SU1483374A1 - Способ определени степени т жести кандидоза - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к области медицины и может быть использовано в диагностике заболеваний, вызванных грибами рода CANDIDA ALBICANA. Цель изобретени - повышение точности способа. В пробах крови считают число лимфоцитов, присоединивших 3 и более эритроцитов барана (Е-РОК) после предварительной инкубации с антигеном грибов CANDIDA в течение 45 мин. при 37° по сравнению с контролем (без антигена), и при увеличении количества розеткообразующих лимфоцитов определ ют т желую степень кандидоза, а при уменьшении или сохранении их количества на уровне контрол  определ ют легкую степень кандидоза.

Description

Изобретение относитс  к медицине и может быть использовано в диагностике заболеваний, вызываемых грибами рода Candida дл  оценки их т жести.

Целью изобретени   вл етс  повышение точности определени  степени т жести кандидоза.

Способ осуществл ют следующим образом .

К 4-5 мл крови, полученной пункцией локтевой вены в гепаринизирован- ную пробирку, добавл ют 1,5 мл 6%-но- го раствора желатины. Плазму с лейкоцитами центрифугируют при 300 g 10 мин о Избавл ютс  от аутологичных эритроцитов, прилива  к полученному осадку клеток 0,5 мл дистиллированной воды с последующим трехкратным отмыванием избытком раствора Хенкса при указанном режиме центрифугировани . Осадок клеток взвешивают в среде Игла или Хенкса до концентрации 2,5 «105 кл. в 1 мл. Смешивают 0,2 мл взвеси клеток с равным объемом антигена Candida albicans в рабочей дозе, предварительно оттитрованной на крови здоровых добровольцев. Это опытные пробы. В контрольные пробы вместо антигена добавл ют соответствующий объем среды Игла или Хенкса. Все пробы инкубируют в термостате 45 мин (врем , в течение которого еще не вырабатываютс  лимфокины, но уже происход т мембранные изменени ) при 37°С (обычна  температура дл  клеточных реакций у млекопитающих). После этого клетки трижды отмывают средой Хенкса при 300 g по 5 мин, чтобы избавитьс  от антигена, и осадок взвешивают в О,1 мл среды Игла или Хенкса . Затем к клеточной взвеси добавл ют равный объем 0,4%-ных эритроцитов

00

со со л

Ј

барана на среде Хенкса, смесь выдерживают в термостате 5 мин при 37 °С, центрифугируют при том же режиме и затем инкубируют 1 ч при (+4)°С в хо лодилышке. Далее добавл ют 0,1 мл сыворотки человека IV (АВ) группы, осторожно пипетируют клеточную взвес и делают мазки на предметных стеклах После высушивани  на воздухе мазки окрашивают красной Май-Грюнвальда 1 мин и 2 мин этой же краской, разведенной в два раза водой Краску смывают водой мазки высушивают на воздухе и под микроскопом с иммер- сией подсчитывают 200 лимфоцитов и среди них число розеткообразующих (Е-РОК), т.е. присоединивших 3 и более эритроцитов барана. Дл  характеристики реакции лимфоцитов на об- работку антигеном высчитывают процент прироста или уменьшени  количества Е-РОК после инкубации с антигеном Candida albicans по сравнению с контролем-пробами, не обработан- ными предварительно антигеном, так называемый индекс сдвига спонтанного розеткообразовани  (ИС) по формуле:

72,5. Следовательно, количество Е-РОК повысилось на 19%. Поставлен диагноз: хронический кандидоз кожи и слизистых ( т жела  степень кандидо- за). Последующее наблюдение, частые рецидивы, эффективность только комплексной терапии, включающей гормоны, иммуномодул торы, нар ду с антимико- тической подтвердили этот диагноз,,

Пример 2. Больна  X., 53 года , поступила 08.09.85. Клинически обнаружено поражение слизистой  зыка. Степень т жестки кандидоза оценить не представл етс  возможным и титр антител в РИГА 1/32 (-log,,0). До лечени  больна  обследована предлагаемым способом . Установлено, что количество Е-РОК в контроле 45, после обработки антигеном 37, Следовательно, имеет место уменьшение количества Е-РОК на 17%. Определена легка  степень кандидоза. Больна  выпечена местной антимнкотической терапией, рецидивов нет в течение двух лет, что подтверждает празильность определени  степени т жести кандидоза предлагаемым способом.

