SU1756349A1 - Штамм бактерий СоRYNевастеRIUм SереDоNIсUм - продуцент полисахарида, индуцирующего образование интерферона - Google Patents
Штамм бактерий СоRYNевастеRIUм SереDоNIсUм - продуцент полисахарида, индуцирующего образование интерферона Download PDFInfo
- Publication number
- SU1756349A1 SU1756349A1 SU904817938A SU4817938A SU1756349A1 SU 1756349 A1 SU1756349 A1 SU 1756349A1 SU 904817938 A SU904817938 A SU 904817938A SU 4817938 A SU4817938 A SU 4817938A SU 1756349 A1 SU1756349 A1 SU 1756349A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- polysaccharide
- interferon
- producer
- sepedonicum
- strain
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: полисахарид может быть использован в профилактике и лечении опухолевых процессов, а также различных иммунодефицитных состо ний. Сущность изобретени : Штамм Corynebacterlum sepedonicum ВНИИА 1857 вл етс продуцентом полисахарида, индуцирующего образование интерферона с высокой активностью. Штамм Corynebacterlum sepedonicum выделен из клубней картофел . При росте на жидкой синтетической среде , в которой в качестве источника азота используетс хлористый аммоний, а углерода - глюкоза (стоимость 1 л среды составл ет 16 коп), клетки синтезируют полисахарид, обладающий способностью индуцировать образование интерферона лейкоцитами периферической крови человека , а также культурами мышиных фибробластов. Полисахарид состоит из следующих моносахаридов: рамнозы и галактозы. Кисла природа полисахарида обусловлена присутствием пировИног- радной кислоты. 2 ил. 1 табл.
Description
Изобретение относитс к микробиологии , а именно к штаммам микроорганизмов, используемых в микробиологической и медицинской промышленности дл получени иммуномодул торов, в частности полисахаридов , обладающих способностью индуцировать образование интерферона в клетках человека и животных.
Известен продуцент полисахарида Bacterium prodlgiosum, получившего название гфодигмозан, который про вл етинтер- ферониндуцирующее действие,
Выращивание указанного продуцента проводитс на среде, содержащей дорогосто щие реактивы - м со-пептонный бульон , м со-пептонный агар. Стоимость 1 л среды дл выращивани В. prodlglosum составл ет 2 руб.
Дл получени продигиозона густой смыв культуры В. prodlgiosum штамм К обрабатывают многократно 0,5 М раствором трихлоруксусной кислоты (ТХУ) при 4°С. Объединенные экстракты тщательно освобождают от взвешенных частиц на центрифуге при 10-12 тыс. об/мин и осаждают на холоду шестью объемами охлажденного этанола с добавлением насыщенного спиртового раствора уксуснокислого натри из расчета 33 мл/л. После полного выпадени осадок отдекл ют на центрифуге и подверо
СА
ю
гэют диализу в течение 3-сут в проточной водопроводной воде и 24 ч в дистиллированной воде, После диализа препарат подвергают лиофильной сушке. В нем обнаружены следующие моносахариды; глюкоза, галактоза , манноза. глкжозамин.
Продигиозан вл етс токсичным, максимально переносима доза в опытах на белых мышах составл ла 0,125-5,0 мг/кг, ЛДбО равн лась 2-2,5 мг/кг, активность 16-64 ед. ,
Недостатками известного продуцента вл ютс : выращивание продуцента осуществл етс на дорогосто щих средах; низка активность продигиозана; токсичность про- дигиозана.
Целью изобретени вл етс получение нового штамма - продуцента полисахарида, про вл ющего активность индуктора интерферона .
Новый штамм С. sepedonicum HMB 7694, обладающий указанными выше свойствами , выделен из больных клубней картофел . Дл этой цели часть пораженной ткани на границе с внешне здоровой тканью вырезают стерильным скальпелем, промывают в течение 15-20 мин несколькими порци ми стерильной воды. Затем растительную ткань растирают в стерильной ступке с небольшим количеством стерильной воды и образующуюс гомогенную кашицу высевают петлей на поверхность агара на чашках Петри. Чашки помещают в термостат (температура 25 ± 3)°С. Питательными средами дл выделени бактерий обычно служат: картофельный агар; картофельный агар + 1 % дрожжевого автолизата: агар картофельный + 1% глюкозы; м со- пептонный агар.
Культуру хран т; а/в пробирках на кос ках с картофельным агаром при комнатной температуре, б/в пробирках на кос ках с картофельным агаром, поверхность которого заливают растительным маслом.
