SU1183539A1 - Холестериловый эфир о-кумаровой кислоты в качестве субстрата для определения активности холестеролэстеразы. - Google Patents
Холестериловый эфир о-кумаровой кислоты в качестве субстрата для определения активности холестеролэстеразы. Download PDFInfo
- Publication number
- SU1183539A1 SU1183539A1 SU843702073A SU3702073A SU1183539A1 SU 1183539 A1 SU1183539 A1 SU 1183539A1 SU 843702073 A SU843702073 A SU 843702073A SU 3702073 A SU3702073 A SU 3702073A SU 1183539 A1 SU1183539 A1 SU 1183539A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- substrate
- coumaric acid
- cholesterolesterolesterase
- acid
- determining activity
- Prior art date
Links
Landscapes
- Steroid Compounds (AREA)
Description
Изобретение относится к созданию'’ новых химических соединений, а именно к субстратам холестеролэстеразы (КФ 3.1.1.13), которые могут использоваться для определения активности 5 этого фермента в промышленности, а также в диагностических целях, в медицине .
Цель изобретения - упрощение определения активности холестеролэстеразы.
Пример. Холестериловый эфир о-кумароврй кислоты
синтезирован по следующей схеме:
сн= снон
соон
сгеооснэ ΝαΟΗ *
©С
II
СООН
СОС1
СН=СНХ
ОСООСН3
III
Холестерин^
ПириЗин
©с
IV
Синтез холестерилового эфира 0 кумаровой кислоты.
A. О-Карбометокси-транс-коричная кислота (II). Получают по [1], вы- 35 ход 90%, т.пл. 185-186°С (этанол), лит.т.пл. 185°С [1].
Б. Хлорангидрид о-карбометокси-транс-коричной кислоты (III). Смесь 2,22 г (0,01 моль) (II) и 2,8 мл 40 (0,033 моль) хлористого тионила кипятят 3 ч с обратным холодильником, избыток хлористого тионила отгоняют в вакууме. Получают 2,38 г хлорангидрида (III). Выход 98%, т.пл. 61-62°С 45 (гексан).
Найдено, %: С1 14,48, 14,69. с9нтсю4
Вычислено, %: С1 14,67.
B. Холестериловый эфир о-карбоме- 50 токси-транс-коричной кислоты (IV).
К раствору 2,64 г (0,066 моль) холестерина и 1,7 мл сухого пиридина в 100 мл сухого бензола прибавляют по каплям при 7-10°С раствор 2,4 г 55
(0,01 моль) хлорангидрида (III) в 30 мл сухого бензола, перемешивают при комнатной температуре 2 ч, фильтруют, к фильтрату прибавляют 250 мл эфира и последовательно промывают его 3%-ной соляной кислотой, водой, 10%-ным аммиаком и водой. Эфирный экстракт упаривают, получают 3,75 г (96%) практически чистого соединения (IV), т.пл. 50г52°С (этанол), Кг
о
0.98; МГ_0-С-СНз 1790см*4, н
1)Ар—С=С—СООН » 1720 см-1. п
Найдено, %: С 76,88, 77,04,
Н 9,26, 9,28.
сзвну5о5.
Вычислено, %: С 77,12, Н 9,36.
Г. Холестериловый эфир 0-кумаровой
кислоты (I). Раствор 3,0 г (5,3 ммоль) соединения (IV) в 400 мл этанола перемешивают при комнатной температуре с 10 мл 1н. едкого натра в течение 20 ч, подкисляют 1г. соляной кислотой, осадок отделяют. Выход соединения (I) 2,3 г (81%), т.пл. 190—192°С (этанол), Кр 0,91; 9 Аг-СН=СН-СООК 1690 см'1 .
3
1 183539
4
| Найдено, %: С | 81,26, 81 | ,0 | |
| Н | 9,90, 10, | 01 | |
| СЭЬН 52°3' | |||
| Вычислено, %: | С 81,15, | Н | 9,83. |
| Хроматографию | проводят | в | тонком |
слое силикагеля ча пластинах 511и£о1 υν 254 в системе толуол-этилацетат (1:1). ИК-спектры сняты в таблетках КС 1 (3%) на ИК-спектрометре ипхсаш 8Р 1000. 10
Определение активности холестеролэстеразы.
При гидролизе холестерилового эфира О-кумаровой кислоты холестеролэстеразой образуется 0-кумаровая кислота, флуоресцирующая в щелочной среде, по измерению прироста интенсивности флуоресценции определяют активность холестеролэстеразы. 20
1 мг холестерилового эфира о-кумаровой кислоты растворяют в 200 мкл эфира и смешивают с 40 мкл Тритона Х-100. Затем добавляют 1 мл буферного раствора, содержащего 0,3 М фос- 25 фат калия и 5 мМ холат натрия (рН 6,6). Смесь тщательно перемешивают, избегая пенообразования. Полученная таким образом дисперсия субстрата стабильна в течение, по крайней ме- 30 ре 1 сут.
