SU1470056A1

SU1470056A1 - Method of determining thymus activity

Info

Publication number: SU1470056A1
Application number: SU864071002A
Authority: SU
Inventors: В.С. Кожевников; В.П. Лозовой
Original assignee: Институт клинической иммунологии СО АМН СССР
Priority date: 1986-05-22
Filing date: 1986-05-22
Publication date: 1990-09-23

Abstract

Изобретение относитс к иммунологии . Цель изобретени - повышение точности способа. Суспензию мононук- леарных клеток смешивают с взвесью эритро1Д1Тов барана. Смесь клеток осаждают центрифугированием. Осадок инкубируют, суспендируют, вновь центрифугируют и инкубируют. Определ ют количество комплексных розеткообра- ,зующих и тотальных Е-розеткообразукг- щих клеток. По их отношению определ ют показатель функции тимуса. Если показатель равен 0,75-1,25, то диагностируют нормальную функцию тимуса.The invention relates to immunology. The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method. A suspension of mononuclear cells is mixed with a suspension of sheep erythro1D1Ts. The cell mixture is precipitated by centrifugation. The pellet is incubated, suspended, centrifuged again and incubated. The number of complex rosettes, and total E-rosettes is determined. The ratio of the function of the thymus is determined by their ratio. If the index is 0.75-1.25, then normal thymus function is diagnosed.

Description

1one

Изобретение относитс к медицине, а именно к исследованию биологичес. ких материалов иммунологическими методами . Оно может быть использовано в клинической иммунологии, терапии, хирургии и других област х медицины в диагностиче ких цел х.The invention relates to medicine, namely to the study of biological. materials by immunological methods. It can be used in clinical immunology, therapy, surgery and other areas of medicine for diagnostic purposes.

Целью изобретени вл етс повышение точности способа.The aim of the invention is to improve the accuracy of the method.

Поставленна цепь достигаетс за счет того, что кроме тотальных Е-розеткооб азующих клеток- (т-РОК) определ ют количество комплексных ,;. розеткообразующих клеток (к-РОК), показатель функции тимуса определ ют по формулеThe delivered chain is achieved due to the fact that, in addition to total E-rosetting cells (t-ROK), the number of complex cells is determined; rosette-forming cells (K-ROCK), an indicator of thymus function is determined by the formula

ПФТCFT

тРОК кРОКхббTROK KROKhbb

где 66 - среднее значение т-РОК уwhere 66 is the average value of t-rock

здоровых людей.healthy people.

.При ПФТ от 0,75 до 1,25 диагност.и- руют:нормальную функцию тимуса, при. In case of CFT from 0.75 to 1.25 diagnostician: normal thymus function, with

ПФТ ,75 - недостаточную, при ПФТ 1,25 - повышенную.CFT, 75 - insufficient, with CFT 1.25 - increased.

Способ осуществл етс следуюоиоThe method is carried out following

образом.in a way.

Мононуклеарные клетки (МНК) выдел ют их 5 мл венозной крови, стабилизированной гепарином (250 ед/мл), наслаивают на 3 мл раствора верогра- фин-фиколл (d 1,082 г/см ). После центрифугировани при 400 g 40 мин МНК собирают пипеткой с поверхности раствора верографин-фиколл и трижды отмывают: первый раз при 400 g 10 мин, второй при 200 g 5 мин (в эабуфервнном физрастворе;) и третий - йри 200 g 5 мин в среде 199. Клетки суспендируют в 1 мл среды, подсчитывают в камере Гор ева и развод т средой до концентрации 2,510 кл/мл. ; Дл приготовлени эритроцитов барана (ЭБ) венозную кРОвь барана хран т не более двух недель после забора с консервантом (15% от общего объема),Mononuclear cells (MNCs) isolate them with 5 ml of venous blood, stabilized with heparin (250 units / ml), layered over 3 ml of vergraphin-ficoll (d 1.082 g / cm). After centrifugation at 400 g 40 min, the MNC is pipetted from the surface of the verographin-ficoll solution and washed three times: the first time at 400 g 10 min, the second at 200 g 5 min (in an eBufer solution) and the third - 200 g 5 min in medium 199. The cells are suspended in 1 ml of medium, counted in a Gorev chamber and diluted with medium to a concentration of 2.510 cells / ml. ; For the preparation of sheep erythrocytes (EB), the venous cornea of the sheep is stored no more than two weeks after collection with preservative (15% of the total volume),

