SU1611929A1 - Способ деконтаминации от микоплазм тимидинкиназодефектных перевиваемых клеточных линий СПЭВ-ТК @ - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к биологии, а именно к культивированию клеток животных IN VITRO дл  вирусологических и биотехнологических исследований. Цель изобретени  - повышение степени деконтаминации. Способ состоит в комбинированной обработке СПЭВ-ТК-клеток 5-бром-2-дезоксиуридином(150-250 мкг/мл), этонием (5-15 мкг/мл), канамицином (200-300 мкг/мл) на прот жении трех пассажей в ростовой среде. Способ отличаетс  высокой эффективностью деконтаминации СПЭВ-ТК-клеток. На прот жении дес ти пассажей (срок наблюдени ) без дальнейшей обработки клетки свободны от микоплазм.

Description

Изобретение относитс  к области биологии, а именно к культивированию клеток животньк in vitro дл  вирусологических и биотехнологических исследований .

Целью изобретени   вл етс  повышение степени деконтаминации.

Пример 1. Клетки мутантног-о штамма СПЭВ-А4-ТК высевают в культура льные флаконы объемом 100 мл в - коцентрадии 0,5 х 10 к /мл в ростовую среду, содержащую 200 мкг/мл 5-БДУ 5-бром-2-дедоксиуридин (5-БДУ), мкг/мл: этоний 10 и кана- мицин 250. На 10-12 сут культивировани  после формировани  очагового моносло  клетки пересевают и повтор ют цикл обработки.клеток препара- тами второй раз, а затем третий раз. После третьего цикла обработки клеток микоплазмы на элективных питательных средах не вы вл ютс  и результаты по ДНК-флуорохромировангео клеток также отрицательны. При дальнейшем культивировании на прот жении 2 мес цев (10 пассажей) без препаратов и антибиотиков клетки свободны от микоплазм (срок наблюдени ).

Пример 2. Клетки мутантиого штамма СПЭВ-13-Д5-ТК- высевают в

а

х tc

со

ультуральные флаконы объемом 100 мл IB .концентрации 1,0 х 10 кл/мл в (ростовую среду, содержащум,мкг/мл: -ВДУ 200, этоний 10 и канамицин : 1250. На 10-12 сут Культивировани  сле формировани  очагового моно- 1сло  клетки пересевают и повтор ют |цикл обработки клеток, препаратами второй раз. После третьего цикла об- 1работки клеток микоплазмы на элективный: питательных не вы вл ютс , и результаты ДНК-флуорохромиро- вани  культур раствором Хехст-33258 |и оливомицином также отрицательны. |При дальнейшем культивировании на Прот жении 2 мес (Ю пассажей) -без litpenai зтов и антибиотиков клетки сво- |бЬдны от микоплазм (срок наблюдени ) I П р и м е р 3, После криогениза- |1щи в течение 1 мес.рекультивировали клетки штаммов СПЭВ-13-А4-ТК и СПЭВ-13-Д5-ТК , свободные от мико- плазм. На прот жении 5 пассажей (срок наблюдени ) клетки обоих штаммов культивировали в ростовой среде без антибиотшсрв. Результаты культивировани  микоплазм:. на элективных питательных средах и ДИК-флуорохромнро- вани  клеток раствором Хехст-33258 и оливомицином свидетельствуют о том, что клетки штаммов СПЭВ-АА-ТК и СПЭВ-13-Д5-ТК свободны от микоплаз

р и м е р 4. Клетки двух мутантных штаммов СПЭВ-АА-ТК- и СПЭВ-13-Д5-ТК контаьшнированных микоплазмами, и тех штаммов, свободных от микоплазм высевают в концентрации 2,0 х .X 10 кл/мл в ростовой среде во флаконы с покровными стеклами. Через

24 ч культивировани  провод т сли 

5

0

5

0

35

40

ние клеток в монослое с помощью 50%- . ного раствора ПЭГ. Эффективность гибридизации клеток оценившот на-цитологических препаратах, орошенных гема- токсилинэозином по количеству гомо- карионов. Процент слившихс  клеток, свободных от микоплазм, почти в 2 раза дл  штамма СПЭВ-13-А4-ТК и в 1,5 раза дп  штамма СПЭВ 13-Д5-ТК превьш1ает процент слившихс  контамй- нированных клеток.

Способ деконтаминации от микоплазм тимидинкиназодефектных клеток позвол ет быстро достичь положительного результата. Целесообразно с помощью этого способа деконтаминировать клеточные линии с ТК фенотипом и осуществл ть криоконсервирование больших количеств образцов, которые затем при необходимости можно рекультивировать дп  проведени  двух-трех, мес чных экспериментов. Способ универсален дл  деконтаминации от микоплазм ТК° -линий клеток.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ деконтаминации от мико- ; плазм тимидинкиназодефектных перевиваемых клеточных линий СПЭВ-ТК , включающий обработку клеток в ростовой среде канамицином, отличающийс  тем, что, с целью повышени  степени деконтаминации, клетки обрабатывают кaнa -fицинoм в конечной концентрации 200-300 мкг/мл среды в сочетании с 5-бром-2-дезоксиу- ридином с концентрацией 150- 250 мкг/мл среды и этонием в конечной концентрации 5-15 мкг/мл среды, при этом обработку провод т с интер- валом в 10-12 дней, культивировани .

   , Составитель А.Маныкин Редактор П.Бобкова Техред М.Ходанич Корректор Л,П даипенко

   Заказ 3812

   Тираж 486

   6НИИПИ Государственного комитета по изобретени м и открыти м nfи ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушска  наб., д. 4/5

   Производственно-издательский комбинат Патент, г .Ужгоро.ч, ул. ГагаринаИ01

   Подписное