SU1727067A1

SU1727067A1 - Способ определени объема эритроцитов в биологической ткани

Info

Publication number: SU1727067A1
Application number: SU904800324A
Authority: SU
Inventors: Вадим Геннадьевич Малышев
Original assignee: Казанский государственный институт усовершенствования врачей им.В.И.Ленина
Priority date: 1990-01-05
Filing date: 1990-01-05
Publication date: 1992-04-15

Abstract

Использование: дл определени объема эритроцитов и исследовани функции внутриорганных сосудов при действии различных экстремальных факторов. Сущность изобретени : после окрашивани гемолиза- та производ т повторное центрифугирование , в качестве красител используют смесь, состо щую из амидопирина, анилина сернокислого и этилового спирта, объем эритроцитов в ткан х определ ют по формуле (Етк-Ек)/(ЕЭр-Ек), где V - объем эритроцитов в ткани, мкл/г; Етк - экстинкци пробы ткани; ЕЭр экстинкци пробы эритроцитов крови; Ек - экстинкци пробы контрол на реактивы; К - посто нный коэффициент . . ,

Description

Изобретение относитс к медицине, а. именно к нормальной и патологической физиологии сердечно-сосудистой системы, и предназначено дл характеристики внутри- органного кровенаполнени при воздействии различных возмущающих факторов.

Известен способ оценки объема эритроцитов в навеске биологической ткани, основанный на способности гемоглобина гемолизатас помощью метгемоглобинобра- зовател (феррицианида) и цианистой соли образовывать цианметгемоглобин, концентрацию которого измер ют фотометрически . После определени количества гемоглобина в заданном объеме эритроцитов крови вычисл ют объем эритроцитов в исследуемой ткани.

Однако, при использовании известного способа из-за мутности фотометрируемого раствора (наличие белка в пробе) величина

экстинкции существенно. завышаетс , что ведет к снижению показател объема эритроцитов в ткани.

Цель изобретени - повышение точности способа.

Способ осуществл ют следующим образом .

После забо животного тушку промораживают при -15°С в течение 3-х ч. Выделенный кусочек органа взвешивают и гомогенизируют в дистиллированной воде в соотношении 1:10. Гемолизат ткани центрифугируют при 6000 об/мин в течение 15 мин.

Параллельно извлекают кровь, которую стабилизируют 5%-ным раствором цитрата натри и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 15 мин. К 0,1 мл эритроцитарной массы добавл ют 4,0 мл дистиллированной воды. Гемолизат эритроци 4 hO «Ч

О

S

ов центрифугируют при 6000 об/мин в теение 15 мин,

В три пробирки внос т по 1,0 мл дистилированной воды, 1,0 мл красител (70,0- 0,0 мл 20%-ного водного раствора мидопирина, 70,0-80,0 мл 5%-ного водно- о раствора анилина сернокислого и 96%- ного этилового спирта до 500,0 мл) и 0,8 мл %-ной перекиси водорода. В первую пробирку добавл ют 0,2 мл супернатанта ткани, во вторую - 0,2 мл супернатанта эритроциов крови, а в третью - 0,2 мл дистиллированной воды (контроль на реактивы). Содержимое первых 2-х пробирок перемешивают и центрифугируют при 6000 об/мин в течение 5 мин.

Через 15 мин после прибавлени красител пробы спектрофотометрируют при дли- не волны 540 нм. Длина оптического пути кювет 10 мм;

Объем эритроцитов в биологической ткани рассчитывают по формуле

(Етк - Ек) х 5 х 1000

(Еэр-Ек)х2

где V - объем эритроцитов в ткани, мкл/г;

Етк - экстинкци пробы ткани;

Еэр - экстинкци пробы эритроцитов крови;

Ек - экстинкци пробы контрол на реактивы;

5 - объем эритроцитов крови в пробе, мкл;

2 - масса ткани в пробе, мг;

1000 - коэффициент пересчета из мг в г.

П р и м е р 1. У белой беспородной крысы - самца массой 130 г после забо передозировкой эфирного наркоза и промораживани тушки в морозильной камере холодильника при -15°С в течение 3-х ч вз ты дл анализа навески следующих органов: печени (массой 95 мг), почки (массой 60 мг), селезенки (массой 65 мг) больших полушарий мозга (массой 70 мг).

Обработка биологической ткани и крови проведена по предлагаемому способу. Состав красител , мл: 20%-ный водный раствор амидопирина 70,0; 5%-ный водный раствор анилина сернокислого 70,0; 96%- ный этиловый спирт до 500,0.

