SU1701741A1

SU1701741A1 - Bacterial strain vibrio cholerae eltor of serovar 2, useable for preparing a diagnostic serum

Info

Publication number: SU1701741A1
Application number: SU894764904A
Authority: SU
Inventors: Ирина Тимофеевна Андрусенко; Александр Павлович Шепелев; Алексей Константинович Адамов; Ираида Ивановна Шуркина
Original assignee: Ростовский Научно-Исследовательский Институт Эпидемиологии, Микробиологии, Паразитологии И Гигиены
Priority date: 1989-12-12
Filing date: 1989-12-12
Publication date: 1991-12-30

Abstract

Изобретение относитс к медицинской микробиологии, а именно к серологической идентификации патогенных вибрионов, и может быть использовано до получени специфической диагностической сыворотки. Целью избретени вл етс штамм Vibrio cholerae eltor 2, выделенный из попул ции Vibrio Nag. NcTc4711 2 серовара, обладающий общим антигеном с исходной культурой Vibrio Nag. NcTc 4711 2 серовара, служащий дл получени специфических сывороток. Штамм Vibrio cholerae eltor 2 выделен из попул ции Vibrio Nag. 2 серовара при помощи способа отбора токсигенных субкультур Vibrio cholerae eltor 01 и депонирован в коллекции Музе живых культур Всесоюзного научнс-исследовательского противочумного институга Микроб. При использовании штамма Vibrio cholerae eltor 2 возможно получение сыворотки, агглютинирующей холерные и неагглютинирующиес вибрионы 2 серовара. 2 табл. СПThe invention relates to medical microbiology, in particular to the serological identification of pathogenic vibrios, and can be used to obtain a specific diagnostic serum. The selection target is a Vibrio cholerae eltor 2 strain isolated from the Vibrio Nag population. NcTc4711 2 serovar having a common antigen with the original culture Vibrio Nag. NcTc 4711 2 serovar, used to obtain specific sera. The Vibrio cholerae eltor 2 strain was isolated from the Vibrio Nag population. 2 serovars using the Vibrio cholerae eltor 01 selection method of toxigenic subcultures and deposited in the collection of the Museum of Living Cultures of the All-Union Scientific Research Anti-Plague Institute Microbe. When using the Vibrio cholerae eltor 2 strain, it is possible to obtain serum that agglutinates cholera and nonagglutinating vibrios 2 of the serovar. 2 tab. SP

Description

Изобретение относитс к медицинской микробиологии, а именно к серологической идентификации патогенных вибрионов, и может быть использовано дл получени специфической диагностической сыворотки .The invention relates to medical microbiology, namely to the serological identification of pathogenic vibrios, and can be used to obtain specific diagnostic serum.

Целью изобретени вл етс штамм Vibrio cholerae eltor 2, выделенный из попул ции V.Nag.NcTc 4711 2 серовара, обладающий общим антигеном с исходной культурой Vibrio Nag. NcTc 4711 2 cepoaapa, служащий дл получени специфических сывороток.The aim of the invention is a Vibrio cholerae eltor 2 strain isolated from a V.Nag.NcTc 4711 2 population of serovar, which has a common antigen with the original Vibrio Nag culture. NcTc 4711 2 cepoaapa, used to obtain specific sera.

Штамм Vibrio Nag. 2 серовара хранитс в коллекции Музе живых культур Всесоюзного научно-исследовательского протичум- ного института Микроб под номером NcTcStrain Vibrio Nag. 2 serovars are stored in the collection of the Museum of Living Cultures of the All-Union Microbial Research Institute of Microbes under the number NcTc

4711 и используетс дл получени моно- варных специфических сывороток 2 серовара . Штамм Vibrio Nag. NcTc 4711 обладает свойствами, характерными дл рода Vibrio.4711 and is used to prepare monovar specific serovar 2 sera. Strain Vibrio Nag. NcTc 4711 has properties characteristic of the genus Vibrio.

Штамм Vibrio cholerae eltor 2 получен путем целенаправленной селекции из штамма Vibrio Nag NcTc 4711 следующим образом .Strain Vibrio cholerae eltor 2 obtained by targeted selection of the strain Vibrio Nag NcTc 4711 as follows.

Штамм Vibrio Nag. NcTc 4711 выращивают в пептонной воде к стандартизируют по оптическому стандарту мутности до 109 микробных те в 1 мл.Strain Vibrio Nag. NcTc 4711 is grown in peptone water and standardized to an optical turbidity standard up to 109 microbial ones per ml.

