SK288337B6 - Oligosaccharide mixture - Google Patents
Oligosaccharide mixture Download PDFInfo
- Publication number
- SK288337B6 SK288337B6 SK781-2002A SK7812002A SK288337B6 SK 288337 B6 SK288337 B6 SK 288337B6 SK 7812002 A SK7812002 A SK 7812002A SK 288337 B6 SK288337 B6 SK 288337B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- oligosaccharides
- oligosaccharide
- milk
- animal milk
- oligosaccharide mixture
- Prior art date
Links
Abstract
Description
(54) Názov: Oligosacharidová zmes (57) Anotácia:(54) Name: Oligosaccharide mixture (57) Annotation:
Oligosacharidová zmes na báze oligosacharidov, majúca aspoň dve oligosacharidové frakcie, z ktorých každá sa skladá aspoň z dvoch rozdielnych oligosacharidov, pričom k nim nepatrí voľná laktóza, kde celkové spektrum oligosacharidov nachádzajúcich sa v oligosacharidovej zmesi sa líši od spektra oligosacharidov tohto druhu zvieracieho mlieka alebo týchto druhov zvieracieho mlieka, z ktorého alebo z ktorých sa získali oligosacharidové frakcie, a ak sa oligosacharidy získali len z jedného druhu zvieracieho mlieka, pomer neutrálnych oligosacharidov ku kyslým oligosacharidom je 90 až 60 : 10 až 40 % hmotn., alebo ak sa oligosacharidy získali aspoň z dvoch druhov zvieracieho mlieka, tieto oligosacharidy získané z každého druhu zvieracieho mlieka tvoria vždy aspoň 10 % hmotn. z celkových oligosacharidov nachádzajúcich sa v oligosacharidovej zmesi, pričom pomer neutrálnych oligosacharidov ku kyslým oligosacharidom je 90 až 60 : 10 až 40 % hmotn. Táto zmes môže byť zavedená do dojčenskej výživy, diétnych potravín alebo farmaceutického prostriedku a môže byť užitočná pri poruchách gastrointestinálnych funkcií, ktoré boli spôsobené bakteriálnym alebo vírusovým obsadením gastrointestinálneho traktu, alebo na zachovanie normálnych gastrointestinálnych funkcií.An oligosaccharide mixture based on oligosaccharides, having at least two oligosaccharide fractions, each consisting of at least two different oligosaccharides, not including free lactose, wherein the total spectrum of oligosaccharides present in the oligosaccharide mixture differs from that of oligosaccharides of this species or species. species of animal milk from or from which oligosaccharide fractions have been obtained, and if the oligosaccharides were obtained from only one species of animal milk, the ratio of neutral oligosaccharides to acid oligosaccharides is 90 to 60: 10 to 40% by weight, or if the oligosaccharides were obtained at least of the two types of animal milk, these oligosaccharides obtained from each type of animal milk each make up at least 10% by weight. of the total oligosaccharides present in the oligosaccharide mixture, the ratio of neutral oligosaccharides to acid oligosaccharides being 90 to 60:10 to 40% by weight. The composition may be incorporated into an infant formula, diet food, or pharmaceutical composition and may be useful in disorders of gastrointestinal function caused by bacterial or viral occupation of the gastrointestinal tract, or in maintaining normal gastrointestinal function.
Oblasť technikyTechnical field
Vynález sa týka oligosacharidovej zmesi obsahujúcej oligosacharidy, ktoré sa získali z jedného druhu alebo viacerých druhov mlieka zo zvierat a ktoré sú zložené z dvoch alebo viacerých monosacharidových jednotiek a použitia tejto oligosacharidovej zmesi na prípravu liečiva proti poruchám gastrointestinálnych funkcií.The invention relates to an oligosaccharide composition comprising oligosaccharides obtained from one or more animal milk species and which are composed of two or more monosaccharide units and to the use of this oligosaccharide composition for the preparation of a medicament for disorders of gastrointestinal function.
Koncentrácia oligosacharidov v zrelom ľudskom (materskom) mlieku je približne 10 g/1. V ľudskom mlieku bolo doteraz opísaných približne 80 oligosacharidov odlišujúcich sa svojou štruktúrou, ktoré sa skladajú z 3 až 13 monomérov; Newburg, D. S. a Neubauer, S. H. (1995) Carbohydrates in Milk: Analysis, Quantities and Significance, in: Handbook of Milk Composition, Jensen, R. G., editor. Academic press, 273 až 349. V štruktúrnej mnohotvárnosti oligosacharidov hrá veľkú úlohu štruktúrna a polohová izoméria. Pomer neutrálnych oligosacharidov k sializovaným (kyslým) oligosacharidom, prípadne oligosacharidovým štruktúram je v zrelom mlieku približne 10 : 1.The concentration of oligosaccharides in mature human (breast) milk is approximately 10 g / l. Approximately 80 oligosaccharides differing in structure, consisting of 3 to 13 monomers, have been described in human milk to date; Newburg, D. S. and Neubauer, S. H. (1995) Carbohydrates in Milk: Analysis, Quantities and Significance, in: Handbook of Milk Composition, Jensen, R. G., editor. Academic press, 273-349. Structural and positional isomerism plays a major role in the structural diversity of oligosaccharides. The ratio of neutral oligosaccharides to sialylated (acidic) oligosaccharides or oligosaccharide structures in mature milk is approximately 10: 1.
Oligosacharidy hrajú u ľudí pri špecifickej a nešpecifickej obrane proti infekciám nasledujúce dôležité úlohy:Oligosaccharides play the following important roles in humans in specific and non-specific defense against infections:
1. Oligosacharidy z ľudského mlieka predstavujú zdroj substrátu pre bifidobaktérie. Tým podporujú normálnu črevnú flóru potrebnú pre funkciu gastrointestinálneho traktu a potláčajú choroboplodné zárodky; Rose, C. S., Kuhn, R., Zilliken, F. und Gyorgy, P. (1954) Bifidus Factor. V. the Activity of a- and β-methylN-acetyl-D-glucosaminides, Árch. Biochem. Biophys. 49, 123 - 129.1. Oligosaccharides from human milk are a source of substrate for bifidobacteria. In this way, they support the normal intestinal flora necessary for the function of the gastrointestinal tract and suppress pathogens; Rose, C. S., Kuhn, R., Zilliken, F. and Gyorgy, P. (1954) Bifidus Factor. V. the Activity of a- and β-methylN-acetyl-D-glucosaminides, Árch. Biochem. Biophys. 49, 123 - 129.
2. Oligosacharidy zabraňujú adhézii choroboplodných zárodkov a/alebo substancií, ako sú napríklad baktérie, toxíny a eukaryotické parazity tým, že pôsobia ako špecifické analógy receptorov, čím sa zabraňuje prvému stupňu infekcie. V rôznych in vitro analýzach sa mohol dokázať antiadhezívny účinok oligosacharidov proti najrôznejším choroboplodným mikroorganizmom; Kunz, C. a Rudloff, S. (1993) Biological Functions of Oligosaccharides in Human Milk, Acta paediatr. 82, 903 - 912.2. Oligosaccharides prevent the adhesion of pathogens and / or substances such as bacteria, toxins and eukaryotic parasites by acting as specific receptor analogues, thus preventing the first stage of infection. In various in vitro analyzes, the antiadhesive effect of oligosaccharides against a variety of pathogenic microorganisms could be demonstrated; Kunz, C. and Rudloff, S. (1993) Biological Functions of Oligosaccharides in Human Milk, Acta paediatr. 82, 903 - 912.
