SK286990B6 - Viacdávková kompozícia na báze erytropoetínu - Google Patents

Abstract

Je opísaná viacdávková kompozícia erytropoetínu na parenterálne podávanie, ktorá obsahuje jeden alebo viacero z nasledovných konzervantov: benzethonium chlorid, fenoxyetanol a fenyletyl alkohol.

Description

Tento vynález sa týka viacdávkovej kompozície na báze erytropoetínu (ďalej uvádzaný ako „EPO“), obsahujúcich obzvlášť výhodný konzervant alebo kombináciu konzervantov. Špecificky sa tento vynález týka používania konzervantov benzethonium chloridu, fenoxyetanolu a fenyletyl alkoholu, samotných alebo v kombinácii, vo viacnásobne dávkovaných kompozíciách EPO. Tento vynález sa ďalej týka ampulky na plnenie touto kompozíciou a metódy potlačenia mikrobiálneho rastu v roztoku, pričom všetky kompozície alebo roztoky obsahujú EPO a jeden alebo viacero konzervantov benzethonium chlorid, fenoxyetanol a fenyletyl alkohol.

Doterajší stav techniky

Sterilita je jednou z najdôležitejších vlastností parenterálnych kompozícií. Udržiavanie sterility parenterálnych kompozícií, ktoré sú sterilizované a sú určené na jednorazové injekčné dávkovanie, je funkciou jednak spôsobu sterilizácie, a jednak integrity systému balenia. Pri parenterálnych výrobkoch, ktoré sú určené na viacnásobné dávkovanie, sa musia pridávať do kompozície tohto výrobku antimikrobiálne látky, ktoré chránia tento výrobok pred náhodnou mikrobiálnou kontamináciou počas jeho skladovania a/alebo používania.

Farmaceutický priemysel sa pozerá na stabilné viacnásobne dávkované farmaceutické kompozície obsahujúce proteín ako na obzvlášť výhodné a komerčne lákavé. Viacnásobne dávkované komozície sa zvyčajne, ale nie vždy, balia do ampuliek (obaly na viacnásobné dávkovanie), ktoré kedykoľvek umožňujú odobratie určitých množstiev tejto kompozície. Tento spôsob je žiaduci, pretože umožňuje, aby sa viacnásobné dávky dali dostať z jedného obalu a umožňuje kontrolovanejšie podávanie farmaceutickej kompozície, pretože táto kompozícia sa môže prestať užívať a opäť podať v akomkoľvek čiastkovom množstve.

Povaha používania viacnásobne dávkovaných kompozícii kladie špeciálne požiadavky na komozíciu. Napríklad, udržiavanie sterility kompozície je obzvlášť problematické, vzhľadom na to, že existuje veľa príležitostí na zavedenie mikroorganizmov a iných kontaminantov do týchto komozícií. Opakované zavádzanie cudzích prvkov do obalu na viacnásobné dávkovanie po formulácii, napríklad, ihiel alebo tampónov, taktiež vytvára pravdepodobnosť zavedenia mikroorganizmov do tohto obalu. Okrem toho a/alebo, mikroorganizmy možno zaviesť počas plnenia obalov alebo počas riedenia týchto kompozícií po lyofilizácii a pred podaním. Predĺžené časové obdobie, počas ktorého sa obal môže skladovať - najmä počas opakovaného zavádzania cudzích prvkov a/alebo po tom, ako mohli byť zavedené kontaminanty, si vyžaduje, aby táto kompozícia obsahovala špeciálne pomocné látky, ktoré zaistia sterilitu tohto obsahu.

Aby sa zaistilo, že tieto kompozície budú udržiavať optimálne sterilné vlastnosti, FDA (Food and Drug Administration) Spojených štátov amerických (USFDA) a schvaľovacie úrady v iných jurisdikciách vyžadujú, aby všetky viacnásobne dávkované kompozície obsahovali konzervačné prostriedky, ktoré zabránia rastu alebo zabijú akékoľvek mikroorganizmy, ktoré mohli byť do nich zavedené. Vzhľadom na neodmysliteľnú nestabilitu proteínov a ich tendenciu vzájomne nepriaznivo pôsobiť s konzervačnými zlúčeninami, vývoj viacnásobne dávkovaných kompozícií obsahujúcich proteíny sa ukázal byť obzvlášť náročným. Medzi možné nepriaznivé vzájomné pôsobenie konzervantov a proteínov patri rozklad proteínov, najmä tých, ktoré sú skladované počas predĺžených časových období; inaktivácia proteínov; vytváranie proteínových agregátov; a iné interakcie, ktoré inaktivujú túto kompozíciu alebo spôsobujú, že podávanie tejto kompozície ľuďom, najmä infúziou, injekčné alebo parenterálnym podávaním, sa stáva obtiažnym, bolestivým alebo inak nežiaducim.

Okrem toho, o samotných konzervantoch sa vie, že po parenterálnom podaní spôsobujú u ľudí akútne nepriaznivé reakcie, ako sú alergické reakcie. Ideálne by mal byť konzervant nachádzajúci sa vo viacnásobne dávkovanej proteínovej farmaceutickej kompozícii účinný pri nízkej koncentrácii proti viacerým druhom mikroorganizmov; mal by byť v tejto kompozícii rozpustný; netoxický; kompatibilný a nemal by reagovať s proteinom; účinný s dlhodobou stabilitou; a nemal by reagovať so zložkami obalu alebo uzáveru.

