SU1018015A1

SU1018015A1 - Blood serum toxicity determination method

Info

Publication number: SU1018015A1
Application number: SU813341276A
Authority: SU
Inventors: Григорий Яковлевич Левин; Юрий Александрович Шереметьев; Валентина Андреевна Мариничева
Original assignee: Горьковский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии
Priority date: 1981-09-28
Filing date: 1981-09-28
Publication date: 1983-05-15

Abstract

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ СЫВОРОТКИ КРОВИ путем измерени степени воздействи исследуемой сывсротки на форменные.элементы кроэи здорового донора, о т л и ч .а ющ и и с тем, что, с целью ускорени и упрощени способа, дл исследовани используют эритроциты, -инкубируют их с исследуемой и контрольной сыворотками, затем отдел ют эритроциты от сыворотки центрифугированием , определ ют величины времени фильтрации опытньос и контрольных эритроцитов через мелкопористый фильтр и по их соотношению оценивают степень токсичности исследуемой сыворот- ; ки. §THE METHOD FOR DETERMINING BLOOD SERUM TOXICITY by measuring the extent of the effect of the test serum on the shaped cells of a healthy donor, which is also used so that, in order to speed up and simplify the method, erythrocytes are used for the study, they incubate the test and control sera, then the red blood cells are separated from the serum by centrifugation, the values of filtration time of the experiment and the control red blood cells are determined through a finely porous filter and their degree of toxicity is determined by their ratio food serum; ki §

Description

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения токсических свойств сыворотки крови при различных заболеваниях.The invention relates to medicine and can be used to determine the toxic properties of blood serum in various diseases.

Известен способ определения токсичности сыворотки крови путем куль- 5 тйвирования ее на биологическом тестматериале с последующим измерением степени воздействия исследуемой сыворотки на тест-культуруA known method for determining the toxicity of blood serum by cultivating it on a biological test material with subsequent measurement of the degree of influence of the test serum on the test culture

Известен также способ определения 10 токсичности сыворотки крови при поражении печени, включающий культивирование исследуемой сыворотки с лейкоцитарной пленкой в питательной среде, содержащей плазму крови человека и 15 кролика в соотношении 2,5/1, и измерение величины зоны миграции зрелых лейкоцитов (2).There is also a method for determining 10 toxicity of blood serum in liver damage, including culturing the test serum with a white blood cell film in a nutrient medium containing human blood plasma and 15 rabbits in a ratio of 2.5 / 1, and measuring the size of the migration zone of mature white blood cells (2).

Однако известный способ является длительным (более суток) и трудоемким , ·However, the known method is long (more than a day) and time-consuming,

Цель изобретения - ускорение и упрощение способа.The purpose of the invention is the acceleration and simplification of the method.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения токсичности сыворотки крови путем измерения степени воздействия исследуемой сыворотки на форменные элементы крови здорового донора, для исследования используют эритроциты, инкубируют их с исследуемой и контрольной сыворотками, затем отделяют эритроциты от сыворотки центрифугированием, определяют величины времени фильтрации опытных и контрольных 'эритроцитов через мелкопористый фильтр· и по их соотношению оценивают степень токсичности исследуемой сыворотки .This goal is achieved by the fact that according to the method for determining the toxicity of blood serum by measuring the degree of influence of the test serum on the blood cells of a healthy donor, red blood cells are used for research, they are incubated with the test and control serums, then the red blood cells are separated from the serum by centrifugation, and the experimental filtration time is determined and control erythrocytes through a fine-porous filter · and the degree of toxicity of the test serum is evaluated by their ratio.

Способ осуществляют следующим образом. 40The method is as follows. 40

Свежезаготовленную цитратную кровь донора центрифугируют при 200 д в течение 15 мин. Плазму, обогащенную тромбоцитами, отсасывают, а осадок эритроцитов дважды отмывают в физиологическом растворе с последующим центрифугированием при .2000 g в течение 10-мин. В клинике, в опытах используют эритроциты донорской кро- iви I группы (резус - отрицательные) или донорские эритроциты той же группы и резус принадлежности, что и испытуемая кровь . В экспериментах используют эритроциты того же вида животного, что и испытуемая кровь.Freshly prepared citrated blood from a donor is centrifuged at 200 d for 15 minutes. Platelet-rich plasma is aspirated, and the erythrocyte pellet is washed twice in saline followed by centrifugation at .2000 g for 10 min. In the clinic, experiments use red blood cells of donor blood of group I (Rhesus negative) or donor red blood cells of the same group and Rhesus affiliation as the test blood. In the experiments, red blood cells of the same animal type as the test blood are used.