3. Oligosacharidy podporujú obranyschopnosť proti infekciám ovplyvňovaním rôznych imunologický účinných buniek. Imunomodulačný účinok istých oligosacharidových štruktúr sa mohol dokázať na zvieracom modeli zvýšením produkcie interleukínu 10 (Velupillai, P. a Harn, D. A (1994) OligosaccharideSpecific Instruction of Interleukin 10 Production by B 220+ Cells from Schistosome-Infected Mice: a Mechanism for Regulation of CD4+ T-cell subsets, Proc. Natl. Acad. Sci. 91, 1 - 2.3. Oligosaccharides promote the defense against infections by affecting various immunologically active cells. The immunomodulatory effect of certain oligosaccharide structures could be demonstrated in an animal model by increasing the production of interleukin 10 (Velupillai, P. and Harn, D. A (1994) OligosaccharideSpecific Instruction of Interleukin 10 Production by B 220+ Cells from Schistosome-Infected Mice: a Mechanism for Regulation of CD4 + T-cell subsets, Proc Natl Acad Sci 91, 1-2.
Heterogenita oligosacharidov z väčšiny doteraz známych druhov mlieka cicavcov sa líši z mnohých hľadísk od ľudských mliečnych oligosacharidov. Vzhľadom na zloženie oligosacharidov existuje veľký počet kvantitatívnych a aj kvalitatívnych rozdielov. Druhové rozdiely v obsahu oligosacharidov v mlieku cicavcov sa vzťahujú predovšetkým na rozdiely v koncentrácii jednotlivých zložiek a taktiež štruktúry s podobnými charakteristickými znakmi a základnú štruktúru samotnú. V porovnaní s oligosacharidmi z ľudského mlieka je rozdielna sekvencia mo no sacharidov a aj naviazanie. Okrem toho množstvo väčšiny jednotlivých zložiek vo väčšine druhov zvieracieho mlieka je výrazne nižšie ako v ľudskom materskom mlieku.The heterogeneity of oligosaccharides from most known mammalian milk species differs in many respects from human dairy oligosaccharides. Due to the composition of oligosaccharides, there are a large number of quantitative as well as qualitative differences. Species differences in the content of oligosaccharides in mammalian milk relate mainly to differences in the concentration of the individual components and also to structures with similar characteristics and the basic structure itself. Compared to oligosaccharides from human milk, there is a different sequence of possible carbohydrates as well as binding. In addition, the amount of most of the individual components in most types of animal milk is significantly lower than in human breast milk.
Predpokladá sa, že tieto rozdiely sú podmienené požiadavkami gastrointestinálneho traktu novorodencov na zloženie oligosacharidov v mlieku. Tieto požiadavky sa veľmi menia v závislosti od druhu. Také rozdiely vzhľadom na požiadavky existujú teraz nielen v porovnaní novorodeného dieťaťa s novorodeným zvieraťom, ale aj medzi rôznymi novorodenými zvieratami. Rozdiely sú založené na stave funkcií gastrointestinálneho traktu novorodencov, na stupni vývinu imunitného systému, na výžive uprednostňovanej v závislosti od druhu a taktiež na veľmi špecifickom prostredí jedinca príslušného druhu.These differences are thought to be due to the requirements of the gastrointestinal tract of neonates for the composition of oligosaccharides in milk. These requirements vary greatly depending on the species. Such differences in requirements now exist not only in the comparison of a newborn with a newborn, but also between different newborns. The differences are based on the state of function of the gastrointestinal tract of the newborn, on the stage of development of the immune system, on the nutrition preferred depending on the species and also on the very specific environment of the individual of the respective species.
Ak sa skúša teraz nahrádzať ľudské mlieko umelým mliekom alebo detskou výživou (infant formula) na báze mlieka zo zvierat, potom dochádza ku konfrontácii s tým problémom, že mlieko jediného zvieracieho druhu podľa súčasného stavu poznania nemá heterogénnu štruktúrnu rôznorodosť vzhľadom na oligosacharidy, ktorá sa vyskytuje v ľudskom mlieku.If attempts are now being made to replace human milk with artificial milk or infant formula based on animal milk, then the problem is faced with the fact that the milk of a single animal species does not, according to the current state of knowledge, have heterogeneous structural diversity with respect to oligosaccharides. in human milk.
Úlohou predloženého vynálezu je poskytnutie oligosacharidovej zmesi skladajúcej sa z oligosacharidov, ktoré sa získali z jedného alebo viacerých druhov mlieka zvierat, ktorých pozitívny účinok a najmä ktorých antiinfekčný účinok čo najviac zodpovedá účinku oligosacharidov z ľudského mlieka.The object of the present invention is to provide an oligosaccharide mixture consisting of oligosaccharides obtained from one or more milk species of animals whose positive effect and in particular whose anti-infective effect corresponds as closely as possible to that of human milk oligosaccharides.
Táto úloha sa rieši prostredníctvom oligosacharidovej zmesi podľa znenia patentových nárokov.This object is achieved by an oligosaccharide mixture as defined in the claims.
Podstata vynálezuThe essence of the invention
Prekvapivo sa zistilo, že pomocou novej zmesi oligosacharidov z jedného, ale aj z rozličných druhov zvieracieho mlieka sa zvyšuje antiinfekčný a/alebo prebiotický účinok oligosacharidov zo zvieracieho mlieka.Surprisingly, it has been found that a new mixture of oligosaccharides from one but also from different types of animal milk increases the anti-infective and / or prebiotic effect of oligosaccharides from animal milk.
Predmetom vynálezu je oligosacharidová zmes na báze oligosacharidov, ktoré sa získali z jedného alebo viacerých druhov zvieracieho mlieka a ktoré sa skladajú z dvoch alebo viacerých monosacharidových jednotiek, ktorých podstata spočíva v tom, že má aspoň dve oligosacharidové frakcie, z ktorých každá sa skladá aspoň z dvoch rozdielnych oligosacharidov, pričom k nim nepatrí voľná laktóza, že celkové spektrum oligosacharidov nachádzajúcich sa v oligosacharidovej zmesi sa od spektra oligosacharidov tohto druhu zvieracieho mlieka alebo týchto druhov zvieracieho mlieka, z ktorého alebo z ktorých sa získali oligosacharidové frakcie, líši a žeThe present invention relates to an oligosaccharide mixture based on oligosaccharides obtained from one or more types of animal milk and consisting of two or more monosaccharide units, the essence of which consists in having at least two oligosaccharide fractions, each of which consists of at least two different oligosaccharides, excluding free lactose, that the total spectrum of oligosaccharides present in the oligosaccharide mixture differs from the spectrum of oligosaccharides of this type of animal milk or those species of animal milk from or from which the oligosaccharide fractions were obtained, and that
a) ak sa oligosacharidy získali len z jedného druhu zvieracieho mlieka, pomer neutrálnych oligosacharidov ku kyslým oligosacharidom je 90 až 60 : 10 až 40 % hmotn., alebo(a) if the oligosaccharides are obtained from only one type of animal milk, the ratio of neutral oligosaccharides to acid oligosaccharides is 90 to 60: 10 to 40% by weight, or
b) ak sa oligosacharidy získali aspoň z dvoch druhov zvieracieho mlieka, tieto oligosacharidy získané z každého druhu zvieracieho mlieka tvoria vždy aspoň 10 % hmotn. z celkových oligosacharidov nachádzajúcich sa v oligosacharidovej zmesi, pričom pomer neutrálnych oligosacharidov ku kyslím oligosacharidom je 90 až 60 : 10 až 40 % hmotn.(b) if the oligosaccharides have been obtained from at least two types of animal milk, these oligosaccharides obtained from each type of animal milk always comprise at least 10% by weight. of the total oligosaccharides present in the oligosaccharide mixture, the ratio of neutral oligosaccharides to acid oligosaccharides being 90 to 60:10 to 40% by weight.
