магни 0,4magnesium sulfate 0.4

хлорида кальци 0,012calcium chloride 0,012

В течение 3 дней с помощью а ммиачной воды рП среды Д01вод т до 7,0. В питательной среде образуетс  4,1 мг/мл гипоксактина.Within 3 days, with the help of m-water RP water of medium D01, water is up to 7.0. In a nutrient medium, 4.1 mg / ml of hypoxactin is formed.

Одно1времен1но выращивают микроорганизм Brevibacterium ammoniagenes АТСС Л 6872 в течение 24 час щи температуре 30°С и посто нном встр ХИвании на стерильной питательной среде, содержащей, %:At one time, the microorganism Brevibacterium ammoniagenes ATCC L 6872 is grown for 24 hours at a temperature of 30 ° C and continuously added on a sterile nutrient medium containing,%:

глюкозы3glucose3

дрожжевого экстракта2yeast extract2

пентона1pentone1

хлорида натри 0,25sodium chloride 0.25

Затем толученную маточную культуру в количестве 300 Mji пересеивают .в 3 л свежей стерильной питательной среды, содержащей , %:Then, 300 Mji crushed uterine culture is subcultured in 3 liters of fresh sterile nutrient medium containing,%:

глюкозы8glucose8

дрожжевого экстракта0,4yeast extract0,4

двухосновного фосфатаdibasic phosphate

кали 0,4Kali 0.4

Выращивание провод т в течение 3 суток при перемешивании, насыщении кислородом и значении рН среды 7,0.The cultivation is carried out for 3 days with stirring, saturation with oxygen and a pH value of 7.0.

Культуральные жидкости, цолученные на второй стадии выращивани  Brevibacterium ammoniagenes 7209-1 (АТСС № 15454 и „NO 6872) по 1,5 л каждой смешивают и добавл ют глюкозу в таком количестве, чтобы в смеси ее было 5%.The culture fluids obtained in the second stage of growing Brevibacterium ammoniagenes 7209-1 (ATCC No. 15454 and „NO 6872) are mixed 1.5 l each and glucose is added in such an amount that it is 5% in the mixture.

Ферментацию 5-инозиновой кислоты провод т в течение 3 суток, поддерживают рП среды 7,0 посредством аммиачной воды. Затем смесь подогревают дл  коагул ции клеток и отдел ют их центрифугированием. Центрифугат пропускают через ионообменную смолу Диа-ион SKLA, после чего ионообменную смолу промьивают ВОДой.Fermentation of 5-inosinic acid is carried out for 3 days, the RP of medium 7.0 is maintained by means of ammonia water. The mixture is then heated to coagulate the cells and separated by centrifugation. The centrifugate is passed through the Dia-ion SKLA ion-exchange resin, after which the ion-exchange resin is washed with WODA.

Полученный раствор 5-инозиновой кислоты с рН, равным 2, вновь .пропускают через ионообменную смолу Диа-ион 2AIA.The resulting solution of 5-inosinic acid with a pH of 2 is again passed through Dia-ion 2AIA through an ion exchange resin.

Таким образо.м получают 240 мл раствора инозиновой кислоты, из которого выдел ют 0,5 N сол ной кислотой 42,8 г кристаллического натри  5-инозината.Thus, 240 ml of inosinic acid solution is obtained, from which 42.8 g of crystalline sodium 5-inosinate is isolated from 0.5 N hydrochloric acid.

Дл  получени  5-инозиновой кислоты используют штаммы Brevibacterium ammoniagenes № 7209-1 АТСС 15454 и АТСС № 15187, продуцирующие г.ипоксантин и АТСС № 6872, продуцирующий О-рибозу-5-фосфорную кислоту , обладающий активностью нуклеотид пирофосфорилазы .For the production of 5-inosinic acid, Brevibacterium ammoniagenes No. 7209-1 ATCC 15454 and ATCC No. 15187, producing gipoksantin and ATCC No. 6872, producing O-ribose-5-phosphoric acid, having pyrophosphorylase nucleotide activity, are used.

Штаммы Brevibacterium ammoniagenes 7209-1 АТСС jYo 15454 и АТСС № 6872 характеризуютс  следующими морфологическими и культуральным.и нризнаками.The strains of Brevibacterium ammoniagenes 7209-1 ATCC jYo 15454 and ATCC No. 6872 are characterized by the following morphological and cultural.

Оба штамма выделены из детского кала.Both strains were isolated from baby feces.

Морфологи . Палочки с закругленными концами, размером 0,8 X 1,4 X 1,7 мк, одиночные , без .капсул, непо.движпые, грамположительные .Morphology. Rods with rounded ends, 0.8 X 1.4 X 1.7 microns in size, single, without. Capsules, not displaced, gram-positive.

