SU1689856A1 - Способ диагностики аутоиммунного поражени печени - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине, конкретно к гепатологии. Целью изобретени   вл етс  повышение точности диагностики аутоиммунного поражени  печени у больных механической желтухой. Цель достигаетс  тем, что исследуют контактное взаимодействие лимфоцитов с макрофагами , которые получают путем культивировани  моноцитов на стекл нной поверхности в течение 1,5 ч при 37°С в атмосфере 5%- ного содержани  СО в присутствии водно- солевого антигена ткани аутологичной печени в концентрации 40 мкг бепка на 1 мл культуральной жидкости, и оценку функционального состо ни  клеток провод т по количеству контактных розеток макрофагов и лимфоцитов, и при его знлченим равном индексу макрофагов от 1,12 дс 1 78 или содержащего взаимодействующих макро- фа ов от 38 до 62%, диагностируют аутоиммунное поражение печени у ботьных, Положительный эффект способа заключаетс  в повышении точности диагностики с 77,8 до 92,5%.

Description

Изобретение относитс  к медицине, конкретно к гепатологии.

Цель изобретени  - повышение точности диагностики аутоиммунного поражени  печени у больных механической желтухой.

Способ осуществл етс  следующим образом .

Забор венозной крови а количестве 5 мл осуществл ют из локтевой вены, кровь помещают в силиконизироааиную пробирку с несколькими капл ми гепарина. Взвесь мононуклеарных клеток (лимфоцитов и моноцитов ), выделенных из данной крови центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина, довод т до концентрации 5x105 кл/мл средой 199 с добавлением сыворотки АВ группы. Полученную взвесь клеток в количестве 1 мл нанос т на хорошо обезжиренное предметное стекло.

В эту же каплю добавл ют зодно-солевой антиген ткани аутологичной печени из расчета 40 мкг белка на 1 мл культуральной жидкости . Стекло инкубируют в течение 1,5 ч при 37°С в термостате в атмосфере 5%-иого содержани  С02. Неприлипшие клетки после инкубации удал ют следующим образом: переворачивают стекло, дела  рис чую каплю, и оставл ют стекло в таком положении в течение 10 мин при комнатной температуре. Каплю отсасывают фильтровальной бумагой, стекло дополнительно промывают средой 199. На полученный монослой макрофагов нанос т 1 мл взвеси аутологичных лимфоцитов из пробиркм со средой 199 с добавлением сыворотки АВ группы. Стекло повторно инкубируют при 37°С в термостате в атмосфере 5%-ного содержани  С.02 а течение 1 ч После инкуО 00 Ч

СП Os

бировани  взвесь неприлипших клеток удал ют по той же методике, стекло дополнительно промывают 1 мл стерильного изотонического раствора натри  хлорида. Препарат фиксируют 1%-ным раствором глютаратальдегида на фосфатном буфере и окрашивают по методу Гимзе-Романовско- го. Окрашенный препарат просматривают под большим увеличением с масл ной иммерсией , подсчитыва  количество макрофагов , образовавших контактные розетки с лимфоцитами.

Дл  количественной оценки эффективности образовани  комплексов макрофаг - лимфоцит используютс  следующие показатели: индекс макрофагов (ИМ) - количество лимфоцитов, фиксированных к одному макрофагу; процентное содержание взаимодействующих макрофагов (М+), образовавших контактные комплексы с лимфоцитами.

Возрастание показател  ИМ до 1,12- 1,78 и показател  М+ до 38-62%  вл етс  специфическим дл  аутоиммунного поражени  ткани печени.

Разработанный способ диагностики аутоиммунного поражени  печени отличаетс  следующим.

В предлагаемом способе используетс  исследование контактного взаимодействи  между лимфоцитами и макрофагами, трансформировавшимис  из моноцитов периферической крови в результате их предварительного инкубировани  в присутствии водно-солевого антигена ткани аутологич- ной печени.

По сравнению с известным, разработанный способ обладает более высокой специфичностью и эффективностью диагностики аутоиммунного поражени  ткани печени .

По разработанному способу обследовано 42 больных, из них 14 больных с хроническим неосложненным калькулезным холециститом и 28 больных с хроническим холестатическим гепатитом, обусловленным длительной хронической обтурацией внепечеиочных желчных путей. С целью контрол  диагностической эффективности разработанного способа в этих же группах больных и в те же сроки исследована РБТЛ в присутствии водно-солевого антигена ткани аутологичной печени по общеприн той методике и проведено гистологическое исследование интраоперационных биоптатов ткани печени.

Анализ полученных данных показал. В группе больных с хроническим неос- ложиенным калькулезным холециститом

показатели РБТЛ с аутоантигеном и показатели контактного взаимодействи  макрофаг - лимфоцит в присутствии аутоантигена были минимальны (РБТЛ от 22,3 до 22,4%,

ИМант 0,43, М+ан-г 10,6 ±1,448%) в течение

.всего периода наблюдени , что доказывает

отсутствие у этих больных аутоиммунных

процессов, направленных против ткани

аутологичной печени. Гистологическое исследование интраоперационных биоптатов ткани печени также не показало наличи  аутоиммунной гепатопатии у этих больных,

В группе больных с хроническим холестатическим гепатитом вы влены качественно иные изменени : показатели контактного взаимодействи  макрофаг - лимфоцит у 25 из 28 больных были значительно повышены (ИМант 1,382±0,164, М+ант

49,6±5,31%) в течение всего периода наблюдени . У трех больных из этой группы эти показатели достоверно не отличались (р 0,05) от таковых при неосложненчом хроническом холецистите. Значительное

повышение показателей РБТЛ (до 41,7± ±4,83%) отмечено у 21 из 28 обследованных в данной группе, у остальных 7 больных показатели РБТЛ достоверно не отличались (р 0,05) от показателей контрольной группы . Гистологическое исследование биоптатов ткани печени у всех 28 больных вы вило однотипные изменени : резко выраженную белковую и жировую дистрофию гепатоци- тов, s различной степени выраженный перипортальный м диффузный фиброз, признаки портального и перипортального гепатита, начинающегос  цирроза печени со специфической диффузной и перипор- тальной инфильтрацией лимфоидными

; члетками. Эти изменени  убедительно доказывают наличие у всех обследованных Сольных этой группы аутоиммунных процессов , направленных против ткани аутологичной печени.

