SU1597405A1 - Способ определени протеолитической активности ферментов в международных единицах - Google Patents
Способ определени протеолитической активности ферментов в международных единицах Download PDFInfo
- Publication number
- SU1597405A1 SU1597405A1 SU884477201A SU4477201A SU1597405A1 SU 1597405 A1 SU1597405 A1 SU 1597405A1 SU 884477201 A SU884477201 A SU 884477201A SU 4477201 A SU4477201 A SU 4477201A SU 1597405 A1 SU1597405 A1 SU 1597405A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- casein
- solution
- colored
- substrate
- enzyme
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биохимии, а именно к способам определени активности ферментов, и может быть использовано в отрасл х промышленности, изготовл ющих или примен ющих протеолитические ферменты, а также в научно-исследовательских учреждени х, в медицинской диагностике. С целью расширени технологических возможностей способа и повышени его воспроизводимости в качестве субстрата сравнени используют 98аS-казеин с блокированными алкилированием или ацилированием аминогруппами (N1N-дикарбамидоэтил-αS-ованием аминогруппами (N1N-дикарбамидоэтил-αS- казеин, N1N-диметил-αS-казеин, N-сукцинил-αS-казеин), а в качестве "рабочего" белкового субстрата - модифицированные белки (окрашенный казеин ОКиА-АС, азоказеин, модифицированный казеин МКА-1, окрашенный гольевой порошок).
Description
Изобретение относитс к биохимии, а именно к способам определени активности ферментов, и может быть использовано в област х промьшшенности, изготавливающих или примен ющих проте- олитические ферменты, а также в научно-исследовательских учреждени х, в медицинской диагностике.
Цель изобретени - расширение технологических возможностей способа и повышение его воспроизводимости.
В качестве субстрата сравнени используют электрофоретичесй чистый бе. лок - ti -казекн с блокированными аминогруппами , которьй расщепл етс всеми известными протеазами, а различи скоростей протеодиза отдельных партий зтого белка варьируют в интервале 4-6%, что значительно повышает воспроизводимость способа
Значени активности ферментов, определенные предлагаемым способом, показывают количество гидролизованных пептидных св зей в используемом суб- страте сравнени Такие Данные показысл
;о -и
:л
вают практическую ценность протеолити ческих ферментов„
Пример 1 „ Определение протео- литической активности химотрипсина
при помощи модифицированного казеина МКА-1о
В О,1 М фосфатном буфере (рН 7,6) готов т 2%-ньй раствор модифицированного казеина МКА-1, 2%-ный раствор Ы,Н-дикарбамидоэтил- /5 к зеина и раствор кристаллического химотрипсина (концентраци 1 мг/см) Делают п ть разведений О,1 М фосфатным-буфером (рН 7,6+0,1) кристаллического химот- .рипсина А (концентраци 0,2 -.-V 1 мг/см) и провод т по п ть параллельных опытов гидролиза модифицированного казеина MKA-I с каждой концентрацией химотрипсинао
В пробирки вместимостью 20-25 см наливают по 1 см 2%-ного раствора модифицированного казеина МКА-1 и термостатируют в ультратермостате при 5 миНо Нар ду с ними термоста- тируют и ферментный раствор. В каждую пробирку с термостатированным раствором модифицированного казеина МКА-1 добавл ют по 1 см термостатированного pacTjBopa фермента, содержи- мое перемешивают и вьщерживают при. 10 мино Через 10 мин пробирки перенос т в кип щую вод ную баню и выдерживают в ней 2 мино Затем в пробирки с инкубационной смесью добав- л ют по 10 см 0,1М боратного буферного раствора (рН 9,3) и по 1 см- 0,7%-ного раствора 2,4,6-тринитробен- .золсульфокислоты, реакционную смесь энергично взбалтывают и выдерживают при в течение 30 мин, после чего добавл ют по 1 см 6М раствора формалина, перемешивают и определ ют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 420 нм про тив контрольной пробы
Контроль ную пробу готов т аналогич но опытному гидролизату, добавл .вместо 1 см раствора исследуемого фермента 1 см раствора инактивиро- ванного (кип чением в вод ной бане 3 мин) фермента. Параллельно тем же способом провод т гидролиз N,N-ди- карбамидоэтил- оСу-казеина одним из ра- створов кристаллического о/-химотрипсина и определ ют его активность по формуле
(EM.
