Изобретение относитс к способу получени новых биологически активных соединений - тетрапептидов или их кислотно-аддитивных солей, которые могут найти применение в медицине , Известен способ получени пептидов путем отщеплени Трет -бутилокс ка1)бонильной группы от соответствую щего блокированного пептида путем о работки последнего трифторуксусной кислотой в присутствии анизола при 1 . Цель изобретени - получение новых соединений, обладающих интересными фармакологическими свойствами. Поставленна цель достигаетс способом получени тетрапептидов общей формулы R-Tyr-DAla-mtJ-NR-CH-CONH водород, алкил ;, алкил , циклопропилме X - бром, хлор, йод и метил, И.ПИ их кисло т но-аддитивных солей, закл в том, что защищенный тетр пептид общей формулы fgOC K-Tyr DAlO-Gly-N-Cfl-CONH R ,К и X имеют указанные значе ни , подвергают деблокированию при обраб ке трифторуксусной кислотой. Тетрапептиды формулы(Т)выдел ют виде кислотно-аддитивных приемлемых с фармацевтической точки зрени нетоксичных солей, которые включают с ли органических и неорганических ки лот, например таких, как сол на , серна , сульфо-, винна фумарова , бромистоводородна , гликолева , лимонна , мапеинова , фосфорна , нта на уксусна азотна , бензойна , аскорбинова , h -толуолсульфо-, бен золсульфо-, нафталинсульфо-, пропионова и других. В описании использораны следующие сокращени : (-аминомасл на i кислота, Ala - аланин, Cys - дистеин, Cys(Me) - (5-метил)-цистеин, Cys(Me) (О) - (5-метил)-цистеин сульфоксид, Gly - глидин, Gly(Al) - аллилглицин, Gla(Cp) - циклопропилметмлглицин, Hse - гомосерин. Не - ИЗО-лейцин, Leu лейцин. Met - метионин, Met(O)сульфоксид метионина, Nle - норлейцин , Nva - норвалин, Phe - фенилаланин , Ser - серин, Thr - треонин. Туг - тирозин, Val - валин. Ас - ацетил , АсОМе - ацетоксиметил, А аллил , Ср - циклопропилметил, Me метил , Et - этил, 1р -изо -пропил, Рг -н -пропил, ОМе - метокси, Etm этилтиометил , Fie - 2-фторэтил, Ppg - пропаргил, Ви - н,-бутил, i-Bu -изо -бутил, -трет -бутил, s-Bu -втор- утил. Вое -трет-бутилоксикарбонил , Bzl - бензил, CBZ бензолоксикарбонил , DCC - N.N-дициклогексилкарбодимиид , НВТ - 1-оксибензотриазол , DMF - N N -диметилформамид , TFA - трифторуксусна кислота, THF - тетрагидрофуран, DEAE диэтиламнноэтил , NMM - N-метйлморфолин, IBCF -изо -бутилхлорформиат, 18-крон-6-1 ,4,7,10,13,16 - гексаоксациклооктадекан . Каждое из соединений формуль: имеет заместитель в мета-позиции феналаланина и, кроме того, любое из них или все они могут находитьс в форме приемлемой с фармацевтической точки зрени нетоксичной присоединенной соли кислоты. Пример 1. Получение соли ацетата Ь-(К-метил)тирозил-В-аланил-глицил-Ь- (К-циклопропилметш1)-мета-бромф .енилаланин амида. А. Этиловый сложный эфир N-ацетш1-/ь-циано-В-Ь-метабромфенилаланина . К суспензии 16,8 г (0,35 моль) гидрида натри (50%-ный раствор в минеральном масле) в 260 мл сухого ТГФ при перемешиЁании при комнатной температуре добавл ют небольшими порци ми 59,56 г (0,35 моль) этиладет амидоцианоацетата. В реакционную смесь по капл м добавл ют раствор 37,48 г (0,35 моль) метабромбензилбромида в 50 мл (сухого) ТГФ. Смесь сначала несколько ох.г эждают, а затем перемешивание продолжают при комнатной температуре в течение 72 ч, после чего дес шегмируют в течение 4 ч. Смесь затем охлаждают до комнатной температуры и добавл ют 80 ип этилового спирта. Перемешивание про должают еще в течение 30 мин, а затем вливают реакционную массу в Ш раствор НС1. Водную смесь экстрагируют этилацетатом, слой этилацетата отдел ют и промывают последовательно водой, IN раствором бикарбоната натри и водой. Этилацетат сушат над сульфатом магни и концентрируют в вакууме до масла (107 г). ЯМР ,0 (ацетил), 3,4-3,5 (метилен ) и 7,1-7,5 (мета-бромфенил), Б. В,Ь-Мета-бромфенилапанин. Продукт, полученный на стадии А U07 г, 0,32 моль), суспендируют в растворе 58,8 г (1,47 моль )таблеток гидрата окиси натри и 220 мл воды. Полученную в результате смесь дефлег мируют в течение 24 ч. Далее смесь охлаждают до комнатной температуры и ее рН довод т до 6,5 при помощи 7N раствора НС1. Полученный и выпавший в осадок продукт собирают, сушат получают 41,01 г (53%) соединени . В. N-тpифтopaцeтил D,L-мeтa-бpoмфенилаланин . К 200 мл трифторуксусной кислоты добавл ют 46,53 г (О,19 моль) В,Ъ-ме та-бромфенилаланина. Смесь охлаждают до 0С и в течение 5 мин добавл ют 29,3 мл (0,21 моль ) трифторуксусного ангидрида. Полученный раствор перемешивают при 0°С в течение 1,5 ч и 3 ч при комнатной температуре , после чего реакционную массу кон центрируют в вакууме. Остаток разбавл ют 400 мл воды и выпавший в оса док продукт собирают и сушат. Твердое вещество кристаллизуют из смеси простой эфир-петролейный эфир, получают 28,4 г (44%) соединени . Элементный анализ. Найдено, %: С 39,09;.