SU1303610A1 - Способ определени концентрации жизнеспособных спор бактерий - Google Patents
Способ определени концентрации жизнеспособных спор бактерий Download PDFInfo
- Publication number
- SU1303610A1 SU1303610A1 SU843771185A SU3771185A SU1303610A1 SU 1303610 A1 SU1303610 A1 SU 1303610A1 SU 843771185 A SU843771185 A SU 843771185A SU 3771185 A SU3771185 A SU 3771185A SU 1303610 A1 SU1303610 A1 SU 1303610A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- spores
- viable
- concentration
- medium
- minutes
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 17
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims abstract description 16
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 8
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 claims description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 claims description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 claims description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 210000004215 spore Anatomy 0.000 claims 9
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims 1
- 210000004666 bacterial spore Anatomy 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 6
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 abstract 1
- 230000000967 entomopathogenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 6
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241001631715 Dendrolimus Species 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 102100026436 Regulator of MON1-CCZ1 complex Human genes 0.000 description 1
- 101710180672 Regulator of MON1-CCZ1 complex Proteins 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000036387 respiratory rate Effects 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к микробиологической промьшшенности и может быть использовано дл количественного определени жизнеспособных спор микроорганизмов в различных препаратах , в частности энтомопатогенных. Цель изобретени - упрощение способа и сокращение длительности определени . Готов т суспензию спор в дистиллированной воде, гомогенизируют до получени однородной мелкодисперсной суспензии, прогревают при суб- летальной температуре 69-75 С, ввод т в питательную среду, выдерживают 10-30 мин, отбирают пробу, устанавливают в термостатируемую чейку по- л рографа, измер ют скорость поглощени кислорода и рассчитывают концентрацию (Т) жизнеспособных спор микроорганизмов по формуле: T K VjQ j где К - эмпирический коэффициент, характеризующий культуру микроорганизмов , кл-мин/мл м; (Ог скорость поглощени кислорода, м/мин. 1 з.п. . ф-лы, 5.ил., 2 табл. о с (Л со о 00 О5
Description
рп
Изобретение отно логической быть использовано го определени жизг микроорганизмов в ратах.
Целью изобретенна щение способа и ности процесса
На фиг. 1 установки дл на фиг, 2 - поглощени кислорода держивани после av 70°С в течение 10- зависимость скорости
итс к микробио промышле|нности и может
количественно еспособных спор р| аз личных препа вл етс упро- сойращение длитель- определени . изображена
рсуще ствлени
зaвиcи ость
(О
лорода спорами от при 60, 70 и 80°С; висимость скорости рода от концентрац1 и изменение силы ток
блок-схема
способа скорости от времени вы- тивации и при мин; на фиг. 3 поглощени кис ремени активации на фиг. 4 - за- поглощени кисло спор ; на фиг.5 во времени.
зав симости
Способ заключае 1|с
Биомассу, в
центрации спор мик1: оорганизмов (0,1-1 г сухого
10 г пасты, или 10ной жидкости), дистиллированной вс)ды
Нижние пределы от чувствительности верхние определ ютс ности измерений пр поглощени кислоро;,а тарных дл высокой роорганизмов,
следующем, от конв ней или 1г культураль- сусйендируют в 100 мл
концентрата
100
разведений завис т установки, а
снижением точ- высоких скорост в чейке, харак концентрации микПолученную суспфнзию низируют на микрои лучени однородной суспензии. При исп измельчител РТ-2 : ществл ют 1,5-2 ми) реактивируют путем сублетальной темпе; питательную среду i оптимальной дл ро- Отбирают пробу, ус мостатируемую чей: рость поглощени к: тывают концентраци: ных спор
спор гомоге- мельчителе до по- мелкодисперсной шьзовании микро- омогенизацию осу- . Затем споры прогрева их при атуре, ввод т в ; вьщерживают при ixa температуре, анавливают в тер у, измер ют ско- cлopoдa и рассчи 0 (Т) жизнеспособмикроорга измов по формуле
де К Чог
.V(,J
эмпирическ
характериз
микроорган
скорость
рода.
1 )
й коэффициент, ующий культуру дзмов; пЬглощени кислоКоэффициент К определ ют экспе- риментэльно. Дл этого определ ют титр одного образца микробиологическим способом и скорость поглоще6 ни кислорода V;
(oz
данным способом.
Коэффициент К рассчитывают по формуле , п .
;
К -- п
V
(oj
где п - количество образцов.