1,5 мл эритроцитов донора смешивают с 1,0 мл испытуемой сыворотки и инкубируют при 37°С в течение 1,5 ч. После этого взвесь эритроцитов центрифугируют при 200 g в течение 15 мин, плазму отсасывают, а эритроциты отмывают в физиологическом растворе путем однократного центрифугирования при 2000 g в течение 10 мин»1.5 ml of donor erythrocytes are mixed with 1.0 ml of the test serum and incubated at 37 ° C for 1.5 hours. After this, the suspension of red blood cells is centrifuged at 200 g for 15 minutes, the plasma is aspirated, and the red blood cells are washed in physiological saline by single centrifugation at 2000 g for 10 min

Способность эритроцитов в деформации определяют путем измерения времени их фильтрации через мелкопорис'тые фильтры известным методом.The ability of red blood cells in deformation is determined by measuring the time of their filtration through fine-porous filters by a known method.

Степень токсичности испытуемой сыворотки оценивают по отношению времени фильтрации интактных эритроцитов, инкубированных с испытываемой сывороткой, к времени фильтрации тех же эритроцитов, инкубированных с сывороткой здорового донора. Время фильтрации нормальных контрольных эритроцитов составляет в среднем 6-7,5 мин (7,16+0,43 мин).The degree of toxicity of the test serum is estimated by the ratio of the filtration time of intact erythrocytes incubated with the test serum to the filtering time of the same red blood cells incubated with the serum of a healthy donor. The filtration time of normal control red blood cells is on average 6-7.5 minutes (7.16 + 0.43 minutes).

Способ позволяет определять токсичность сыворотки крови за 2,5-3 ч.The method allows to determine the toxicity of blood serum for 2.5-3 hours

Пример 1. Больная Ч. получила ожог площадью 27% поверхности тела, из них 3-й степени - 12%, 4-й степени - 0,5%; ожог дыхательных путей. На 10-й день после ожогё степень токсичности сыворотки крови больной, определенная предложенным способом, составила 5,3 ,Example 1. Patient Ch. Received a burn with an area of 27% of the body surface, of which 3rd degree - 12%, 4th degree - 0.5%; burn of the respiratory tract. On the 10th day after the burn, the degree of toxicity of the patient’s blood serum, determined by the proposed method, was 5.3,

Пример 2. Экспериментальный ожог 3-й степени на площади 20% поверхности тела у крысы. Через сутки после ожога степень токсичности сыворотки крови - 1,57,Example 2. An experimental burn of the 3rd degree on an area of 20% of the body surface in a rat. A day after a burn, the degree of toxicity of blood serum is 1.57,

Таким образом, предложенный способ позволяет значительно проще и быстрее по сравнению с известным измерять степень токсичности сыворотки крови, а оценить не изученное ранее действие токсинов на эритроциты. При этом способ может быть использован, в частности, для обнаружения и количественного определения токсических веществ, образующихся при ожоговой болезни, а также оценки эффективное•1и ее лечения. Кроме того, предлагаемый способ может применяться для определения токсичности крови й при других заболеваниях (поражениях печени , почек и пр.).Thus, the proposed method allows much simpler and faster than the known measure the degree of toxicity of blood serum, and to evaluate the previously not studied effect of toxins on red blood cells. Moreover, the method can be used, in particular, for the detection and quantification of toxic substances formed during burn disease, as well as evaluating the effective • 1 and its treatment. In addition, the proposed method can be used to determine blood toxicity and other diseases (lesions of the liver, kidneys, etc.).

Claims

METHOD FOR DETERMINING THE BLOOD SERUM TOXICITY by measuring the degree of influence of the test serum on the blood cells of a healthy donor, which is based on the fact that, in order to speed up and simplify the method, red blood cells are used for research, incubated with the test and control sera, then erythrocytes are separated from the serum by centrifugation, the filtration time of the experimental and control erythrocytes through a fine-porous filter is determined, and the degree of toxicity of the test is evaluated by their ratio serum _; ki.

1 01S 0120