И 2,46; N 4,32. C..,RgN03BrFi (340,1) Вычислено, %: С 38,35; Н 2,67; N 4,12. Г. L-мета-бромфенилаланин. Смесь 28 г (0,082 мольч) продукта полученного в стадии В, добавл ют к 500 мл воды, перемешивают, а затем к ней добавл ют 2N раствор NaCR до получени прозрачного раствора (рН 7,2 Добавл ют карбоксипептидазу А (25 м и поддерживают температуру раствора (37 С)при noMouui термостатически, ре1 94 гулируемой вод ной ванны и рН 7,2 при помопщ радиометра величины рН.Раствор энергично перемешивают в течение 5 дн, затем рН довод т до 5,0 добавл ют углерод и смесь фильтруют. рН фильтрата довод т до 3,0 при помощи IN НС1 и затем фильтрат экстрагируют трижды, этилацетатом, после чего рН водного раствора довод т до 7,0 при помощи 2N раствора NaOH и раствор., концентрируют в вакууме до начала кристаллизации L-изомера. Смесь охлаждают до комнатной температуры, выпавший в осадок продукт собирают, сушат, получают 10,9 г (l09%) соединени . / Д, трет-Бутилоксикарбонил-Ъ-мета-бромфенилаланин . Б смесь 25 мл трет -бутилового спирта и 20 мл воды добавл ют 9,9 г ( 0,041 моль) продукта со стадии Г, затем 20,5 мл (0,041 моль) 2N раствора NaOH и 8,9 г (0,041 ноль ди-трет-бутил карбоната. Смесь перемешнвают при комнатной температуре в течение 5 ч, после чего добавл ют 150 мл воды и продукт экстрагируют эфиромг Водный слой отдел ют, подкисл ют до рН 2,5 при помощи холодного IN раствора НС1 и экстрагируют эфиром. Эфирный слой промывают водой, сушат над сульфатом магни и упаривают в вакууме. Масл нистый остаток раствор ют в петролейном эфире и раствор вьщерживают при в течение ночи. Выпавшие в осадок кристаллы отфильтровывают , сушат, получают 11,3 г (80%) соединени , точка плавлени 124125 С , (ci)|| ,7° (с,0, EtOH). Элементн й анализ. Найдено, %: С 49,25; Н 5,59; N4,04. (344) Вычислено, %: С 48,85; Н 5,27; N 4,07. Е. ЬРтрет-Бутилоксикарбонил-Ь-мета-бромфенилаланин амид. К смеси 50 мл ДМФ 1 1,5 г (0,033 моль) #-трет -бутилоксикарбонил-Т гм.ета-бром-, фенилаланина,охлажденной до 15°С,добавл ют 3,63 мл (0,033 моль) NMM и 4,33 мл (0,33 моль I И50 -бутил хлосформиата . Смесь перемешивают при в течение 5 мин, после чего через еакционную массу в течение 1 ч барботируют безводный газообразный аммиак (газ). Реакционную массу перемешивают еще в течение 4 ч при -15°С ц вливают в смесь изме.тьченного льда и IN раствора бикарбоната натри . Полученный водный раствор экстрагир ют этилацетатом. Органический слой отдел ют и промывают последовательн водой, 1,5N раствором лимонной кисл ты и, водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магни и концентрирую в вакууме до твердого состо ни . Твердое вещество растирают с эфиром и полученный осадок отфильтровывают и сушат, получают 11, (100%/ соединени т. Ш1. 146-147 С, 9,8(,5 МеОН,. Элементный анализ. Найдено, %: С 48,85; Н 5,33; N , (343,2) Вычислено, %:С 48,99; Н 5,58; Ы 8,16. Ж. Хлоргидратна соль Ь-мета-бро фенилаланин амида. В 60 мл свежеприготовленного IN раствораНС1 (газ) в лед ной уксусной кислоте, содержащей 5 мл анизол добавл ют 11,1 г (0,032 моль| прО дукта со. стадии Е,. Смесь перемешившЬт при комнатной температуре в те чение 30 мин, затем вливают в эфир р полученный осадок собирают и суша получают 8,75 г (98%) соединени . (cL),46 ° |(,5 MeOHJ. Злементный анализ. НайденоS %; С 38,55; н4,41; :J 10, CgH N OClBr (279,6) 9 17 J Л.ЛЛ, I Вычислено , %:С 38,67; Н 4,33; 0j02,, 3 К-ЦиклОпропилметил-Ь-мета-бромфенилаланин амид. В 50 МЛ безводного этанола добав л йт г (0,015 моль ) продукта со ;тадии Ж, а затем 5,04 г (0,06 моль твердого безводного бикарбоната нат ри и 2,04 г (0,015 моль) циклопропилметилбромида . Смесь дефлегмируют в течение 7 ч и упаривают в вакууме до масла. Масло раствор ют в 20 мл хлороформа и чист т колоночной хроматографией на колонке типа Грейса и Дэфисона 62 на силикагеле в хлоро форме. Продукт элюируют при помощи послестадийного градиента до 10% метанола. Продукт выдел ют в соответствии с профилем, определенным хроматографией в тонком слое собран ных; фракций, получают 2,2 г (49%) .