Состав среды картофельный агар: на 1 л дистиллированной воды 200 г картофел , 0,5% хлористого натри . 1,5-2,0% агара, рН 7,0-7.2.
Штамм С. sepedonicum ИМ8 7694 депонирован в коллекции культур Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков Минмедпрома и имеет регистрационный номер 1857.
Штамм С. sepedonicum ВНИИА 1857 имеет следующие морфологические и биохимические признаки.
Культурально-морфологические свойства - хорошо растет на обычных питательных средах.
На картофельном агаре - колонии Kpyi лые, гладкие, приподн тые, блест щие, ела бо слизистые, желто-оранжевые.
На м со-пептонном агаре - колонии
круглые, гладкие, более прозрачные, чем при росте на картофельном агаре, слабо слизистые, желтого цвета, со временем маслообразной консистенции.
При росте в м со-пептонном бульоне культура растет умеренно, образует нежную пленку и небольшой осадок.
Культура растет в аэробных услови х, оптимальн температура роста (25 ± 3)°С, минимальна 3-4°С, максимальна 3031°С . рН: оптимальное 7,0 ± 0,2; растут в интервале рН от 6,7 до 7,4.
Физиолого-биохимические признаки. Культура не образует кислоту из глюкозы, мальтозы, мелецитозы, инулина, лактозы,
сахарозы, маннита, салицина, дульцитэ, сорбита. Не образует сероводород, индол, нитраты не редуцирует, молоко слабо пеп- тонизирует, не разжижает желатины.
Использует ацетат, сукцинат, не использует лактат и пропионат.
Факторы роста - биотин, никотинова кислота, гистидин, пурин, пиримидин, мети- онин, аспарагин. Цистеин и другие аминокислоты могут ингибировать рост бактерий.
Штамм С. sepedonicum ИМВ 7694 при культивировании на жидкой синтетической среде, содержащей в качестве источника углерода глюкозу, а азота - хлористый аммоний, синтезирует полисахарид, обладающий способностью иидуцировэт0 образование интерферона в клетках человека и животных.
Безвредность. Штамм С. sepedonicum ИМВ 7694 не вирулентен, не токсичен дл
теплокровных животных. Введение 24-часовой культуры С. sepedonicum ИМВ 7694 внутрибрюшинно, подкожно и перорально в дозах 5 и 10 млрд микробных клеток на 1 мышь, а также фильтратов среды роста
(после культивировани культуры на жидкой синтетической среде) не вызывало у животных патологического процесса, регистрируемого клинически или при макроскопическом изучении внутренних органов
животных.
Штамм 7694 С. sepedonicum не патогенен дл теплокровных животных.
Выращиавние бактериальной массы С. sepedonicum ИМВ 7694 и получение полисахарида осуществл ли следующим образом . Дл получени инокул та используют 24-часовую культуру, выращенную на картофельном при(25 ±3)°С. Выращивание продуцента осуществл ют в колбах обьеMOM 500 мл, содержащих 200 мл жидкой синтетической среды следующего состава, г/л: MgS04 0.2; ЫаэНРО 6,0; KH2PO i 3,0; NH-iCI 1,0; глюкоза 5,0.
Выращивание культуры продуцента осуществл ют при (25 ± 3)°С п течение 35-41 ч, целевой продукт выдел ют м гким щелочным гидролизом целых клеток.
Премер 1. Культуру С. sepedonlcum ИМВ 7694, хран щуюс на кос ках с картофельным агаром, засевают на кос к с той же средой и выращивают в термостате при (25 ± 3)°С в течение 24 ч. Затем культуру смывают с кос ков жидкой питательной средой описанного выше состава и засевают в колбы емкостью 500 мл, содержащие200 мл аналогичной питательной среды; выращивают на качалках (240 об/мин) в течение 31 ч. Клетки осаждают центрифугированием при 5000 об/мин в течение 20-25 мин, промывают физиологическим раствором и подвергают гидролизу в 5%-ном растворе КОН (100 мл на 10 г влажных клеток) в течение 1,5-2,0 ч. Гицролизат диализуют против водопроводной , а затем дистиллированной воды до нейтрального значени рН, центриф угиру- ют дл осаждени неразрушенных клеток, а также загр зн ющих компонентов клеточной стенки при 5000 об/мин в течение 20-25 мин, Полисахарид осаждают из надосадоч- ной жидкости добавлением 5-ти объемов спирта. Осадок полисахарида освобождают от липидов последовательной обработкой ацетоном, эфиром, а затем смесью хлороформа с метанолом (2:1) и подвергают ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-ТСК геле. Полисахарид, целевой продукт, элюи- руют 0,50 М раствором , рН 6,0, Фракции полисахарида собирают, диализу- ют против водопроводной, а затем дистиллированной воды, лиофильно высушивают.
