SU1493952A1

SU1493952A1 - Способ определени содержани белка

Info

Publication number: SU1493952A1
Application number: SU874258459A
Authority: SU
Inventors: Станислав Леонидович Романов; Вячеслав Васильевич Котусов; Валерий Васильевич Орлов; Наталья Константиновна Белоцерковская; Наталья Александровна Щербак
Original assignee: Всесоюзный Научно-Исследовательский И Проектно-Конструкторский Институт Микробиологических Производств
Priority date: 1987-06-08
Filing date: 1987-06-08
Publication date: 1989-07-15

Abstract

Изобретение относитс к микробиологической и комбикормовой промышленности и касаетс методов контрол содержани истинного белка непосредственно в кормовых дрожжах или в кормосмес х. Цель изобретени - повышение точности определени белка. Способ заключаетс в том, что провод т предварительную обработку образца ацетоном при 15-55°С в течение 15-30 мин и при отношении исходного образца и растворител не более 0,5-1,0%, после чего ацетон удал ют, а инкубацию образца с раствором красител амидочерного 10В провод т при 50-100°С в течение 10-30 мин в дистиллированной воде, причем добавление красител осуществл ют с установлением PH с помощью HCL в пределах 1-3 с последующим фильтрованием и измерением оптической плотности фильтрата при 590 нм. Предлагаемый способ позвол ет количественно определ ть белок в биомассе микроорганизмов с высокой точностью. 12 табл.

Description

Изобретение относитс к микробиологической и комбикормовой промьшшен- ности и касаетс 1етодов контрол содержани истин)1ого белка непосредственно в кормовых дрожжах или в кор- мосмес х.

Целью изобретени вл етс повьшге- ние точности определени белка.

Изобретение заключаетс в том, что предварительную обработку сухого препарата (биомассы микроорганизмов или продукта микробного синтеза) провод т ацетоном при 15-55 С в течение 15-30 мин, удал ют ацетон, инкубирук1Т препарат при 50-100 С в

течение 10-30 мин в растворе красител амидочерн-ого 10В в подкисленной с помощью НС1 дистиллированной воде до рН 1-3, а затем фильтруют и измер ют оптическую плотность фильтрата. В качестве стандартного препарата используют биомассу микроорганизмов или продукт микробного синтеза с заранее определенным содержанием белка с помощью известного метода, например по Барнштейну.

Дл определени св зывани красител амидочерного 10В с анализируемым препаратом берут небольшое количество этого препарата (около 20 г),тща4 СО СА СО СП N5

тельно растирают в фарфоровой ступке пестиком в течение 10 мин и высушивают при до посто нного веса (хран т препарат в стекл нном бгоксе с притертой крышкой).Затем делают необходимую навеску препарата, добавл ют 15 мл ацетона и перемешивают при комнатной температуре (см,табл.1 в течение 15 мин (см.табл.2) на маг- нитной мешалке. После этого суспензию центрифугируют в течение 15 мин при 7000-8000 об/мин, ацетон удал ют декантацией , а осадок высушивают при комнатной температуре в течение 5-10 мин. К высушенному от ацетона препарата добавл ют 0,01 н НС1, рН 2 (см.табл-. 3,4) до концентрации препарата 5 мг/мл и перемешивают при комнатной температуре на магнитной мешалке в течение 15 мин. Затем не прекраща перемешивание, разнос т аликвоты суспензии по пробиркам,довод объем до 1,5 мл с помощью 0,01 н НС1, и добавл ют в каждую пробирку по 3 мл раствора красител амидочер- ного 10В 0,6 г/л в 0,01 н НС1. Далее пробирки помещают в термостат и инкубируют при 60°С (см.табл,5) в течение 20 мин (см.табл.6) при перемешивании . После инкубации фильтруют все образцы и контроль (раствор красител без препарата) через бумажные фильтры на воронках. Фильтраты разбавл ют в 25 раз, дл чего к 0,2 мл фильтрата добавл ют 4,8 мл 0,01 н НС1, а затем измер ют оптическую - плотность D при 590 нм в стекл нных кюветах с длиной оптического пути 1,0 см против 0,01 н НС1. Далее определ ют разницу ЛВ между оптическими плотност ми контрол и опытного образца. Св зывание красител с анализируемым препаратом (разницу между оптическими плотност ми) выражают в процентах от оптической плотности фильтрата контрол .

Содержание истинного белка в продуктах микробного синтеза и биомассе микроорганизмов определ ют по формуле

С --I-100%,

Ах

где С - содержание белка;

у - значение св зывани красител с белком;

X - соответствующее этому св зыванию значение концентрации анализируемого препарата;

А и В - эмпирические коэффициенты уравнени калибровочной пр мой (), рассчитанные с помощью метода наименьших квадратов из нескольких параллельных опы- тов по св зьтанию красител амидочерного 10В со стандартным препаратом (биомассой микроорганизмов или . продуктом микробного синтеза ) , содержание белка в котором определено с помощью известного метода, например по Барнштейну или по данным аминокислотного анализа. В табл.1 показано вли ние температуры обработки ацетоном препарата кормовых гидролизных дрожжей с кон- . центрацией 5 мг/мл на св зывание красител амидочерного 10В с ними.

В табл.2 показано вли ние времени обработки ацетоном препарата кормовых гидролизных дрожжей на св зьшание красител амидочерного 10В с ними.

В табл.3 показано вли ние рН раствора красител амидочерного 10В на его св зывание с кормовыми гидролизными дрожжами.

В табл.4 показано св зывание кра сител амидочерного 10В с кормовыми гидролизными дрожжами в зависимости от состава растворител . .