соединени . ЯМР с ; 1,6(-NH-) и 7,0-7,4 (мета-бромфенил). . И . N-Трет -Бутило,ксикарбонил-В-аланил-глицил-L- (N-циклопропилметил )-мета-бромфенилаланин амид. Б смесь из 40 мл ДМФ и 2,1 г (7,1 моль) продукта со с -адии 3, охлажденную до Ос, добавл ют 1,87 г (7,1 моль) К трет-бутилоксикарбонил-D-аланил-глидила , а затем 0,96 г (,7,1 ммоль J ОБТ и 1,46 г (7,1 ммоль ДЦК. Смесь перемешивают при в течение 4 ч, а затем при комнатной температуре в течение 72 ч. Смесь затем охлаждают до О С, полученный в результате осадок удал ют фильтрацией, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток раствор ют в этилацетате и раствор экстрагируют последовательно IN раствором бикарбоната натри , , lj5N раствором лимонной кислоты и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магни и упаривают в вакууме до масла, получают 1,5 г (40%) соединени . К. IF тper-Бyтилoкcикapбoнил-IN-мeтил-L-тиpoзил-D-aлaнил-глицил-L- (№-циклопропилметил )-мета-бромфенилаланин амид. Смесь 50 мл трифторуксусной кислоты , содержащей 5 мл анизола и 1,5 г (2,9 ммоль) продукта со стадии И, перемешивают при 0°С Б течение 30 мин и. упаривают в вакууме без нагревани . Полученное в результате масло разбавл ют простым эфиром. Образующийс сверху в результате отстаивани продукт декантируют, а оставшеес масло сушат в вакууме. В 15 мл даФ добавл ют 0,856 г (2,9 ммоль) N rpeT-бутилоксикарбоил-К -метил-Ь-тирозина . Смесь охлажают до -15 С и в перемешиваемый аствор быстро добавл ют 0,32 мл (2,9 ммоль) NMM и 0,38 мл (2,9 ммоль) ю -бутилхлорформиата. Перемешивание ри -15 С продолжают в течение слеующего процесса Полученную соль ТФК рипептида раствор ют в ,10 мл ДМФ. аствор охлаждают до и добавл ют дну порцию 0,32 мл (2,9 ммоль) NMM. аствор перемешивают до окончани роцесса и добавл ют в ранее полуе нный раствор смешанный ангидрид. олученную в результате смесь переешивают при -15°С в течение 4 ч, заем медленно нагревают до комнатной емпературы и перемешивание продол7108231 жают в течение ночи. Смесь затем вливают в IN раствор бикарбоната натри , водный раствор экстрагируют этилацетатом . Органическую фазу отдел ют и экстрагируют последовательно водой, 5 1,5N раствором лимонной кислоты, и водой. Затем этилацетат сушат над i сульфатом магни и концентрируют в вакууме. Масл нистый остаток (1,6 г) раствор ют в ацетоне и нанос т на две препаративные пластины с тонким слоем. Про вление ведут в смеси хлороформа и .метанола при соотношении 9:1. Основна компонента отдел етс с пластин тех и элюируетс с сили- 5 кагел , получают 0,8 г (39% целевого соединени . Л. Ацетатна соль М -метил-Ь-тирозил-В-аланил-глицил-Ь- (Ы -циклопропилметил )-мета-бромфенилаланин амида. В 15 мл ТФК, содержащей 3 мл анизола , добавл ют 0,8 г (1,2 ммоль) продукта, полученного в стадии К. Смесь перемешивают при 0°С в течение 30 мин, после чего сушат замораживанием . Полученное твердое вещество раствор ют в 9,0 мл 0,1 М раствора ацетата аммони , содержащего 31% ацетонитрила. Полученный раствор 30 хроматографируют на колонке с силикагелем (4x72 смК Колонку обрабатывают давлением 4,2 кг/см и элюат анализируют при 280 нм. Соответствующие фракции собирают и лиофили- 35 зуют. Полученное твердое вещество раствор ют в 0,2 М растворе уксусной кислоты (10 мл) и раствор пропускают через колонку с сефадексом (5x100 см) предварительно уравновешенную тем 40 же растворителем. Элюат анализируют в области 280 нм и соответствующие фракции собирают, лиофилизуют, в результате получают 773 мг (97%)соединени . (oC)J +6,64 (,5, 1NHC1).45 Элементный анализ. Найдено, %: С 54,30; Н 5,99; N 10,28. (662,2) Вычислено, %: С 54,38; Н 6,09; 50 N 10,57. Аминокислотный анализ, %: Ala 0,97 Gly 1,03; NHj 0,99. П р и М е р 2. Ацетатна соль , Ь-(К-метил)тирозил-В-апанил-глицил- js -L-(N-этил)-мcтa-бpoмфeнилaлaнин амида. (oC)J + 7,1° (,5, IN НС1). 9 N N Gl ро та N N Al L-L ам N N Gl Ь-м N N Al L-L ам N N Gl 8 Элементный анализ. Найдено, %: С 53,09; Н 6,13; . 11,13. (636,5) Вычислено, %: С 52,83; Н 6,02; 11,00. Аминокислотный анализ,%:Ala 0,99; y 1,01; NH 1,04. Пример 3. Ацетатна соль L-THзил-В-аланил-глицил-Ь- (N-зтил)-мe-бромфенилаланин амида. (ct)25 . (,5, IN НС1). Элементный анализ. Найдено, %: С 52,13; Н 6,09; 11,39. C2TH3bNy0 r (623) Вычислено, %: С 52,09; Н 5,83; 11,25. Аминокислотный анализ,%: Туг 1,01; a 0,99; Gly 0,99; NH 1,01. П р и М е р 4. Ацетатна соль (N-метил)тирозил-В-аланил-глицил (N-этил-мета-метил фенил ал аа-шн ида. ( 9,2 (с 0,5, IN НС1). Элементный анализ. Найдено, %;С 60,68; Н 7,00; 12,46. C29H4 NjO (517,7) Вычислено, %: С 60,93; Н 7,23; 12, 25. Аминокислотный анализ,%: Ala 0,98; y 1,02; NHj 0,96. П р и М е р 5. Ацетатна соль тирозил-О-аланил-глицил-Ь-(N-этил)ета-хлорфенилаланин амида. (d} - 13,7° (,5, IN НС1). Элементный анализ. Найдено, %: С 55,84; Н 6,37; 12,35. C H j NjO-jCl (578,1) Вычислено, %: С 56,10; Н 6,28; 12,12. Аминокислотный анализ,%: Туг 1,02; a 0,99; Gly 0,98; NHj 0,88. Приме р 6. Ацетатна соль (N-метил)тирозил-В-аланил-глицил- (N-зтил)-мета-хлорфенилаланин ида. (oi)if -9,2 (,5, IN НС1) Элементный анализ. Найдено, %: С 57,11; Н 6,45; 12,15. C28H38N50-,C1 (592,1) Вычислено, %: С 56,80; Н 6,47; 11,83. Аминокислотный анализ, %:А1а 0,99; y 1,00; NHj 1,01. Пример. Ацетатна соль Ъ-тирозил 0-аланил-глнцил-Ь-(Ы-этил мета-йодфенилалаиин амида, ,о (,5.,lN НС1). Элементный анализ. Найдено, %: С 48,40; Н 5,25; N 10,66. C2THasN 07J (669,5) Вычислено, %: ,44; Н 5,42; N 10,46. Аминокислотный анали з,: Туг 1,0 Ala 0,99; Gly 0,99; NH 1,05. П р и м .