Výhodne sú vystavané z jednej alebo viacerých z nasledujúcich monosacharidových jednotiek: D-glukózy, D-galaktózy, D-N-acetyglukozamínu, D-N-acetylgalaktozamínu, L-fukózy, D-manózy, sialových kyselín v D-forme a taktiež ich O-acetylovaných, sulfátovaných a fosforylovaných derivátov.Preferably they are composed of one or more of the following monosaccharide units: D-glucose, D-galactose, DN-acetylglucosamine, DN-acetylgalactosamine, L-fucose, D-mannose, sialic acids in D-form and also their O-acetylated, sulphated and phosphorylated derivatives.
Výhodne sa oligosacharidy získali z jedného alebo viacerých z nasledujúcich druhov zvieracieho mlieka: kravského, kozieho, ovčieho, kobylieho, ťavieho a byvolieho mlieka.Preferably, the oligosaccharides are obtained from one or more of the following types of animal milk: cow's, goat's, sheep's, mare's, camel's and buffalo's milk.
Oligosacharidy sa získali z nemiešaného alebo zmiešaného mlieka alebo srvátky alebo nezmiešaných alebo zmiešaných mliečnych výrobkov z jedného alebo viacerých druhov zvierat.Oligosaccharides were obtained from unmixed or blended milk or whey or unmixed or blended dairy products from one or more animal species.
Výhodne oligosacharidová zmes okrem oligosacharidov, prípadne oligosacharidových frakcií, získaných zo zvieracieho mlieka obsahuje taktiež laktózu, ktorá môže pochádzať z jedného druhu zvieracieho mlieka alebo z viacerých druhov zvieracieho mlieka, z ktorých sa získali oligosascharidy, jeden alebo viac oligosacharidov nepochádzajúcich zo zvieracieho mlieka a/alebo oligosacharidy uvoľnené pri získavaní týchto oligosacharidov chemickou, enzymatickou a/alebo technologickou a/alebo technologickou premenou glykolipidov a/alebo glykoproteínov.Preferably, in addition to the oligosaccharides or oligosaccharide fractions obtained from animal milk, the oligosaccharide mixture also contains lactose, which may be derived from one or more animal milk from which oligosaccharides, one or more non-animal milk oligosaccharides have been obtained, and / oligosaccharides released during the recovery of these oligosaccharides by chemical, enzymatic and / or technological and / or technological conversion of glycolipids and / or glycoproteins.
Výhodne je oligosacharidová zmes zavedená do dojčenskej výživy, diétnych potravín alebo farmaceutického prostriedku alebo predstavuje prísadu do inak kompletnej výživy.Preferably, the oligosaccharide mixture is introduced into an infant formula, diet food or pharmaceutical composition or is an additive to an otherwise complete diet.
Výhodne je oligosacharidová zmes zavedená do dojčenskej výživy, diétnych potravín alebo farmaceutického prostriedku alebo predstavuje prísadu do inak kompletnej výživy.Preferably, the oligosaccharide mixture is introduced into an infant formula, diet food or pharmaceutical composition or is an additive to an otherwise complete diet.
Predmetom vynálezu je tiež použitie oligosacharidovej zmesi podľa vynálezu pre prípravu liečiva proti poruchám gastrointestinálnych funkcií, ktoré boli spôsobené bakteriálnym alebo vírusovým obsadením gastrointestinálneho traktu, alebo na zachovanie normálnych gastrointestinálnych funkcií.The invention also relates to the use of an oligosaccharide composition according to the invention for the preparation of a medicament for disorders of gastrointestinal function caused by bacterial or viral occupation of the gastrointestinal tract or for the maintenance of normal gastrointestinal functions.
Výhodne je oligosacharidová zmes určená pre použitie v množstve 10 mg/kg až 4 g/kg telesnej hmotnosti a deň.Preferably, the oligosaccharide mixture is for use in an amount of 10 mg / kg to 4 g / kg of body weight per day.
Podstatný aspekt vynálezu spočíva teda v tom, že sa novým spôsobom vytvoria oligosacharidové frakcie zo zvieracieho mlieka jedného druhu, prípadne rôznych druhov tak, aby sa dosiahol zvýšený biologický účinok. Pri tomto novom vytváraní, prípadne zmiešavaní, sa prirodzene musí zaistiť, aby nevznikla žiadna zmes, ktorá by zodpovedala pôvodnej zmesi vyskytujúcej sa v jednom zvieracom mlieku alebo vo viacerých druhoch zvieracieho mlieka. Z tohto dôvodu sa musí celkové spektrum oligosacharidov nachádzajúcich sa v oligosacharidovej zmesi odlišovať od spektra druhu zvieracieho mlieka alebo druhov zvieracieho mlieka, z ktorého alebo z ktorých boli získané oligosacharidové frakcie. Ak sa oligosacharidová zmes podľa vynálezu získa len z jedného druhu zvieracieho mlieka, potom sa z tohto dôvodu má klásť dôraz na charakteristický znak týkajúci sa celkového spektra, aby nová kompozícia, prípadne zmes oligosacharidových frakcií získaná z tohto jediného druhu zvieracieho mlieka neviedla znovu k pôvodnému druhu zvieracieho mlieka. Ak sa oligosacharidová zmes získa z viacerých druhov zvieracieho mlieka, potom nová kompozícia alebo nová zmes nemôže viesť k tomu, aby získaná oligosacharidová zmes zodpovedala oligosacharidovému zloženiu pôvodne použitých druhov zvieracieho mlieka.An essential aspect of the invention therefore consists in that oligosaccharide fractions are formed in a new manner from animal milk of one or different species so as to achieve an increased biological effect. During this new formation or mixing, it must, of course, be ensured that no mixture is formed which corresponds to the original mixture occurring in one animal milk or in several types of animal milk. Therefore, the total spectrum of oligosaccharides present in the oligosaccharide mixture must be different from the spectrum of the animal milk species or animal milk species from or from which the oligosaccharide fractions were obtained. If the oligosaccharide mixture according to the invention is obtained from only one type of animal milk, then emphasis should be placed on the overall spectrum characteristic so that the new composition or mixture of oligosaccharide fractions obtained from this single type of animal milk does not lead back to the original species. animal milk. If the oligosaccharide mixture is obtained from several animal milk species, then the new composition or the new mixture cannot lead to the oligosaccharide mixture obtained corresponding to the oligosaccharide composition of the animal milk species originally used.