(1)
где ПА-- активность протеазы в междунаррдных единицах; D - оптическа плотность; 14 - разведение ферментного раст ора в ходе определени ; ГЭ - глициновый зквивалент, определ емый по калибровочному графику; t - врем гидролиза субстрата,
мин; m - количество фермента, вз тое
на протеолиз, мг;
1000 - переводной коэффициент полученных единиц на 1 г ферментного препарата. По данным параллельного гидролиза модифицированного казеина МКА-1 и N,N-дикapбaмидoзтил-o(s-кaзeинa методом наименьших квадратов наход т коэффициенты пересчета (табл. 1) по формуле
ПА 1 ( + KJ,
(2)
где ПА - активность протеазы в международных единицах; D - средн оптическа плотность параллельных опытов гидролиза модифицированного белкового субстрата;
m - количество ферментного препарата , мг, вз тое на анализ при помощи модифицированного белкового субстрата;
К, и К J- коэффициенты пересчета данной партии модифицированного белкового субстрата
Данные по определению коэффициента пересчета дл модифицированного ка- зеина МКА-1 приведены в табл. 1. I„
.В 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,6) готов т 2%-ньй раствор модифицированного казеина МКА-1 и раствор о; -химотрипсина (концентраци 3 мг/см). Провод т определение активности по описанной методике,.получа D 0,41с Использу значени коэффициентов К и К 2 по формуле (2) вычисл ют активность ПА 1.68,01 ME/г.
Пример 2 о Определение протес-, литической активности протосубтилина ГЗх при помощи окрашенного казеина ОКА-АС.
В О,1 М фосфатном буфере (рН 7,2) готов т 0,8%-ный раствор окрашенного казеина ОКА-АС, 2%-ньй раствор N,N- -дикарбамидоэтил-о -казеина и раствор
очищенной нейтральной протеазы из В, Subtilis шт. 65 (0,15 мг/см). Делают п ть разведений раствора очищенной нейтральной протеазы (концентраци 0,05 - 0,15 мг/см ) и провод т по п ть параллельных опытов протеоли- за с каждой концентрацией фермента следующим образом. .К 5 см- 0,8%-ного раствора окрашенного казеина ОКА-АС, термостатированного при 30,0+0,, добавл ют 1 см раствора ферментного препарата, перемешивают и инкубируют при 30,0+0,1 С. Через 10 мин добавл 10
держивают в термостате еще 10 мин. Полученную смесь фильтруют через плотный бумажный фильтр (син лента) и определ ют оптическую плотность фильтрата при 400+0,5 нм против контрольной пробы.
Контрольную пробу приготавливают аналогично опытному гидролизату, добавл .1 см инактивированного (кип чением на вод ной бане 3 мин) ферментного раствора о Получают D 0.415. Иг- пользу значени К и К этой партии окрашенного казеина ОКА-АС по формуле
от 5 смЗ 0,5 М раствора трихлоруксус- is (2) вычисл ют активность ,1 МЕ/г. ной кислоты, перемешивают и выдержива-П р и м е р 3. Определение протеоют в термостате еще 10 мин. Полученную смесь фильтруют через плотный бумажный фильтр (син лента) и определ ют оптическую плотность фильтрата при Л 400tO,5 нм против контрольной пробыо
Контрольную пробу готов т аналогично опытному гидролизату, добавл 1 см инактивированного (кип чением на вод ной бане 2-3 мин) ферментного раствора.