Sandeep Nemá a kol. publikovali zoznam rôznych pomocných látok, ktoré boli zahrnuté do kompozície injekčných výrobkov uvádzaných na trhu v USA. Antimikrobiálne konzervanty uvedené v tomto článku sa nachádzajú v tabuľke 1:

Tabuľka 1

Antimikrobiálne konzervanty
Konzervant	Frekvencia	Rozsah
Benzalkonium chlorid	1	0,02 % hmotn.
Benzethonium chlorid	4	0,01 %
Benzyl alkohol	74	0,75-5 %

Chlorbutanol	17	0,25-0,5 %
m-krezol	3	0,1-0,3 %
Myristyl-gamma-pikolínium chlorid	2	0,0195-0,169 %
Paraben metyl	50	0,05-0,18 %
Paraben propyl	40	0,01-0,1 %
Fenol	48	0,2-0,5 %
2-Fenoxyetanol	3	0,50 %
Fenyl dusičnan ortuťnatý	3	0,001 %
Thimerosal	46	0,003-0,01 %

EPO je glykoproteín, ktorý stimuluje tvorbu hemoglobínu a erytrocytov v kostnej dreni. Tvorí sa v obličkách a používa sa hlavne v liečbe anémie spôsobenej rôznymi stavmi vrátane napríklad zlyhania obličiek. Sekvencia aminokyselín a všeobecné glykozylačné vzorce EPO sú v tomto odbore známe. Pozri, napríklad, Miyaka a kol. a U.S. patent č. 4 703 008. Miyake a kol. opísal izoláciu a purifikáciu EPO z ľudských tkanív alebo tekutín.

Sekvencia nukleových kyselín kódujúcich proteín, izolácia tejto sekvencie a výroba proteínu tradičnými rekombinantnými metódami sú taktiež v tomto odbore známe. Pozri, napríklad, U.S. patent č. 4 703 008, Lin, ktorý opisuje sekvenciu nukleových kyselín kódujúcich EPO; U.S. patent č. 4 337 513, Sugimoto a kol., ktorý opisuje používanie lymfoblastoidných buniek na výrobu EPO; a Sherwood a kol., opisujúci výrobu EPO líniou ľudských buniek z renálneho karcinómu. Okrem toho, výrobu, izoláciu a purifikáciu proteínu možno taktiež dosiahnuť génovou aktiváciou alebo homológnou rekombináciou, s následnými dobre známymi izolačnými a purifikačnými technikami.

Vývoj viacnásobne dávkovaných kompozícií obsahujúcich EPO sa ukázal obzvlášť náročným kvôli nestabilite EPO a jeho tendencii ľahko vzájomne reagovať s bežnými farmaceutickými zložkami. U.S. patent č. 4 806 524. Pokusy vyvinúť viacnásobne dávkované EPO kompozície viedli k vyhnutiu sa týmto problémom udržiavaním týchto kompozícií pri nízkom pH alebo zahrnutím rôznych aminokyselinových štruktúr, dva prístupy, o ktorých sa domnievalo, že pomôžu pri stabilizácii EPO proteínu; alebo vyvinutím lyofilizovaných foriem, v ktorých konzervant vysublimuje z kompozície pred podaním. U.S. patent č. 5 503 827 (patent '827), Woog.

Je málo stabilných, sterilných, viacnásobne dávkovaných farmaceutických kompozícií obsahujúcich EPO. Patria sem tie kompozície, ktoré boli opísané v patente '827. Odkaz v patente '827 odhaľuje a špecificky si nárokuje ako konzervanty chloreton (chlorbutanol, l,l,l-trichloro-2-metyl-2.propanol), benzalkonium chlorid alebo benzyl alkohol. Woog špeciálne poznamenáva určitú ťažkosť pri poskytovaní viacnásobne dávkovaných EPO kompozícií, pri ktorých je znížený výskyt alergickej reakcie a podporuje používame špeciálne nárokovaných konzervantov ako obzvlášť výhodných v tomto ohľade. Tento odkaz ďalej zdôrazňuje, že kvôli tendencii konzervantov rozkladať sa a kvôli tendencii proteínov pri kombinovaní deaktivovať sa, je veľmi potrebné, aby sa minimalizoval kontakt medzi konzervantom a proteínom. Patent '827 ďalej odhaľuje, že používanie niekoľkých aminokyselinových štruktúr a iných pomocných látok je nevyhnutné na stabilizáciu EPO v roztoku. Nakoniec patent '827 v najprednostnejšom uskutočnení odhaľuje, že akýkoľvek konzervant použitý v pôvodnej kompozícii vysublimuje po lyofilizácii tejto kompozície. Potom, po rekonštitúcii, môže byť zavedený ďalší konzervant vybraný z odhalenej skupiny (chloreton), ako je definovaná, benzalkonium chlorid a benzyl alkohol, ale takýto injekčný rekonštituovaný roztok by sa mal použiť do 30 dní.

Ďalší príklad viacnásobne dávkovanej kompozície obsahujúcej EPO je opísaný v U.S. patente č. 5 661 125 (patent Ί25). Tento patent explicitne uznáva a potvrdzuje ďalšie odkazy, ktoré uvádzajú, že EPO ,je nestabilná látka, najmä vo forme roztoku „a“, keď sa kombinuje so známymi stabilizátormi, výsledná stabilita EPO sa mení a je nepredvídateľná“. Tento odkaz ďalej pokračuje, aby ukázal a potvrdil špeciálne používanie benzyl alkoholu, parabenu a/alebo fenolu alebo ich kombinácie ako konzervantu v roztokoch obsahujúcich EPO. K ďalšiemu doloženiu namáhavosti rozlíšenia kompatibilných a výhodných konzervantov na použitie vo viacnásobne dávkovaných kompozíciách obsahujúcich EPO tento odkaz uvádza:

„...nič špecifické sa nedá odvodiť od používania konzervantov s inými proteínmi, čo by navrhovalo akúkoľvek mimoriadne konzervovanú kompozíciu na erytropoetín. Pozri, napr. Geigert,J„ „Prehľad stability a zaoberáme sa rekombinantnými proteínovými liekmi“, Joumal of Parenteral Science & Technology, Zv. 43(5):220-224 (1989).“

US 5503827 sa týka viacnásobne dávkovaných farmaceutických prípravkov obsahujúcich ľudské proteíny ako erytropoetín a konzervant.