Результаты измерени экстинкции проб:

Печень 0,452; Етк-Ек 0,422;

Почка 0,207; Етк-Ек 0,177;

Селезенка 0,219; ,189;

Большие полушари мозга 0,073; Етк-Ек 0 ,043;

Эритроциты крови 2,480; ЕЭр-Ек 2,450;

Контроль 0,030.

Исход изформулыV

(Етк-Ек)х 5x1000 к -тс с о объем эритроцитов

Сзр - Ск) X i

составл ет, мкл/г: в печени 430,6; в почке 180,6; в селезенке 192,9; в больших полушари х мозга 43,9.

Пример 2. У белой беспородной крысы - самца массой 200 г после забо передози: ровкой эфирного наркоза и проморажива- ни тушки в морозильной камере холодильника при -15С в течение 3-х ч вз ты дл анализа навески следующих органов: печени (массой 80 мг), почки (массой 65 мг), селезенки (массой 90 мг), больших 5 полушарий мозга (массой 60 мг),

Обработка биологической ткани и крови проводилась по предлагаемому способу. Состав красител , мл: 20%-ный водный раствор амидопирина 75,0; 5%-ный водный 0 раствор анилина сернокислого 75,0; 96%- ный этиловый спирт до 500,0 мл.

Результаты измерени экстинкции проб: Печень 0,426; Етк-Ек 0,402; Почка 0,213; Етк-Ек 0,189; 5 Селезенка 0,207; ЕТК-ЕК 0,183;

Большие полушари мозга 0,064; Етк- . ,040;

Эритроциты крови 2,252; ЕЭр-Ек 2,228; Контроль 0,024. 0 Исход из формулы V

(Етк -Ек)х 5x1000 к

л-ТЕ объем эритроцитов

(сэр Ек) х 2.

составл ет, мкл/г: в печени 451,1; в почке 212,1; в селезенке 205,3; в больших полуша- 5 ри х мозга 44,9,

Пример-3. У белой беспородной крысы-самца массой 150 г после забо передозировкой эфирного наркоза и промора- 0 живани тушки в морозильной камере холодильника при -15°С в течение 3-х ч вз ты дл анализа навески следующих органов: печени (массой 60 мг), почки (массой 60 мг), селезенки (массой 85 мг), больших полуша- 5 рий мозга (массой 70 мг).

Обработка биологической ткани и крови проводилась по предлагаемому способу. Состав красител , мл: 20%-ный водный раствор амидопирина 80,0; 5%-ный водный 0 раствор анилина сернокислого 80,0; 96%- ный этиловый спирт до 500,0 мл.

Результаты измерени экстинкции проб:

Печень 0,439; ЕТК-ЕК 0,412;

Почка 0,227; ЕТК-ЕК 0,200; 5 Селезенка 0,216; Етк-Ек 0,189;

Большие полушари мозга 0,078; Етк- -Ей-0,051;

Эритроциты крови 2,520; Етк-Ек 2,493;

Контроль 0,027.

Исход из формулы V

(Етк-Ек)х 5x1000 объем эритроцитов

{.Ьэр Ьк) X i

составл ет, мкл/r: в печени 413,2; в почке 200,6; в селезенке 189,5; в больших полушари х мозга 51,1.

При использовании предлагаемого красител в предлагаемом способе после повторного центрифугировани проб и удалени осадка фотометрируемый раствор оказываетс прозрачным. В результате становитс возможным точное измерение концентрации гемоглобина в пробе, что делает более объективным и информативным способ определени объема эритроцитов в навеске биологической ткани. Способ прост в исполнении, не требует высокотоксичных и дефицитных реактивов, а также дорогоскх- щего оборудовани . Он может с успехом использоватьс при изучении состо ни регионарного кровенаполнени сосудов в услови х нормы и патологии, при действии различных вазоактивных препаратов.

Claims

Формула изобретени Способ определени объема эритроцитов в биологической ткани путем гемолиза эритроцитов, центрифугировани , окраши0

5

вани гемолизата с последующим измерением экстинкции пробы ткани против контрол , отл ича ю щ и и с тем, что, с целью повышени точности способа, производ т повторное центрифугирование после окрашивани гемолизата, в качестве красител используют смесь, состо щую из 20%-ного амидопирина, 5%-ного анилина сернокислого, 96%-ного этилового спирта, при следующих соотношени х компонентов , мае. %:

Раствор амидопирина14-16

Раствор анилина

сернокислого14-16

Этиловый спиртОстальное,

а объем эритроцитов определ ют по формуле

20

V

К (Етк - Ек) (Еэр-Ек).

где V - объем эритроцитов в ткани, мкл/г;

Етк - экстинкци проб ткани;

Еэр - экстинкци пробы эритроцитов крови;

Ек - экстинкци пробы контрол на реактивы;

К - посто нный коэффициент.