Данный способ может быть осуществлен дл определени количества жизнеспособных спор различных видов мик- роорганизмов,.
Предлагаемый способ осуществл етс на установке., представленной на фиг. 1.
Установка состоит из чейки 1 с мембранными датчиками типа Кларка, пол рографа 2, самописца 3, термостата 4 и магнитной мешалки 5.
К pa6o4eNry электроду термостати- руемой чейки от пол рографа подаетс напр жение, и после выдерживани суспензии реактивированных спор в чейке в течение 20-30 мин при посто нном перемешивании магнитной мешалкой на самописце регистрируют зменение в чейке силы тока, которое р мо пропорционально изменению кон- ентрации кислорода в образце.
Скорость поглощени кислорода в образце наход т по формуле
35
V,
СО.)
.. ГОг
где о - концентраци кислорода в дистиллированной воде при услори х (температура,, давление) измерени /U ;
-В
1с значени силы тока дл
контрольных растворов соответственно дистиллированной воды и бескислородного раствора (0,1 г сульфит натри на 100 Mji воды), мкА;
45:
-
1 значени силы тока дл
исследуемого образца соответственно в моменты времени /, и
Величина
А (константа 1, -1
чейки) характеризует чувствительность используемых датчиков чейки к кислороду ,1
It((0. у скорость изменеС - о,
НИЯ силы тока в образце в единицу времени, которую наход т из пол ро- граммы, т.е.
Со.)
A-V
С помощью установки, описанной выше, была исследована зависимость скорости дыхани спор бактерий Bacillus thuringiensis от времени.
Вы вленна зависимость скорости поглощени кислорода от времени активации представлена на фиг. 2.
Из представленных данных видно, что через 20 мин дл различных образцов , независимо от времени активации наблюдаетс посто нна скорость дыхани .
Было исследовано вли ние температуры и времени активации спор на скорость поглощени кислорода (фиг. 3). Установлено, что при активации спор при 60 С скорость поглощени кислорода достигает максимума через 50 мин нагрева.
Скорость поглощени кислорода при обработке спор при 70 С в течение 20-50 мин максимальна , при увеличении продолжительности более 50 мин отмечаетс снижение скорости погло- щени , что обусловлено гибелью части спор. Активаци же спор при 80 С происходит быстрее, но уже через 10 мин клетки начинают гибнуть.
В св зи с полученными данными оптимальными услови ми активации спор бактерий Bacillus thuringiensis вл ютс : температура 70 С-, врем 20- 50 мин.
Было установлено, что максимальна скорость поглощени кислорода спорами пропорциональна конструкции клеток в исследуемом образце (фиг. 4
Пример 1. Концентрацию жиз- неспособных спор определ ют в сухом препарате, полученном культивированием штамма Bacillus thuringiensis var dendrolimus 49-8. Дл этого навеску концентрата (0,2 г) развод т в 100 мл дистиллированной воды, гомогенизируют на микроизмельчителе РТ-2 в течение 2 мин. Полученную суспензию прогревают в вод ной бане при 70 С в течение 20 мин, затем охлаж
дают проточной водой.
В пробирку заливают 5 мл суспензи обработанных спор и 5 Ыл водной питательной среды, содержащей 0,9% NaCl, 0,9% глюкозы и 0,134% инозина. Полученную суспензию помещают в вод ную баню и выдерживают 15 мин. Затем отбирают 1,5 мл суспензии, заливают в чейку пол рографа и через 10 мин (минимальное врем выхо на
рабочий режим установки) записывают пол рограмму-(рис. 5).
Рассчитывают концентрацию жизнеспособных спор следующим образом.
Наход т значение силы тока в моменты времени сГ 21 мин; ,8 мкА; I.
б 25 мин;
,.0,4 мкА;
(0.)
где
0,8-0,4 , 1 , 0,1 мкА/мин
2,27 -10 0,,227. 10 м/мин;
2,2710 м/мкА - константа чейки .
Ко 5ффициент К дл спор бактерий 5 .Bacillus thuringiensis 49-8 равен (0,3510,04)- 10 кл-мин/м-мл; т:„
0,35 1о -2,27- ,9-10 кл/мл С учетом сделанных разведений
титр сухого концентрата Т
СПО
Р
в кон
центрате равен 79,2-10 кл/мг,
П р и м е р 2. Дл определени концентрации жизнеспособных спор используют препарат из Bacillus thu- ringiensis штамм 98.
