SU1084293A1 - Способ получени антигена дл серологической диагностики сальмонеллеза - Google Patents

Abstract

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА дл  серологической диагностики сальмонеллеза путем выделени  липолисахарида из биомассы сальмонелл с помощью водно-фенольной экстракции 90%-Ным раствором фенола, отличающийс  тем, что, с целью повьппени  специфичности диагностики сальмонеллеза группы В, после йодно-фенольной экстракции дополнительно смешивают 0,5-1,0%-ньй ,, раствор липополисахарйда в нейтральном забуференном физрастворе с равным объемом 0,,00t)15 М раствора периодата кали , вьщерживают в течение 1 ч, нейтрализуют действие периодата кали  добавлением 2%-ного раствора глюкозы.

Description

сх 4 to

со со 1 И-лобретенно относитс  к иммунохимии , преимущественно к получению биологических диагностических препаратов , и может быть использовано дл  серологической диагностики сальмонеллезов группы В. Известные способы получени  антигена дл  диагностики сальмонеллеза не позвол ет получить препарат с необходимой антигенной специфичностью И Известен способ получени  антигена дл  серологической диагностики сальмонеллеза путем выделени  липополисахарида из биомассы сальмонелл с помощью водно-фенольной экстракции 90%-ным раствором фенола 21. Однако полученные таким образом липополисахаридные антигенные препараты про вл ют 8 серологических реакци х недостаточно выраженную специфичность, поскольку не удаетс  получить моноантигены группы В, Целью изобретени   вл етс  повышение специфичности диагностики сальмонеллеза группыв. Указанна  цель достигаетс  тем, что согласно способу получени  антигена дл  серологической диагностики сальмонеллеза путем вццелени  липоцолисахарида из биомассы сальмонелл с помощью водно-фенольНо экстракции 90%-ным раствором фенола после водно-фенольной экстракции дополнительно смейивают 0,5-1,0%-ны раствор.липополисахарида в нейтраль ном забуферённом физрастворе с равным объемом О,0005-0;00015 М раство ра периодата кали , вьщерживают в течение 1 ч, нейтрализуют действие периодата: кали  добавлением 2%-ного раствора глюкозы. П р им ер. Культуру сальмоиелл выращивают в чeтвept x с 2,5%-нь1м агаром (МПА) 18 ч. Бактерийную масс с каждой четверти смывают 10 мл физиологического раствора. Чистоту культуры контролируют бактериоскопи ческИм исследованием. Бактерийную массу дважды отмываю1Т физиологическим раствором при 5000 об/мин, перенос т в колбу и запивают при перемешивании 400 мл (на 2 г клеток влажный вес) воды, предварительно нагретой на вод ной бане до 65-68 с Суспензию интенсивно перемешивают, прибавл ют 400 мл 90%-ного фенола (65-68®С) и смесь выдерживают 20aS 25 мин при 68. Обра:п)1к ншу1ос  эмульсию охлаждают сначсига при комнатной температуре до , а затем 1-2 ч в холодильнике до 4-5°С. После этого смесь центрифугируют 30 мин (1000 об/мин), смесь раздел етс  на три сло : верхний - водный, содержащий липополисахарид и нуклеиновые кислоты, промежуточный - фенольный , содержащий белок, и нижний, содержащий остатки разрушенных клетрк и крупномолекул рный белок. Водньй слой отдел ют с помощью сифона И диализуйт 48 ч против проточной воды (), далее лиофилизируют. Дл  разруш ени  0,12 антигена в липополисахариде готов т 5 мл 0,5-1%-ного раствора липополисахарида в КаС2-буфере, рН 7,1, сливают в равных объемах раствор липополисахарида и 0,00015 М раствор периодата кали  в NaCi-буфере, выдерживают 1 ч, добавл ют несколько (5) капель 2%-ного раствора глюкозы. Через 10 мин раствор антигена используют дл  посадки на эритроциты в реакции непр мой гемагглютинации (РИГА). В табл. 