В табл.5 показано вли ние температуры инкубации кормовых гидролизных дрожжей с красителем амидочерным 10В на его св зывание с дрожжами.

В табл.6 показано вли ние времени инкубации кормовых гидролизных дрожжей с красителем амидочерным 10В на его св зывание с ними.

При ме р. Первоначальным зтапом определени белка по предлагаемому способу вл етс определение эмпирических коэффициентов калибровочной пр мой (у Ах + В), т.е. зависимости св зывани красител амидочерного 10В со стандартным препаратом от концентра- рти в этом препарате истинного белка, который определ ли по Барнштейну. В качестве стандартного препарата дл определени белка в биомассе микроорганизмов мы использовали кормовые

гидролизные дрожжи с содержанием белка в расчете на сухой вес 41,42%. Эмпирические коэффициенты А и В определ ли по методу наименьших квадратов

по данным 5 параллельных опытов (см.табл.7):

Содержание белка в анализируемых препаратах определ ли по формуле

Nl iJ-il LlALlli -Zil

NiX;- (Х,.)

30.07;

В AnLi5 2jLi-l 5i)i(l.Xij:iL

N X-JT - feX;)

8,11 -

где А и В - эмпирические коэффициенты калибровочной пр мой концентраци белка в стандартном препарате опытные значени св зывани красител с препаратом , соответствующие х;, N - число измерений. В табл.7 показано св зьгеание красител амидочерного 10В со стандартным препаратом кормовых гидролизных дрожжей.

X;УГ

100%.

С -Х-1-8л11- . 30,07.x

В качестве анализируемого препарата вз ли дрожжи (кормовые гидролизные ) с неизвестным содержанием белка (см.табл.8).

В табл.8 показано св зывание красител амидочерного ЮВ с анализируемым препаратом кормовых гидролизных дрожжей.

В результате проведенных расчетов получили следующие значени содержани белка в анализируемом препарате кормовых гидролизных дрожжей:

С, 39,99%; С 42,97%; С з 41,51 41,49 ± 0,63%.

Таким образом, содержание белка в анализируемом препарате кормовых гидролизных дрожжей составл ет 41,49%.

Дл определени содержани белка в продукте микробного синтеза в качестве стандартного препарата использовали дрожжёванную ржаную муку с содержанием белка по Барнштейну 10,62% (см.табл.9) и белково-вита- минный концентрат (БВК) с содержанием белка 55,13% (см.табл.11).

В табл.9 показано св зывание красител амидочерного 10В со стандартным препаратом дрожжёванной ржаной муки.

Г - У 35,63 X

100%

В качестве анализируемого препарата мы использовали дрожжеваннзто ржаную муку (см.табл.10) с неизвестным содержанием белка.

В табл.10 показано св зывание красители амидочерного 10В с анализируемым препаратом дрожжёванной ржаной муки.

в результате проведенных расчетов получили следующие значени содержани белка в анализируемом препарате:

С, 11,07%; Ct 11,28%; Сз 11,19%i ССР 11,18 ± 0,07%.

Таким образом, содержание белка в анализируемом препарате дрожжёванной ржаной муки составл ет 11,18%.

В табл.11 показано св зьшание красител амидочерного ЮВ со стандартным препаратом белково-витаминного концентрата.

Содержание белка в анализируемых препаратах белково-витаминных концентраци х определ ли по формуле

У - 27,09 -х

100%.

В качестве анализируемого препарата использовали белково-витаминный 35 концентрат (см.табл.12) с неизвестным содержанием белка.

В табл.12 показано св зывание красител амидочерного ЮВ с анализируе- 40 мым препаратом белково-витаминного концентрата.

В результате проведенных расчетов получили следующие значе 1и содержани белка в анализируемом препарате дс белково-витаминного концентрата:

С, 56,45%; C,j 55,88%; С, 55,96%; Сср 56,10 ± 0,24%.

Таким образом, содержание белка в анализируемом препарате БВК составл - 50 ет 56,10%.

Claims

Формула изобретени

55

Способ определени содержани белка , предусматривающий предварительную обработку исходного образца, добавление к нему красител амидочерного ЮВ с одновременным регулировй- нием рН среды, инкубирование, удаление осадка с последующим спектрофото- метрическим анализом надосадочной фракции и расчетом содержани белка, отличающийс тем, что, с целью повышени точности определени белка, предварительную обработку образца провод т ацетоном при IS-SS C в течение 15-30 мин и при отношении

Оптическа плотность контрол не зависела от рН в исследованном диапазоне.

исходного образца и растворител 0,5-1,0, после чего ацетон удал ют, а инкубацию образца с раствором красител провод т при 50-100 с в течение 10-30 мин в дистиллированной воде , при этом добавление красител осуществл ют с установлением рН с помощью НС1 в пределах 1-3.

Таблица 1

Буферный раствор содержал 37,65 г/л лимонной кислоты и 1,136 г/л ,

Таблица 5

Оптическа плотность контрол не зависела от температуры в исследованном диапазоне.

Таблица 6

В таблице представлены усредненные значени св зывани , полученные из 5 опытов „

1493952

10 Таблица 4

11

В таблице представлены усредненные значени св зывани , полученные из 5 опытов.

Таблица 10

В таблице предстаилены усредненные значени св зьгоани , полученные из 5 опытов.

l 93952

12 Таблица 8

,5 А,5 3,5 3,5 3,0 3,0

1,20 0,19 0,21 0,40 0,38 0,48 0,48

Таблица 12

О 1,00

0,81 0,72

О 83,33

67,50 60,00