SU1455317A1

SU1455317A1 - Способ дифференциальной диагностики стволового и полушарного ишемического инсульта при нарушении мозгового кровообращени

Info

Publication number: SU1455317A1
Application number: SU864077928A
Authority: SU
Inventors: Сергей Борисович Чекнев; Валерий Вадимович Яковлев; Леонид Васильевич Ковальчук
Original assignee: 2-й Московский государственный медицинский институт им.Н.И.Пирогова
Priority date: 1986-06-11
Filing date: 1986-06-11
Publication date: 1989-01-30

Abstract

Изобретение относитс к медицине , точнее к неврологии, предназначено дл локализации очага поражени (стволовой или полушарный) при ишеми- ческом инсульте. Цель изобретени - повьшение точности способа и сокращение времени исследовани . Дл этого из периферической крови пациента выдел ют лимфоциты в одноступенчатом градиенте плотности фикола-верогра- фина (1,077 г/мл) в режиме центрифугировани 400 g, 45 мин при 20&deg;С. После 2-кратного отмьшани забуферен- ным физраствором готов т исходную концентрацию лимфоцитов 10-10 в 1 мл полной питательной среды, содержащей 12% эмбриональной тел чьей сыворотки , глутамин (200 мм), гентами- цин (40 мкг/мл). В качестве мишеней используют меченные Н -уризином в дозе 3 мкКи/мл в течение 2 ч клетки эритромиелолейкозной линии К-562, культивируемые in vitro в указанной среде. Определ ют цитотоксическую активность естественных киллеров радиометрически при отношении эффекторов и мишеней 100:1; 50:1; 25:1. Рассчитывают цитотоксический индекс и по его величине делают вывод о стволовом или полушарном ишемическом инсульте . 2 табл. (Л 4 сл СП со

Description

1

Изобретение относитс к медицине, в частности к неврологии, и может быть использовано дл локализации очага поражени (стволовой или полушарный ) при ишемическом инсульте.

Цель изобретени - повьшение точности способа и сокращение времени исследовани .

Способ осуществл етс следующим

образом.

Из периферической крови больного, вз той в количестве Ю мл, вьщел ют

лимфоциты в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-верографина (1,077 г/мл) в режиме центрифугировани 400 g, 45 мин, . После дву5 кратного отмывани забуференньм физиологическим раствором готов т исходную концентрацию лимфоцитов, составл ющую 10-10 в 1 мл полной питательной среды на основе RPMI-1640,

10 содержащей 12% эмбриональной тел чьей сыворотки, глутамин (200 мМ), гента- мицин (40 мкг/мл). В качестве мишеней

используют меченные Н -уридином в дозе 3 мкКи/мл в течение 2 ч клетки эритромиелолейкозной линии К-562, культивируемые in vitro в указанной среде. После отмьшани от изотопа готов т исходную концентрацию мишеней 10-10 3 1 Rn. К мишен м добавл ют фермент - панкреатическую РНК-азу в дозе 5 мкг/мл, после чего лимфоциты и мишени закапывают в чейки 96- луночных круглодонных микропластин по 0,1 мл. Дл более точной оценки активности естественных киллеров (ЕКА) путем двукратных разведений суспензии лимфоцитов создают различные соотношени эффекторов и мишеней в системе (Э:М), каждое соотношение

тестируют в 3 микропластин.

параллельных лунках

Лимфоциты и мишени инкубируют в течение 14 ч при 37°С во влажной атмосфере , содержащей 5% COg, после чего содержимое лунок осаждают на стек- ловолоконные фильтры с диаметром пор 2,5 мкм 12-канальным собирателем биологических фракций. Фильтры высушивают , уровень остаточной радиоактивности определ етс с помощью сцинтилл - ционного счетчика, счет каждой пробы осуществл етс в течение 2 мин.

В качестве меры ЕКА примен етс цитотоксический индекс (ЦИ), вычисл емый по формуле:

тш d - -22 22 Sf5Z5S 2:S l 2SSI225 ZS5),i007 число импульсов в контроле

: Контролем в лимфоцитотоксическом тесте служат клетки - мишени, инкуби- I руемые в тех же услови х, но без эф- фекторов. Врем исследовани 24 ч с ; момента забора крови у больного.

Существенное отличие отмечаетс .;При соотношени х Э:М от 100:1 до 25:1. Вы вленные пределы определ ютс тем, что в более разреженной системе (соотношение Э:М меньше 25:1) регистрируетс цйтотоксическа функци отдельных клеток 5 а не попул ци мононуклеаров в целом, зшеличиваетс разброс показателей ЦИ; при увеличении количества -клеток в системе (соотношение Э:М больше 100.4) истощение среды большим числом клеточных элементов затрудн ет учет результатов . 1

В оптимальном диапазоне соотношений Э:М при полушарном инсульте отмечаетс снижение показателей ЦИ, при стволовом они соответствуют норме.