EP-A-0459795 sa týka perorálnej liekovej formy z erytropoetínu obsahujúcej surfaktant ako benzetonium chlorid.

Na základe toho zostáva potreba na konzervovanú, viacnásobne dávkovanú farmaceutickú kompozíciu obsahujúcu EPO, ktorá: (1) udržiava stabilitu proteínovej zložky a kompozície počas predĺženého obdobia skladovateľnosti výrobku; (2) udržiava sterilitu kompozície a spĺňa kritériá testu účinnosti antimikrobiálnej konzervancie podľa Amerického, Európskeho a Japonského liekopisu; (3) je bezpečná z hľadiska použitej koncentrácie; a (4) je podávateľná - akoukoľvek parenterálnou alebo perorálnou cestou - spôsobom, ktorý je účinný a u pacienta minimalizuje bolesť a možnosť nepriaznivej reakcie, napríklad alergickej reakcie.

Podstata vynálezu

Uvedené nedostatky do značnej miery odstraňuje tento vynález, ktorý poskytuje novú a obzvlášť výhodnú viacnásobne dávkovanú kompozíciu obsahujúcu erytropoetín a konzervanty benzethonium chlorid, fenoxyetanol a fenyletyl alkohol, buď samostatné, alebo v kombinácii.

Kompozície tohto vynálezu môžu byť formulované v rôznych koncentráciách, v rôznych veľkostiach ampuliek, pre rôzne formy podávania. Napríklad, kompozície opísané v tomto vynáleze môžu obsahovať 10 000, 20 000, 40 000 alebo až viac ako 100 000 jednotiek/ml koncentrácií EPO. Ďalej môžu obsahovať akékoľvek koncentrácie medzi týmito príkladmi koncentrácií, ako 5000, 15 000, 25 000 jednotiek/ml koncentrácií, a pod. Okrem toho, dávky môžu byť formulované do Ά, 1 alebo 2 ml ampuliek alebo do akejkoľvek inej veľkosti ampuliek alebo iného obalu, aký formulátor uprednostní. Odborníkovi bude jasné, že môže byť použitá akákoľvek kombinácia dávok a ampuliek, závisí to od potrieb formulátora. Napríklad, jeden by mohol pripraviť tu opísané kompozície ako 10 000 jednotiek/1/2 ml koncentrácie v 1 ml ampulke, 40 000 jednotiek/ ml dávky v 2 ml ampulke alebo akúkoľvek inú kombináciu koncentrácie EPO v akejkoľvek veľkosti ampulky. Tieto kompozície môžu byť vo forme vodného roztoku, suspenzie alebo môžu byť lyofilizované.

Tento vynález poskytuje alternatívne uskutočnenie kompozície farmaceutického nosiča, na použitie ako nosiča EPO, obsahujúce konzervanty benzethonium chlorid, fenoxyetanol alebo fenyletyl alkohol, v ktorom sú konzervanty obsiahnuté v kompozícii EPO nosiča samostatné alebo v kombinácii. Tento vynález taktiež poskytuje ampulku na viacnásobné dávky EPO, ktorá obsahuje EPO a účinné množstvo jedného alebo kombináciu nasledovných konzervantov: benzethonium chlorid, fenoxyetanol a fenyletyl alkohol.

V ešte ďalšom uskutočnení tento vynález poskytuje metódu inhibitovania mikrobiálneho rastu v roztoku obsahujúcom EPO, ktorá zahŕňa pridanie jedného alebo kombináciu nasledovných konzervantov do roztoku obsahujúceho EPO: benzethonium chlorid, fenoxyetanol a fenyletyl alkohol.

Medzi ďalšie zložky viacnásobne dávkovaných EPO kompozícií tohto vynálezu patria: surfaktanty, pufre, látky upravujúce osmolalitu a antiadsorbanty. Medzi obzvlášť výhodné pomocné látky patrí polysorbát-20, polysorbát-80, fosforečnan sodný, chlorid sodný a genapol.

Kompozície tohto vynálezu môžu byť v pevnej, polotuhej, tekutej alebo fluidnej forme, napríklad ako tablety, vodné roztoky alebo suspenzie alebo môžu byť pred podávaním pacientovi lyofilizované a rekonštituované. Kompozície sa môžu podávať parenterálnou cestou vrátane intravenóznej, podkožnej, intramuskulámej, transdermálnej, intraarteriálnej, intraperitoneálnej a pľúcnou inhaláciou. Môžu sa taktiež podávať perorálne.

Tento vynález poskytuje významný pokrok v stave techniky. Sú uvedené nové viacnásobne dávkované farmaceutické kompozície obsahujúce EPO a konzervanty, ktoré jednotlivo poskytujú stabilné, sterilné a ľahko podávateľné kompozície. Okrem toho, a najneočakávanejšie, tento vynález odhaľuje, že fenoxyetanol a benzethonium chlorid, ak sa používajú v kombinácii s viacnásobne dávkovanými farmaceutickými kompozíciami obsahujúcimi EPO, majú pozitívny synergický účinok, v dôsledku čoho vzniká obzvlášť výhodná kompozícia. Špeciálne táto kombinácia konzervantov ukazuje nasledovné vlastnosti: (1) synergický antimikrobiálny účinok, ktorý umožňuje použitie nižšej koncentrácie konzervantov; (2) vynikajúcu stabilitu EPO za meniacich sa skladovacích podmienok počas predĺženého časového obdobia; a (3) fenoxyetanol má potenciál pre lokálny anestetický účinok, čím sa táto kompozícia stáva obzvlášť uprednostňovaná pri podkožnom podávaní.