г. т,тг т- ,-.тгПример 3„ Больна  Щ.,31 год,

„. Е - РОК в опыте - Е - РОК в контроле,,,,.„, ,„ 0 ,, - ИС :--- 3« поступила 21.12,85. Клинически обнаружено поражение слизистой влагалища и двух ногтевых пластинок. Оценить степень т жести затруднительно по этим симптомам. Титр антител в РНГА 35 1 Л6(-logЈ 4,0), Больна  обследована до лечени  указанным способом. Количество Е-РОК в контрольных пробах 58, после обработки лимфоцитов антигеном 59« Следовательно, количество 40 Е-РОК практически не изменилось. Определена легка  степень т жести канЕ - РОК в контроле х 100% ,

Если количество Е-РОК повышаетс  в пробах, обработанных антигеном, по сравнению с контролем на 10 и более процентов, определ ют т желую степень кандидоза, например, хронический кандидоз кожи и слизистых, характеризующийс  т желым хроническим течением с частыми рецидивами, плохо поддающийс  антимикотической терапии,,

Если количество Е-РОК после об- .работки проб антигеном Candida albicans уменьшаетс  или не измен етс , определ ют легкую степень т жести кандидоза, например, локализованный кандидозкый вульвовагинит, хейлит и т.п. локализованные формы.

Пример 1., Больна  О., 30 лет поступила 12009.85 года. Клинически при осмотре обнаружено поражение слизистой оболочки рта,  зыка, конъ- юктивы, ногтевых пластинок. Степень т жести по этим признакам определить невозможно. Титр антител в РИГА 1/16 (-logЈ 4,0). Больна  обследована до лечени  предлагаемым способом . Количество Е-РОК в контроле 64, после обработки лимфоцитов антигеном

45

50

55

дидоза. Назначена местна  антимикоти- ческа  терапи . Больна  выздоровела через 23 дн . Повторно поступила через 1 год 8 мес. с признаками вульво- вагинита, который при бактериологическом обследовании исключалс . Однако местна  антимикотическа  терапи  вновь привела к выздоровлению. Все это подтверждает установленную степень т жести кандидоза.

Предлагаемым способом обследовано 35 больных т желой степенью кандидоза и 31 - с легкой. Обнаружено, что данный способ позвол ет в случаев точно определить степень т жести кандидоза, в отличие от прототипа , что доказано статистической об5

0

5

дидоза. Назначена местна  антимикоти- ческа  терапи . Больна  выздоровела через 23 дн . Повторно поступила через 1 год 8 мес. с признаками вульво- вагинита, который при бактериологическом обследовании исключалс . Однако местна  антимикотическа  терапи  вновь привела к выздоровлению. Все это подтверждает установленную степень т жести кандидоза.

Предлагаемым способом обследовано 35 больных т желой степенью кандидоза и 31 - с легкой. Обнаружено, что данный способ позвол ет в случаев точно определить степень т жести кандидоза, в отличие от прототипа , что доказано статистической об514833746

работкой результатов различными спо- количество розеткообразующих лимфоци- собами.тов после обработки их антигеном Сап1 dida albicans, и при увеличении колиФормула изобретени чества розеткообразующих лимфоцитов

по сравнению- с контролем определ ют

Способ определени  степени т жес- т желую степень кандидоза, а при ти кандидоза путем исследовани  кро- уменьшении розеткообразующих лимфо- ви, отличающийс  тем, цитов или сохранении их количества что, с целью повышени  точности диаг- ю на уровне контрол  определ ют легкую ностики, в исследуемой крови вы вл ют степень кандидоза.

Claims (1)

1. Формула изобретения

   Способ определения степени тяжести кандидоза путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диаг- jq ностики, в исследуемой крови выявляют количество розеткообразующих лимфоцитов после обработки их антигеном Candida albicans, и при увеличении количества розеткообразующих лимфоцитов по сравнению- с контролем определяют тяжелую степень кандидоза, а при уменьшении розеткообразующих лимфоцитов или сохранении их количества на уровне контроля определяют легкую степень кандидоза.