Параллельно провод т гидролиз субПример литической активности щелочной протеазы в моющем средстве Биомаг при помощи окрашенного казеина ОАК-АС. 20 В О,1М карбокатном-бикарбонатном буфере (рН 10,5) готов т 0,4%-ньш раствор окрашенного казеина ОКА-АС, 1%-ный раствор К,К-дикарбамидозтил- - 0/5 казеина, раствор очищенной щелочной протеазы из В.Subtilis шт. 72
25
,-3
(концентраци 2,0-10 мг/см ). Делают п ть разведений раствора очищенной щелочной протеазы (концентраци О, 510 - 2 10-- мг/см) и провод т по п ть па-.
страта сравнени дикарбамидоэтил-о - -казеина при помощи очищенной нейтральной протеазы из В.subtil is шт.65 по методике примера 1 и по формуле (1) вычисл ют активность в международных единицах.
По данным параллельного гидролиза очищенной нейтральной протеазой окрашенного казеина ОКА-АС и М,Ы-дикар- бамидоэтил-о -казеина (табл. 2) при помоищ уравнени (2) методом наименьших квадратов наход т коэффициенты пересчета К и К дл данной партии окрашенного казеина ОКА-АС;
Данные определени коэффициента пересчета дл окрашенного казеина ОКА-АС приведены в табл. 2.
В 0,Ш фосфатном буфере (рН 7,2) готов т 0,8%-ный раствор окр аш,енного казеина ОКА-АС и раствор исследуемого ферментного препарата протосубтилина ГЗх (концентраци 8 мг/см). Далее провод т гидролиз окрашенного казеина ОКА-АС описанным образом, ТоВ. к 5 см- 0,8%-ного раствора окрашенного казеина ОКА-АС, термостатированного при , добавл ют 1 см ферментного раствора, перемешивают и инкубируют при . Через 10 мин добавл ют 5 см 0,5М раствора трихлор- уксусной кислоты, перемешивают и вы
держивают в термостате еще 10 мин. Полученную смесь фильтруют через плотный бумажный фильтр (син лента) и определ ют оптическую плотность фильтрата при 400+0,5 нм против контрольной пробы.
Контрольную пробу приготавливают аналогично опытному гидролизату, добавл .1 см инактивированного (кип чением на вод ной бане 3 мин) ферментного раствора о Получают D 0.415. Иг- пользу значени К и К этой партии окрашенного казеина ОКА-АС по формуле
(2) вычисл ют активность ,1 МЕ/г. П р и м е р 3. Определение протео (2) вычисл ют активность ,1 МЕ/г. П р и м е р 3. Определение протеоПример литической активности щелочной протеазы в моющем средстве Биомаг при помощи окрашенного казеина ОАК-АС. В О,1М карбокатном-бикарбонатном буфере (рН 10,5) готов т 0,4%-ньш раствор окрашенного казеина ОКА-АС, 1%-ный раствор К,К-дикарбамидозтил- - 0/5 казеина, раствор очищенной щелочной протеазы из В.Subtilis шт. 72
,-3
5
0
(концентраци 2,0-10 мг/см ). Делают п ть разведений раствора очищенной щелочной протеазы (концентраци О, 510 - 2 10-- мг/см) и провод т по п ть па-.
0 раллельных опьп-ов протеолиза-с каждой концентрацией фермента следующим образом . К 5 см 0,4%-ного раствора окрашенного казеина ОК.-АС, термостатированного при , добавл ют 2 см ферментного раствора, переменашают и инкубируют при 40 Со Через 45 мин добавл ют 5 см 1,2М раствора трихлор- уксусной кислоты, перемешивают и выдерживают в термостате еще 10 мин. Полученную смесь фильтруют через плотный бумажный фильтр (син лента) и определ ют оптическую плотность фильтрата при / 400 нм против контрольной пробыо
5 Контрольную пробу готов т аналогично опытному гидролизату, добавл 2 см инактивированного (кип чением на вод ной базе 3 мин) ферментногЬ раствора.
