Изобретение относитс к микробиологической промышленности, в частности к молочной промышленности, и касаетс питательной среды дл вы влени анаэробов - вредителей молочного производства. Известна питательна среда дл учета спосрбных анаэробных микроорганизмов - вредителей молочного про изводства, содержаща ферментативны гидролизат обезжиренного молока, ук суснокислый натрий, крахмал водорас воримый, цистеин, агар-агар и воду Однако известна среда не обеспе чивает быстрого роста микроорганизмое . Цель изобретени - ускорение рос микроорганизмов. Поставленна цель достигаетс тем, что питательна среда дл учет споровых анаэробных микроорганизмов вредителей молочного производства, содержаща ферментативный гидролиза обезжиренного молока, уксуснокислый натрий, крахмал водорастворимый, цистеин и воду, дополнительно содер фосфорнокислый однозамещенный калий бромкрезоловый пурпурный и фуксин кислый, а в качестве ферментативног гидролизата молока - сухой амилоризиновый гидролизат обезжиренного молока при следующем количественном соотношении компонентов, г/л: Сухой аминолоризиновьм гидролизат обезжиренного молока30,0-35,0 Крахмал водорастворимый0 ,8-1,0 Уксуснокислый натрий 5,0-5,5 Фосфорнокислый одно2 ,7-3,0 замещенный калий Бромкрезоловый 0,03-0,04 пурпурный 0,045-0,05 Фуксин кислый 0,5-0,6 Цистин До 1 л Питательную среду готов т следующим образом. Обезжиренное молоко подвергают ферментативной обработке амилорезином П 10 X (25-30 ед/г)- при рН 8,0-9,0 в течение 6-8 ч до содержани аминного азота 140-160 мг%. Затем в небольшое количество освет-пен ного гидролизата при рН 10,0-10,5 добавл ют 0,5-0,6 г/л среды цистина и объедин ют с гидролизатом. В высу шенный гидролизат ввод т калий фос-форнокислый од озам чцсиный, бромкрезо .човый пурпурный, фуксии кислый. Цвпт среды фиол(тово-нп1имевый. Пример 1 . fk:pyT 100 п обезжиренного молока с титруемой кислотностью не больик; 20 Т, подогревают до 45 С и устанавлинают рН 9,0. В 1 л подогретой смеси развод т 0,2 кг амилоризина актиипостыо 25 ед/г и перенос т в общую массу. Смесь вторично псрсмсм;1 1вают, гидролиз зедут при 32 + 2 С.. . т хлороформ в количестве 0,5 л. Ферментер герметически закрывают, через каждый час гидролизат п€рег-1ешивак)т. Внешним ггризнаком получени ГотоБого гидролизата и л етс отделение кремового 11лотн(пч) осадка и отстаннание светло-коричневой прозрачной Жидкости . В зто врем след т за нарастанием аминного азота. При содержагши аминного азота 140 мг процесс прекращают автоклавиронанием при 121 С в течение 15 мин. Одновременно 1идролизат освобождают от белкового осадка. Прод(;лжите:1ьность гид эолиза 6-8 ч, конечный рИ 7,6. В 0,5 л осветленного гидролизата раствор ют 0,5 кг цистина при рН 10,5 и перенос т в остальной объем. 1 идролизат упаривают при , до содержани сухих вещест 50%.. Сгущенный гидролизат высуошвают распылительным способом до содержани сухих веществ 96%, Упаковка сухой питательной среды, предназначенной дл приготовлени 1 л рабочего субстрата, содержит, г сухой амилоризиновый гидролизат 30; крахмал водорастворимый 0,8; натрий уксуснокислый 5 калий фосфорнокислый однозамещенный 2,7; бромкрезоловый пурпурный 0,030; фуксин кислый 0,045. Суха питательна среда содержит- аминного азота мг%. Среды упаковывают в пакеты из черной полимерной пленки и хран т в течение 18 мес при комнатной температуре и относительной влажности 75%. Дл приготовлени рабочего субстрата в производственных услови х содержимое упаковки перенос т в колбу и довод т дистиллированной водой до 1 л. нагревают до растворени порошка , разливают в пропибрки с поплавками и стерилизуют при в течение 15 мин (рН рабочего субстрата 7,2). Биологический контроль среды провод т в сравнении с известной средой. В качестве посевного материала используют штаммы споровых анаэробных микроорганизмов Cf.butyricum b- ; Clf. betyrium Cf. tyrobutyricum 1754, Ci/, tyrobuturicum 1755, молоко сырое, молоко, насто нное на сило се, образцы сыров. Термостатируют посевы при в течение 3 сут. Наличие спор учитывают по разрыву стол бика агара в пробирках с общеприн тыми средами, образованию пузырьков газа в поплавках и изменению цвета среды, приготовленной по предлагаемому способу, до желто-розового. Результаты исследований при определении споровых анаэробных микроорганизмов на индикаторной среде можно получить через 48 ч, а на общеприн тых питательных субстратах через 72 На индикаторной среде по вление газа в пузырьках совпадает с изменением ее цвета. Исследуема среда более чувствительна к небольшому обсеменению продукта споровыми анаэробными микроорганизмами и вы вл ет их количества на пор док выше, Пример 2. Отвешивают 30,0 сухого амилорезинового гидролизата обезжиренного молока (с растворенным в нем цистином из расчета 0,5 г на 1 гидролизата), добавл ют крахмал воде растворимый в количестве 0,8 г, натрий уксуснокислый 