Минеральна  среда. Агар. Колонии круглые , плоские гладкие, сер:ого цвета. Иногда встречаетс  слабо-желтый хромогенез.Mineral environment. Agar. The colonies are round, flat, smooth, gray in color. Sometimes a weak yellow chromogenesis occurs.

Па косом агаре наблюдаетс  умеренный рост. Колонии гладкие, плоские, светонепроницаемые , блест щие, консистенци  сливочного масла, аморфные, без запаха.Moderate growth is observed in oblique agar. The colonies are smooth, flat, opaque, shiny, butter consistency, amorphous, odorless.

Бульон: умеренное помутнение вблизи поверхности , пушистый осадок. Желатин ие разжижает.Broth: moderate turbidity near the surface, fluffy sediment. Gelatin does not liquefy.

Лакмусовое молоко слабо щелочное.Litmus milk is weakly alkaline.

Индол не образует.Indole does not form.

Отношение к нитратам. Переводит в нитрИ; ты.Attitude to nitrates. Translates into nitri; you.

Мочевину сбралсавает с образованием аммиака .Urea is collected to form ammonia.

Сыворотку крови не слсижает.Blood serum does not slip.

Аэроб, факультативный анаэроб.Aerobe, optional anaerobic.

Оптимальна  температура раз вити  30°С, при 55°С ногибает за 10 мин.The optimum temperature is 30 ° C, and at 55 ° C it takes 10 minutes.

Олтимальный рИ от 7,0 до 8,5.Ultimate rI from 7.0 to 8.5.

Предмет изобретени Subject invention

Способ получени  б-инозиновой кислоты путем выращивани  микроорганизмов, продуцирующих ее ооставные части - пипоксантин и О-рибозу-5-фосфорную кислоту на питательной среде, Содержащей источник углевода , необходимые минеральные соли и стимул торы роста с .последующим смещиванием этих составных частей и выделением 5-инозиновой кислоты из полученной смешаннойThe method of obtaining b-inosinic acid by growing microorganisms producing its constituent parts - pipoxanthin and O-ribose-5-phosphoric acid on a nutrient medium containing a source of carbohydrate, essential mineral salts and growth stimulants followed by displacement of these components and release 5 -inosinic acid from the resulting mixed

культуральной жидкости одним из известных способов, например при помощи ионообменных смол, отличающийс  тем, что, с целью увеличени  выхода 5-иноз«новой кислоты, в качестве продуцентов гипоксантина используют штаммы Brevibacterium ammoniagenes № 7209-1, АТСС № 15454 или АТСС №. 15187, а в качестве продуцента В-рибозы-5-фосфорной кислоты - Brevibacterium ammoniagenes АТСС № 6872, обладающего активностью нуклеотид Пирофосфорилазы.the culture fluid is one of the known methods, for example, using ion exchange resins, characterized in that, in order to increase the yield of 5-inos "acid", Brevibacterium ammoniagenes No. 7209-1, ATCC No. 15454 or ATCC No. are used as producers of hypoxanthine. 15187, and as a producer of B-ribose-5-phosphoric acid - Brevibacterium ammoniagenes ATSS No. 6872, with the activity of the pyrophosphorylase nucleotide.

SU912271A METHOD OF MANUFACTURE OF 5'-INOSINE ACID SU248566A1 (en)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU248566A1 true SU248566A1 (en)

Family

ID=

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US3198712A (en) Process for producing l-aspartic acid
US3475274A (en) Production of riboflavin
US3622455A (en) Process for the production of citric acid by fermentation
SU248566A1 (en) METHOD OF MANUFACTURE OF 5'-INOSINE ACID
SU747436A3 (en) Fructose producing method
US2978384A (en) Method for the production of 1-glutamic acid
US4011135A (en) Production of L(+)-tartaric acid
US3974030A (en) Process for producing yeast cells
US3389058A (en) Process for producing 5'-inosinic acid through mixed culture of two different microorganisms
Kligler et al. Studies on the role of niacin and thiamine in the metabolism of glucose by Staphylococcus aureus
JPS6291177A (en) Production of selenium-containing microbial cell
RU2300560C2 (en) Method for preparing nutrient medium for culturing yersinia enterocolitica
SU236365A1 (en)
SU575037A3 (en) Method of preparing zeaxanthin
SU577229A1 (en) Method of preparing hexokinase
SU1362021A1 (en) Strain of eschericia coli bacteria as producer of l-treonin
SU753895A1 (en) Culture medium for culturing russula decolorans milk coagulating enzyme producent
SU306637A1 (en)
SU840107A1 (en) Method of preparing l-homoserine
SU659609A1 (en) Method of obtaining citric acid
SU759055A3 (en) Method of biomass production
SU749891A1 (en) Method of preparing alkaline protease
SU295267A1 (en) METHOD OF OBTAINING BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES
SU1514776A1 (en) Method of producing endo-1,4-beta-mannanase
KR910002860B1 (en) Method for preparing l-glutamin acid by fermentation