Ak sa oligosacharidy z oligosacharidovej zmesi podľa vynálezu získajú len z jedného druhu zvieracieho mlieka, potom je okrem toho pomer neutrálnych oligosacharidov ku kyslým oligosacharidom 90 až 60 : 10 až 40 % hmotn. Inými slovami existuje neutrálna oligosacharidová frakcia vedľa kyslej oligosacharidovej frakcie. Obidve tieto frakcie obsahujú aspoň dva rozdielne oligosacharidy. Zmenou pomerov kyslej oligosacharidovej frakcie k neutrálnej oligosacharidovej frakcii v porovnaní s pomermi neutrálnych oligosacharidov ku kyslým oligosacharidom, pôvodne existujúcim vo zvieracom mlieku, sa dá dosiahnuť zreteľné zvýšenie efektívnosti ich fyziologického účinku.In addition, if the oligosaccharides of the oligosaccharide mixture according to the invention are obtained from only one type of animal milk, then the ratio of neutral oligosaccharides to acid oligosaccharides is 90 to 60:10 to 40% by weight. In other words, there is a neutral oligosaccharide fraction next to the acid oligosaccharide fraction. Both of these fractions contain at least two different oligosaccharides. By changing the ratios of the acid oligosaccharide fraction to the neutral oligosaccharide fraction compared to the ratios of the neutral oligosaccharides to the acid oligosaccharides originally present in the animal's milk, a marked increase in the effectiveness of their physiological effect can be achieved.
Ak sa oligosacharidy získajú z rôznych, a teda z aspoň dvoch druhov zvieracieho mlieka, nová kompozícia, prípadne nová zmes sa dá realizovať tak, že oligosacharidy získané z každého druhu zvieracieho mlieka tvoria aspoň vždy 10 % hmotn. z oligosacharidov nadchádzajúcich sa celkom v oligosacharidovej zmesi. Ak sa oligosacharidy získajú z dvoch druhov zvieracieho mlieka, potom musia oligosacharidy získané z jedného druhu zvieracieho mlieka tvoriť aspoň 10 % hmotn., zatiaľ čo oligosacharidy získané z iného druhu zvieracieho mlieka tvoria taktiež aspoň 10 % hmotn. a maximálne 90 % hmotn. a naopak. Ak sa oligosacharidy naproti tomu získajú z troch alebo viacerých druhov zvieracieho mlieka, potom musia oligosacharidy len z dvoch druhov zvieracieho mlieka tvoriť aspoň 10 % hmotn. Oligosacharidy získané z ďalších druhov zvieracieho mlieka môžu tvoriť menej ako 10 % hmotn.If the oligosaccharides are obtained from different, and thus from at least two, types of animal milk, the new composition or the new mixture can be realized in such a way that the oligosaccharides obtained from each type of animal milk make up at least 10% by weight. of oligosaccharides occurring entirely in the oligosaccharide mixture. If oligosaccharides are obtained from two types of animal milk, then oligosaccharides obtained from one type of animal milk must constitute at least 10% by weight, while oligosaccharides obtained from another type of animal milk also constitute at least 10% by weight. and a maximum of 90 wt. and vice versa. If, on the other hand, the oligosaccharides are obtained from three or more types of animal milk, then the oligosaccharides from only two types of animal milk must make up at least 10% by weight. Oligosaccharides obtained from other types of animal milk may constitute less than 10% by weight.
Ako zdroj na prípravu oligosacharidovej zmesi podľa vynálezu sa môžu používať všetky druhy zvieracieho mlieka, pričom sa prednostne používajú frakcie z kravského, kozieho, ovčieho, kobylieho, ťavieho a byvolieho mlieka.All types of animal milk can be used as a source for the preparation of the oligosaccharide mixture according to the invention, with fractions from cow's, goat's, sheep's, mare's, camel's and buffalo's milk being preferred.
Izolácia oligosacharidových frakcií sa uskutočňuje pomocou známych oddeľovacích spôsobov. Odtučnenie sa môže uskutočňovať prostredníctvom odstreďovania použitím odstredivky. Oddelenie proteínov sa môže uskutočňovať ultrafiltráciou, prípadne vyzrážaním rozpúšťadlom (napríklad etanolom, acetónom). Obsah laktózy sa môže znižovať pomocou jedného alebo viacerých z nasledujúcich spôsobov: kryštalizáciou, filtráciou, chromatografickými metódami (chromatografia s výmenou ligandov, gélová filtrácia, elučná chromatografia, recyklačná chromatografia a simulovaná protiprúdová chromatografia (SMB)). Minerálne látky sa oddeľujú elektrodialýzou, nanofiltráciou, iónovou výmenou a/alebo reverznou osmózou. Frakcionácia oligosacharidov na neutrálne a kyslé oligosacharidy sa uskutočňuje jednou z vyššie uvedených chromatografických metód a/alebo anexovou chromatografiou a taktiež alternatívne filtráciou.Isolation of oligosaccharide fractions is performed using known separation methods. Defatting can be performed by centrifugation using a centrifuge. Protein separation can be performed by ultrafiltration or precipitation with a solvent (e.g. ethanol, acetone). The lactose content can be reduced by one or more of the following methods: crystallization, filtration, chromatographic methods (ligand exchange chromatography, gel filtration, elution chromatography, recycling chromatography, and simulated countercurrent chromatography (SMB)). Minerals are separated by electrodialysis, nanofiltration, ion exchange and / or reverse osmosis. The fractionation of oligosaccharides into neutral and acid oligosaccharides is carried out by one of the above chromatographic methods and / or anion exchange chromatography and also alternatively by filtration.
Podľa prednostnej formy uskutočnenia sa oligosacharidová zmes podľa vynálezu, ktorej oligosacharidy sa získavajú aspoň z dvoch druhov zvieracieho mlieka, novým spôsobom vytvára tak, aby taktiež v tomto prípade bol pomer neutrálnych oligosacharidov ku kyslým oligosacharidom 90 až 60 : 10 až 40 % hmotn.According to a preferred embodiment, the oligosaccharide mixture according to the invention, the oligosaccharides of which are obtained from at least two kinds of animal milk, is formed in a new manner so that also in this case the ratio of neutral oligosaccharides to acid oligosaccharides is 90 to 60:10 to 40% by weight.
Pomocou hodnôt pomerov v predložených podkladoch 90 až 60 : 10 až 40 % hmotn. sa zároveň zahŕňajú a zverejňujú aspoň všetky celočíselné medzihodnoty, napríklad 89 : 11, 88 : 12, 87 : 13, 85 : 15, 80 : 20, 79 : 21, 75 : 25, 74 : 26, 73 : 27, 72 : 28, 68 : 32, 67 : 33, 66 : 34, 65 : 35, 64 : 36, 63 : 37, 62 : 38, 61 : 39.By means of ratio values in the present substrates of 90 to 60: 10 to 40% by weight. at least all integer intermediate values are included and published at the same time, for example 89: 11, 88: 12, 87: 13, 85: 15, 80: 20, 79: 21, 75: 25, 74: 26, 73: 27, 72: 28 , 68: 32, 67: 33, 66: 34, 65: 35, 64: 36, 63: 37, 62: 38, 61: 39.