Культуру в количестве 1 мл внос т в пробирки с 3 мл 2%-ного растопленного и остуженного до 40-45°С щелочного агара (рН 7,6-7,8), тщательно перемешивают и выливают вторым слоем в чашки Петри с 10 млThe culture in the amount of 1 ml is introduced into test tubes with 3 ml of 2% alkaline agar melted and cooled to 40-45 ° C (pH 7.6-7.8), mixed thoroughly and poured in a second layer into Petri dishes with 10 ml

ОABOUT

4four

предварительно разлитого 2%-ного щелочного агара. После еф застывани на поверхность наносит полупроницаемую мембрану, вырезанную по кругу чашки, и простерилизованную 10-минутным кип чением в дистиллированной воде. На мембрану засевают суточную культуру Vibrio cholerae closslca 569 В, выращенную в 0,3%-ном питательном агаре.. Чашку помещают в термостат1 при 37°С и выдерживают ,18ч. Затем мембрану с нанесенной в ней культурой удал ют, а пассированный | штамм на участке частичного его роста непосредственно под культурой Vibrio cholerae classlca 569 В отбирают петлей и подращивают дл нового пассажа в течение 4-5 ч.pre-spilled 2% alkaline agar. After ef hardens, it applies a semipermeable membrane, cut out in a circle of a cup, and sterilized for 10 minutes by boiling in distilled water. A daily culture of Vibrio cholerae closslca 569 V, grown in 0.3% nutrient agar, is seeded on the membrane .. The cup is placed in a thermostat1 at 37 ° C and kept for 18 hours. Then, the membrane with the culture deposited in it is removed, and the passaged | the strain at the site of its partial growth immediately below the culture of Vibrio cholerae classlca 569 B is selected by a loop and grown for a new passage for 4-5 hours.

В результате 10-кратного пассировани указанным способом вз та в опыт культура Vibrio Nag.NcTc 4711 приобрела свойства типичные дл холерного вибриона, а выделений штамм диагностирован как Vibrio Icholeraeeltor2.As a result of 10-fold passaging by this method, the culture of Vibrio Nag.NcTc 4711 acquired properties typical for Vibrio cholerae, and the secretions of the strain were diagnosed as Vibrio Icholeraeeltor2.

Штамм Vibrio cholerae eltor 2 депонирован в Музее живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института Микроб под номером КМ-29 (2).The Vibrio cholerae eltor 2 strain was deposited at the Museum of Living Cultures of the All-Union Anti-Plague Research Institute Microbe under the number CM-29 (2).

Свойства штамма Vibrio cholerae eltor 2 N КМ-29 (2). Морфологические признаки. Подвижные изогнутые палочки с одним пол рно расположенным жгутиком, спор и капсул не образует.Properties of the strain Vibrio cholerae eltor 2 N KM-29 (2). Morphological signs. Movable curved rods with one polar flagella, does not form a spore or capsules.

Грам-отрицательные.Gram-negative.

Культуральные признаки. На 1 %-ной пептонной воде вызывает помутнение, на плоском агаре образует гладкие круглые полупрозрачные с голубоватым оттенком колонии диаметром 2-2,5 мм.Cultural features. On 1% peptone water causes turbidity, on flat agar it forms smooth round translucent colonies with a bluish tinge of 2-2.5 mm in diameter.

Физиологические свойства. Оксидазо- положителен, ферментирует глюкозу и ман- нит (до кислоты без газа), не ферментирует инозит и салицин, образует индол, декар- боксилирует лизин и орнитин и не дегидрирует аргинин, не фосфоресцирует, относитс к 1 группе Хейберга, дает феномен т жа, не растет на 1%-но пептонной воде с 7% и 10% хлорида натри , агглютинируетс холерными диагностическими О, ОН и Инаба сыворотками, не агглютинируетс Огава РО сыворотками, не лизи- руетс холерными фагами С.Physiological properties. Oxidase positive, ferments glucose and mannit (to acid without gas), does not ferment inositol and salicin, forms indole, decaroxylizes lysine and ornithine and does not dehydrate arginine, does not phosphoresce, belongs to Heyberg group 1, gives rise to , does not grow in 1% peptone water with 7% and 10% sodium chloride, is agglutinated by cholera O, OH and Inaba serums, not agglutinated by Ogawa RO serums, not lysing with cholera C.

Лизируетс холерными фагами эльтор и ХДФ 3-5.Lysed by cholera phages Eltor and HDF 3-5.

Антигенные свойства. Обладает холерными 0-антигенами. При иммунизации животных вызывает образование холерных агглютининов. Полученна сыворотка агглютинирует холерные вибрионы и исходную культуру (вибрионы 2 серовара), но не аглю- тинирует штаммы 3-26, 28-56 сероваров.Antigenic properties. Possesses cholera 0-antigens. When immunization of animals causes the formation of cholera agglutinins. The obtained serum agglutinates cholera vibrioes and the initial culture (vibrioes 2 of serovar), but does not agglutinate strains 3-26, 28-56 of serovars.

