SU1124975A1

SU1124975A1 - Способ получени эритроцитарного диагностикума

Info

Publication number: SU1124975A1
Application number: SU833628557A
Authority: SU
Inventors: Анатолий Игнатьевич Мирошников; Александр Викторович Темнов; Ольга Владимировна Савицкая; Маргарита Владимировна Дулатова; Александр Юсупович Иванов; Надежда Константиновна Призова; Анна Константиновна Анфиногенова
Original assignee: Институт биологической физики АН СССР
Priority date: 1983-07-19
Filing date: 1983-07-19
Publication date: 1984-11-23
Also published as: SU1124976A1

Abstract

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА путем выделени эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией, о т ли чаюц и и с тем, что, с целью повниюни специфической активности продукта, в качестве целевого продукта иЪпользуют сенсибилизированные эритроциты с зар дом 3,3-Ю - 1,а1-10 Кл. 9

Description

1 |й

:д

Изобретение относитс к вакцинно-сывороточному делу и может быть использовано в технологии получени эритроцитарных диагностикумов медицинского и ветеринарного назначени .

Известен способ получени эритроцитарных диагностикумов путем выделени эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией l .

Недостатками известного способа вл ютс низка специфическа активность целевого продукта вплоть до получени искаженных результатов при обследовании сывороток здоровых и больных людей, а также трудоемкость проверки специфичности диагностикума, так как дл этого необходимо предварительно отобрать 10-12 сывороток больных соответствующим заболеванием и столько же сывороток здоровых доноров .

Целью изобретени вл етс повышение специфической активности целевого продукта.

Поставленна цель достигаетс согласно способу получени эритроцитарного диагностикума путем выделени эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией, в качестве целевого продукта используют сенсибилизированные эритроциты о зар дом 3,310 -1,81-10 Кл.

Способ осуществл етс следующим образом.

После получени цельной крови (например, бараньей) эритроциты фиксируют 5)ормалином, сенсибилизируют необходимым сенситином, затем жидкий препарат замораживают и посл гиофильной .сушки получают сухой диагьзостикум, У жидкого или сухого препарата определ ют зар д эритроцитов , а в качестве диагностикума используют эритроциты с зар дом 3,3-10 К - 1,81-10 Кл.

При технической реализации предлагаемого способа дл повышени специфичности определенного эритроцитарного дукагностикума предв арительно устанавливают граничное значение величины зар да, при снижении которой у целевого продукта ведут выбраковку готового препарата. Граничные значени можно определить однократным определением зар да специфических и неспецифических серий целевого.продукта при параллельном их контроле с гипериммунными сыворотками животных и сыворотками здоровых доноров, т.е. путем градуировки , как проиллюстрировано в примере . Причем по. существующим техническим услови м Регламента произ водства дйагностикум считаетс специфичным если титр его с сывороткой

здоровых доноров в реакции РИГА меньше чем 1/100.

Пример. Контроль специфичности жидких и сухих эритроцитарных дизентерийных диагностикумов Зонне.

5 1 мл жидкого эритроцитарного диагностикума Зонне ( в случае контрол сухого препарата его предварительно в течение 1 сут вымачивают в дистиллированной воде) подвергают центри0 фугированию при «350 в течение 5 мин. Полученный осадок, содержащий эритроциты, сенсибилизированные дизентерийным антигеном Зонне, обрабатывают измерительной средой с па5 раметрами: ионна сила ги 0,02; рН 7,3; t 25С.

Концентрацию эритроцитов в пробе довод т разбавлением ее измерительной средой до .10 клеток на 1 мл. Величину поверхностного

0 зар5ща эритроцита рассчитывают по формуле « 3 V 10 IJ эе 05 (ЪКл, где измер емой величиной вл етс U - электрофоретическа подвижность

1 . MVM Р П пм П - nwQwnr-Ti,

(ЭФП) , мкм с В см; Ч - в зкость

5 ( дл используемых растворов равна 10 П) ; Ж - величина, обратна толщине двойного электрического сло , которай дл водных растворов одновалентных солей (концентраци ,

0 См) равна Jt-fcM/i,06 ; S - плс дадь поверхности эритроцита, среднее значение которой 1,65-10 см

ЭФП измер ют методоммикроэлектрофореза .на приборе Пармоквант-2 ( Карл.Цейсс, Йена) в режиме

5 автоматическйго анализа подвижности 100 эритроцитарных клеток. Используемый измерительный прибор обеспечивает получение средних значений ЭФП.

В таблице приведены результаты

0 контрол производственных серий дизентерийного эритроцитарного диагностикума Зонне по ЭФП и в РИГА с донорской сь вороткой.

Из приведенной таблицы следует,

5 что и дл жидких, и дл сухих препаратов нижним граничным значением ЭФП, по которому следует браковать препарат, вл етс ЭФП «1,10 (или 1,81-10 КЛ) , так как препараты,

0 ЭФП эритроцитов которых равен 1,10 и более ( серии 5-8) имеют титр в РИГА с донорской сывороткой ниже, чем 1/100, т.е. соответствуют техни ческим услови м. Препаратй с ЭФП

1,04 и ниже (зар д 1,71-10 Кл, серии 1-4) не соответствуют ническим услови м, так как имеют титры с донорскими сыворотками 1/150 и более.

0

Верхн граница значений ЭФП используемых препаратов определ етс природой поверхности фиксированных несенсибилизированных эритроцитов ;барана. Это значение оказалось рав5 ным 2 мкм или 3,3-ia Кл. Преиму1цества предлагаемого способа заключаютс в повышении специфической активности диагностикума за счет отработки из готовых диагностикумов , препаратов с низкой специфической активностью. Кроме того, способ прост,так как отпала необходимость в донорских сыворотках,которые ранее было необходимо предварительна получать дл постановки реакции РИГА.

Claims

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА путем выделения эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией, о т л и ч а ю. щ и й с я тем, что, с целью повышения специфической активности продукта, в качестве целевого продукта иЪпользуют сенсибилизированные эритроциты с зарядом 3,3‘ 10'** - 1,81-10*^чКл.