Ako je použité v tomto vynáleze, nasledovné pojmy budú mať nasledujúce významy:

Erytropoetín - glykoprotein, ktorý, ak je v biologicky aktívnej a glykozylovanej forme, má schopnosť indukovať tvorenie hemoglobínu a červených krviniek v kostnej dreni. Možno ho získať izoláciou z ľudských tkanív alebo tekutín, tradičnými rekombinantnými metódami alebo génovou aktiváciou.

Parenterálnv - určitým spôsobom iný ako gastrointestinálny trakt; patrí sem intravenózny, podkožný, intramuskulámy a intramedulámy; intraarteriálny, intraperitoneálny a pľúcna inhalácia.

Farmaceutický prijateľný (alebo farmakologicky prijateľný) - týka sa molekulárnych entít a kompozícií, ktoré pri podávaní zvieraťu alebo človeku nevytvárajú nepriaznivú, alergickú alebo inú nečakanú reakciu .

Farmaceutický prijateľný nosič - zahŕňa akékoľvek a všetky rozpúšťadlá, disperzné médiá, poťahovania, antibakteriálne a izotonické látky a látky oneskorujúce absorpciu a podobné látky, ktoré sa môžu použiť ako médium na farmaceutický prijateľnú substanciu.

Jednotka - jednotka biologickej aktivity, ako je stanovená exhypoxickou polyeythemickou biologickou skúškou na myši a porovnaná s normami Svetovej zdravotníckej organizácie.

Všetky číselné hodnoty uvedené v tomto vynáleze zahŕňajú všetky hodnoty od nižšej hodnoty po vyššiu hodnotu s prírastkom jednej jednotky za predpokladu, že medzi nižšou hodnotou a ktoroukoľvek vyššou hodnotou existuje rozdiel najmenej dvoch jednotiek. Napríklad, ak je uvedené, že koncentrácia niektorej zložky alebo hodnota nejakého procesu, ako je napr. osmolalita, teplota, tlak, čas a podobne, je napr. od 1 do 90, prednostne od 20 do 80, prednostnejšie od 30 do 70, znamená to, že hodnoty ako od 15 do 85, od 22 do 68, od 43 do 51, od 30 do 32, atď. sú výslovne vypočítané v tejto špecifikácii. Pre hodnoty, ktoré sú menšie ako jedna, sa za jednu jednotku považujú 0,0001, 0,001, 0,01 alebo prípadne 0,1. Toto sú iba príklady toho, čo je špecificky zamýšľané a všetky možné kombinácie číselných hodnôt medzi vypočítanou najnižšou hodnotou a najvyššou hodnotou sa budú podobným spôsobom považovať za výslovne uvedené v tejto prihláške.

A. Konzervanty: fenoxyetanol a benzethonium chlorid

Konzervanty, s ktorými sa ráta na použitie podľa tohto vynálezu, sú benzethonium chlorid, fenoxyetanol a fenyletyl alkohol, všetky varianty týchto konzervantov a ich štrukturálne analógy. Špeciálne sa predpokladá, že ktorýkoľvek z týchto konzervantov sa môže použiť ako samostatný konzervant v tu odhalených kompozíciách alebo môžu byť výhodne použité vo vzájomnej kombinácii. Ako je tu uvedené, kompozície tohto vynálezu, ktoré používajú kombináciu fenoxyetanolu a benzethonium chloridu sú obzvlášť uprednostňované.

Benzethonium chlorid, fenoxyetanol a fenyletyl alkohol sa môžu použiť v tu odhalených kompozíciách v akomkoľvek účinnom množstve. Celková koncentrácia konzervantu je prednostne medzi asi 0,01 % až asi 4,0 % z celkovej kompozície. Obzvlášť výhodné koncentrácie celkového konzervantu sú tie, ktoré sú udržiavané čo možno najnižšie, aby sa dosiahol požadovaný antimikrobiálny účinok, pričom sa minimalizuje potenciál pre nepriaznivé reakcie. Hoci sa benzethonium chlorid, fenoxyetanol a fenyletyl alkohol môžu použiť ako konzervanty jednotlivo, toto si vyžaduje vyššiu koncentráciu konzervantu ako v prípade, ak sa použijú kombinácie týchto konzervantov.

V prednostnejších uskutočneniach tohto vynálezu sa benzethonium chlorid aj fenoxyetanol používajú spolu. Na prekvapenie, keď sa použijú spolu, majú tieto konzervanty vzájomný synergický účinok. Aby sa dosiahol ekvivalentný antimikrobiálny účinok pri použití jednotlivo, koncentrácie benzethonium chloridu alebo fenoxyetanolu musia byť vyššie ako celková koncentrácia konzervantu, ak sú použité v kombinácii a vo všeobecnosti musí byť použité dvojnásobné množstvo konzervantu, ak je použitý samostatne. Preto, napríklad, ak sa buď benzethonium chlorid alebo fenoxyetanol použijú samostatne, približne dvojnásobné množstvo benzethonium chloridu alebo fenoxyetanolu bude potrebné na dosiahnutie toho istého účinku ako pri množstve benzethonium chloridu v kombinácii s fenoxyetanolom. Okrem toho, aj pri týchto vyšších koncentráciách benzethonium chloridu a fenoxyetanolu, jednotlivé kompozície nemusia spĺňať Americké, Európske alebo Japonské antimikrobiálne schvaľovacie kritériá. Medzi prednostné kompozície patrí benzethonium chlorid v koncentráciách od asi 0,01 do asi 0,1 % v kombinácii s fenoxyetanolom v koncentráciách od asi 0,01 do asi 1,0 %. Prednostnej šie kombinované kompozície obsahujú benzethonium chlorid v koncentrácii od asi 0,01 % do asi 0,02 % a fenoxyetanol v koncentrácii od asi 0,25 % do asi 0,5 %.