0 Параллельно провод т гидролиз субстрата сравнени - N,N-дикapбaмидo- э тил-о(5 казеина при помощи очищенной щелочной протеазы из Б.Subtilis шт.72 В пробирки вместимостью 20-25 см на5 ливают по 1 см 1%-ного раствора
N,N-дикapбaмидoэтил-о -казеина и тер- мостатируют в ультратермостате при 40 С 5 мин. Нар ду с ними термостатируют и ферментньй раствор. В каждую
1
пробирку с термостатированным раство
ром Н,Ы-дикарбамидоэтил-о(5-казеина добавл ют по 1 -см термостатированного раствора фермента, содержимое перемешивают , вьщерживают при 10 мин. Через 10 мин пробирки перенос т в кип ченую вод ную бани и выдерживают в ней 2 мин. Затем в пробирки с инкуба1щонной смесью добавл ют по 10 см 0,1М боратного буферного расвора (рН 9,3) и по 1 смЗ 0,7%-ного раствора 2,4,6-тринитробензолсульфо- кислоты, реакционную смесь энергично взбалтывают и вьщерживают при 30 мин, после чего добавл ют по 1 см 6м формагшна, перемешивают и определ ют оптическую плотность колоримет- рированием ни спектрофотометре при длине волны А - 420 нм против контрольной пробы.
Контрольную пробу готов т аналогино -опытному гидролизату, добавл 1 см инактивированного кип чением на вод ной бане 2-3 мин ферментного раствора.
Активность вычисл ют по формуле
(Оо
По данным параллельного гидролиза очищенной щелочной протеазой из В. Subtilis шт. 72 окрашенного казеина ОКЛ-АС и Ы,Ы-дикарбамидоэтил-о д- -казеина (табЛо 3) при помощи уравнени (2) методом наименьших квадратов наход т коэффшщенты пересчета К. :и К 1 дл данной партии окрашенного казеина ОКА-АС„
Данные опр еделени коэффициента пересчета дл окрашенного казеина ОКА-АС приведены в табл„ 3„
В 0,Ш карбонатно-бикарбонатном буфере (рН 10,5) готов т 0,4%-ный.. раствор окрашенного казеина ОКА-СА и раствор исследуемого препарата Би омаг (концентраци 3 мг/мл), Далее провод т гидролиз окрашенного казеин ОКА-АС описанным образом, т.е. к 5 см 0,4%-ного раствора субстрата, термостатированного при , добавлют 2 см раствора Боимаг, перемешивают и инкубируют при Через 45 мин добавл ют 5 см 1,2 М раствор трихлоруксусной кислоты, перевешиваю и ньщерживают в термостате ещё 10 мин Полученнзтю смесь фильтруют через плотный.бумажный фильтр (син лента и определ ют оптическую плотность фильтрата при Л 400 нм против конрольной пробыо
8
0
5
0
5
0
0 5
5
0
5
Контрольную пробу готов т аналогично опытному гидролизату, добавл 2 см инактивированного (кип чением на вод ной бане 3 мин), раствора Био- маг. Получают D 0,320 Использу значени коэффициентов К;, и К,-г по формуле (2) вычисл ют активность ПА 4,72 НЕ/Г.
. I р и м е р 4. Определение протео- литической активности протосубтилина ПОх при помощи азоказеинао
В О,1М карбонатно-бикарбонатном буфере (рН 10,5) готов т 0,3%-ный раствор азоказеина, 1%-ньш раствор Нсукцинил-о(з-казеина и раствор очищенной щелочной протеазы из В.Subtilis што 72 (концентраци 2,5-Ю мг/см-. Делают п ть разведений раствора очищенной щелочной протеазы (концентраци 0,00075-0,0025 мг/см) и провод т по п ть параллельных опытов протеоли- за с каждой концентрацией фермента следующим образом К 5 см Oj3%-Horo раствора азоказеина, термостатированного при 40 С, добавл ют 2 см ферментного раствора, перемешивают и инкубируют при 40°Со Через 45 мин добавл ют 5 см 1,2М раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и выдерживают в термостате еще 10 мин„ Полученную смесь фильтруют через плотньтй бумажньй фильтр (син лента) и определ ют оптическую плотность фильтрата при А 400 нм против контрольной пробы. Контрольную пробу готов т ана- логично опытному гидролизату, добавл ют 2 см инактивированного кип чением на вод ной бане 3 мин ферментного раствора о
Параллельно провод т гидролиз субстрата сравнени - -сукцинил-o j,- -казеина при помощи одного из растворов .очищенной протеазы из В.Subtilis шт. 72 по методу примера 3 и по формуле (1) вычисл ют активность в между- : народных единицах
По данным параллельного гидролиза очищенной щелочной протеазой из В.Subtilis шТо 72 азоказеина и N-сук- цинил-о(,5-казеина (табл„ 4), использу уравнение (2), методом наименьших квадратов наход т коэффициенты пере- счета К., и К дл данной партии азоказеина . ,.
