SU1393375A1 - Способ биохимического контрол за структурой попул ций рыб - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к ихтиологии и направлено на сохранение рыб и упрощение способа биохимического контрол  за структурой попул ций рыб. Дл  этого у исследуемых рыб в -качы стве пробы отбирают слизь с поверхности их тела. Из полученной пробы путем залити  ее дистиллированной водой экстрагируют белок. После чего полученную смесь (слизь + вода) подвергают центрифугированию и надоса- дочную жидкость исследуют методом электрофореза в полиакриламидном геле, вы вл   малатдегидрогеназную активность (МДГ) тетразолиевым методом. Полученные таким образом данные позвол ют вы вить изоферменты МДГ, характеризующие структуру попул ции. t

Description

00

со

00

00 ел

Изобретение относитс  к способам вы влени  биохимической разнокачест- венности попул ций рыб, может быть использовано в научных цел х и в пра тическом рыбоводстве, например при изучении редких и исчезающих видов, при подборе пар производителей и т.д.

Целью изобретени   вл етс  сохра- нение рыб живыми при отборе проб и ;упрощение способа.

Использование способа позвол ет |не травмировать рыб при отборе проб, а также получить ее/прижизненные био химические характеристики, необходимые дл  изучени  структуры попул ций Способ дает возможность изучить био- |химические характеристики одной и |ТОЙ же рыбы на-разньк этапах онтоге- неза и в разном физиологическом сос то нии, осуществить подбор пар про- |изводителей с соответствующими ха- |рактеристиками, не травмиру  рыб, 1чТо особенно важно дл  рыбоводной 1пракТики.

; Способ осуществл етс  следующим |образом.

I Пойманнзто рыбу в районе спинного 1плавника протирают ватным тампоном,, смоченным в дистиллированной воде, затем тупым скальпелем соскабливают 1пробу слизи (50 мг) и помещают в по- |лиэтид новую центрифз жную пробирку, в которую запивают дистиллированную воду (0,5 мп). Экстрагируют сутки |при при посто нном перемешива- нии, после чего пробу центрифугируют :и надосадочную жидкость используют дл  электрофоретического анализа. Элект рофоретическое фракционирование бел- iKOB провод т в 7%-ном полиакрилайид- ном геле, в щелочной системе буферов с рН 8,9. Вы вление ферментативной активности малатдегидрогеназы (ВДГ) осуществл ют в инкубационном растворе следующего состава; 1 объем 1М малата натри  +1 объем 0,2 М фосфатного буфера, рН 7,4 + 1 объем .0,1%-ного раствора нитросинего тетразоли  + 1 объем 0,1%-ного раствора никотинадениндинуклеотида + 1 объем 0,005 М хлористого магни  1 объем хлористого натри  + 0,1 мг/мл феназинметасульфата. Вы вление производитс  в термостате при 37°С в течение 2ч.

Существенное отличие слизи от об- гразцов,которые ранее использовались

дл  анализа, состоит в том,.что она не  вл етс  какой-либо тканью, а представл ет собой продукт жизнеде тельности организма. Однако слизь обладает характеристиками, позвол ющими использовать ее дл  проведени  биохимического контрол  за структурой попул ций рыб,

Пример. Рыбу в районе спинного плавника протирают ватным тампоном , смоченным в. дистиллированной воде. Затем тупым скальпелем соскабливают пробу слизи (50 мг) и помещают в полиэтиленовую центрифужную пробирку, в которую заливают дистиллированную воду (0,5 мл). Пробу экстрагируют в течение суток в термостате при при посто нном перемешивании, после чего ее центрифугирувот и надосадочную жидкость используют дл  электрофорети- ческого анализа. Электрофоретическое- фракциопирование белков провод т в 7%-ном полиакриламидном- геле, в щелочной системе буферов с рН 8,9, Вы вление ферментативной активности ВДГ осуществл ют в инкубационном растворе следуюп5его, состава: 1 объем 1 М малата натри  + 1 объем 0,2 М фосфатного буфера, рН 7,4 + 1 объем О, 1.%-но- го раствора нитросинего тетразоли  + + 1 объем О,-1 %-ного раствора никотинадениндинуклеотида + 1 0,005М хлористого магни  + 1 объем хлористого натри  О,1 мг/мл феназинметасульфата . Вы вление ферментативной активности ВДГ производ т в термостате при 37°С в течение 2ч.

Как в мьшцах, тик и в слизи вы вл ютс  одни и те же изоферменты МДТ, различающиес  лишь по интенсивности их окрашивани .

При окрашивании экстрактов слизи после фракционировани  красителем на общие белки (Кумасси голубой Р-250 в концентрации 0,25%) на проте- инограммах можно обнаружить более полутора дес тков компонентов,

Таким образом, помимо фракций, обладаюш;их малатдегидрогеназной активностью и составл ющих лишь небольшую часть белков слизи, имеетс  еще целый р д фракций, которые можно использовать дл  изучени  попул цион- ной структуры рыб.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ биохимического контрол  за структурой попул ций рыб, вклгочаю31393375

   щий отбор у исследуемых ры,б пробы,попул ций рыб по полученным данным, экстрагирование из нее белка, центри-отличающи йс  тем, что, фугирование экстракта с получениемс целью сохранени  рыб живьми надосадочной жидкости, фракционирова -боре проб и упрощени  способа, в канне растворенных в ней белков мето-честве исследуемой пробы используют дом электрофореза в цолиакриламидномслизь, которую берут с поверхности геле и вы вление малатдегидрогеназ- кожи рыб, а дл  экстрагировани  бел- ной активности тетразолиевым мето-ка слизь запивают дистиллированной дом с последзтощей оценкой структуры IQводой.