Дл этого 1 г концентрата внесли в 100 мл дистиллированной воды. Дальнейшие операции повторили, как в примере 1 .
Экспериментально установлено, что коэффициент К дл спор Bacillus thuringiensis № 98 равен 1,1710,08
XlO КГ МИН/МЛ М.
Из пол рограммы контрольных растворов наход т
1ц-т,..-0,936 мкА.
- 1ь-1с
По формуле А
наход т
0
5
А
10
,-4
2,19
-4
10 м/мкА;
0,936
,09 мкА/мин (из пол рограммы
Исследуемой суспензии J; 0,19 10 м/мин
Чог) Титр водной суспензии спор
,19-10- - 1,17--10 0,22 х10 кл/мл, при пересчете на сухой концентрат
0 с учетом разведений Т(.44-10 кл/мг. Пример 3. Исследовали споры Вас. subtilis, выращенные на кос ках м со-пептонного агара. Суспензию спор гомогенизировали и выдерживали в во5 д ной бане при в течение
15 мин дл активации, затем охлаждали и разводили в отношении i:1 питательной средой следующего состава: 0,9 г NaCl+0,09 г глюкозы + 0,2 г
Ь-о6 аланина на 10 воды. Затем образе|ц статированную при графа, выдерживали ровали скорость по в образце.
Экспериментальн эффициент К дл равен: ,58fO,04
Из пол рограмм ров получено 1,-1 рограмм исследуемой
51
чл дистиллированной
помещали в термо- 20°С чейку пол ро- 25 мин и регистри- лощени кислорода
СП эр
э определенный коВас . subtilis 10 кл мин/мл м. контрольных раство- 0,9 мкА, Из пол - суспензии:
V. 0,04 1кА/мин
г, оЛ
to
.85
.,
турные данные.
Скорость поглощени образце равна:
Тог
2,85-10
.-4
0,9
-.С
-4
UO м - кисл
,0..0,,2соответственно Титр образца равен:
I
0,58 МО
х10 кл/мл.
Проверку корре1| ции определени титра вестным способами, биологическим, проводили ми. Дл концентрата ringiensis дл одюго повторност х опре;;ел ли биологическим и бами.
Сравнительные нию концентрации бактерий Bacillus л рографическим и способами
представлены
0,12МО 7
результатов предлагаемым и из в частности микр„ .„... двум пут спор Вас. thu-
образца в сем
титр микро- пйедлагаемым спосо;;анные по определе ;визнеспособных спо thuringiensis по- микробиологически
в табл. 1.
Таблица 1
lO м/мин
л9
Т-10 . кл/мг по способу
0,24 0,24 0,23 0,24 0,22
предлагаемому
85,7 84,7 79,4 83,3 77,7
микробиологическому
70,2 89,1 80,3 63,5 78,0
Продолжение табл.1
±0,1 1
13,9
±8,01
25 Дл спор Bacillus subtilis (три образца в двух повторност х) определ ли титр микробиологическим и предлагаемым способами. Результаты экспериментальных данных приведены в
Таблица2
5
0
5
0,11 0,12 0,33 0,33 0,26 0,25
6,38
6,95
19,14
19,14
15,08
14,5
5,36
6,12
20,47
21,02
5,64
13,72
50 Данный способ позвол ет в 15- 20 раз ускорить процесс определени концентрации жизнеспособных спор, снижает трудоемкость и исключает субъективность.
55
Claims (2)
1. Способ определени концентрации жизнеспособных спор бактерий.
713
предусматривающий активацию спор путем вьщержки их в питательной среде в течение 15-30 мин и термообработки с последующим определением количе- ства спор расчетным путем, отлича ю щ и и с тем, что, с целью упрощени способа и сокращени длительности процесса определени , перед выдерживанием спор в среде споры внос т в дистиллированную воду, го- могенизируют, термообработку спор осуществл ют при сублетальной температуре в водной суспензии перед внесением в питательную среду, а после выдерживани в среде отбирают сус- пен зию спор и измер ют в ней скорость поглощени кислорода, а концентрацию жизнеспособных спор рассчитывают по формуле
10
(0.)
o,Y
где Т - концентраци жизнеспособных
спор, кл/мг;
К - эмпирический коэффициент, храктеризующий культуру, кл мин/м мл;
- скорость поглощени кислорода , м/мин.