Prednostne sú oligosacharidy v oligosacharidovej zmesi podľa vynálezu vystavané z jednej alebo viacerých z nasledujúcich monosacharidových jednotiek: D-glukózy, D-galaktózy, D-N-acetylglukozamínu, D-N-acetylgalaktozamínu, L-fukózy, D-manózy, sialových kyselín v D-forme (napríklad kyselina D-N-acetylneuramínová a kyselina D-N-glykolylneuramínová) a taktiež ich O-acetylovaných, sulfátovaných a fosforylovaných derivátov.Preferably, the oligosaccharides in the oligosaccharide mixture of the invention are composed of one or more of the following monosaccharide units: D-glucose, D-galactose, DN-acetylglucosamine, DN-acetylgalactosamine, L-fucose, D-mannose, sialic acids in D-form (e.g. DN-acetylneuraminic acid and DN-glycolylneuraminic acid) as well as their O-acetylated, sulfated and phosphorylated derivatives.
Voľná laktóza nachádzajúca sa vo zvieracom mlieku vo veľkom množstve sa ostatne nepočíta k oligosacharidom získaným zo zvieracieho mlieka, ktoré vytvárajú oligosacharidové frakcie používané podľa vynálezu. Ale aj v oligosacharidovej zmesi podľa vynálezu môže byť voľná laktóza okrem oligosacharidových frakcií používaných podľa vynálezu.The free lactose present in the animal's milk in large quantities does not, moreover, count as oligosaccharides obtained from animal milk, which form the oligosaccharide fractions used according to the invention. However, there may also be free lactose in the oligosaccharide mixture according to the invention in addition to the oligosaccharide fractions used according to the invention.
Inými slovami oligosacharidová zmes podľa vynálezu môže byť vytvorená výlučne z oligosacharidových frakcií, ktoré obsahujú oligosacharidy, ktoré sa získali z jedného alebo viacerých druhov zvieracieho mlieka a sú zložené z dvoch alebo viacerých monosacharidových jednotiek, pričom voľná laktóza k nim nepatrí. Ale oligosacharidová zmes, ako sa uviedlo, môže obsahovať voľnú laktózu, i keď teraz pochádza zo zvieracieho mlieka alebo nie. Ďalej oligosacharidová zmes môže obsahovať jeden alebo viac oligosacharidov, ktoré nepochádzajú zo zvieracieho mlieka. Teda oligosacharidová zmes podľa vynálezu sa môže napríklad zmiešať s obvyklými sacharidmi, ktoré sa používajú na prípravu výživy a najmä dojčenskej výživy. Okrem toho v oligosacharidovej zmesi podľa vynálezu môžu byť obsiahnuté taktiež také oligosacharidy, ktoré sa uvoľnili pri získavaní oligosacharidov, prípadne oligosacharidových frakcií, používaných podľa vynálezu, chemickou, enzymatickou a/alebo technologickou premenou z glykolipidov a/alebo glykoproteínov.In other words, the oligosaccharide mixture according to the invention can be formed exclusively from oligosaccharide fractions which contain oligosaccharides obtained from one or more kinds of animal milk and are composed of two or more monosaccharide units, free of which lactose is not present. But the oligosaccharide mixture, as mentioned, may contain free lactose, whether it now comes from animal milk or not. Furthermore, the oligosaccharide mixture may contain one or more oligosaccharides that are not derived from animal milk. Thus, for example, the oligosaccharide mixture according to the invention can be mixed with customary carbohydrates which are used for the preparation of food and in particular baby food. In addition, oligosaccharides which have been liberated during the recovery of the oligosaccharides or oligosaccharide fractions used according to the invention by chemical, enzymatic and / or technological conversion from glycolipids and / or glycoproteins can also be present in the oligosaccharide mixture according to the invention.
Keď sa v rámci predložených podkladov hovorí o oligosacharidoch, potom sa tento výraz vzťahuje najmä na také oligosacharidy, ktoré sa získali zo zvieracieho mlieka. Okrem toho môžu byť prítomné aj iné oligosacharidy, ako sa to uviedlo vyššie, pričom táto okolnosť sa zmieňuje alebo vyplýva z tejto súvislosti.When oligosaccharides are referred to in the context of the present documents, this term refers in particular to those oligosaccharides which have been obtained from animal milk. In addition, other oligosaccharides may be present, as noted above, and this is mentioned or indicated in this context.
Prednostný zdroj na izoláciu oligosacharidov predstavujú mliečne výrobky, z ktorých sa čiastočne a/alebo úplne odstránili proteínové frakcie a taktiež tuk. Spracovanie a frakcionácia z produktov, ako je napríklad frakcia laktózy a minerálnych látok, ktorá vzniká pri získavaní smotany, kazeínová frakcia a ďalšie zložky, sa zreteľne zjednodušuje. Supernatant vzniknutý pri výrobe farmaceutickej laktózy taktiež predstavuje vhodný východiskový zdroj pre rôzne oligosacharidy. Pri tom sa pred uskutočnením vlastnej izolácie frakcií môže mlieko, prípadne srvátka od jedného zvieracieho druhu alebo od rôznych zvieracích druhov pred frakcionáciou oligosacharidov v požadovanom pomere miešať, ako je to potrebné pre účinnú oligosacharidovú zmes jednotlivých štruktúr alebo štruktúrnych skupín.Preferred sources for the isolation of oligosaccharides are dairy products from which protein fractions as well as fat have been partially and / or completely removed. The processing and fractionation of products such as the lactose and mineral fraction, which is formed during the recovery of cream, the casein fraction and other ingredients, is clearly simplified. The supernatant produced in the production of pharmaceutical lactose is also a suitable starting source for various oligosaccharides. In this case, milk or whey from one animal species or from different animal species can be mixed in the desired ratio before the fractionation of the oligosaccharides, as is necessary for an effective oligosaccharide mixture of the individual structures or structural groups.
Oligosacharidová zmes podľa vynálezu sa môže používať vo forme s vysokou koncentráciou alebo v čistej forme pri poruchách gastrointestinálnych funkcií, pri ktorých hrá úlohu dysbaktéria (t. j. porucha gastrointestinálnej flóry, napríklad po podávaní antibiotík alebo iných medikamentov ovplyvňujúcich/drevnú flóru po neznášanlivosti potravín atď.), prípadne vírusové infekcie. Môže sa používať taktiež na prevenciu takých gastrointestinálnych infekcií. Okrem toho oligosacharidová zmes podľa vynálezu sa môže pridávať do dojčenskej výživy, diétnych potravín alebo farmaceutického prostriedku.The oligosaccharide mixture according to the invention can be used in high concentration form or in pure form for disorders of gastrointestinal function in which dysbacteria play a role (ie disorder of the gastrointestinal flora, for example after administration of antibiotics or other drugs affecting the wood flora after food intolerance, etc.). possibly viral infections. It can also be used to prevent such gastrointestinal infections. In addition, the oligosaccharide composition of the invention may be added to an infant formula, diet food or pharmaceutical composition.
