Изобретение относитс к бессереб р ной фотографии, точнее к фотомэтериалам дл получени полутоновых черно-белых и окрашенных изображений . Цель изобретени - удешевление фотоматериала, повышение его светочувствительности и качества изображени . Способ получени ферментного фотографического материала осуществл етс следующим образом. Приготавливают полимерный- листовой материал, несущий светочувствительные реакционноспособные группы. Дл этого полимерную подложку, например целлюлозу, карбоксиметил- целлюлозу, фосфоцеллюлозу, желатину или карбоксиметилсефадекс, модифицируют бифункциональными фотореаген тами с помощью реакций алкилировани или ацилировани . В качестве би функциональных фотореагентов исполь зуют ( ароматические азиды, содержаши л-хлорэтиламиногруппы, карбоксильные амино- и другие реакционноспособные группы, модифицирующие по лимерную подложку. Нанос т на подложку раствор активного фермента, например щелочной фосфотазы, лактатдегидрогеназы, пер оксидазы, субтилизина, о -химотрипси на и др. (предварительно раствор фе мента фильтруют через полимерный но ситель дл удалени сильно сорбирующихс агрегатов )и высушивают. Способ получени изображени ; на полученном, как описано, вьше фо томатериале осуществл етс следующим образом. Фотоматериал экспонируют через г логеносеребр ный полутоновьш негати или через трафарет с помощью ртутных ламп ДРШ-500 или БУФ-15. В результате фоторазложени ароматических азидов с образованием высокореакциоиноспособных нитренов в экспонированных участках фермент ковален . но и неспецифично, т.е. не по актив ному центру, присоедин етс к полимерной матрице без заметного уменьшени своей каталитической активнос ти. Закрепл ют скрытое изображение вымьшаннем несв занного фермента, например обрабатывают буферным раст вором с больщой ионной силой, содержащим поверхностно-активные веA2 щества, например 0,1 М НС1, 1 М NaCl и Тритон Х-100. В результате ковалентло не св занный фермент переходит в раствор и на подложке образу- етс стабильное скрытое изображение, состо щее из фотоиммобилизованного фермента. Про вл ют скрытое изображение методами гистохимической визуализации ферментов, т.е. обрабатывагот водными растворами хромогенных: субстратов, специфичных дл данного фермента, например oi-нёфтилфосфат дл фосфотазы , Н202 с о-дианизидином дл пероксидазы , индоксилбутират дл субтилизина и др. В результате ферментативных реакций в местонахождении последнего происходит накопление красител , что и приводит к образованию видимого изображени . Предлагаемьй способ применим к ферментам практически всех классов, поскольку в указанных услови х к подложке ковалентно присоедин ютс любые белки, наход щиес на полимерном нрсителе. Это определ етс способностью ароматических азидов при облучении УФ-светом давать высокореакционноспособные частицы - нитре- ны, способные модифицировать практически все типы химических св зей, причем квантовый выход фотолиза ароматических азидов в полосе поглощени близок к единице. Выбор под- ложек с ковалентно присоединенными азидогруппами весьма широк. Многообразие, методов гистохимической визуализации каталитически ак- тивньпс ферментов позвол ет получать изображение любого цвета, в том числе и черно-белое. Другими достоинствами предлагаемых способов вл ютс легкость получени полутонового изображени и возможность использовани ферментативных препара- тов низкой степени очистки, что значительно снижает стоимость