П р и м е р 1. Больна Ч., 62 лет, поступила с диагнозом: атеросклероз, артериальна гипертони , шейньй остеохондроз , хроническа церебральна сосудиста недостаточность в стадии субкомпенсации. В анамнезе; в тече- иие последних 2 лет приступы системного головокружени с тошнотой, рвотой , головные боли непосто нной локализации , снижение слуха слева. Дл выбора правильной тактики лечени требовалось локализовать очаг поражени в вертебро-базилл рной системе

30

(стволовой инсульт). Вз та кровь дл 2g исследовани .

Расчет ЦИ проводилс следующим образом.

Средние значени остаточной радиоактивности на фильтрах после совместной инкубации лимфоцитов с мишен ми составили, имц/мин:

Э:М 100:1 1803

Э:М 50:1 2041

Э:М 25:1 2949

Средн радиоактивность дл 6 кон- 35 трольных лунок равн лась 4764 имц/мин. Подставл полученные значени в формулу дл расчета ЦИ, при соотношении Э:М 100:1 получили

ЦИ (1 1803 4764

О-100% 62%,

при соотношении Э:М 50:1 ЦИ 57%, при соотношении Э:М 25:1 ЦИ 38%.

45 Такие значени свидетельствовали о локализации очага поражени в вертебро-базилл рной системе, т.е. о наличии стволового инсульта. Врем исследовани составило 24 ч. Дальнейgg ша динамика и эффективность проведенной терапии подтвердили правильность диагноза.

П р и м е р 2. Больна Ж., 56 лет, поступила с неврологическим диагноgg зом: артериальна гипертони , острое нарушение мозгового кровообращени в глубоких ветв х левой задней мозговой артерии. За 2 мес до поступлени отметила ухудшение пам ти на текущие

и прошлые событи . Дл контрол правильности проводимой терапии необходимо было установить отсутствие повреждени в вертебро-базилл рной системе . Вз та кровь дл исследовани . Показатели ЦИ при соотношени х Э:М 100:1; 50:1 и 25:1 составили соответственно 25, 24 и 21%. На основании этих данных диагностирован полу- шарный инсульт без повреждени стволовых структур. Врем исследовани 24 ч. Результаты исследовани подтверждены эффективностью проведенной терапии и дальнейшей динамикой про-- цесса.

П р и м е р 3. Больна С., 48 лет, поступила с неврологическим диагнозом: артериальна гипертони , повторное нарушение мозгового кровообращени в корковых ветв х левой задней мозговой артерии. В анамнезе: год назад острое нарушение мозговог о кровообращени с парезом в правой руке. Новое ухудшение состо ни наступило остро, в течение 3 дней, сопровождалось речевыми нарушени ми. Вз та кровь дл исследовани . Показатели ЦИ при соотношени х Э:М 12:1 и 6:1 составили соответственно 35 и 32%, что свидетельствовало о наличии стволового инсульта. Однако эффективность проведенной терапии и динамика процесса подтвердили правильность диагноза при поступлении.

Таким образом определение ЦИ при соотношени х Э:М меньше 25:1 неинформативно при данной диагностике.

Подобным образом обследов ана группа больных (26 человек) с ишемически- ми инсультами: 16 человек со стволовым инсультом, 10 - с полушарным.

Таблица 1 Показатели ЕКА в группе здоровых доноров

Данные исследовани подтверждались клиническими наблюдени ми, динамикой процесса и эффективностью терапии. В качестве контрольной обследована группа здоровых (без иммунологических нарушений ) доноров в количестве 35 человек .

Данные приведены в табл. 1 и 2.

Таким образом, способ позвол ет

локализовать очаг поражени (стволовой или полушарный) при ишемическом инсульте в течение 24 ч с момента забора крови. Способ отличаетс высокой точностью, воспроизводимостью результатов (п 26, р 0,01), быстротой постановки теста, объективностью оценки . Эффективен при использовании боль-,

ших соотношений эффекторов и мишеней в системе (100:1 - 25:1).

Claims

Формула изобретени

Способ дифференциальной диагностики стволового и полушарного ишемичес- кого инсульта при нарушении мозгового кровообращени путем клинического и параклинического исследовани больного , отличающийс тем,что, с целью повьшени точности способа и сокращени времени исследовани , дополнительно определ ют цитотоксичес- кую активность естественных киллеров радиометрическим методом при отношении эффекторов и мишеней 100:1, 50:1,25:1,рассчитывают по полученным показател м цитотоксический индекс и при значении 44% и более диагностиуют стволовый шпемический инсульт, а при значении 43% и менее - полуарный .

Соотношени

Цитотоксический индекс, %

Стволовой

инсульт

Полушарный инсулвт

714553178

Таблица 2 Показатели ЕКА у больных с ишемическим инсультом

12:1 6:1

100:1

50:1

25:1

54.5±4,4 51,7±А,1 48,8±4,4 41,8±3,9 32,1±3,9 40,1±5,1 37.4±3,3 25,6±3,9 30,8±5,8 24,8±4,5

25:1