е р 8. Ацетатна соль Ъ-тирозил В-апанил-глицил-Ь-(Ы-циклопропилметил -мета-йодфенилаланин амида. (о(,)8 ( ,5, IM J Элементный анализ. Найдено, %: С 50,00; Н 5,22; N 1С,23 C2gK gNg07J Вычислено, %: С 50,08; Н 5,51; N 10,07. Аминокислотный анализ,%: Туг 0,9 Ala 1,01; Gly 0,99; NH 0,95. Приме р 9. Ацетатна соль 11,-(К метил)тирозил-В-аланил-глицил-L--{N-циклопропилметил Ьмета-йодфенилаланин анида, (tii +0,787°( ,5, Ш СНдСООН Элементный анализ. Найдено, %: С 50,50; Н 5,40; Н 9,88. Вычислено, %: С 50,78; Н 5,68; N 9,, 81 . Проведены биологические испытани описываемых тетрапецтидов. Болеутол юща активность с эединений формулы (Т } установлена при помощи испытани на мышах с использованием гор чей пластины. В этом исгсытаник примен ют вертикальный акриловый цилиндр, содержащий в качестве основани гор чую плоскую по верхность, температура которой поддерживаетс на уровне 52°С. Мьшам ввод т подкожно заранее определенно количество испытуемого соединени , растворенного или суспендированного в подход щем носителе, через 15 мин после применени испытуемого соединени мышь помещают на гор чую плос кую поверхность. Измер ют скрытое состо ние в секундах до прыжка мьши с гор чей плоской поверхности. Аген обладаю1ций болеутол ющей активность вызывает увеличение этого скрытого состо ни по сравнению с кон-грольнрй мышью, который был введен только носитель. Это может про вл тьс в ;Об ласти доз, которые не вызывают потери моторной координации или способности двигатьс . В табл.1 представлены величины ED, полученные в результате испытаний . ( - величина дозы, котора вызывает болеутол юпц1Й эффект у 50% испытываемых мыщей |. Болеутол ющий эффект определ ют как реакцию скрытого состо ни в присутствии испытуемого соединени , котора больше или равна контрольной реакции скрытого состо ни плюс два стандартных отклонени . Эффект болеутолени в процентах рассматривают как статистическую величину и вычисл ют методами регрессионного анализа данных доза-эффект. Кажда крива доза-эффектдолжна иметь по крайней мере четыре точки и кажда точка определ етс с использованием данных, полученных дл по крайней мере дес ти обработанных мьш1ей и дес ти контрольных мьшей. Таблица 1 Кроме того, соединени .формулы (1| облс1дают низкой склонностью к физической зависимости. Этот факт установлен при помощи испытани , св занного с исследованием двигательной способности мышей. Была установлена высока коррел ци между степенью склонности к физической зависимости сое д нени и его способностью вызывать двигательную активность у мьппей. Двигательную активность у мышей измер ют при ПОМОП1И цилиндрических клеток, изготовленных из проволоки, 5,08 см высотой и 28 см в диаметре. Шесть клеток помещают в звукоизолированную снабженную вентил цией камеру с равномерным освещением. Луч света проходит через центр клетки к фото чейке, расположенной на противоположной стороне. Две мьппи помещают в каждую клетку на 1 ч с целью акклиматизации к окружающим услови м Затем п ти парам мышей подкожно ввод т определенное количество испытуемого соединени , оставша с пара обрабатываетс сол ным носителем, не содержащим испытуемое соединение.The invention relates to a method for producing new biologically active compounds - tetrapeptides or their acid addition salts, which can be used in medicine. A known method for producing peptides by cleaving the Tert-butylox ka1) bonyl group from the corresponding blocked peptide by treating the latter with trifluoroacetic acid the presence of anisole at 1. The purpose of the invention is to obtain new compounds with interesting pharmacological properties. This goal is achieved by the method of obtaining tetrapeptides of the general formula R-Tyr-DAla-mtJ-NR-CH-CONH hydrogen, alkyl, alkyl, cyclopropyl X - bromine, chlorine, iodine and methyl, I.P., their acid addition salts, The fact is that the protected tetra peptide