Данные определени коэффициентов пересчета дл азоказеина приведены в табл„ 4 о
915
В О,Ш карбонатно-бикарбонатном буфере (рН 10,5) готов т 0,4%-ный раствор азоказеина и раствор прото- субтилина Г10Х (концентраци 0,03 мг/см)„ Далее провод т гидролиз азрказеина описанным образом, т,е« к 5 см 0,3%-ного раствора субстрата, термостатированного при , добавл ют 2 СМ раствора протосубтилина Г10х и инкубируют при . Через 45 мин добавл ют 5 см 1,2М раствора трихлогзгксусной кислоты, перемешивают и вьдерживают в термостате еще 10 мин
Полученную смесь фильтруют через плот- единицах.
Параллельно провод т гидролиз субстрата сравнени - НдЫ-диметил-«/ -казеина при помощи очищенной нейтральной протеазы из В,Subtil is шт. 65 по методике примера 1 и по формуле (1) вычисл ют активность в международных
По данным параллельного гидролиза очищенной нейтральной протеазой окра- шенного гольевого порошка ОГП-0 и Н,М-диметил-«/5 казеина (табл. 5) при
ньй бумажный фильтр (син лента) и определ ют оптическую плотность фермента при А 400 км против контрольной про.бы. Контрольную пробу готов т аналогично опытному гидролизату, 20 помощи уравнени (2) методом наимень- добавл 2 см инактивированного кип чением на вод ной бане 3 мин.,ферментного раствора Получают D 0,415. Использу значени коэффициентов К
ших квадратов наход т коэффициенты пересчета К и К, дл данной партии окрашенного гольевого порошка ОГП-0. Данные по опре,ц&пению коэффициента
ших квадратов наход т коэффициенты пересчета К и К, дл данной партии окрашенного гольевого порошка ОГП-0. Данные по опре,ц&пению коэффициент
и К по формуле (2) вычисл ют актив- 25 пересчета дл окрашенного гольевого
ность ПА 3075 МЕ/г.
II р и м е р 5. Определение протео- литической активности протосубтилина ГЗх при помощи окрашенного гольевого порошка
В 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,2) готов т 2%-ный раствор Ы,Н-диметил- - У -казеина и раствор очищенной нейтральной протеазы из B,Subtilis шт,65 (концентраци 3 -Ю- мг/см), а в-ic
О,1М фосфатном буфере (рН 6,0) -. раствор очищенной нейтральней протеазы из В. Subtilis шт. 65 (концентрахщ 1,5-10- мг/смЗ),
порошка ОГП-О приведены в табл. 5.
В О,1М фосфатном буфере (рН 6,0) готов т раствор исследуемого препара 30 та протосубтилина ГЗх (концентраци 2 мг/см о Далее провод т гидролиз окрашенного гольевого порошка ОГП-0 описанным образом, т„ео в термостати руемую при кюветуj поставленную на магнитной мешалке, поме1ца)от 200 м субстрата, наливают 5 сн буферного раствора (рН S,0) и термостатируют 5 мин о При перемеамваш .и со скорость 300 обУмин добавл ют 2 см раствора
ющим образом.
Делают п ть разведений О,1М фосфат-40 протосубтилина ГЗх и выдерживают при ным буфером (рН 6,0) очищенной нейт- . 5 мин. По окончании инкубацион- ральной протеазы и провод т по п ть |ного времени реакционную смесь..не}.ед- параллельных опытов гидролиза окра- ленно фильтруют через бумажный фильтр шенного головьевого порошка ОГП-0 с средней плотности. Опредеп ют оптичес- каждой концентрацией фермента следу- 45 кую плотность фильтрата при 480 нм
против контрольной пробы.