V ďalšom uskutočnení tento vynález zahŕňa benzethonium chlorid v kombinácii s fenyletyl alkoholom. Medzi prednostné kompozície patrí benzethonium chlorid v koncentráciách od asi 0,01 do asi 0,1 % spolu s fenyletyl alkoholom v koncentráciách od asi 0,01 do asi 1,0 %. Prednostnejšie kompozície obsahujú benzethonium chlorid v koncentrácii od asi 0,15 do asi 0,25 % a fenyletyl alkohol v koncentrácii od asi 0,2 do asi 0,5 %. Najprednostaejšia kompozícia, v ktorej sú benzethonium chlorid a fenyletyl alkohol použité spolu, obsahuje benzethonium chlorid v koncentrácii od asi .02 % a fenyletyl alkohol v koncentrácii asi 0,25 %.

B. Erytropoetín

V odbore je známy sled kyseliny nukleovej, sled aminokyselín, trojrozmerná štruktúra a typické glykozylačné vzorce EPO. Taktiež je z rôznych zdrojov známy izolovaný a purifikovaný EPO. Na základe toho môže odborník získať EPO na použitie podľa tohto vynálezu izoláciou a purifikáciou EPO z ľudských tkanív alebo tekutín prostredníctvom tradičných rekombinantných technik a prostredníctvom procesov génovej aktivácie. O všetkých týchto metódach sa špecificky predpokladá, že patria do rámca tohto vynálezu. Okrem toho sa predpokladá, že použitie akékoľvek iného EPO získaného z iného zdroja je podľa tohto vynálezu.

C. Ostatné účinné zložky

Optimálna kompozícia podľa tohto vynálezu sa môže líšiť podľa faktorov, ako je doba, počas ktorej bude táto kompozícia skladovaná, podmienok, za ktorých bude skladovaná a použitá, podľa určitej populácie pacientov, ktorým môže byť podávaná, atď. Úpravy tejto kompozície môžu byť vykonané podľa potrieb formulátora, aplikátora a pacienta úpravou zložiek týchto kompozícií a ich relatívnych koncentrácií, iných ako sú konzervanty benzethonium chlorid, fenoxyetanol a fenyletyl alkohol a EPO, ako je opísané. Medzi ďalšie

SK 286990 Β6 zložky viacnásobne dávkovaných kompozícií EPO tohto vynálezu môže patriť voda, pufer, surfaktant alebo antiadsorbant, vlhčivo a látka upravujúca osmolalitu. Medzi vlastnosti kompozície, ktoré možno upravovať, aby sa dosiahla kompozícia, ktorá má pH a osmolitu podobnú ľudskej krvi alebo tkanivám, patrí napríklad pH a osmolalita.

Pufte sú v tomto vynáleze výhodné okrem iného pre možnosť úpravy celkového pH tejto farmaceutickej kompozície. V týchto kompozíciách možno použiť veľa pufrov známych v tomto odbore, ako sú rôzne soli organických alebo anorganických kyselín, zásady alebo aminokyseliny a vrátane rôznych foriem citrátu, fosforečnanu, tartrátu, sukcinátu, adipátu, maleátu, laktátu, octanu, uhličitanu alebo uhličitanových iónov. Medzi obzvlášť výhodné pufte na používame v tomto vynáleze patria sodné alebo draselné pufte, hlavne fosforečnan sodný. V prednostnom vyhotovení sa využíva fosforečnan sodný v koncentrácii asi 20 mM. Obzvlášť účinný pufrovací systém fosforečnanu sodného obsahuje jednosýtny monohydrát fosforečnanu sodného a dvojsýtny heptahydrát fosforečnanu sodného. Ak sa použije táto kombinácia jednosýtneho a dvojsýtneho fosforečnanu sodného, výhodnou je koncentrácia jednosýtneho fosforečnanu od 0,5 do 1,5 mg/ml a dvojsýtneho od asi 2,0 do 4,0 mg/ml, s uprednostňovanou koncentráciou asi 0,9 mg/ml pri jednosýtnom a asi 3,4 mg/ml pri dvojsýtnom fosforečnane. pH kompozície sa mení podľa množstva použitého pufra. Uprednostňuje sa dosiahnutie hladiny pH od asi 5,0 do 8,0, viac sa uprednostňuje mať pH od asi 6,0 do asi 7,5 a ešte viac sa uprednostňuje vytvoriť kompozíciu s pH asi 7,0.

V tu opísaných kompozíciách môže byť výhodné použiť aj surfaktanty. Medzi surfaktanty alebo antiadsorbanty, ktoré sa ukázali ako výhodné podľa tohto vynálezu, patria polyoxyetylénsorbitany, polyoxyetylénsorbitan monolaureát, polysorbát-20, ako je Tween-20™, polysorbát-80, hydroxycelulóza a genapol. V prednostnom uskutočnení sa používa polysorbát-20. Ak sa v tomto vynáleze použije ktorýkoľvek surfaktant, je výhodné použiť ho v koncentrácii od asi 0,01 do asi 0,5 mg/ml. V obzvlášť výhodnom uskutočnení sa používa polysorbát-20 v koncentrácii asi 0,1 mg/ml.