of the general formula fgOC K-Tyr DAlO-Gly-N-Cfl-CONH R, K and X have the indicated values, is released by processing with trifluoroacetic acid. The tetrapeptides of formula (T) are isolated in the form of acid additionally acceptable from a pharmaceutical point of view, non-toxic salts that include organic and inorganic kilotroses, such as salt, sulfur, sulfo, wine fumaric, hydrobromic, glycol, citric, mapeinova, phosphorus, nta on acetic nitrogen, benzoin, ascorbic, h-toluenesulfo-, ben zolsulfo-, naphthalene-sulfo-, propionic and others. The following abbreviations are used in the description: (-amino-oil on acid i, Ala - alanine, Cys - distein, Cys (Me) - (5-methyl) -cysteine, Cys (Me) (O) - (5-methyl) -cysteine sulfoxide , Gly - glidine, Gly (Al) - allylglycine, Gla (Cp) - cyclopropylmethylglycine, Hse - homoserine. Not - IZO-leucine, Leu leucine. Met - methionine, Met (O) methionine sulfoxide, Nle - norleucine, Nva - norvaline , Phe is phenylalanine, Ser is serine, Thr is threonine, Tyr is tyrosine, Val is valine, Ac is acetyl, AcOMe is acetoxymethyl, A is allyl, Cp is cyclopropylmethyl, Me is methyl, Et is ethyl, 1p iso-propyl, Pr -n-propyl, OMe - methoxy, Etm ethylthiomethyl, Fie - 2-fluoroethyl, Ppg - about Pargil, Vin, -butyl, i-Bu-iso-butyl, -t-butyl, s-Bu-second-util. Vo-ter-butyloxycarbonyl, Bzl-benzyl, CBZ benzoloxycarbonyl, DCC -NN-dicyclohexylcarbodimide, NVT - 1-hydroxybenzotriazole, DMF - NN-dimethylformamide, TFA - trifluoroacetic acid, THF - tetrahydrofuran, DEAE diethylaminoethyl, NMM - N-methylmorpholine, IBCF-iso-butyl chloroformate, 18-crown-6-1, 4,7,10,13 , 16 - hexaoxacyclo-octadecane. Each of the formuli compounds has a substituent in the phenalalanine meta position and, in addition, any or all of them can be in the form of a pharmaceutical-acceptable non-toxic acid-added salt. Example 1. Preparation of the salt of L- (K-methyl) tyrosyl-B-alanyl-glycyl-L- (K-cyclopropylmetesh1) -meta-bromo-phenylalanine amide acetate salt A. N-acetyl-1-b-cyano-B-b-metabromophenylalanine ethyl ester. To a suspension of 16.8 g (0.35 mol) of sodium hydride (50% solution in mineral oil) in 260 ml of dry THF, while stirring at room temperature, 59.56 g (0.35 mol) of ethylene hydrochloride are added in small portions amidocyanoacetate. A solution of 37.48 g (0.35 mol) of metabromobenzyl bromide in 50 ml (dry) of THF is added dropwise to the reaction mixture. The mixture is first cooled slightly, and then the stirring is continued at room temperature for 72 hours, after which it is decanted for 4 hours. The mixture is then cooled to room temperature and 80% ethyl alcohol is added. Stirring is continued for another 30 min, and then the reaction mass is poured into the HC1 W solution. The aqueous mixture is extracted with ethyl acetate, the ethyl acetate layer is separated and washed successively with water, IN with sodium bicarbonate solution and water. Ethyl acetate is dried over magnesium sulfate and concentrated in vacuo to an oil (107 g). NMR, 0 (acetyl), 3.4-3.5 (methylene) and 7.1-7.5 (meta-bromophenyl), B. V, L-Meta-bromophenylapanine. The product obtained in Step A U07 g, 0.32 mol) is suspended in a solution of 58.8 g (1.47 mol) of sodium hydroxide tablets and 220 ml of water. The resulting mixture is refluxed for 24 hours. The mixture is then cooled to room temperature and its pH is adjusted to 6.5 with 7N HCl solution. The resulting and precipitated product was collected, dried to give 41.01 g (53%) of the compound. B. N-triphosphate D, L-meta-bromophenylalanine. 46.53 g (O, 19 mol) B, b-meth ta-bromophenylalanine are added to 200 ml of trifluoroacetic acid. The mixture is cooled to 0 ° C and 29.3 ml (0.21 mol) of trifluoroacetic anhydride are added over 5 minutes. The resulting solution was stirred at 0 ° C for 1.5 h and 3 h at room temperature, after which the reaction mass was concentrated in vacuo. The residue is diluted with 400 ml of water and the product precipitated is collected and dried. A solid crystallized from ether-petroleum ether to give 28.4 g (44%) of the compound. Elemental analysis. Found,%: C 39.09; .I 2.46; N 4.32. C .., RgN03BrFi (340.1) Calculated,%: C 38.35; H 2.67; N 4.12. G. L-meta-bromophenylalanine. A mixture of 28 g (0.082 mol) of the product obtained in Step B is added to 500 ml of water, stirred and then a 2N solution of NaCR is added to it until a clear solution is obtained (pH 7.2. The carboxypeptidase A is added (25 m and the temperature is kept solution (37 C) at noMouui