Oligosacharidová zmes podľa vynálezu môže predstavovať aj prísadu k inak kompletnej výžive. Takými výživami sú napríklad dojčenské výživy, prípadne infant formulae a prípravky na enterálnu klinickú výživu. Ďalej sa môže používať ako prísada do obvyklých potravín na zachovanie normálnych gastrointestinálnych funkcií (v zmysle prevencie) a taktiež na zlepšenie gastrointestinálnych funkcií po poruchách, pri ktorých hrá úlohu nevhodné bakteriálne alebo vírusové rozloženie v gastrointestinálnom trakte.The oligosaccharide composition of the invention may also be an additive to an otherwise complete diet. Such diets are, for example, infant formulas or infant formulations and preparations for enteral clinical nutrition. Furthermore, it can be used as an additive in conventional foods to maintain normal gastrointestinal functions (in terms of prevention) and also to improve gastrointestinal functions after disorders in which inappropriate bacterial or viral distribution in the gastrointestinal tract plays a role.
Oligosacharidová zmes podľa vynálezu môže byť upravená vo forme kapsúl, prípadne prášku alebo v zriedenej forme, ako prísada k inak kompletnej instantnej výžive.The oligosaccharide mixture according to the invention can be formulated in the form of capsules or powder or in diluted form as an additive to an otherwise complete instant nutrition.
Oligosacharidová zmes podľa vynálezu sa prednostne používa v množstve aspoň 10 mg/kg až 4 g/kg telesnej hmotnosti a na deň, pričom miligramové hodnoty sa vzťahujú na tri oligosacharidy v oligosacharidovej zmesi podľa vynálezu, ktoré sa získali zo zvieracieho mlieka. Iné oligosacharidy, ktoré sú prípadne k dispozícii, ako je napríklad laktóza a oligosacharidy nepochádzajúce zo zvieracieho mlieka, sa pri tom nechávajú nepovšimnuté. Obzvlášť prednostne sa podáva približne 100 mg/kg a deň.The oligosaccharide mixture according to the invention is preferably used in an amount of at least 10 mg / kg to 4 g / kg of body weight and per day, the milligram values relating to the three oligosaccharides in the oligosaccharide mixture according to the invention obtained from animal milk. Other oligosaccharides which are optionally available, such as lactose and oligosaccharides not derived from animal milk, are left unnoticed. Particularly preferably, about 100 mg / kg per day is administered.
Vynález sa v nasledujúcom texte bližšie vysvetľuje na základe príkladov opisujúcich prednostne formy uskutočnenia.The invention is explained in more detail in the following on the basis of examples describing preferred embodiments.
Príklady uskutočnenia vynálezuExamples of embodiments of the invention
Príklad 1Example 1
100 1 kravského mlieka sa spracuje nasledujúcim spôsobom:100 l of cow's milk are processed as follows:
Oddelenie tuku sa uskutočňuje prostredníctvom odstreďovania pri teplote 45 °C. Vzniknuté odstredené mlieko sa deproteinuje zrážaním etanolom (konečná koncentrácia 66 % etanolu). Vyzrážaný precipitát sa oddelí pomocou odstredivky. Etanol a časť vody sa odparí pomocou spádovej odparky tak, aby objem bol 40 1. V ňom sú približne 4 kg laktózy, 1 kg minerálnych látok a iné rozpustné zložky, ako napríklad vo vode rozpustné vitamíny, močovina alebo citráty. Podiel oligosacharidov je približne 10 g. Oligosacharidová frakcia pozostáva približne z rovnakých dielov neutrálnych a sialyzovaných Štruktúr. Pomocou anexovej chromatografie na AG 1 x 2 sa uskutočňuje delenie na neutrálnu (elučné činidlo: demineralizovaná voda) a kyslú frakciu (elučné činidlo: 300 mM octan amónny). Z neutrálnej frakcie sa odstráni 60 % laktózy pomocou kryštalizačnej techniky. Pomocou gélovej chromatografie na Toyopearl HW 40 (S) sa dosiahne to, že sa získa 5 g neutrálnej oligosacharidovej frakcie, v ktorej zvyškový obsah laktózy je približne 10 %. Z frakcie sialyzovaných oligosacharidov sa elektrodialýzou odstráni anexový elučný tlmivý roztok (octan amónny) a frakcia sa taktiež lyofilizuje ako neutrálna oligosacharidová frakcia. Týmto spôsobom sa môže získať 4,5 g sialyzovanej oligosacharidovej frakcie. Pomocou novej kompozície z 1 g kyslej frakcie s 5 g neutrálnej frakcie sa získa aktívnejšia zmes ako v prípade prírodného zloženia.The fat is separated by centrifugation at 45 ° C. The resulting skim milk is deproteinized by ethanol precipitation (final concentration 66% ethanol). The precipitated precipitate is separated by centrifugation. The ethanol and part of the water are evaporated by means of a evaporator to a volume of 40 L. It contains approximately 4 kg of lactose, 1 kg of minerals and other soluble constituents, such as water-soluble vitamins, urea or citrates. The proportion of oligosaccharides is approximately 10 g. The oligosaccharide fraction consists of approximately equal parts of the neutral and sialylated structures. Separation into neutral (eluent: demineralized water) and acidic fraction (eluent: 300 mM ammonium acetate) is carried out by anion exchange chromatography on AG 1 x 2. 60% of the lactose is removed from the neutral fraction by a crystallization technique. Gel permeation chromatography on Toyopearl HW 40 (S) gave 5 g of a neutral oligosaccharide fraction in which the residual lactose content was approximately 10%. Anion exchange elution buffer (ammonium acetate) was removed from the sialylated oligosaccharide fraction by electrodialysis, and the fraction was also lyophilized as a neutral oligosaccharide fraction. In this way, 4.5 g of sialylated oligosaccharide fraction can be obtained. A new composition of 1 g of the acid fraction with 5 g of the neutral fraction gives a more active mixture than in the case of the natural composition.