Гомогенность полисахарида показана гель-фильтрацией на сефарозе 6В (фиг.1), В целевом продукте содержитс 80 ±5% уг- леводоров.
Моносахаридный состав целевого продукта изучали методом газожидкостной хроматографии (фиг.2), а также 13С-ЯМР спектроскопии. Установлено, что полисахарид состоит из тетрасахаридных повтор ющих звеньев, представленных остатками рамнозы (двум ) и остатками галактозы (двум ), к С4 и С6 которой присоедин етс пи- ровиноградна кислота.
Молекул рна масса полисахарида, установленна методами гельхроматографии на сефарозе 6В, а также седиментации и диффузии, составл ет 60 000.
Выход очищенного полисахарида составл ет 4-5% сухой массы клегок.
Полученный полисахарид провер ют на интерферониндуцирующую активность.
Индукцию интерферона в опытах In
vitro проводили внесением в суспензию лейкоцитов периферической крови человека (5 106 клеток/мл)полисахарида в конечной концентрации 200 мкг) в пробе. Смесь
инкубируют при 37°С в течение 24 ч, затем центрифугируют, В опытах In vivo животным (мыши линии СВА с массой 18-20 г) внутри- брюшинно ввод т полисахарид в дозе 10 и 100 мкг/мышь в 0,5 мл. Через 4 и 24 ч после
введени полисахарида мышь декапитиру- ют и собирают пул сывороток, получают спленоциты общеприн тым методом путем разволокнени ткани селезенки. Ложный сывороточный интерферон получают, ввод животным вместо полисахарида алланто- исную жидкость. В полученном материале (сыворотки, суспензии спленоцитов, культу- ральна среда) определ ют активность интерферона по способности подавл ть
цитотоксическое действие вируса-индикатора (вирус везикул рного стоматита - ВВС), 100 тканевых цитопатогенных доз (ТЦД)мл. Учет результатов проводили через 48 ч. Зэ единицу активности принимают величины , обратные максимальному разведению интерферона, предотвращающему на 50% цитопатическое действие 100ТЦЦ ВВС в культуре перевиваемых человеческих лейкоцитов линии или культурами мышиных
фибробластов линии 1-929 соответственно
Тип интерферона определ ют по инги- бированию активности интерферона специфическими моноклинальными антителами к препаратам у-и а-типам человеческого
интерферона.
В опытах in vitro интерферониндуциру- юща активность полисахарида составила 1920 ± 580ИЕ50/МЛ.
При изучении интерфероногенной актив;:ости в опытах in vivo было установлено, что внутрибрюшинное введение его в дозе 0,5-5,0 мг/мг спуст 4 ч вызывает образование интерферона в селезенках и сыворотках крови мышей, При этом оказалось, что введение полисахарида в дозе 0,5 мг/кг вызывало продукцию интерферона гораздо более эффективнее по сравнению с другими исследованными дозами.
При сравнительном изучении интерфероногенной активности известных препаратов продигиозана установлено, что предлагаемый полисахарид более эффективен (табл.).
Предлагаемый полисахарид не вл етс токсичным даже в дозе 40 мг/кг (ЛДбо продигиозана равна 2-3,5 мг/кг). не обладает побочными эффектами, Продигиозан вызывает повышение температуры тела примерно у 30% больных через 2-4 ч после инъекции до субфебриальных цифр.
Таким образом, предлагаемый нами штамм 7694 С. sepedonlcum вл етс новым штаммом, продуцирующим полисахарид , вл ющийс активным индуктором у-интерферона.
Выращивание культуры продуцента более , чем в 10 раз дешевле выращивани В. prodiglosum.
Полисахарид в отличие от продипшзака вл етс токсичным и не обладает побочными действи ми.
Изобретение может быть использовано в микробиологической и медицинской промышленности, при этом не требуетс дополнительных ассигнований дл осуще- ствлени технологических процессов выращивани продуцента и выделени из него полисахарида.
Интерфероногенна активность полисахарида Corynebacterium sepedonlcum ЛМВ 7694 и продигиозана Bacterium prodlgoosum приведена в таблице.