thermostatically, controlled water bath and pH 7.2 with the aid of a radiometer of the size of pN. The solution is vigorously stirred for 5 days, then the pH is adjusted to 5.0 and carbon is added and the mixture is filtered. the filtrate was adjusted to 3.0 using IN HCl and then the filtrate was extracted three times, with ethyl acetate, after the pH of the aqueous solution is adjusted to 7.0 with 2N NaOH solution and the solution is concentrated in vacuo until the L-isomer begins to crystallize. The mixture is cooled to room temperature, the precipitated product is collected, dried, 10.9 g are obtained (l09 %) Compound / D, tert-Butyloxycarbonyl-b-meta-bromophenylalanine. To a mixture of 25 ml of tert-butyl alcohol and 20 ml of water, 9.9 g (0.041 mol) of the product from step D, then 20.5 ml ( 0.041 mol) 2N NaOH solution and 8.9 g (0.041 nil di-tert-butyl carbonate. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours, then 150 ml of water was added and the product was extracted with ether. The aqueous layer was separated, acidified to pH 2.5 with cold IN HC1 solution and extracted with ether. The ether layer is washed with water, dried over magnesium sulfate and evaporated in vacuo. The oily residue is dissolved in petroleum ether and the solution held at overnight. The precipitated crystals were filtered, dried, yielded 11.3 g (80%) of the compound, melting point 124125 ° C, (ci) || , 7 ° (s, 0, EtOH). Elemental analysis. Found,%: C 49.25; H 5.59; N4.04. (344) Calculated,%: C, 48.85; H 5.27; N 4.07. E. bR-tert-butyloxycarbonyl-b-meta-bromophenylalanine amide. To a mixture of 50 ml of DMF 1 1.5 g (0.033 mol) # -t-butyloxycarbonyl-T gm e-bromo-, phenylalanine, cooled to 15 ° C, add 3.63 ml (0.033 mol) of NMM and 4, 33 ml (0.33 mol I I 50 -butyl chloroformate. The mixture is stirred at 5 minutes, after which anhydrous gaseous ammonia (gas) is bubbled through the reaction mass for 1 h. The reaction mass is stirred for 4 more hours at -15 ° Cs is poured into a mixture of crushed ice and IN sodium bicarbonate solution. The resulting aqueous solution is extracted with ethyl acetate. The organic layer is separated and washed sequentially in ode, 1.5N citric acid solution, and water. The organic phase is dried over magnesium sulphate and concentrated in vacuo to a solid. The solid is triturated with ether and the resulting precipitate is filtered and dried to give 11, (100% / compound t. R1.146-147 C, 9.8 (, 5 MeOH, elemental analysis. Found,%: C 48.85; H 5.33; N, (343.2) Calculated,%: C 48.99; H 5.58; S 8.16. J. Hydrochloride salt of b-meta-bro phenylalanine amide. In 60 ml of freshly prepared IN solution INS1 (gas) in glacial acetic acid containing 5 ml of anisole was added 11.1 g (0.032 mol | product of co. Stage E.). The mixture was stirred at room temperature for 30 minutes, then poured the precipitate obtained in ether p is collected and dried to obtain 8.75 g (98%) of the compound. (cL), 46 ° | (, 5 MeOHJ. Elemental analysis. Found S%; C 38.55; n4.41;: J 10, CgH N OClBr (279.6) 9 17 J LLL, I Calculated,%: C 38.67; H 4.33; 0j02 ,, 3 K-Cyc Opolpropylmethyl-b-meta-bromophenylalanine amide. 50 ML of anhydrous ethanol add lt g (0.015 mol) of the product co; tadii J, and then 5.04 g (0.06 mol solid) anhydrous sodium bicarbonate and 2.04 g (0.015 mol) of cyclopropylmethyl bromide. The mixture is refluxed for 7 hours and evaporated in vacuo to an oil. The oil is dissolved in 20 ml of chloroform and purified by column chromatography on a Grace-type and Diffison 62 column on silica gel in chloroform. The product is eluted by a post-step gradient up to 10% methanol. The product is isolated according to the profile determined by chromatography in a thin layer of the collected; fractions, 2.2 g (49%) are obtained. Compounds. NMR with; 1.6 (-NH-) and 7.0-7.4 (meta-bromophenyl). . And N-tert-Butyl, xycarbonyl-B-alanyl-glycyl-L- (N-cyclopropylmethyl) -meta-bromophenylalanine amide. B a mixture of 40 ml of DMF and 2.1 g (7.1 mol) of the product with a C-adium 3, cooled to OC, was added 1.87 g (7.1 mol) to tert-butyloxycarbonyl-D-alanyl-glidyl and then 0.96 g (, 7.1 mmol J of OBT and 1.46 g (7.1 mmol of DCC. The mixture is stirred at 4 h and then at room temperature for 72 h. The mixture is then cooled to O C, the resulting precipitate was removed by filtration, the filtrate was evaporated in vacuo, the residue was dissolved in ethyl acetate and the solution was extracted successively with IN solution of sodium bicarbonate, lj5N