5,0 г, калий фосфо нокислый однозамещенный 2,7 г, а так же индикаторр :: бромкрезоловый пурпур ный 0,03 г и фуксин кислый 0,045, Су хие компоненты хорошо перемешивают, перенос т в колбу и довод т дистилли рованной водой объем до 1 л. Содержа ние колбы нагревают до растворени порошка, разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют при в течение 15 мин (рИ рабочего субстрат 6,0). Пример 3. Отвешивают 32,5 г сухого амилорезинового гидролизата обезжиренного молока (с растворенным в нем цистином из расчета 0,55 г на 1 л гидролизата), добавл ют крахмал Вычисление титра споровых анаэро Споровые анаэробные микроорганиз водорастворимый в количестве 0,9 г, натрий уксуснокислый 5,26 г, калий фосфорнокислый однозамещенный 2,85 г, а также индикаторы: бромкрезолодый пурпурный 0,035 и фуксин кислый 0,0475 г. Сухие компоненты хорошо перемешивают, перенос т в колбу и довод т дистиллированной водой объем до 1 л. Содержимое колбы Н1 1гревают до растворени порошка, разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют при 121°С в течение 15 мин (рН рабочего субстрата 7,1). Пример 4. Отвешивают 35 г сухого амилорезинового гидролизата обезжиренного молока (с растворенным в нем цистином из расчета г на 1 л гидролизата), добавл ют крахмал водорастворимый в количестве 1,0, натрий уксуснокислый 5,5 г, калий фосфорнокислый однозамещенный 3,0 г, а также индикаторы: бромкрезоловый пурпурный 0,04 г и фуксин кислый 0,05 г. Сухие компоненты хорошо перемешивают, перенос т в колбу и довод т дистиллированной водой объем до 1 л. Содержимое колбы нагревают до растворени порошка, разливают в пропибрки с поплавками и стерилизуют при 121°С в течение 15 мин (рН рабочего субстрата 7,2). Дл определени наиболее веро тного количества клеток в единице объема , веса исследуемого образца используют таблицу Мак-Креди. Вычисление титра споровых анаэробных бактерий провод т по табл. 1. Результаты анализа приведены в табл, 2. Использование питательной среды позвол ет ускорить рост микроорганизмов (с 72 до 48 ч), что, в свою очередь, ускор ет способ индикации анаэробов - вредителей молочного производства. Исключение из состава среды агар-агара и уменьшение расхода цистеина (последний заменен цистином) позвол ет удешевить среду. Таблица 1 бактерий ---«- бнаруженные в объеме, млThe invention relates to the microbiological industry, in particular to the dairy industry, and relates to a nutrient medium for the detection of anaerobic pests of the dairy industry. A well-known nutrient medium for recording spontaneous anaerobic microorganisms — pests of the dairy industry — contains enzymatic skim milk hydrolyzate, sodium hydrochloric acid, water-soluble starch, cysteine, agar-agar, and water, however, the known medium does not provide for the rapid growth of microorganism. The purpose of the invention is the acceleration of the growth of microorganisms. This aim is achieved in that the nutrient medium for keeping spore anaerobic microorganisms pests milk production, comprising enzymatic hydrolysis of skim milk, sodium acetate, starch, soluble, cysteine and water additionally contains phosphate monobasic potassium bromocresol purple and magenta acidic, and as fermentativnog hydrolyzate of milk - dry amylorizine hydrolyzed skim milk with the following proportion of components, g / l: Dry aminoloriz low-fat hydrolyzate milk30,0-35,0 Water-soluble starch, 8-1.0 Sodium acetate 5,0-5,5 Phosphate one 2, 7-3,0 substituted potassium Bromcresol 0.03-0.04 purple 0.045-0, 05 Fuchsin acid 0.5-0.6 Cystine Up to 1 l Nutrient medium is prepared as follows. Skimmed milk is subjected to enzymatic treatment with amilosine P 10 X (25-30 U / g) - at pH 8.0-9.0 for 6-8 hours until the content of amino nitrogen is 140-160 mg%. Then, 0.5-0.6 g / l of cystine medium is added to a small amount of light-pen hydrolyzate at pH 10.0-10.5 and combined with the hydrolyzate. Potassium phosphate phosphate is added to the dried hydrolyzate, ozam chromium, bromcrezo pure purple, and fuchsia sour. Color of medium fiol (combo-np1imic. Example 1. fk: pyT 100 p skim milk with titrated acidity is not large; 20 T, heated to 45 ° C and adjusted to pH 9.0. 0.2 kg of amilorizine is diluted in 1 l of heated mixture 25 u / g and transferred to the total mass. The mixture is repeated PSRsms; 1 1, hydrolysis will go at 32 + 2 C. .. t chloroform in an amount of 0.5 l. The fermenter is sealed, Shiv (t) The external sign of the production of GotoBogo hydrolyzate is the separation of the creamy 11L (sedimentary) sediment and the separation of the light brown transparent Liquid. At this time, the growth of amino nitrogen is monitored. When the content of amino nitrogen is 140 mg, the process is stopped by autoclaving at 121 ° C for 15 minutes. At the same time 1 hydrolyzed free from protein precipitate. Prod (; lie: 1) hydrolysis of 6-8 hours, final pH of 7.6. 