(Л(L

4 four

сдsd

аbut

используют трижды отмытые средой 199 (перва и втора отмывки при 200 g 5 мин, треть - при 400 g 5 мин) ЭБ в виде 1%-ной суспензии (0,1 мл осад ка ЭБ плюс 9,9 мл среды).three times washed with medium 199 are used (the first and second washings at 200 g 5 min, one third at 400 g 5 min) with EB as a 1% suspension (0.1 ml of precipitate EB and 9.9 ml of medium).

Дл проведени реакции розеткооб- разовани 0,2 мл суспензии МНК смешивают с 0,2 мл взвеси ЭБ в двух пробирках , смесь клеток -осаждают центри фугированием при 200 g 5 мин. Дл подсчета к-РОК осадок инкубируют при 37°С t,5 ч, суспендируют энерч-ичным встр хиванием до получени гомогенной суспензии (без видимых на глаз сгустков), вновь центрифугируют при 200 g 5 мин и инкубируют при . 16-18 ч. Перед подсчетом удал ют 0,2 МП надосадочной зидкости, осадок суспендируют осторожным покачивани- ем пробирки (обычно 10-15 движений), каплю полученной суспензии помещают ца предметное стекло и накрывают покровным. При 300-400 увеличении под воздушной И|-1мерсией подсчитывают количество лимфоцитов с 3 и более прикрепившимис ЭБ (розетки) на 100- 200 лимфоцитов For the rosette reaction, 0.2 ml of MNC suspension is mixed with 0.2 ml of EB suspension in two tubes, the mixture of cells is precipitated by centrifuging at 200 g for 5 min. To calculate k-ROCK, the precipitate is incubated at 37 ° C for 5 hours, suspended by energy shaking to obtain a homogeneous suspension (without clots visible to the eye), centrifuged again at 200 g for 5 minutes and incubated at. 16-18 hours. Before counting, 0.2 MP of the supernatant liquid are removed, the precipitate is suspended by gently shaking the tube (usually 10-15 movements), a drop of the resulting suspension is placed in a glass slide and covered with a cover slip. At 300-400 magnification under the air and | -1mercia calculate the number of lymphocytes with 3 or more attached EB (outlet) per 100-200 lymphocytes

Дл определени т-РОК осадок МНК н ЭБ (втора пробирка инкубируют при 15 мин и при 4 С 16-18 ч, после чего готов т препарат дл подсчета и считают розетки, как описано выше ДЯ , % к-РОК.For the determination of t-ROCK, sediment MNC n EB (the second tube is incubated at 15 min and at 4 C for 16-18 h, after which the preparation is prepared for counting and the sockets are counted as described above,% k-ROCK.

Показатель функции тимуса опреде- л етс по формулеThe index of the function of the thymus is determined by the formula

ПФТCFT

тРОК TROK

где 66 - среднее значение т-РОК у здоровых доноров, равное 66%.where 66 is the average value of t-ROCK in healthy donors, equal to 66%.

Из формулы следует, что ПФТ учитывает интенсивность продукций Е-ре- цептора Т-лимфоцитами (т-РОК) и количество предшественников Т-лимфо- цнтов (к-РОК), несущих только структуру дл реабсорбдии Е-рецептора. При снижении функции тимуса увеличиваетс количество предшественников Т-лш оцитов., при повышении.функции тимуса увеличиваетс интенсивность гГродук1цга Е-рецептора T-лимфoцитa ш, а количество предшественников уменьшаетс . При ПФТ от 0,75 до 1,25 диаг ностируют нормальную функцию тимуса, при ПФТ 0,75 - недостаточную, при ПФТ 1,25 - повышеннуюIt follows from the formula that PPT takes into account the intensity of E-receptor production by T-lymphocytes (t-ROCK) and the number of T-lymphocyte precursors (K-ROCK) that carry only the structure for reabsorption of the E-receptor. By reducing the function of the thymus, the number of precursors of T-max of oocytes increases, while the increase of the function of the thymus increases the intensity of the G-production of the E-receptor T-lymphocyte w, and the number of precursors decreases. With PPT from 0.75 to 1.25, normal thymus function is diagnosed, with PPT 0.75 - insufficient, with PPT 1.25 - increased