Ďalšie výhodné pomocné látky sa dajú ľahko určiť odborníkmi podľa určitých potrieb alebo zamýšľaných použití opísaných viacnásobne dávkovaných kompozícií EPO. Jednou z takýchto obzvlášť výhodných iných substancií je chlorid sodný, ktorý je vhodný k úprave osmolality v kompozíciách na dosiahnutie požadovanej výslednej osmolality. Obzvlášť uprednostňované osmolality na parenterálne podávanie odhalených kompozícií sú v rozpätí od asi 270 do asi 330 mOsm/kg. Optimálna osmolalita kompozícií odhalených v tomto vynáleze je asi 300 Osm/kg. Koncentrácie chloridu sodného od asi 6,5 do asi 7,5 mg/ml sú účinné na dosiahnutie tejto osmolality, pričom koncentrácia chloridu sodného asi 7,0 mg/ml je obzvlášť účinnou. Na dosiahnutie osmolality od asi 270 do asi 330 mOsm/kg, prednostne 300 mOsm/kg možno pridať alebo upraviť množstvo chloridu sodného. Medzi ďalšie výhodné látky upravujúce osmolalitu patrí manitol a sorbitol.

D. Príprava kompozícií

Kompozície EPO opísané v tomto vynáleze možno pripraviť vo vode vhodne zmiešanej so surfaktantom, ako je hydroxypropylcelulóza alebo polyoxyetylénsorbitany. V mnohých prípadoch sa môže uprednostňovať zahrnutie izotonických látok, napríklad, cukrov alebo chloridu sodného, ako bolo uvedené. Prolongované vstrebávanie injekčných kompozícií možno dosiahnuť tým, že sa v kompozíciách použijú látky, ktoré predlžujú vstrebávanie, napríklad, monostearát hlinitý alebo želatína. Medzi ďalšie látky, ktoré možno použiť, ale neobmedzuje sa len na ne, patrí lecitín, močovina, etylén oxid, propylén oxid, hydroxypropylcelulóza, metylcelulóza alebo polyetylén glykol.

Vodné kompozície (inokulá), ako je opísané v tomto vynáleze, môžu obsahovať účinné množstvo EPO rozpusteného alebo rozptýleného vo farmaceutický prijateľnom vodnom médiu. Aj takéto kompozície sa označujú ako inokulá. Používanie farmaceutický prijateľných nosných médií a látok pre farmaceutický účinné substancie je v tomto odbore dobre známe. Pokiaľ nie je akékoľvek konvenčné médium alebo látka nekompatibilná s účinnou zložkou, predpokladá sa jej použitie v týchto terapeutických kompozíciách. Dodatkové účinné zložky môžu byť tiež zahrnuté do opísaných kompozícií.

Proteoglykan, ako je EPO, môže byť formulovaný do kompozície v neutrálnej alebo soľnej forme. Medzi farmaceutický prijateľné soli patria adičné soli kyselín (tvorené voľnými aminoskupinami proteínu) a tie, ktoré sú tvorené anorganickými kyselinami, ako je napríklad kyselina chlorovodíková alebo fosforečná, alebo takými organickými kyselinami, ako je kyselina octová, šťavelová, tartarová, mandľová a podobné. Soli tvorené voľnými karboxylovými skupinami môžu byť tiež odvodené od anorganických zásad, ako je napríklad hydroxid sodný, draselný, amónny, vápenatý alebo železitý a od takých organických zásad, ako je izopropylamín, trimetylamín, histidín, prokaín a podobné.

Terapeutické kompozície tohto vynálezu sú výhodne podávané vo forme injekčných kompozícií, buď ako kvapalné roztoky, alebo suspenzie; môžu byť taktiež pripravované pevné formy vhodné pre roztoky alebo suspenzie v kvapaline určenej na injekčné podanie. Typická kompozícia na takéto účely obsahuje farmaceutický prijateľný nosič. Napríklad, kompozícia môže obsahovať 10 mg, 25 mg, 50 mg alebo až asi 100 mg ľudského sérového albumínu na mililiter fyziologického roztoku pufrovaného fosforečnanom.

SK 286990 Β6

Kompozície opísané v tomto vynáleze sa môžu dať do ampulky, fľašky, tuby, injekčnej striekačky alebo iného obalu na jednorazové alebo viacnásobné podávanie. Takéto obaly môžu byť vyrobené zo skla alebo polymérového materiálu, ako je polypropylén, polyetylén alebo polyvinylchlorid. Prednostne používané obaly môžu mať plombu alebo iný uzatvárací systém, ako je gumová zátka, ktorá sa dá prepichnúť ihlou, aby sa odobrala jedna dávka a ktorá sa po vytiahnutí ihly znovu uzavrie. O všetkých takýchto obaloch na injekčné kvapaliny, lyofilizované kompozície, rekonštruované lyofílizované kompozície alebo rekonštituovateľné prachy pre injekcie známe v tomto odbore sa predpokladá, že budú použité v tu opísaných kompozíciách a metódach.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Nasledovné príklady sú iba ilustratívne a nemali by sa chápať ako zámer obmedziť rozsah tohto vynálezu.

Príklad 1: Výber konzervantu a testovanie stability

Látky a metódy

Jednosýtny monohydrát fosforečnanu sodného USP, dvojsýtny heptahydrát fosforečnanu sodného USP, chlorid sodný USP/EP a polysorbát 20 USP/NF boli získané od J.T.Baker, divízia Mallinckrodt Baker, Inc., Phillipsburg, NH 08865.