2. Способ по п. 1, отличающийс тем , что при определении количества жизнеспособных спор бактерий Bacillus thuringiensis в качестве питательной среды используют среду, содержащую 0,9% хлористого натри , 0,09% глюкозы, 0,134% инозина, остальное - вода, а термообработку осуществл ют при 69-7l C в течение 20-50 мин.
срие.1
Vet
-if. мин
fffSO..
«3
«7
ff.20
/wi//y
/г w
Фиа
jit , цл
аг
те т. мин
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU843771185A SU1303610A1 (ru) | 1984-06-11 | 1984-06-11 | Способ определени концентрации жизнеспособных спор бактерий |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU843771185A SU1303610A1 (ru) | 1984-06-11 | 1984-06-11 | Способ определени концентрации жизнеспособных спор бактерий |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1303610A1 true SU1303610A1 (ru) | 1987-04-15 |
Family
ID=21130870
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU843771185A SU1303610A1 (ru) | 1984-06-11 | 1984-06-11 | Способ определени концентрации жизнеспособных спор бактерий |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1303610A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113061565A (zh) * | 2021-04-12 | 2021-07-02 | 东北农业大学 | 一种禾谷镰孢分生孢子快速形成方法 |
-
1984
- 1984-06-11 SU SU843771185A patent/SU1303610A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Фихман Б.А. Микробиологическа рефрактометри , М., 1967, с. 172, 179, 220-223, 240-244. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113061565A (zh) * | 2021-04-12 | 2021-07-02 | 东北农业大学 | 一种禾谷镰孢分生孢子快速形成方法 |
| CN113061565B (zh) * | 2021-04-12 | 2023-03-24 | 东北农业大学 | 一种禾谷镰孢分生孢子快速形成方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Harrison et al. | Fluorimetric technique for monitoring changes in the level of reduced nicotinamide nucleotides in continuous cultures of microorganisms | |
| DE69020555T2 (de) | Fällungstest für mikroorganismen. | |
| DE3882862T2 (de) | Verfahren zum Extrahieren von ATP. | |
| Schimz et al. | Rapid decrease of ATP content in intact cells of Saccharomyces cerevisiae after incubation with low concentrations of sulfite | |
| Chang | Studies on hemoflagellates: iV. Observations concerning some biochemical activities in culture, and respiration of three species of Leishmanias and Trypanosoma Cruzi | |
| US7238496B2 (en) | Rapid and automated electrochemical method for detection of viable microbial pathogens | |
| Stalons et al. | Effect of culture medium and carbon dioxide concentration on growth of anaerobic bacteria commonly encountered in clinical specimens | |
| Lindstrom et al. | The relationship between photosynthesis and nitrogen fixation | |
| SU1303610A1 (ru) | Способ определени концентрации жизнеспособных спор бактерий | |
| West et al. | Growth factor requirements of the root nodule bacteria | |
| Scheper et al. | Monitoring of NADH-dependent culture fluorescence during the cultivation of Escherichia coli | |
| DE69119791T2 (de) | Hochempfindliche Bestimmungsmethode für L-Carnitin und Zusammensetzung für einen Reagenziensatz | |
| EP0036274B1 (en) | Methods of monitoring micro-organisms and media for culture | |
| Vennesland et al. | The oxidation-reduction potential requirements of a non-spore-forming, obligate anaerobe | |
| DE3153683C2 (ru) | ||
| Simpson et al. | Microbiological assay of tetracycline with a potentiometric CO2 gas sensor | |
| Polster et al. | Production of reddish-brown pigment from dl-tryptophan by Enterobacteria of the Proteus-Providencia group | |
| DE3702159C2 (ru) | ||
| Demain et al. | Dissociation of spore germination from outgrowth by use of auxotrophic mutants of Bacillus subtilis | |
| Fazel‐Madjlessi et al. | Analysis of fermentation processes using flow microflourometry: Single‐parameter observations of batch bacterial growth | |
| Sanders et al. | A study of urease activity in cells of the genus Brucella | |
| JP2007513636A (ja) | 微生物の同定の電気化学的検定法 | |
| RU2086652C1 (ru) | Способ количественного определения l-пролина | |
| DE3741198A1 (de) | N-acetylmannosamindehydrogenase, verfahren zu deren herstellung, verfahren zur quantitativen analyse von n-acetylmannosamin oder sialylsaeure und gebinde fuer die quantitative analyse | |
| DE69118641T2 (de) | Acyl-carnitin-Esterase, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verfahren zur Analyse von Acyl-carnitinen |