Claims (1)
- Формула изобретениШтамм бактерий Coryaebacterium sepedonicum ВНИИА 1857 - продуцент полисахарида , индуцирующего образованиеинтерферона.Аьдоiy1,110ф0,8Ofi0,1I li I/ г j Ј s § 7
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904817938A SU1756349A1 (ru) | 1990-03-23 | 1990-03-23 | Штамм бактерий СоRYNевастеRIUм SереDоNIсUм - продуцент полисахарида, индуцирующего образование интерферона |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904817938A SU1756349A1 (ru) | 1990-03-23 | 1990-03-23 | Штамм бактерий СоRYNевастеRIUм SереDоNIсUм - продуцент полисахарида, индуцирующего образование интерферона |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1756349A1 true SU1756349A1 (ru) | 1992-08-23 |
Family
ID=21510280
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU904817938A SU1756349A1 (ru) | 1990-03-23 | 1990-03-23 | Штамм бактерий СоRYNевастеRIUм SереDоNIсUм - продуцент полисахарида, индуцирующего образование интерферона |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1756349A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7087726B2 (en) | 2001-02-22 | 2006-08-08 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
-
1990
- 1990-03-23 SU SU904817938A patent/SU1756349A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Ермольева З.В., Вайсберг Г.Е. Стимул ци неспецифической резистентности организма и бактериальные полисахариды. - М.: Медицина, 1976, с. 187. * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7087726B2 (en) | 2001-02-22 | 2006-08-08 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
US7582445B2 (en) | 2001-02-22 | 2009-09-01 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
US7910707B2 (en) | 2001-02-22 | 2011-03-22 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
US8349331B2 (en) | 2001-02-22 | 2013-01-08 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
US8557967B2 (en) | 2001-02-22 | 2013-10-15 | Genentech, Inc. | Anti-interferon-α antibodies |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPS6033474B2 (ja) | 新規なヒアルロニダ−ゼbmp−8231およびその製造法 | |
JPS6216638B2 (ru) | ||
EA003902B1 (ru) | Индукторы апоптоза, содержащие их противораковые и канцеростатические средства, способ индуцирования апоптоза, полисахариды и способы их получения | |
CN116948901B (zh) | 食窦魏斯氏菌d-2胞外多糖在抑制结肠癌细胞中的应用 | |
Snieszko et al. | A new bacterium (Hemophilus piscium n. sp.) from ulcer disease of trout | |
FR2520379A1 (fr) | Procede de preparation d'un disaccharide-tripeptide et d'un disaccharide-tetrapeptide possedant des proprietes immunostimulantes | |
JPH021154B2 (ru) | ||
SU1732815A3 (ru) | Способ получени гипотриглицеридально-активных полисахаридов | |
SU1756349A1 (ru) | Штамм бактерий СоRYNевастеRIUм SереDоNIсUм - продуцент полисахарида, индуцирующего образование интерферона | |
JP3995733B2 (ja) | 免疫賦活組成物 | |
US4410510A (en) | Method for preparing a purified extraction residue fraction and its use in stimulating the immune response | |
JPS58318B2 (ja) | 制癌性物質の製造方法 | |
JPS6147515B2 (ru) | ||
EP0890648B1 (en) | Non-toxic lipopolysaccharide and its preparation | |
KR890002256B1 (ko) | 항암 물질 tf-2 제조 방법 | |
KR20030015504A (ko) | 감귤농축액을 이용한 버섯균사체의 배양방법 및 그버섯균사체 | |
US4030976A (en) | Process for preparing a product having a biological activity | |
Wolbach et al. | A critical Review of the Bacteriology of Human and Rat Leprosy | |
SU1756350A1 (ru) | Штамм бактерий СоRYNевастеRIUм INSIDIоSUм - продуцент полисахарида, стимулирующего образование фактора некроза опухоли и интерлейкина-1 | |
RU2601123C1 (ru) | ШТАММ Candida albicans var. stellatoidea ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОГО АЛЛЕРГЕНА | |
US5382428A (en) | Method for preparing a purified extraction residue fraction and its use in stimulating the immune response | |
RU2101020C1 (ru) | Препарат, обладающий иммуностимулирующим действием | |
US4543259A (en) | Substance TH69E and immunopotentiator containing the same | |
KR830002817B1 (ko) | 생물학적으로 활성인 fr-900156물질의 제조방법 | |
KR970002492B1 (ko) | 신규 트리펩티드 유도체 |