Benzalkonium chlorid USP/NF, 2-fenoxyetanol BP, fenyletyl alkohol USP/NF, timerosal USP/NF, kryštále fenolu USP, benzethonium chlorid USP/NF, m-krezol USP, fenyl dusičnan ortuťnatý USP/NF, benzyl alkohol USP, chlorbutanol USP, metylparaben USP/NF a propylparaben USP/NF boli získané od Spectrum Quality products INC., Gardena, CA 90248.

Myristyl-gamma-pikolínium chlorid bol získaný od Pharmacia & Upjohn Company, Kalamazoo, Michigan 49001.

Viacnásobne dávkované roztoky obsahujúce EPO boli formulované ako sterilné, nepyrogénne, bezfarebné vodné roztoky vo vode na injekciu pri koncentrácii 10 000 a 20 000 jednotiek. Pripravené roztoky obsahovali 20 mM fosforečnanového pufra (jednosýtny monohydrát fosforečnanu sodného a dvojsýtny heptahydrát fosforečnanu sodného), 0,01 % hmotn. polysorbátu 20 ako antiadsorbentu, 0,45-0,8 % hmotn. chloridu sodného (v závislosti od konzervačného systému, ktorý bol použitý, množstvo chloridu sodného bolo upravené na dosiahnutie Osmolality asi 300 mOsm/kg) a konzervačný systém. Pripravené roztoky mali pH asi 7,0 a Osmolalitu asi 300 mOsm/kg.

Roztoky boli sterilizované filtráciou cez sterilný 0,22 mikrónový milipórový filter. Roztoky boli zabalené do sterilných, priehľadných 2 ml sklenených ampuliek typu 1 USP a boli skladované pri 5EC a 25EC na testovanie chemickej stability a do sterilných 250 - 500 ml polypropylénových fľašiek s vysokou hustotou na mikrobiálne testovanie.

Medzi skúmané konzervanty patrili: benzyl alkohol 1,0 % hmotn., benzalkonium chlorid 0,01 % hmotn., 2-fenoxyetanol 0,5 % hmotn., fenyletyl alkohol 0,5 % hmotn., timerosal 0,005 % hmotn., kryštále fenolu 0,4 % hmotn., benzethonium chlorid 0,01 % a 0,02 % hmotn., m-krezol 0,4 hmotn., fenyl dusičnan ortuťnatý 0,002 % hmotn., metylparaben 0,1 a 0,18 % hmotn. a propylparaben 0,03 % a 0,035 % hmotn. a myristylgamma-pikolínium chlorid 0,02 % hmotn. Boli skúmané aj nasledovné kombinácie: (1) benzethonium chlorid 0,005 % hmotn. s fenoxyetanolom 0,25 % hmotn.; (2) benzethonium chlorid 0,005 % hmotn. s fenoxyetanolom 0,5 % hmotn.; (3) benzethonium chlorid 0,01 % hmotn. s fenoxyetanolom 0,5 % hmotn.; a (4) fenyletyl alkohol 0,25 % hmotn. a benzethonium chlorid 0,02 % hmotn.

Diskusia:

Metylparaben, propylparaben, m-krezol a fenol po pridaní do EPO kompozície (pufrovaný roztok), vytvorili zakalené až kalné roztoky. Tento problém zakalenia bol identifikovaný ako nekompatibilita medzi absorbentom polysorbátom 20 a každým z týchto konzervantov (Príručka farmaceutických excipientov, 1994).

Hoci chlorbutanol vytvoril pri použití v kompozícii číry roztok, jeho hodnotenie bolo zastavené, pretože nie je stabilný pri pH>3, jeho polčas premeny pri pH 7,5 asi 3 mesiace (Príručka farmaceutických excipientov, 1994).

V prítomnosti fenyl dusičnanu ortuťnatého vznikol kalný roztok. Toto zakalenie bolo identifikované ako nekompatibilita medzi osmotickou látkou chloridom sodným a fenyl dusičnanom ortuťnatým (Príručka farmaceutických excipientov, 1994).

Timerosal pri použití v EPO kompozícii vytvoril číry roztok. Preukázal tiež dobrú konzervačnú účinnosť. Okrem toho, EPO kompozícia v prítomnosti timerosalu preukázala dobrú chemickú stabilitu. Ale, pretože obsahuje ortuť, je pravdepodobné, že jej použitie je v Európe, Japonsku a USA neprijateľné.

Kompozície obsahujúce benzyl alkohol, benzethonium chlorid, fenoxyetanol, fenyletyl alkohol, benzalkonium chlorid a myristyl-gamma-pikolínium chlorid vytvorili číre roztoky. Na základe minimálnych koncentrácií inhibítora pre tieto konzervanty, bezpečnosti a frekvencie ich používania, boli pre ďalšie chemické hodnotenie stability proteínu a antimikrobiálnej účinnosti kompozície EPO vybrané nasledovné konzervanty : benzyl alkohol, benzethonium chlorid, fenoxyetanol, fenyletyl alkohol a niekoľko kombinácií benzethonium chloridu & fenoxyetanolu.

Príklad 2: Stabilita testovaného proteínu

Látky a metódy

Boli vyrobené skúšobné šarže pomocou týchto vybraných konzervantov a boli dané na stabilitu pri 5EC a 25EC. Vzorky boli testované reverzne fázovou HPLC. Výsledky analýzy (% deklarovaného množstva) kompozícií obsahujúcich EPO za prítomnosti týchto konzervantov sú uvedené v tabuľke 2.