фотоматериала . Изобретение иллюстрируетс примерами с ферментами классов гидролаз и оксидоредуктаз. Во всех примерах, если это специально не оговорено в тексте, растворитель - вода, темпе- ратура комнатна (20-25 С). Пример I , а) Получение светочувствительного полимерного материала. ферментативной реакции с сол ми ди азони при комнатной температуре О, I- ч в растворе, содержащем: ot-Нафтилфосфат натри , мг5 Диазоль синий 2 С, мг12 1 М трис: НС1, 1 М NaC1, 1 Ш MgClj, ZnCL , рН 9,6, После про влени получают черно белое изображение, которое многокр но промывают водой и сушат. Пример 3. а)Получение полимерного светочувствительного материала. Светочувствительную карбоксимет целлюлозу получают, как в примере 2 а. б)Нанесение фермента на светочувствительный материал. 10 мг пероксидазы из хрена (Re nal, ВНР) с активностью 400 ед./м раствор ют в 100 мл 0,,1 М ацетата натри , рН 5,0, и фильтруют через карбоксиметилцеллюлозу. Светочувст вительный носитель погружают на 1-3 с в раствор фермента и промаха ют фильтровальной бумагой. в)Получение скрытого изображени . Фотоматериал экспонируют, как в примере 1 в. г)Закрепление изображени . Экспонированный образец отмываю от несв занного фермента при 20- 37с дважды по 15 мин раствором 1 примера 1,затем 15 мин О,1 М KNOj О,1 М раствором ацетата натри , рН 5,0. д)Про вление. Закрепленное скрытое изображени из фотоиммобилизованной пероксидазы про вл ют при комнатной темпера туре 0,5-1 ч в растворе, содержаще мл: 0,01 М о-дианизидин в этаноле1 0,1 М ацетат натри , 1 мМ CaCl2 , рН 5,0 10 3%-на перекись , водорода 0,5 Получают темн.о-коричневое изо- бражение на белом фоне, которое Зг 4 раза по 2-3 мин промывают водой и сушат. Пример 4. а) Получение полимерного светочувствительного материала. Задубленный желатиновый слой фо- топластинки с отмытым гапогенидом серебра смачивают раствором N-ме- тил-И-(2-хлорэтил)-п-азидобензиламин гидрохлорида в абсолютном метаноле ,(50 мг/мл из расчета 0,1 мл/см и термостатируют 12 ч при комнатной температуре. Алкилированный желатиновый слой последовательно промывают в течение 1 ч 1 М NaCl, 3-4 раза по 2-3 мин водой и сушат на воздухе. Нанесение фермента, получение скрытого изображени , закрепление его и про вление провод т, как в примере 2 б, в, г, д. Пример 5. а) Получение полимерного светочувствительного материала. Лист хроматографической бумаги ФН-П (8x40 см) помещают в колбу на 500 мл и приливают раствор п-нит- робензоилхлорида (П г) в 450 мл пирнцина . Реакционную смесь нагревают до 80с и выдерживают при этой температуре 6 ч. После этого пиридиновый раствор сливают, а бензоилиро- ванную целлюлозу трижды промывают разбавленным раствором , 3-4 раза по 2-3 мин водой, вымачивают 1 ч в 0,01 М , оп ть промывают водой , затем ацетоном и сушат на воздухе . Восстанавливают п-нитробензой- ный эфир целлюлозы 15 .мин при в растворе, содержащем 500 мл 5%- ного раствора сегнетовой соли в воде: 10 мл 15%-ного раствора ИСЦп-Аминобёнзойный эфир целлюлозы 3- 4 раза по 2-3 мин промывают водой, этанолом и сушат на воздухе. Диазо- тирование материала провод т при 0, в течение 0,5 ч в растворе 3 г NaNOj в 100 мл, 0,01 М HCI. Эту и последующие операции провод т в затененном месте. После этого бумагу промывают лед ной водой и помещают в раствор 2,5 г NaN,, в 0,01 М HCI на 0,5 ч при 0-5С. Светочувствительный п-азидобензойный эфир целлюлозы 3-4 раза по 2-3 мин промывают цодой, затем ацетоном и сушат. Нанесение фермента, получение скрытого негативного изображени . 