citric acid solution and water. the tooth is dried over magnesium sulfate and evaporated in vacuo to an oil to obtain 1.5 g (40%) of the compound. K. IF tper-Butyloxycarbonyl-IN-methyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L- (n-cyclopropylmethyl a) -meta-bromophenylalanine amide. A mixture of 50 ml of trifluoroacetic acid containing 5 ml of anisole and 1.5 g (2.9 mmol) of the product from step I was stirred at 0 ° C for 30 minutes and evaporated in vacuo without heating. The resulting oil is diluted with ether. The product formed from the top by settling is decanted, and the remaining oil is dried under vacuum. To 15 ml of dAF, 0.856 g (2.9 mmol) of N rpeT-butyloxycarboyl-K-methyl-L-tyrosine is added. The mixture is cooled to -15 ° C and 0.32 ml (2.9 mmol) of NMM and 0.38 ml (2.9 mmol) of u-butyl chloroformate are quickly added to the stirred solution. Stirring ri 15 C is continued for the next process. The resulting salt of TFA of the peptide is dissolved in 10 ml of DMF. The solution is cooled to and a bottom portion of 0.32 ml (2.9 mmol) of NMM is added. The solution is stirred until the end of the process and mixed anhydride is added to the previously obtained solution. The resulting mixture is stirred at -15 ° C for 4 hours, the loan is slowly heated to room temperature and stirring is continued overnight. The mixture is then poured into an IN solution of sodium bicarbonate, the aqueous solution is extracted with ethyl acetate. The organic phase is separated and extracted successively with water, 5 with a 1.5N citric acid solution, and water. The ethyl acetate is then dried over MgSO4 and concentrated in vacuo. The oily residue (1.6 g) is dissolved in acetone and applied to two preparative plates with a thin layer. The development is carried out in a mixture of chloroform and methanol at a ratio of 9: 1. The main component is separated from the plates of those and is eluted with silica-5-gel, 0.8 g (39% of the target compound is obtained). L. M-methyl-L-tyrosyl-B-alanyl-glycyl-L- acetate salt (L-cyclopropylmethyl a) -meta-bromophenylalanine amide. In 15 ml of TFA containing 3 ml of anisole, 0.8 g (1.2 mmol) of the product obtained in stage K is added. The mixture is stirred at 0 ° C for 30 minutes, then dried The resulting solid is dissolved in 9.0 ml of a 0.1 M ammonium acetate solution containing 31% acetonitrile. The resulting solution 30 is chromatographed on a column of sy gelgel (4x72 cmK. The column was treated with a pressure of 4.2 kg / cm and the eluate was analyzed at 280 nm. The appropriate fractions were collected and lyophilized. The resulting solid was dissolved in a 0.2 M solution of acetic acid (10 ml) and the solution was passed through a column with Sephadex (5x100 cm) pre-equilibrated with the same solvent.The eluate was analyzed at 280 nm and the corresponding fractions were collected, lyophilized, and 773 mg (97%) of the compound were obtained. (oC) J + 6.64 (, 5, 1NHC1) .45 Elemental analysis. Found,%: C 54.30; H 5.99; N 10.28. (662.2) Calculated,%: C 54.38; H 6.09; 50 N 10.57. Amino acid analysis,%: Ala 0.97 Gly 1.03; NHj 0.99. PREMIUME 2. Acetate salt, L- (K-methyl) tyrosyl-B-apanyl-glycyl-js-L- (N-ethyl) -mst-bromophenyl-llanine amide. (oC) J + 7.1 ° (, 5, IN HC1). 9 N N Gl rota N N Al L-L am N N Gl Lm N N Al L-L am N N Gl 8 Elemental analysis. Found,%: C 53.09; H 6.13; . 11.13. (636.5) Calculated,%: C, 52.83; H 6.02; 11.00. Amino acid analysis,%: Ala 0,99; y 1.01; NH 1.04. Example 3. Acetate salt of L-THzyl-B-alanyl-glycyl-L- (N-methyl) -me-bromophenylalanine amide. (ct) 25. (, 5, IN HC1). Elemental analysis. Found,%: C 52.13; H 6.09; 11.39. C2TH3bNy0 r (623) Calculated,%: C 52.09; H 5.83; 11.25. Amino acid analysis,%: Tug 1.01; a 0.99; Gly 0.99; NH 1.01. PRI and MER 4. Acetate salt of (N-methyl) tyrosyl-B-alanyl-glycyl (N-ethyl-meth-methyl phenyl al-a-shn ida. (9.2 (with 0.5, IN HC1) Elemental analysis. Found,%; C 60.68; H 7.00; 12.46. C29H4 NjO (517.7) Calculated,%: C 60.93; H 7.23; 12, 25. Amino acid analysis, %: Ala 0.98; y 1.02; NHj 0.96. P r and M e r 5. Tyrosyl-O-alanyl-glycyl-L- (N-ethyl) e-chlorophenylalanine amide acetate salt. (D} - 13.7 ° (, 5, IN HC1). Elemental analysis. Found,%: C 55.84; H 6.37; 12.35. CH j NjO-jCl (578.1) Calculated,%: C 56 , 10; H 6.28; 12.12. Amino acid analysis,%: Tyr 1.02; a 0.99; Gly 0.98; NHj 0.88. Example p 6. The (N-methyl) tyrosyl acetate salt B-alanyl-glycyl- (N-ztil) -meta-chlorophenylalany ida. (oi) if -9.2 (, 5, IN HC1) Elemental