Príklad 2Example 2
Srvátky vznikajúce pri výrobe syra z kozieho, ovčieho a kravského mlieka sa pred spracovaním zmiešajú v pomere 3:1:1 tak, aby bolo k dispozícii 4000 1 celkovej srvátky od troch rôznych druhov zvierat. Ultrafiltráciou s polysulfónovou membránou (cutoff 20 kDa) sa oddelí zvyškový tuk, glykomakropeptid nachádzajúci sa v roztoku a proteíny zo srvátky. Permeát sa nechá následkom reverznej osmózy skoncentrovať na 900 1. Ďalší spôsob postupu zodpovedá vyššie opísanému, pričom najskôr sa uskutočňuje kryštalizácia laktózy a potom anexová chromatografia s cieľom oddeliť peptidy. Frakcie z elučných stupňov s demineralizovanou vodou a 300 mM octanom amónnym sa spoja, skoncentrujú, elektrodialyzujú a lyofilizujú. Môže sa získať zmes oligosacharidov troch rôznych druhov v množstve 570 g. Po ďalšom delení gélovou filtráciou a odsolení elektrodialýzou sa môže získať požadovaný produkt lyofilizáciou. Analýza prostredníctvom gélovej filtrácie, HPAEC-PAD a MALDI-MS ukazuje, že podľa použitých druhov mlieka a zmiešavacieho pomeru je pomer kyslých oligosacharidov k neutrálnym oligosacharidom 1:5. Podiel galaktozyllaktózy sa môže vyčísliť v dôsledku vysokého podielu kozej srvátky na 120 g. V ovčom mlieku prevláda kyselina N-glykolylneuramínová v porovnaní s kyselinou N-acetylneuramínovou ako dôležitá zložka kyslých oligosacharidov. Preto sa podiel glykolylneuraminyloligosacharidov zvyšuje v porovnaní s kozím a kravským mliekom.The whey resulting from the production of goat's, sheep's and cow's milk cheese is mixed in a ratio of 3: 1: 1 before processing so that 4000 l of total whey from three different animal species are available. Residual fat, glycomacropeptide in solution and whey proteins are separated by ultrafiltration with a polysulfone membrane (cutoff 20 kDa). The permeate is allowed to concentrate to 900 1 as a result of reverse osmosis. Another procedure is as described above, first crystallizing the lactose and then anion exchange chromatography to separate the peptides. Fractions from the elution steps with demineralized water and 300 mM ammonium acetate were combined, concentrated, electrodialyzed and lyophilized. A mixture of oligosaccharides of three different species in an amount of 570 g can be obtained. After further separation by gel filtration and desalting by electrodialysis, the desired product can be obtained by lyophilization. Analysis by gel filtration, HPAEC-PAD and MALDI-MS shows that, depending on the types of milk used and the mixing ratio, the ratio of acid oligosaccharides to neutral oligosaccharides is 1: 5. The proportion of galactosyllactose can be calculated due to the high proportion of goat whey at 120 g. N-glycolylneuraminic acid predominates in sheep's milk compared to N-acetylneuraminic acid as an important component of acid oligosaccharides. Therefore, the proportion of glycolylneuraminyloligosaccharides increases compared to goat's and cow's milk.
Príklad 3Example 3
Súčasne sa spracováva kobylie a kozie mlieko. Z každého je k dispozícii 50 1. Z každého sa odstredením, vyzrážaním proteínov etanolom a separáciou získa frakcia obsahujúca cukry a minerálne látky. Použitím rotačnej odparky sa obidva roztoky skoncentrujú na 8 1. Pomocou chromatografie s výmenou ligandov na AG 501 x 8 (Ca2+-forma) a elúcie demineralizovanou vodou sa dosiahne chromatografické oddelenie laktózy a monosacharidov na jednej strane a na druhej strane subfrakcionácia oligosacharidov. Z kobylieho mlieka sa medzi elučnou oblasťou vylúčeného objemu a tetrasacharidmi zhromaždí frakcia, ktorá sa použije na ďalšiu novú kompozíciu oligosacharidov. Oddelenie frakcie obsahujúcej cukry a minerálne látky z kozieho mlieka na rovnakej fáze má za následok vznik celkovej oligosacharidovej frakcie ochudobnenej o laktózu a monosacharidy. Po odsolení a súčasnom skoncentrovaní nanofiltráciou každej frakcie sa uskutočňuje lyofilizácia. Obidve frakcie sa zmiešajú v zmiešavacom pomere 2 : 5 (kobylia oligosacharidová frakcia : kozia oligosacharidová frakcia).At the same time, mares and goat's milk are processed. 50 l are available from each. A fraction containing sugars and minerals is obtained from each by centrifugation, precipitation of the proteins with ethanol and separation. Using a rotary evaporator, both solutions are concentrated to 8 l. Chromatographic separation of lactose and monosaccharides on the one hand and subfractionation of oligosaccharides is achieved by ligand exchange chromatography on AG 501 x 8 (Ca 2+ -form) and elution with demineralized water. From the mare's milk, a fraction is collected between the elution area of the excreted volume and the tetrasaccharides, which is used for the next new oligosaccharide composition. Separation of the fraction containing sugars and minerals from goat's milk at the same stage results in a total oligose saccharide fraction depleted in lactose and monosaccharides. After desalting and simultaneous concentration by nanofiltration of each fraction, lyophilization is performed. The two fractions are mixed in a mixing ratio of 2: 5 (mare oligosaccharide fraction: goat oligosaccharide fraction).
Príklad 4Example 4
Kozie mlieko sa spracuje tak, ako sa opisuje v príklade 1. Pomocou anexovej chromatografie na AG 1 x 2 sa získa kyslá frakcia, ktorej hlavné zložky sú 2,3'- a 2,6'-sialyllaktóza a 2,3'- a 2,6'-N-glykolylneuraminyllaktóza. Tieto frakcie sa ďalej delia chromatografiou na materiáli s reverznými fázami tak, že vznikne frakcia skladajúca sa z 2,3'- a 2,6'-N-glykolylneuraminyllaktózy. Táto sa odsolí elektrodialýzou, vysuší rozprašovaním a dá sa k dispozícii pre ďalšie zmesi.Goat's milk is processed as described in Example 1. An acidic fraction is obtained by anion exchange chromatography on AG 1 x 2, the main components of which are 2,3'- and 2,6'-sialyllactose and 2,3'- and 2'-sialyllactose. , 6'-N-glycolylneuraminyllactose. These fractions are further separated by chromatography on reverse phase material to give a fraction consisting of 2,3'- and 2,6'-N-glycolylneuraminyllactose. This is desalted by electrodialysis, spray dried and made available for further mixtures.
Z kravskej srvátky sa pomocou gélovej filtrácie izoluje frakcia zložená zo šiestich neutrálnych trisacharidov: tri izomérne galaktozyllaktózy, fukozylovaný laktozamín a dve laktózové jednotky predĺžené N-acetylgalaktozamínom, prípadne N-acetylglukozamínom.A fraction composed of six neutral trisaccharides is isolated from cow whey by gel filtration: three isomeric galactosyllactoses, fucosylated lactosamine and two lactose units extended with N-acetylgalactosamine or N-acetylglucosamine.
Kyslá frakcia kozieho mlieka, ktorej prevládajúcu štruktúru tvorí 2,3-izomér, sa zmieša v pomere 1 : 7 s neutrálnou frakciou trisacharidov z kravskej srvátky v suchom stave a dá sa k dispozícii na pokusy s krmivami.The acid fraction of goat's milk, the predominant structure of which consists of the 2,3-isomer, is mixed 1: 7 with the neutral fraction of trisaccharides from cow's whey in the dry state and is available for feeding experiments.
Príklad 5Example 5
Z kobylieho mlieka sa uvedenými metódami izoluje štruktúra lakto-N-neotetrózy a lakto-N-neohexózy. Tieto oligosacharidy sa nachádzajú taktiež v ľudskom mlieku.The structure of lacto-N-neotetrose and lacto-N-neohexose is isolated from mare's milk by the above methods. These oligosaccharides are also found in human milk.