Контрольную пробу готов т аналогично опытному гидролизату, добавл вместо 2 см раствора исследуемого 5Q фермента 2 см- раствора инактивированного кип чением на вод ной бане 3 мин фермента Получают U 0,37. Использу значени коэффициентов К и К ,j по формуле (2) вычисл ют активВ терМОстатируемую при кювету , поставленную на магнитной мешалке , помещают 200 мг субстрата,- наливают 5 см буферного раствора (рН 6,0) и термостатируют 5 мин, При пе- ремеЩивании со скоростью 300 об/мин добавл ют 2 см раствора очищенной нейтральной протеазы и вьдерживают
55 ность ПА 231,25 МЕ/г.
при 30 С 5 мино По окончании инкубационного времени реакционную смесь немедленно фильтруют через бумажный фильтр средней плотности Определ ют
10
0
единицах.
оптическую плотность фильтрата при И 480-нм против контрольной пробы Контрольную пробу готов т аналогично опытному гидролизату, добавл вместо 2 см раствора фермента 2 см раствор инактивированного кип че1даем в вод ной бане 3 мин фермента,
Параллельно провод т гидролиз субстрата сравнени - НдЫ-диметил-«/ -казеина при помощи очищенной нейтральной протеазы из В,Subtil is шт. 65 по методике примера 1 и по формуле (1) вычисл ют активность в международных
По данным параллельного гидролиза очищенной нейтральной протеазой окра- шенного гольевого порошка ОГП-0 и Н,М-диметил-«/5 казеина (табл. 5) при
помощи уравнени (2) методом наимень-
помощи уравнени (2) методом наимень-
ших квадратов наход т коэффициенты пересчета К и К, дл данной партии окрашенного гольевого порошка ОГП-0. Данные по опре,ц&пению коэффициента
пересчета дл окрашенного гольевого
порошка ОГП-О приведены в табл. 5.
В О,1М фосфатном буфере (рН 6,0) готов т раствор исследуемого препара- та протосубтилина ГЗх (концентраци 2 мг/см о Далее провод т гидролиз окрашенного гольевого порошка ОГП-0 описанным образом, т„ео в термостати- руемую при кюветуj поставленную на магнитной мешалке, поме1ца)от 200 мг субстрата, наливают 5 сн буферного раствора (рН S,0) и термостатируют 5 мин о При перемеамваш .и со скоростью 300 обУмин добавл ют 2 см раствора
ность ПА 231,25 МЕ/г.
Claims (3)
1. Способ определени протеолити- ческой активности ферментов в междуна11
родных единицах, включающий- инкубацию исследуемого фермента с рабочим субстратом - модифицированным белком и регистрацию продуктов протеолиза путем определени оптической плотности анализируемой пробы отличающийс тем, что, с целыо расширени технологических возможностей способа и повышени его воспроизводимости , определ ют коэффициенты пересчета измерением скоростей параллельного протеолиза стандартного фермента с рабочим субстратом и субстратом сравнени , в качестве которого исполь I - 15
г
зуют 6/5 -казеин .с блокированными ал- килиробанием или ахщлированием аминогруппами .
2.СпосоЬ поп. 1,oтличaю- щ и и с тем, что в качестве рабочего белкового субстрата используют окрашенный казеин ОКА-АС, азоказе- ин, модифицированный казеин МКА-1, окрашенньй гольевой порошок ОГП-О
3.Способ по п, 1, отлича ю- щ и и с тем, что в качестве субстрата сравнени используют Н,Ы-ди- карбамидоэтил-о( 5-казеин, NjN-диметил- - ofj-казеин, Ы-сукцинил-с/ -казеин.