1 приведены сравнительные результаты РИГА с липополисахаридами ( ЛПС) до и после обработки раствором периодата кали . В табл. 1 приведены сравнительные результаты, постановки РИГА с липопо- лисахаридами из S.essen и S.upsala до и после удалени  антигена 012 и с сыворотками к сальмонеллам с различным набором антигенов. Предлагаемый способ обеспечивает возможность полного разрушени  антигена 012, что подтверждаетс  отрицательными peзyльтaтa lи РИГА с липополисахаридами без антигена при наличии высоких титров реакции с липополисахаридом, полученным известньм способом. Обработка ЛПС раствором периодата кали  не вли ет на антиген 04; при постановке РИГА с сыворотками к S.paratyphi В, S.essen и S.upsala не отмечено разницы в титрах до и после обработки раствором периодата кали . Таким образом, предлагаемый способ позвол ет повысить специфичность липополисахаридного антигена сальмонелл группы В. Предлагаемый способ обеспечивает возможность полного ргтчрушени  антигена 012 при coxpaHiMimi aiiTHreEia 04, специфичного дл  i-pynпы В сальмонелл. В табл. 2 приведены средние геометрические титры у обследованны групп. Иэ табл. 2 видно, что активность диагностикума 0-4 не уётупает актив кости диагностикума 0-1, 4,12 (коммерческий диагностикум, Москва, НИИЭМ им.Г.Н.Габричевского), о чем свидетельствуют примерно равные титры РИГА с указанными препаратами полученные у больных сальмонеллезам группы В. Значительно более низкие титры РИГА с диагностикумом 0-4 по сравнению с коммерческим диагностикумом 0-1, 4,12, полученные при обследовании доноров, свидетельству о более высокой специфичности диагностикума 0-4. Постановка РИГА с диагностикумом 0-4, специфичным дл  группы В сальотрицательной пробы говорить об отсутствии антител к сальмонеллам группы В. В силу высокой специфичности диагностикума он может примен тьс  в сомнительн 1х случа х дл  дополнительной диагностики сальмонеллов группы В. Это позвол ет повысить эффективность серологического типировани  группы В сальмонелл, что в свою очередь повышает эффективность лабораторной диагностики заболеваний . Способ разработан и внедрен в лаборатории специфической индикации возбудителей инфекционных заболеваний Горьковского НИИ эпидемиологии и микробилогии. В насто щее врем  этиологическим фактором подавл ющего числа сальмонеллезов на территории СССР  вл ютс  сальмонеллы группы В. При постановке серологического диагноза у больных сальмонеллезами обычно используетс  набор сальмонеллезнык диагностикумов к группам А, В, С, D и др. За счет общих антигенов наблюдаютс  выраженные перекрестные реакции у групп А, В и D что не всегда позвол ет правильно оценить реакцию и, следовательно поставить диагноз, особенно, если нет бактериологического подтверждени . Таблица 1

Использовали сухие неадсорбированные водства Ташкентского НИИВС. агглютинирующие сыворотки произБольные паратифом В

и прочими сальмонеллезами группы В104

Доноры101

Таблица 2

1:208

1:260 1:24 1:4

Claims (1)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА для серологической диагностики сальмонеллеза путем выделения липолисахарида из биомассы сальмонелл с помощью водно-фенольной экстракции 90%-ным раствором фенола, отличающийся Тём, что, с целью повышения специфичности диагностики сальмонеллеза группы В, после Водно-фенольной экстракции дополнительно смешивают 0,5-1,0%-ный ₀ раствор липополисахарида в нейтральном забуференном физрастворе с равным объемом 0,000?5-0,ОО015 М раствора перйодата калия, выдерживают в течение 1 ч, нейтрализуют действие перйодата калия добавлением 2%-ного раствора глюкозы.

   оо

   ЬЭ ς© со >