0,1 мл субстратной смеси добавляют к 1 мл указанного буферного раствора и нагревают до 37°С. Затем добавляют 1 мкг холестеролэстеразы (выделенной из поджелудочной железы свиньи) в 20 мкл 0,05 М калий-фосфат кого буферного раствора, содержащего 0,1М ЫаС1 и 7 мН 2-меркаптоэтанола (рН 6,6). Инкубируют реакционную смесь при 37°С. Отбирают пробы по 0,1 мл и фиксируют их добавлением 0,5 мл буферного раствора, содержаще го 0,2 М К2СО3 и 0,2 Μ Η3Β03 (рН 10,4). Затем добавляют 5 мл дистилли рованной воды и измеряют прирост интенсивности флуоресценции. В данном случае прирост интенсивности на линейном участке кинетической кривой, определяемый на флуорометре БИАН-130 составляет 500165 ед. шкалы флуорометра за 10 мин инкубации реакционной смеси. Это соответствует образованию 0,410,05 мкг о-кумаровой кисло ты или удельной активности холестеролэстеразы 1812 мкмоль(мг белка ч (указана стандартная ошибка при дове рительном уровне 95%). Образование 0-кумаровой кислоты в результате ферментативной реакции подтверждено |тонкослойной хроматографией и анализом спектров флуоресценции.
Claims (2)
- Холестериловый эфир о-кумаровой кислоты формулыв качестве субстрата для определения активности холестеролэстеразы.00соСПсосо1 183539
- 2
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU843702073A SU1183539A1 (ru) | 1984-01-04 | 1984-01-04 | Холестериловый эфир о-кумаровой кислоты в качестве субстрата для определения активности холестеролэстеразы. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU843702073A SU1183539A1 (ru) | 1984-01-04 | 1984-01-04 | Холестериловый эфир о-кумаровой кислоты в качестве субстрата для определения активности холестеролэстеразы. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1183539A1 true SU1183539A1 (ru) | 1985-10-07 |
Family
ID=21104031
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU843702073A SU1183539A1 (ru) | 1984-01-04 | 1984-01-04 | Холестериловый эфир о-кумаровой кислоты в качестве субстрата для определения активности холестеролэстеразы. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1183539A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000063328A (ja) * | 1998-02-13 | 2000-02-29 | Givaudan Roure Internatl Sa | アリ―ル―アクリル酸エステル |
-
1984
- 1984-01-04 SU SU843702073A patent/SU1183539A1/ru active
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000063328A (ja) * | 1998-02-13 | 2000-02-29 | Givaudan Roure Internatl Sa | アリ―ル―アクリル酸エステル |
| USRE43006E1 (en) | 1998-02-13 | 2011-12-06 | Givaudan Roure (International) S.A. | Aryl-acrylic acid esters |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU198445B (en) | Process for production of derivatives of 5-amin-4-hydroxi-valeric acid | |
| US6051391A (en) | Detection of microbial metabolites | |
| US4568675A (en) | Phenazine ACE inhibitor produced from streptomyces species | |
| KR940000816B1 (ko) | 산화환원계 검출용 조성물 | |
| EP0117228B1 (en) | Analogs of mevalonolactone and derivatives thereof, processes for their production, pharmaceutical compositions containing them and their use as pharmaceuticals | |
| EP0915851A1 (en) | Dibenzodihydropyridinecarboxylic esters and their use in chemiluminescent assay methods | |
| US4454330A (en) | Two-functional-group-containing terpenoids, processes for the preparation of the same, and anti-ulcer agents containing the same | |
| JPH03175999A (ja) | β―ガラクトシダーゼのための基質 | |
| EP0098713B1 (en) | Benzoylpiperazine esters and a process for their production | |
| US4962024A (en) | Signal enhancement in assay for an enzyme | |
| US5155259A (en) | Aldose reductase inhibitor | |
| SU1183539A1 (ru) | Холестериловый эфир о-кумаровой кислоты в качестве субстрата для определения активности холестеролэстеразы. | |
| JPH0859686A (ja) | ウミホタルルシフェリン誘導体および糖加水分解酵素の定量方法 | |
| US5055594A (en) | Fluorogenic trypotophanase substrates | |
| US4341781A (en) | Pyridazopyridazine derivatives | |
| EP1224196B1 (fr) | Substrat enzymatique, procede de synthese et utilisations | |
| US5136090A (en) | Biphenyl-5,5'-bis-alkanoic acid derivatives, their production and aldose reductase inhibitors containing the same | |
| US4191809A (en) | Method of measuring enzymatic activity using novel peptide derivatives | |
| US4767872A (en) | Epoxide derivatives | |
| US6872831B2 (en) | Carboxylated heterocyclic compounds and methods of synthesis | |
| EP0168480A1 (en) | Process for preparing optically-active 4-amino-3-hydroxybutyric acid | |
| EP0292169B1 (en) | Substrates for B-galactosidase | |
| US4239902A (en) | N-Carboxyacylaminoacid esters, processes for their production and their diagnostic use | |
| US2773872A (en) | Dihydroorotic acid | |
| US5166351A (en) | Mono-N,N-dimethyl-4-aminopyridinium sn-glycerol-3-phosphate derivatives |