0.5 kg of clarified hydrolyzate is dissolved in 0.5 l of cystine at pH 10.5 and transferred to the remaining volume. 1 and the hydrolyzate is evaporated at dry matter content 50%. Condensed hydrolyzate is spray dried to dry matter content 96%. Packing dry nutrient medium for preparing 1 liter of working substrate contains, g dry amyl rhizine hydrolyzate 30; water-soluble starch 0.8; sodium hydroxide 5 potassium phosphate monosubstituted 2.7; bromocresol purp urn 0.030; acid fuchsin 0.045. Dry nutrient medium contains amine nitrogen mg%. The medium is packaged in black polymer film bags and stored for 18 months at room temperature and 75% relative humidity. For the preparation of the working substrate under the production conditions The packages are transferred to a flask and brought to 1 liter with distilled water, heated to dissolve the powder, poured into propibrks with floats and sterilized for 15 minutes (pH of the working substrate is 7.2). The biological control of the medium is carried out in comparison with the known medium. The inoculum used is Cf.butyricum b- spore anaerobic microorganism strains; Clf. betyrium Cf. tyrobutyricum 1754, Ci /, tyrobuturicum 1755, raw milk, milk, true strength, cheese samples. Thermostatic crops for 3 days. The presence of spores is taken into account by breaking the table of bikar agar in test tubes with conventional media, the formation of gas bubbles in the floats and the change in color of the medium prepared by the proposed method to yellow-pink. The results of studies in determining spore anaerobic microorganisms on the indicator medium can be obtained after 48 hours, and on standard nutrient substrates after 72 On the indicator medium, the appearance of gas in the bubbles coincides with the change in its color. The test medium is more sensitive to a small seeding of the product with spore anaerobic microorganisms and reveals their quantity by an order of magnitude above, Example 2. 30.0 dry amilosine hydrolyzed milk skim milk is weighed out (with cystine dissolved in it at the rate of 0.5 g per 1 hydrolyzate) , starch is added to water soluble in the amount of 0.8 g, sodium acetate with 5.0 g, potassium phosphate mono-substituted 2.7 g, as well as indicator: bromocresol purple 0.03 g and fuchsin acid 0.045, Dry components mix well, carry to a flask and bring the volume to 1 l with distilled water. The contents of the flask are heated to dissolve the powder, poured into tubes with floats, and sterilized for 15 minutes (pI working substrate 6.0). Example 3. 32.5 g of dry amillosin hydrolyzate of skimmed milk (with cystine dissolved in it at the rate of 0.55 g per 1 liter of hydrolyzate) are weighed out. Starch is added. Calculation of anaero spore titer Soluble anaerobic microorganisms soluble in the amount of 0.9 g, sodium acetic acid, 5.26 g, monosubstituted potassium phosphate, 2.85 g, and indicators: bromine-free purple and 0.035 and acid fuchsin 0.0475 g. The dry components are mixed well, transferred to a flask and brought to 1 liter with distilled water. The contents of the flask H1 1 are heated to dissolve the powder, poured into tubes with floats, and sterilized at 121 ° C for 15 minutes (pH of the working substrate is 7.1). Example 4. 35 g of dry amiloresin hydrolyzate of skimmed milk (with cystine dissolved in it at the rate of g per 1 liter of hydrolyzate) are weighed out; water-soluble starch in the amount of 1.0, sodium acetate 5.5 g, and potassium phosphate mono-substituted 3.0 g are added and also indicators: bromocresol purple 0.04 g and fuchsin acid 0.05 g. The dry components are mixed well, transferred to a flask and brought to 1 liter with distilled water. The contents of the flask are heated to dissolve the powder, poured into propibrki with floats and sterilized at 121 ° C for 15 minutes (pH of the working substrate is 7.2). To determine the most probable number of cells per unit volume, the weight of the test sample is using the McCredy table. The calculation of the titer of spore anaerobic bacteria is given in Table. 1. The results of the analysis are given in Table 2. The use of the nutrient medium allows the growth of microorganisms to be accelerated (from 72 to 48 hours), which, in turn, accelerates the method of indicating anaerobes - pests of dairy production. Excluding agar-agar from the medium and reducing the consumption of cysteine (the latter is replaced by cystine) makes the medium cheaper. Table 1 bacteria --- "- found in volume, ml
Продолжение табл. 1Continued table. one
Количество спор анаэробных микроорганизмов, вы вленных на индикаторной и известной средах, вычисленный титрThe number of spores of anaerobic microorganisms found on indicator and known media, calculated titer