Сравнительна характеристика исходного и полученного штаммов представлена в табл.1.Comparative characteristics of the original and the obtained strains are presented in Table 1.

Пример, Штамм Vibrio cholerae eltorExample Strain Vibrio cholerae eltor

2 N4(M-29(2) используют дл получени специфической диагностической сыворотки. С этой целью штамм высевают на 1%-ную пептонную воду рН 7,6 и выращивают 4 ч при 37°С, затем пересевают на м сопептонный агар рН 7,6. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-20 ч. С агара культуру смывают физиологическим раствором рН 7,2. Микробную массу кип т т при 100°С в течение 2 ч. Затем дважды отмывают физиологическим раствором центрифугированием . Микробную взвесь после контрол на стерильность используют дл иммунизации кроликов.2 N4 (M-29 (2) is used to obtain specific diagnostic serum. To this end, the strain is sown on 1% peptone water pH 7.6 and grown for 4 hours at 37 ° C, then subcultured on m septone agar pH 7, 6. Crops are incubated at 37 ° C for 18-20 hours. The agar is washed with a physiological solution of pH 7.2 and the microbial mass is boiled at 100 ° C for 2 hours. Then washed twice with physiological solution by centrifugation. Microbial suspension after sterility controls are used to immunize rabbits.

Кроликов иммунизируют трехкратно сRabbits are immunized three times with

трехдневными перерывами: первую и вторую иньекции делают подкожно по 20 млрд. микробных клеток, третью - внутривенно - 5 млрд, микробных клеток. На 7 сут после третьей инъекции антигена кроликов обескровливают , получают сыворотку. Сыворотку инактивируют мертиол том натри 1:10000.with three-day breaks: the first and second injections are made subcutaneously with 20 billion microbial cells each, the third - intravenously - 5 billion microbial cells. On the 7th day after the third injection of the rabbit antigen, they exsanguinate, and serum is obtained. Serum inactivate mertiolom sodium 1: 10,000.

Титры сывороток составл ют V1600- 1:3200 дл холерных вибрионов и 1:2001:400 с исходным штаммом (контроль). Сыворотку примен ют в реакции агглютинации с холерными штаммами, а также вибрионами 2-56 сероваров. Реакцию аглютинации став т в пробирках объемным методом. Дл Serum titers are V1600-1: 3200 for Vibrio cholerae and 1: 2001: 400 with the original strain (control). Serum is used in the agglutination reaction with cholera strains, as well as vibrios 2-56 serovars. The agglutination reaction is placed in test tubes using the volumetric method. For

разведени сыворотки и приготовлени взвесей культур используют физиологический раствор рН 7,2.dilution of serum and preparation of suspension of cultures using a physiological solution pH 7.2.

Специфичность сыворотки штамма Vibrio cholerae eltor 2 Isfe КМ-29 (2) представлена в табл.2.The specificity of the serum strain of Vibrio cholerae eltor 2 Isfe KM-29 (2) is presented in table 2.

Сыворотка против V. cholerae eltor 2 агглютинирует как холерные вибрионы эль- тор, так и Vibrio Nag. NcTc 4711 2 серовара (табл.2).Anti-V. cholerae eltor 2 serum agglutinates both cholera vibrios eltor and Vibrio Nag. NcTc 4711 2 serovar (Table 2).

Штамм Vibrio cholerae eltor 2 № КМ-29 (2),Strain Vibrio cholerae eltor 2 No. KM-29 (2),

полученный из попул ции Vibrio Nag. серовара 2, позвол ет получить специфичную- сыворотку, необходимую при диагностике кишечных заболеваний, котора позвол етderived from the Vibrio Nag population. serovar 2, allows to obtain serum-specific, necessary for the diagnosis of intestinal diseases, which allows

более широко дифференцировать патогенные вибрионы, а также способствует вы влению антигенного родства между некоторыми представител ми холерных и неагглютинирующихс вибрионов.more widely differentiate pathogenic vibrios, and also contributes to the identification of antigenic kinship between some representatives of cholera and nonagglutinating vibrios.

Claims

Invention Formula

Bacterial strain Vibrio cholerae eltor KM 29 (2) of serovar 2, used to prepare diagnostic serum.

Comparative characteristics of the properties of the strains Vibrio Nag Nc Tc 4711 and Vibrio cholerae eltor 2 No. KM-29 (2)

ate

717017418

Table 2 The specificity of O - cholera serum strain Vibrio choferae eltor 2 No. KM - 29 (2)