SU1438800A1

SU1438800A1 - Method of producing lectine

Info

Publication number: SU1438800A1
Application number: SU874265015A
Authority: SU
Inventors: Вадим Францевич Лапчик; Тамара Владимировна Юрчишина; Лариса Васильевна Багрий
Original assignee: Киевский Государственный Университет Им.Т.Г.Шевченко
Priority date: 1987-06-19
Filing date: 1987-06-19
Publication date: 1988-11-23

Abstract

Изобретение относитс к медицине и биологии, касаетс способа получени лектина из растительного сырь , в качестве которого используют надземную часть коланхре Блосфельда. Экстракцию сырь ведут 29-31%-ным этиловым спиртом. Затем провод т осаждение центрифугированием при 6000 g 78-82%-ным этиловым спиртом и очистку на аффинном .сорбенте. В качестве элюента используют 0,08- 0,12 н. уксусную кислоту или 0,1- 0,18 М р-р NaCl.The invention relates to medicine and biology, relates to a method for the production of lectin from plant raw materials, in which the aerial part of the Blosfeld calligraphy is used. Extraction of raw materials are 29-31% ethanol. Then, precipitation is carried out by centrifugation at 6000 g with 78-82% ethanol and purification on an affinity absorbent. 0.08-0.12 n is used as eluent. acetic acid or 0.1-0.18 M solution of NaCl.

Description

4 DO 00 Х4 DO 00 X

ОABOUT

Изобретение ОТРЮСИТСЯ к медицине и биологии и касаетс способа получени лектика из растительного сьфь The invention is related to medicine and biology, and concerns a method for obtaining lectics from a plant.

Целью изобретени вл етс упрощение способа и сокращение времени процесса.The aim of the invention is to simplify the process and shorten the process time.

П р и м е р 4 о 1 кг надземной части каланхое Блоссфельда измельчают, отжимают coKj фильтруют его через бумажньй фильтр при комнатной температуре Фильтрат охлаждают до 4 с и добавл ют охлажденный до 96%- ньй этиловьй спирт до конечной концентрации спирта 30% и оставл ют на 1 ч при 4 С, Через. 1 ч смесь центрифугируют в рефрижераторной цен трифу- ге при 4 С в течение 10 мин при 6000 go К надосадочному 30%-ному спиртовому раствору добавл ют ох- ,лажденный до 4 С 96%-ньш эти овьй спирт до получени насыщени и выдерживают 1 ч при 4 С, Затем центрифугируют в рефрижераторной центрифуге при 4 С в течение 5 мин при 6000 g. Осадок собирают и раствор ют в минимальном (до 50 мл) количестве охлажденной до 4°С дистиллированной воды,EXAMPLE 4 about 1 kg of the aerial part of the Kalanchoe of Blossfeld is crushed, squeezed coKj is filtered through a filter paper at room temperature. The filtrate is cooled to 4 s and cooled to 96% ethyl alcohol is added to a final alcohol concentration of 30% and left for 1 hour at 4 ° C. The mixture is centrifuged at a temperature of 4 ° C for 10 minutes at 6000 ° C for 1 h. To the supernatant 30% alcohol solution, cooled to 4 ° C is added 96% 96% ovine alcohol until saturation is obtained and incubated for 1 h at 4 C, then centrifuged in a refrigerated centrifuge at 4 C for 5 min at 6000 g. The precipitate is collected and dissolved in a minimum (up to 50 ml) amount of distilled water cooled to 4 ° C,

Растйоренньй осадок диализируют против охлажденной до дистиллированной воды в течение 2 ч. Затем центрифугируют в рефрижераторной центрифуге при 4 С в течение 20 мин при 6000 go Надосадочньй раствор соби- рают и извлекают из него лектин сле дун цим образ ом оThe dilution is dialyzed against cooled water to distilled water for 2 hours. Then it is centrifuged in a refrigerated centrifuge at 4 ° C for 20 minutes at 6000 go. The supernatant solution is collected and lectin is extracted from it.

Колонку (3x15 см) наполн ют аффинным сорбентом (овогелем) при 4 С, промьшают водой, охлажденной до 4 с Промывку колонки ведут до тех пор, пока оптическа плотность вытекакицей жидкости при 280 нм не сниз тс до 0,10„The column (3x15 cm) is filled with affinity sorbent (ovogel) at 4 ° C and rinsed with water cooled to 4 s. The column is washed until the optical density of the liquid at 280 nm decreases to 0.10

Раствор лактина после последнего центрифугировани пропускают через колонку с аффинным сорбентом при 4 After the last centrifugation, the lactin solution is passed through a column with an affinity sorbent at 4

после чего колонку промывают охлажденной до 4 С дистиллированной водой до тех пор, пока оптическа плот- ность вытекающей жидкости при 280 нм не снизитс до 0,15. Затем через колонку пропускают 0,10 н., раствор уксусной кислоты или 0,15 М раствор хлористого натри в О,1 М ацетатномwhereupon the column is washed with distilled water cooled to 4 ° C until the optical density of the effluent at 280 nm is reduced to 0.15. Then, 0.10 N, solution of acetic acid or 0.15 M solution of sodium chloride in O, 1 M acetate is passed through the column.

буфере при комнатной температуре и собирают фракции, содержащие лектин. Наличие лектина во фракци х определ ют -с ПОМОЩЬЮ реакции эритроагглю- тинации либо по оптической плотностиbuffer at room temperature and collect lectin containing fractions. The presence of lectin in the fractions is determined with the help of an erythroagglutination reaction or by optical density.

раствора на спектрофотометре. Собранные фракции, содержащие лектин, сливают вместе и диализируют против дистиллированной воды в течение 2 ч при 4 С, затем лиофильно высушивают.solution on a spectrophotometer. The collected fractions containing lectin are poured together and dialyzed against distilled water for 2 hours at 4 ° C, then lyophilized.

Выход готового продукта составл ет 103 мг при элюции лектина уксусной кислотой и 99 мг при элюции лектина раствором хлористого натри . Способ состоит из 13-ти стадий. Продолжительность процесса 15,5 ч. Извест- ньй способ включает 21-у стадию, его продолжительность 51 ч.The yield of the finished product is 103 mg upon elution of the lectin with acetic acid and 99 mg upon elution of the lectin with a solution of sodium chloride. The method consists of 13 stages. The duration of the process is 15.5 hours. The known method includes the 21st stage, its duration is 51 hours.

Claims

Invention Formula

0

35

The method of obtaining lectin by grinding plant material, extraction, precipitation of the target product, purification and drying, characterized in that, in order to simplify the process and reduce the process time, the aerial part of the Kalanchoe Blossfeld (Kalanchoe blossfeldiaha

v.Poelln), extraction is carried out 29-31% - 4U

ethyl alcohol, precipitation is carried out with 78-82% ethyl alcohol TOM5 and purification is carried out on an affinity sorbent, using 0.08-0.12 n as an eluent. acetic acid or 0.1-0.18 M solution of sodium chloride.