Таблица1
0,05 0,07 0,10 0,12 0,15
0,150 0,205 0,310 0,355 0,444
Таблица 2
2020,6
К,677,47 ,35
13
1597405 -j
Та блица. 3
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU884477201A SU1597405A1 (ru) | 1988-06-29 | 1988-06-29 | Способ определени протеолитической активности ферментов в международных единицах |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU884477201A SU1597405A1 (ru) | 1988-06-29 | 1988-06-29 | Способ определени протеолитической активности ферментов в международных единицах |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1597405A1 true SU1597405A1 (ru) | 1990-10-07 |
Family
ID=21396898
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU884477201A SU1597405A1 (ru) | 1988-06-29 | 1988-06-29 | Способ определени протеолитической активности ферментов в международных единицах |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1597405A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2623875C1 (ru) * | 2016-02-19 | 2017-06-29 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства" | Способ биохимического определения активности протеолитических ферментов в крови |
-
1988
- 1988-06-29 SU SU884477201A patent/SU1597405A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Hennrich N and Brummer W.- LO Bericht. All-gemeines zur Standardi- sierung und die Aktivitatsbestitnmung von Proteinasen - Pharmo I nd, 1973, V. 35, № 4, PO 194-204o Карпавичюс ., Степановичюс Ю.Ю., Глемжа A.A, Денис Г.И. Экспресс-метод определени протеолитической активности ферментных препаратов о - В сб.: Производство и применение микробных ферментных препаратов„ - Вильнюс, 1985, с. 57-63. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2623875C1 (ru) * | 2016-02-19 | 2017-06-29 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства" | Способ биохимического определения активности протеолитических ферментов в крови |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Reimerdes et al. | [3] Determination of proteolytic activities on casein substrates | |
| Lottenberg et al. | The action of thrombin on peptide p-Nitroanilide substrates: Substrate selectivity and examination of hydrolysis under different reaction condtions | |
| Church et al. | Spectrophotometric assay using o-phthaldialdehyde for determination of proteolysis in milk and isolated milk proteins | |
| Shalaby et al. | Performance of two commonly used angiotensin-converting enzyme inhibition assays using FA-PGG and HHL as substrates | |
| CN101484809B (zh) | 用于测定糖化血红蛋白百分比的方法 | |
| Martin et al. | Kinetic studies on the action of Mucor pusillus, Mucor miehei acid proteases and chymosins A and B on a synthetic chromophoric hexapeptide | |
| Coombs et al. | An analysis of the proteinases of Trichomonas vaginalis by polyacrylamide gel electrophoresis | |
| JPH01501486A (ja) | 酵素洗剤添加剤 | |
| Bringe et al. | Influence of calcium chloride on the chymosin-initiated coagulation of casein micelles | |
| CN101171342B (zh) | 蛋白质的切断方法及其用途 | |
| Dikov et al. | Processing of procarboxypeptidase A and other zymogens in murine mast cells. | |
| CN100523184C (zh) | 碱性蛋白酶 | |
| SU1597405A1 (ru) | Способ определени протеолитической активности ферментов в международных единицах | |
| DK156668B (da) | Fremgangsmaade til kvantitativ bestemmelse af blodkoagulationsfaktor xii i humant plasma | |
| JP2001057897A (ja) | フルクトシルバリンの生産方法 | |
| Gossrau et al. | Proteases in the human full-term placenta | |
| Powning et al. | Studies on the Digestion of Wool by Insects II. the Properties of Some Insect Proteinases | |
| Whittaker et al. | A microtiter plate assay for the characterization of serine proteases by their esterase activity | |
| Hill | Synthetic peptide and ester substrates for rennin | |
| Babson et al. | An improved amylase assay using dyed amylopectin | |
| CN103305588A (zh) | 使用了酶的测定方法 | |
| Kunert et al. | Multiple forms of the serine protease Alp of Aspergillus fumigatus | |
| US5246830A (en) | Enzymatic process for the determination of β-lactam antibiotics | |
| SU397843A1 (ru) | Способ определения активности протеиназ | |
| Pairent et al. | Pancreatic exocrine insufficiency: IV. the enzyme content of commercial pancreatic supplements |