Z kravského mlieka sa uvedenými metódami chromá to graficky izoluje a disialyllaktóza a lyofilizuje sa.It is chromatographically isolated from cow's milk and disialyllactose by lyophilization and lyophilized.
Z kozieho mlieka sa známymi zavedenými spôsobmi izolujú dva polohové izoméry fukozylovaného tetrasacharidu.Two positional isomers of fucosylated tetrasaccharide are isolated from goat's milk by known established methods.
Oligosacharidy sa zmiešajú v zmiešavacom pomere 2:1:2 (oligosacharidy z kobylieho mlieka; oligosacharidy z kravského mlieka; oligosacharidy z kozieho mlieka).The oligosaccharides are mixed in a mixing ratio of 2: 1: 2 (mare's milk oligosaccharides; cow's milk oligosaccharides; goat's milk oligosaccharides).
Príklad 6Example 6
Z kozej srvátky sa môže izolovať frakcia neutrálnych oligosacharidov, ktorá sa skladá z už opísaných tetróz a ďalších pentóz, prípadne hexóz s doteraz neznámym monosacharidovým zložením (2 hexozamíny a 4 hexózy, prípadne 2 hexozamíny a 4 hexózy a aj 3 hexozamíny a 3 hexózy). Z rovnakého spracovania sa poskytne kyslá frakcia, ktorá sa frakcionuje pomocou anexovej chromatografie tak, že vznikne zmes zložená z dvoch rôznych sialyllaktóz a dvoch rôznych glykolylneuraminyllaktóz. Kyslé oligosacharidy s dlhším reťazcom a neutrálne galaktozyllaktózy sa na nové vytvorenie novej oligosacharidovej zmesi nepoužívajú. Izolovaná kyslá a neutrálna frakcia sa zmieša v pomere 2:1.A fraction of neutral oligosaccharides can be isolated from goat whey, which consists of the already described tetroses and other pentoses or hexoses with a hitherto unknown monosaccharide composition (2 hexosamines and 4 hexoses, optionally 2 hexosamines and 4 hexoses and also 3 hexosamines and 3 hexoses). From the same work-up, an acidic fraction is provided, which is fractionated by anion exchange chromatography to give a mixture composed of two different sialyllactoses and two different glycolylneuraminyllactoses. Longer chain acid oligosaccharides and neutral galactosyllactoses are not used to form a new oligosaccharide mixture. The isolated acidic and neutral fractions are mixed in a ratio of 2: 1.
Príklad 7Example 7
Srvátka vznikajúca pri výrobe syra obsahuje obvykle okrem voľných oligosacharidov taktiež početné viazané oligosacharidy vo forme N- a O-glykánov. Glykomakropeptid sa O-glykozyluje a laktoferín sa N-glykoziduje. Príslušné glykánové štruktúry sa v značnej miere sialujú. Pôvodný pomer kyslých glykánov k neutrálnym glykánom, prípadne oligosacharidom je približne 1:1. Aby sa tento pomer posunul v prospech neutrálnych oligosacharidov, uskutočňuje sa anexová chromatografia. Všetky sialované a viazané kyslé oligosacharidy (frakcia 2) sa viažu na gélovú matricu a neutrálne oligosacharidy (frakcia 1) sa eluujú demineralizovanou vodou. Všetky zavedené zložky sa eluujú veľkou iónovou silou (napríklad IM NaCl) a ďalej spracovávajú.The whey produced during cheese production usually contains, in addition to free oligosaccharides, also numerous bound oligosaccharides in the form of N- and O-glycans. The glycomacropeptide is O-glycosylated and lactoferrin is N-glycosylated. The respective glycan structures are largely sialy. The initial ratio of acid glycans to neutral glycans or oligosaccharides is approximately 1: 1. In order to shift this ratio in favor of neutral oligosaccharides, anion exchange chromatography is performed. All sialylated and bound acid oligosaccharides (fraction 2) are bound to the gel matrix and the neutral oligosaccharides (fraction 1) are eluted with demineralized water. All introduced components are eluted with high ionic strength (e.g. 1M NaCl) and further processed.
V dôsledku podmienok slabej hydrolýzy pri pH 2,0 a 45 °C sa v priebehu niekoľkých hodín dosiahne odštiepenie kyseliny sialovej. Po neutralizácii pomocou roztoku NaOH sa táto frakcia 2 spojí s neutrálnymi oligosacharidmi (frakcia 1). Pomer neutrálnych oligosacharidov ku kyslým oligosacharidom sa posunie v prospech neutrálnych oligosacharidov.Due to the mild hydrolysis conditions at pH 2.0 and 45 ° C, cleavage of the sialic acid is achieved within a few hours. After neutralization with NaOH solution, this fraction 2 is combined with neutral oligosaccharides (fraction 1). The ratio of neutral oligosaccharides to acid oligosaccharides shifts in favor of neutral oligosaccharides.
Claims (8)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE1999158958 DE19958958A1 (en) | 1998-12-09 | 1999-12-07 | Drinks can closure has seal which deforms plastically under pressure to prevent explosion |
| PCT/EP2000/012345 WO2001042263A2 (en) | 1999-12-07 | 2000-12-07 | Oligosaccharide mixture |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK7812002A3 SK7812002A3 (en) | 2003-06-03 |
| SK288337B6 true SK288337B6 (en) | 2016-02-02 |
Family
ID=28459019
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK781-2002A SK288337B6 (en) | 1999-12-07 | 2000-12-07 | Oligosaccharide mixture |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SK (1) | SK288337B6 (en) |
-
2000
- 2000-12-07 SK SK781-2002A patent/SK288337B6/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SK7812002A3 (en) | 2003-06-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2394090C (en) | Oligosaccharide mixture | |
| Brody | Biological activities of bovine glycomacropeptide | |
| EP2046149B1 (en) | Enriched infant formulas | |
| Newburg | Bioactive components of human milk: evolution, efficiency, and protection | |
| AU2022202598B2 (en) | Purified human milk oligosaccharides compositions | |
| KR100509681B1 (en) | Food composition for stimulating growth comprising fraction isolated from mammalian colostrum or milk whey | |
| US5330975A (en) | Bacterial toxin neutralizer | |
| CN100338085C (en) | Sialic carbohydrates | |
| KR20200011584A (en) | Novel protein material | |
| US20140079845A1 (en) | Oligosaccharide ingredient | |
| SK288337B6 (en) | Oligosaccharide mixture | |
| JPS6365285B2 (en) | ||
| JP3789146B2 (en) | Oligosaccharide-containing nutritional composition | |
| RU2497827C2 (en) | Oligosaccharide ingredient | |
| JP4049278B2 (en) | Intestinal metabolism improving agent | |
| JP4160148B2 (en) | Bacterial toxin neutralizer | |
| CN117481201A (en) | Formula milk powder for promoting brain development and preparation method and application thereof | |
| JP2001192393A (en) | Endogenous sialidase-resistant lactone derivative- containing composition | |
| Ward | Mining milk for nutritional bioactivity: Fermentability of milk oligosaccharides by human microflora | |
| JP2003113087A (en) | Oligosaccharide-containing nutrient composition |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20171207 |