SU1732806A3

SU1732806A3 - Способ разделени гемоглобина крови на гем и глобин

Info

Publication number: SU1732806A3
Application number: SU843728547A
Authority: SU
Inventors: Аутио Карин; Киесваара Мартти; Мялкки Ирье
Original assignee: Валтион Текниллинен Туткимускескус (Фирма)
Priority date: 1983-02-22
Filing date: 1984-04-11
Publication date: 1992-05-07

Abstract

Изобретение относитс к медицине, а именно к медицинской промышленности, и касаетс разделени крови на гем и глобин. Целью изобретени вл етс повышение концентрации тема и глобина. Способ осуществл етс посредством диссоциации гемоглобина эритроцитов на гем и глобин и их разделени , при этом диссоциацию провод т в интервале рН 1,4-3,0, а разделение - осаждением водным раствором карбокси- метилцеллюлозы при соотношении осади- тел и белка 1:75- 1:10. 2 табл.

Description

Изобретение относитс к медицине, а именно к медицинской промышленности, и касаетс способа разделени гемоглобина крови на гем и глобин.

Цель изобретени - повышение концентрации тема и глобина.

Способ осуществл етс путем суспен- дировани клеток эритроцитов, отделенных от плазмы, в растворе кислоты, где гемоглобин диссоциируют на гем и глобин, из этого раствора гем осаждают водным раствором карбоксиметиллцеллюлозы, а глобин остаетс в растворе.

Пример.100 г фракции эритроцитов, отделенных от плазмы, содержащей гемоглобин , причем общее содержание белка составл ет 350 мг/г веса, разбавл ют в 200 г воды и рН раствора довод т до 1,5 путем добавлени 1,0 сол ной кислоты. К данному раствору прибавл ют 1,5%-ный раствор карбоксиметилцеллюлозы в воде в количестве , дающем массовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку, равное

около 1:10. Прибавление карбоксиметилцеллюлозы повышает величину рН, и путем прибавлени гидроокиси натри рН довод т до 2,4 Центрифугирование с силой, соответствующей 8000 д, в течение 15 мин приводит к получению 70% общего белка в растворе, который имеет концентрацию белка 4,0%. Использу силу центрифугировани , соответствующую 10000 д. в течение 30 мин выход белка можно повысить до 85%. При использовании силы центрифугировани ЮОООд содержание железа осадка составл ет 1,8% и содержание белка осадка составл ет 75%.

Первоначальное количество белка и железа 35 и 0,158 г соответственно. На сухой основе общее количество белка и железа в теме состал ет 5,25 и 0,126 г соответственно . Общее количеоство карбоксиметилцеллюлозы составл ет 3,5 г главным образом в фракции тема.

П р и м е р 2. 100 г эритроцитов (300 мг белка/г), отделенных от плазмы, разбавл со

с

-ч

со го со

О

ON

OJ

ют 500 г воды, рН раствора довод т до 1,4 с помощью 1М водного раствора сол ной кислоты и добавл ют 2,010 г 0,2%-ного водного раствора карбоксимети л целлюлозы (класс замещени по крайней мере 1,1, весовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку составл ет около 1:75), рН довод т до 2,4 и смеси позвол ют отсто тьс в течение 15 мин. Осажденный комплекс гем-карбоксиме- тилцеллюлоза отдел ют от белкового раствора центрифугированием (2x1 ч, 15000д). Результаты опытов приведены в табл.1 и 2.

Первоначальное количество белка и железа составл ет 30 и 0,135 соответственно. Количество белка и железа после второго центрифугировани в фракции гема составл ет 1,5 и 0,110 г соответственно.

Пример 3.100 г фракции эритроцитов, отделенной от плазмы, причем общее содержание белка составл ет 360 мг/r мокрой массы, разбавл ют 200 г воды и рН раствора довод т до 1,8 путем добавлени 1 М сол ной кислоты. К этому раствору прибавл ют 1%-ный раствор карбоксиметилцеллюлозы в воде, что дает весовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку, равное 1:20. После прибавлени раствора карбоксиметилцеллюлозы рН довод т до 3,0 прибавлением 1М гидроокиси натри . После центрифугировани с силой ЮОООд в течение 30 мин получают 70% общего белка в растворе, который имеет содержание белка 4,7%. Содержание железа и белка осадка составл ет 0,8 и 84% соответственно.

Первоначальное количество белка и железа составл ет 36 и 0,158 г соответственно . Количество белка и железа в фракции гема на сухой основе составл ет 10,8 и 0.123 г соответственно.

Пример 4. ЮС г кров ных телец (300 мг белка/г), отделенных от плазмы, разбавл ют 500 г воды. рН раствора довод т с помощью 1М водного раствора сол ной кислоты до 1,4 и добавл ют 2010 г 0,02%-ного водного раствора КМЦ. Смесь оставл ют сто ть в течение 15 мин и осажденный гем- КМЦ-комплекс отдел ют от белкового раствор центрифугированием.

Пример 5. 100 г фракции гемоцитов, отделенной от плазмы и содержащей гемоглобин , общее содержание белка в котором составл ет 350 мг/г влажного веса, разбавл ют 200 г воды и показатель рН этого раствора довод т до 1,4-1,5 посредством

добавлени 1,0 М раствора хлористоводородной кислоты, к этому раствору добавл ют 1,5 М раствор карбоксиметилцеллюлозы (CMC) в воде в количестве, позвол ющем

достичь весового соотношени карбоксиметилцеллюлозы и белка, равное примерно 1:10. Добавление раствора карбоксиметилцеллюлозы увеличиваеет значение рН, и в результате добавлени хлориетоводородной кислоты или гидроокиси натри гарантируетс сохрнность показател рН в интервале от 2,4 до 3,0. Обрзовавшийс осадок отдел ют от раствора, центрифугируют с приложением силы, соответствующей

8000 д, в течение 15 мин. 70% общего содержани белка получают в растворе, концентраци белка в котором равн лась 4,0% с использованием центробежной силы, соответствующей 10000 g в течение 30 мин, при

этом выход белка можно увеличить до 85. Осадок можно использовать в качестве лре- парата гема либо гем можно выделить из этого осадка. При использовании центробежной силы, равной 10000 д, содержание

железа в осадке равн лось 1,8 %, а содержание белка 75 %ч

Пример 6. 100 г гемоглобинсодержа- щей фракции эритроцитов, (350 мг белка/г) отделенной от плазмы, разбавл ют с помощью 200 г воды и рН полученного раствора довод т сол ной кислотой до столь низкого значени , что рН этого раствора при добавлении 230 г 1,5%-водного раствора карбоксиметилцеллюлозы оставалс ниже 3.

Полученный осадок отдел ют от раствора центрифугированием (8000 д, 15 мин). Перед центрифугированием рН должен быть в интервале 2,2 - 3,0, чтобы обеспечить осаждение карбоксиметил целлюлозой,

По известному способу окончательна концентраци белка равна 0,038%, выход 67%, раствор гема получен разбавлением и требует дополнительной концентрации.

Claims

Формулаизобретени

Способ разделени гемоглобина крови на гем и глобин путем диссоциации гемоглобина эритроцитов и разделени гема и глобина , отличающийс тем, что, с целью

повышени концентрации гема и глобина, диссоциацию провод т в интервале рН 1,4- 3,0, а разделение - осаждением водным раствором карбоксиметилцеллюлозы при соотношении осадител к белку 1:75 - 1:10.

Таблица 1

Та-б л и ц а 2