3 Лист фосфоцеллюлозы (Watraan Р 8 в )opMe промывают трижды в 1 М растворе NaCl по 15 мин, затем 34 раза водой по 2-3 мин и сушат на воздухе. Полученную натриевую соль фосфоцеллюлозы помещают в плоско донную пр моугольную кювету, нанос раствор N-метил-Н-(2-хлорэтил)-п-аз добензиламин гвдрохлорида в абсолют ном метаноле (30 мг/мл) из расчета 0,1 мл/см. Эту и последующие опера ции провод т в затененном месте или при красном свете. Кювету термоста- тируют в течение 3 ч.при ЗОС. Модифицированную фосфоцеллюлозу после довательно отмывают в 1 М NaCl 1 ч 3-4 раза водой по 2-3 мин, 1 ч этанолом , ацетоном и.сушат. б)Нанесение фермента на светочувствительную подложку. Суспензию лактатдегидрогеназы из мьш1ц свиньи (Reanal, ВНР), кон центраци 10 мг/мл, активность 2 ед /мг, в 3 М (Ш14)2304, разбавл ют в 10 раз 1 М раствором трис: НС1, рН 8,0. Полученный раствор фильтруют через фосфоцеллюлозу. Светочувствительный материал погружают на 1-3 с в фильтрованный раствор фермента и промакают фильтровальной бумагой, в)Получение скрытого негативного изображени . Полученный фотоматериал экспонируют через негатив прлным спектром ДРШ-500 0,2-4 мин с рассто ни 15 с или трем лампами БУФ-15 в течение 10-20 с через трафарет с рассто ни 40 см. г)Закрепление проводитс при 20-37С дважды по 15 мин раствором 0,1 М трис: НС1, 1 М NaCl, 1 мМ MgCl, 10 ZnCl, 5 г/л Тритон-Х 100, рН 8,5 (раствор 1), затем 15 мин раствором 1 М фосфата натри рН 7,5. д)Про вление. Отмытое от несв занного фермента скрытое изображение про вл ют при в течение 0,5-1 ч в растворе, содержащем: Никотинаденин- динуклеотид, мг20 Феназинметасульфат , мг2 1 М лактат натри , мл4 4. 4 Нитротетразо- лиевый синий, 0,1 М фосфат натри , рН 7,4, После про влени получают фиоле- товое изображение на белом фоне, ко торое 3-4 раза по 2-3 мин промьюают водой и сушат. Пример2. а) Получение светочувств5 тельногп полимерного материала. , Лист карбоксиметнпцеллюлозы (Watman СМ 82) в СК -форме на 15 мин погружают в 0,01 М раствор NaOH, вы-держивают I ч в I М NaC1 и сушат при комнатной температуре. Полученную натриевую соль карбоксиметилделлкшо- зы в кювете смачивают раствором ал- килирующего фотореагента К-иетил-N- -(2-хлорэтил)-п-азидобензиламин гид- рохлорида в абсолютном метаноле (30 мг/мл) из расчета 0,1 мл/см. Эту и последующие, операции провод т в затененном месте. Кювету термостати- руют 3 ч при 50 С. Далее промывают 1 ч в 1 М NaCl, 3-4 раза по 2-3 мин в воде, I ч в этаноле, ацетоне и сушат . б)Нанесение фермента на светочувствительный материал. 50 мг щелочной фрсфотазы из кишок цыпл т (Reanal, ВНР) с активностью 0,4 ед/мг раствор ют в 100 мл раствора I мМ трис: НС1, 1 М NaCl, рН 8,2, добавл ют 10 г (. и фильтруют через карбоксиметилцел- лкшозу. Модифицированную подложку на 1-3 с погружают в раствор фермента и промакают фильтровальной бумагой, в)Получение скрытого изображеии . Приготовленный фотоматериал экспонируют через негатив лампой ДРШ-500 в течение 1-4 мин с рассто ни 15 см или трем лампами БУФ-15 в течение 15-20 с через трафарет с рассто ни 40 см. г)Закрепление изображени проод т при 20-37°С дважды по 15 мин аствором 1 примера 1,затем 15 мин аствором 1 мМ трис: НС1, 1 М NaCl, 1 MMMgCl2, lO ZnClj, рН 9,2. д)Про вление. Закрепленное скрытое изображение з фотоиммобилизованной щелочной осфотазы про вл ют методом одноременного азосочетани продуктов