Таким образом, диагностическа  эффективность РБТЛ составила 77,8%, использование предлагаемого способа диагностики позволило повысить частоту вы влени  аутоиммунных процессов, на0 правленных против ткани аутологичной печени до 92,5%.

П р и м е р 1. Больной Антощенко В.Я., 52 лет, находилс  на стационарном лечении 5 в клинике хирургических болезней Вороши- ловградской областной клинической больницы с 11,04.87 г. по02.05.87 г. Клинический диагноз: желчекаменна  болезнь, хронический холецистит, холедохолитназ. Перемежающа с  механическа  желтуха. Хронический холестатической гепатит.

Операци  16.04.87 г.: холецистэктоми , холедохолитотоми , трансдуоденальна  транспапилл рна  холедоходуоденосто- ми , дренирование холедоха по Пиковско- му, биопси  печени.

Показатели РБТЛ с аутоантигеном от 20% до 21% (достоверно не отличаютс  от показателей РБТЛ у больных с хроническим неосложенным калькулезным холециститом ).

Показатели контактного взаимодействи  по разработанному способу: ИМ 1,54- 1,32 М+40-44%.

Заключение гистологического исследовани  биоптата печени: хронический активный холестатический гепатит с признаками аутоиммунной агрессии.

Также установлено, что при наличии у больных аутоиммунного поражени  ткани печени возможно снижение показател  ИМ до значений, достоверно не отличавшихс  от показателей группы.

П р и м е р 2. Больной Царевский В.Н., 47 лет, находилс  на стационарном лечении в хирургическом отделении Ворошиловг- радской областной клинической больницы с 12.01.88 г. по 04.02.88 г. Клинический диагноз: желчекаменна  болезнь, хронический холецистит, холедохолитиаз, стеноз большого дуоденального сосочка II степени. Перемежающа с  механическа  желтуха. Хронический холестатический гепатит.

Операци  16.01.88 г.: холецистэктоми , холедохолитотоми , трансдуоденальна  транспапилл рна  холедоходуоденосто- ми , дренирование холедоха по Пиковско- му, биопси  печени.

Показатели РБТЛ с аутоэнтигеном со- ставили 37 и 42%.

Показатели контактного взаимодействи : ИМ 0,62-0,58, что достоверно не отличаетс  от показателей контрольной группы, М+ 40 и 48%, что соответствует данным, характерным дл  аутоиммунных гепатопа- тий.

Заключение гистологического исследовани : перипортальный фиброз, хронический холестатический гепатит с признаками аутоиммунной агрессии.

П р и м е р 3. Больна  Мисина И.Г., 42 лет, находилась на стационарном лечении в клинике хирургических болезней Вороши- ловградской областной клинической больницы с 04.08.88 г. по 28.08.88 г. Клинический диагноз: желчекаменна  болезнь , хронический холецистит, стеноз большого дуоденального сосочка I степени,

перемежающа с  механическа  желтуха, хронический холестатический гепатит.

Операци  08.08.88 г.: холецистэктоми , трансдуоденальна  транспапилл рна  холедоходуоденостоми , дренирование холедоха по Пиковскому, биопси  печени.

Показатели РБТЛ с аутоантигеном составили от 44 до 48%, М+от 10 до 12%, что достоверно не отличаетс  от показателей практически здоровых лиц. ИМ от 1,32 до 1,43, что характерно дл  аутоиммунного поражени  ткани печени.

Заключение гистологического исследовани : хронический холестатический гепатит с признаками аутоиммунной агрессии, диффузный и перипортальный фиброз.

Приведенные наблюдени  доказывают целесообразность использовани  в диагностике аутоиммунного поражени  печени двух показателей контактного взаимодействи : индекса макрофагов и процента взаимодействующих макрофагов.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики аутоиммунного поражени  ткани печени обладает существенно более вы- сокой диагностической достоверностью, чем известный. Анализ полученных данных и приведенные наблюдени  доказывают целесообразность использовани  в предлагаемом способе одновременно двух показателей: индекса макрофагов и процент взаимодействующих макрофагов.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ диагностики аутоиммунного поражени  печени путем культивировани  клеток крови в присутствии водно-солевого тканевого антигена печени и оценки их фун-. кционального состо ни , отличающий- с   тем, что, с целью повыил ни  точности диагностики у больных механической желтухой , провод т исследование контактного взаимодействи  аутологичных макрофагов и лимфоцитов путем культивировани  в питательной среде моноцитов на стекл нной поверхности в течение 1,5 ч при 37°С в атмосфере с 5%-ным содержанием углекислого газа в присутствии водно-солевого антигена ткани аутологичной печени в концентрации 40 мкг белка на 1 мл культураль- ной жидкости с последующем отмыванием и нанесением на образовавшийс  монослой равного объема взвеси аутологичных лимфоцитов , далее смесь клеток культивируют в течение 1 ч, промывают, фиксируют, окрашивают и подсчитывают среднее количество фиксированных на макрофаге лимфоцитов и процентное содержание мак- ррфагов с фиксированными на нихлимфо

   цитами и при значении указанных показате- диагностируют аутоиммунное поражение лей соответственно 1,12-1,78 или печени у данных больных