Пример 1. Вольна К., т жела миастени . Определены % тотальных и комплексных розеткообраэующих клеток (т-РОК и к-РОК), по формуле вы- числей ПФТ.Example 1. Freestyle K., m myasthenia. The% of total and complex rosette-forming cells (t-ROCK and c-ROCK) were determined, using the formula for calculating PFT.

fg J5 20 25 fg J5 20 25

30thirty

4040

5five

5 five

ПФТ 0,90. Функци тимуса оцениваетс как нормальна (ПФТ у здоровых людей от 0,75 до 1,25).CFT 0.90. Thymus function is assessed as normal (PPT in healthy people is 0.75 to 1.25).

П р и м е р 2. Та же больна , через 5 мес цев после удалени тимуса. Определены % тотальных и комплексных РОК,, по формуле вычислен ПФТExample 2: Same patient, 5 months after the removal of the thymus. Determined% of total and complex ROK ,, calculated by the formula CFT

ПФТ 0,21. Функци тимуса оцени-. ваетс как сниженна . , В данном случае резко замедлен процесс дифференцировки Т-лимфоцитов вследствие удалени тимуса. В периферической крови резко снижено количество зрелых Т-лимфоцитов, несущих Е-рецептор, тогда как общее количество Т-лимфоцитов (зрелых, несунр1Х Е-рецептор, и незрелых, не несущих Е-рецептор, но имеющих структуру дл его реабсорбции) остаетс высоким.CFT 0.21. Thymus function estimated. It is as reduced. In this case, the process of differentiation of T-lymphocytes was drastically slowed down due to the removal of the thymus. In peripheral blood, the number of mature T-lymphocytes bearing the E-receptor is sharply reduced, while the total number of T-lymphocytes (mature, non-SUN1X E-receptor and immature, not carrying the E-receptor, but having a structure for its reabsorption) remains high.

Пример 3. Больному П. проведен курс лечени Т-активином. До и после лечени определ лись % тотальных и комплексных РОК, по форму- . ле вычислен ПФТ.Example 3. Patient P. underwent a course of treatment with T-activin. Before and after treatment,% of total and complex ROCKs were determined, by form -. le computed CFT.

ПФТ до лечени 0,80. ПФТ после последней инъекции Т-активина 2,52. В данном случае функци тимуса оцениваетс как повышенна , что св зано с усилением дифференцировки Т-лимфоцитов под вли нием эндогенного тимического фактора и экзогенного - в виде Т-активина,CFT before treatment 0.80. PFT after the last injection of T-activin 2.52. In this case, the function of the thymus is assessed as being elevated, which is associated with increased differentiation of T lymphocytes under the influence of an endogenous thymic factor and exogenous - in the form of T-activin,

Предложенный способ позвол ет более точно оценивать активность ти- муса. Более высока точность предлагаемого способа достигаетс преимущественно за счет того, что можно оценить не только нормальную и пониженную (как по способу-прототипу), но н повышенную функцию тимуса.The proposed method allows a more accurate assessment of the activity of the thymus. The higher accuracy of the proposed method is achieved mainly due to the fact that it is possible to evaluate not only the normal and reduced (as in the prototype method), but also an increased function of the thymus.

Кроме того, предлагаемый способ не требует специальных стимул торов розеткообразовани , аутоплазмы или тимусньпс факторов, что значительно упрощает способ,In addition, the proposed method does not require special stimuli of rosetting, autoplasma or thymic factors, which greatly simplifies the method

Claims

Invention Formula

The method of determining the activity of the thymus, including the removal of lymphocytes from the blood, incubating them with sheep erythrocytes followed by the determination of 14700566

Tr and 2 Roe-coded "p" do "them and in the demolition of the ratio and

cells bearing the number of lymphocytes bearing the E-reti E-receptor, which distinguishes the receptor. Compared to the rules

so that, in order to increase the exact determination of the function of the mode, in addition to blood pressure, and with an increase in the ratio

Solyi determine the total number of lymphocytes and the number of T-tumor cells. bearing and not carrying and not bearing the E-receptor. - pohgE-receptor. calculates a new one (i.e. an interstitial function of the thymus).