analysis Found:% C 57.11; H 6.45; 12.15. C28H38N50-, C1 (592.1) Calculated% : C 56.80; H 6.47; 11.83. Amino acid analysis,%: A1A 0.99; y 1.00; NHj 1.01. Example: Acetate salt b-tyrosyl 0-alanyl-glcyl-L- (N-ethyl meta-iodophenylallain amide,, o (, 5., lN HCl). Elemental analysis. Found,%: C 48.40; H 5.25; N 10.66. C2THasN 07J (669.5) Calculated,%:, 44; H 5.42; N 10.46. Amino acid analysis ,: Trit 1.0 Ala 0,99; Gly 0.99; NH 1.05. Example 8. Acetate salt of b-tyrosyl B-apanyl-glycyl-L- (H-cyclopropylmethyl-meth-iodophenylalanine amide. (O (,) 8 (, 5, IM J Elemental analysis. Found,% : C 50.00; H 5.22; N 1C, 23 C2gK gNg07J Calculated: C 50.08; H 5.51; N 10.07. Amino acid analysis,%: Tug 0.9 Ala 1.01; Gly 0.99; NH 0.95. Example 9 p. Acetate salt 11, - (K methyl) tyrosyl-B-alanyl-glycyl-L - {N-cyclopropylmethyl bmeta-iodophenylalanine anide, (tii + 0.787 ° (, 5, W SNODC Elemental analysis. Found,%: C 50.50; H 5.40; H 9.88. Calculated,%: C 50.78; H 5.68; N 9, 81. Biological tests of the described tetrapettids. Analgesic activity from compounds formulas (T} are set using a mouse test using a hot plate. This test uses a vertical acrylic cylinder containing as a base a hot flat surface, the temperature of which is maintained at 52 ° C. Your mice are given subcutaneously certain beforehand the amount of the test compound dissolved or suspended in a suitable carrier, 15 minutes after applying the test compound, the mouse is placed on a hot flat surface. The latent state is measured in seconds before jumping the mouse from a hot flat surface. The agent possesses an analgesic activity that causes an increase in this latent state as compared to the consensus mouse, which was introduced only to the carrier. This may occur in the dose range, which does not cause a loss of motor coordination or ability to move. Table 1 presents the ED values obtained from the tests. (- the dose that causes the analgesic effect in 50% of the tested mice. The analgesic effect is defined as the reaction of the latent state in the presence of the test compound, which is greater than or equal to the control reaction of the latent state plus two standard deviations. The effect of analgesia in percent considered as a statistical value and calculated by the methods of regression analysis of dose-effect data. Each dose-effect curve must have at least four points and each point is determined using data x obtained for at least ten treated mice and ten control mice. Table 1 In addition, the formulas (1 | oblasti1) have a low propensity for physical dependence. This fact was established by means of a test connected with the study of the motor ability of mice. A high correlation was established between the degree of propensity for physical dependence of the connection and its ability to induce locomotor activity in myrtles.Motor activity in mice was measured using POMOP1I cylindrical cells, manufactured GOVERNMENTAL wire, 5.08 cm tall and 28 cm in diameter. Six cells are placed in a soundproofed, ventilated chamber with uniform illumination. The beam of light passes through the center of the cell to the photo cell, located on the opposite side. Two mice are placed in each cage for 1 hour in order to acclimatize to the surrounding conditions. Then, a certain amount of the test compound is subcutaneously injected into a pair of mice, the remainder of the steam is treated with a saline carrier that does not contain the test compound.
.r lc - i : ifllM :..r lc - i: ifllM:.
Затем мьопей возвращают на 3 ч в соответствующие им клетки. Записываетс число показаний счетчика за каждые 15 мин, а также общее число за трехчасовой период. Каждое прерывание луча света измен ет показание счетчика на единицу.Then myopia return for 3 hours in the corresponding cells. The number of meter readings for every 15 minutes is recorded, as well as the total for the three-hour period. Each interruption of a beam of light changes the meter reading by one.
В табл. 2 приведено среднее значение общих чисел дл каждой группыIn tab. 2 shows the average of the total numbers for each group.
из дес ти мышей с использованием конкретного соединени и определенной , дозы.out of ten mice using a specific compound and a specific dose.
Из табл.2 видно, что по сравнению с известными соединени ми соединени From Table 2 it can be seen that, in comparison with the known compounds, the compounds
формулы (I ) обладают существенно более низкой двигательной активностью.Formulas (I) have a significantly lower motor activity.