SU1651214A1 - Способ определени липопротеида печени в циркулирующих иммунных комплексах в крови - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к иммунологии и может быть использовано при исследовании специфического липопро- теида в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК) в крови больных с острыми и хроническими заболевани ми печени.Целью изобретени   вл етс  повышение специфичности определени  липопротеида, выдел емого при нарушении клеточной мембраны печени. Согласно способу, циркулирующие иммунные комплексы в крови св зывают субкомпонентом комплемента CU и определ ют оптическую плотность суб- страктного реактива. Определение липопротеида в ЦИК производ т по св зыванию конъюгата щелочной фосфатазы с иммуноглобулином IgG сыворотки бараньей крови к специфическому ли о- протеиду печени. Начина  с 0,3 ед. оптической плотности субстрактного реактива, диагностируют поражение клеточной и мембраны печени. Определение клеточного липопротеида позвол ет диагностировать нарушение клеточных мембран при патологических процессах . а

Description

Изобретение относитс  к иммунологии , а именно к методам исследовани  специфического липопротеида в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК) в крови больных с острыми и хроническими заболевани ми печени.

Целью изобретени   вл етс  повышение специфичности определени  липопротеида , выдел емого при разрушении клеток печени.

Способ осуществл етс  следующим образом.

В св занных С1д ЦИК производ т определение липопротеида по св зыванию конъюгата щелочной фосфатазы с иммуноглобулином бараньей сыворотки

к специфическому липопротеиду печени и начина  с 0,3 ед. оптической плотности субстратного реактива диагностируют поражение клеточной мембраны печени.

Пример. Печень от донора гомогенизируют в 0,25 М растворе сахарозы с рН 8,0. С помощью центрифуги выдел ют супернатант, помещают в хро- матографическую колонку с сефарозой 6В, растворенной в борном буфере (рН 8,5). Выдел ют первый пик хрома- тограммы, при этом получают специфический липопротеид печени, которым иммунизируют баранов с полным адъю- вантом Фреунда и добавлением коклюшОЭ

ел ю

-U

ной вакцины. Из этой иммунной сывороки к специфическому липопротеиду печени выдел ют гамма-глобулин и из него IgG с помощью ионообменной хро- матографии в ДЕАЕ-целлюпозы с фосфатным буфером (рН 8,0).

Вьщеленный иммуноглобулин IgG кон югируют с помощью 4,2%-ного раствора глютаральдегида со щелочной фосфа- тазой.

Субкомпонент комплемента С1д выдел ют из свежей сыворотки свиньи двух этапным преципитированием с 0,03 и 0,069 М ЭДТА. Вьщеленный С1д разбавл ют в карбонатно-бикарбонатном буфере (рН 9,6) и св зывают на полистироль- ном планшете .

С С1д св зывают ЦИК из сывороток обследуемых лиц. Содержание специфи- ческого липопротеида в ЦИК определ ют с помощью конъюгата щелочной фосфа- тазы к специфическому липопротеиду печени. Освобождение щелочной фосфа- тазы определ ют по оптической плот- ности субстратного реактива паранит- рофенилфосфата. Оптическую плотность определ ют при длине волны 405 нм счетчиком Dynatech.

При 0,3 ед. оптической плотности реакционного продукта определ ют поражение клеточной мембраны печени.

Способ позвол ет при остром и хроническом гепатите вы вить в крови больного ЦИК, содержащие специфический липопротеид печени - антиген мембраны печеночной клетки, имеющий большое патогенетическое значение дл  развити  аутоиммунных и вирусных гепатитов.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   сах

   Способ определени  липопротеида пчени в циркулирующих иммунных комплев крови, включающий св зывание циркулирующих иммунных комплексов субкомплементом комплемента СЦ   определение оптической плотности субстратного реактива, отличающийс  тем, что, с целью повышени  специфичности определени  липопротеида , выдел емого при нарушении клеточных мембран, после св зывани  иммунных комплексов, добавл ют раствор коншгата иммуноглобулина IgG к специфическому липопротеиду печени с щелочной фосфатазой и при наличии 0,3 и более единиц оптической плотности определ ют липопротеид, выдел емый при нарушении клеточных мембран .