Deklarované množstvo bolo stanovené reverzne fázovou HPLC pomocou Waters Delta-Pak C18 kolóny a gradientovou elúciou s vodným roztokom 0,05 % TFA a acetonitrilom, ktorého koncentrácia sa zvyšuje od 23 do 86 %. Detekcia proteínu EPO bola monitorovaná pri 210 nm.

Tabuľka 2

Výsledky stanovenia obsahu z hľadiska koncentrácie ( % deklarovaného množstva)
Konzervant	Mesiace	Sila	Chemická analýza (%DM)' obsahu
5°C	25°C
Benzyl alkohol	7M	10 OOOJ/ml	98,6	90,0
Benzyl alkohol	7M	20 OOOJ/ml	99,7	93,7
Benzethonium	4M	10 OOOJ/ml	99,9	88,9
Benzethonium	4M	20 OOOJ/ml	101,5	94,4
Fenoxyetanol	4M	10 OOOJ/ml	100,5	96,9
Fenoxyetanol	4M	20 OOOJ/ml	102,6	97,5
Benzethonium & Fenoxyetanol (0,005 % & 0,5 %)	3M	20 OOOJ/ml	98,3	97,0
1 merané reverzne fázovou HPLC

Ako vidieť z tabuľky 2, údaje z reverzne fázovej HPLC ukazujú, že neprichádza k žiadnej strate koncentrácie EPO pri všetkých kompozíciách, ak sú skladované pri 5EC od 3 do 7 mesiacov. Ale kompozície obsahujúce samostatný benzyl alkohol alebo benzethonium chlorid mali až 10 % stratu EPO, keď boli skladované pri 25 EC od 3 do 7 mesiacov. Kompozície obsahujúce fenoxyetanol alebo fenoxyetanol v kombinácii s benzethonium chloridom nemali žiadnu stratu EPO, keď boli skladované pri 25EC od 3 do 4 mesiacov. Tieto výsledky ukazujú stabilizačný účinok fenoxyetanolu a fenoxyetanolu v kombinácii s benzethonium chloridom na EPO. Tento účinok je prekvapujúci a neočakávaný, ako aj mimoriadne výhodný.

Príklad 3: Test účinnosti antimikrobiálnej konzervancie

Testy účinnosti konzervantu sú analýzy riadené Compendiom, ktoré stanovujú účinnosť konzervačných systémov vo viacnásobne dávkovaných farmaceutických prípravkoch. Pri takýchto analýzach sú testované kompozície naočkované štandardizovanými suspenziami indikátorových aeróbnych baktérií a plesní a prežitie mikroorganizmov je monitorované počas 28 dní.

Tabuľka 3 ukazuje výsledky testu účinnosti antimikrobiálnej konzervancie podľa USP a EP. Všetky testované kompozície prešli kritériami USP na test účinnosti antimikrobiálnej konzervancie. Kompozície obsahujúce 0,01 % hmotn. benzethonium chloridu, 0,5 % hmotn. fenoxyetanolu alebo 0,5 % hmotn. fenyletyl alkoholu nesplnili kritériá EP na test účinnosti antimikrobiálnej konzervancie. Kompozície obsahujúce benzethonium chlorid a fenoxyetanol v rozdielnych kombináciách a benzethonium chlorid v kombinácii s fenyletyl alkoholom, prešli aj kritériami USP, ako aj EP. Na základe údajov v tabuľke 3 je vidno, že antimikrobiálna aktivita benzethonium chloridu sa synergickým spôsobom prekvapivo zvýšila pridaním fenoxyetanolu.

SK 286990 Β6

Tabuľka 3

Test účinnosti antimikrobiálnej konzervancie
Konzervant	Sila	Test účinnosti antimikrobiálnej konzervancie
USP	EP
Benzyl alkohol (1,0%)	20 000 J/ml	prešiel	nebol robený
Benzethoníum (0,01 %) (0,02 %)	20 000 J/ml	prešiel prešiel	neprešiel prešiel
Fenoxyetanol (0,5 %)	20 000 J/ml	prešiel	neprešiel
Benzethoníum & Fenoxyetanol (0,005 & 0,25 %) (0,005 & 0,5 %) (0,01 & 0,5 %)	20 000 J/ml	prešiel	prešiel
Fenyletyl alkohol (0,5 %)	20 000 J/ml	prešiel	neprešiel
Benzethoníum & Fenyletyl alkohol (0,02 & 0,25 %)	20 000 J/ml	prešiel	prešiel

Odkazy:

U.S. patent č. 4,377,573, Sugimoto a kol.

U.S. patent č. 4,703,008, Lin

U.S. patent č. 4,806,524, Kawagachi a kol.

U.S. patent č. 5,503,827, Woog a kol.

U.S.patent 5,661,125, Stricklan a kol.

Príručka farmaceutických excipientov, druhé vydanie, 1994

L.A. Trissel, „Príručka injekčných liečiv“. Vyd. 8, Americká spoločnosť nemocničných lekárnikov, Inc. 1994

Miyaka a kol. „Purifikácia ľudského erytropoetínu“, J. Biol.Chem., 252(15):5558-5564,1997

Lekárske referencie, vyd. 48,1994

Lekárske referencie, vyd. 50, 1996

Sandeep Nemá, R. J. Washkuhn a R. J. Brendel, „Excipienty a ich použitie v injekčných výrobkoch“, PDA Joumal of Pharmaceutical Sciences & Technology, Zv. 51(4), júl-august 1997.

Shewood a kol. „Výroba erytropoetínu ľudskými renálnymi bunkami karcinómu v kultúre“, Endocrynology, Zv. 99(2):504-510, 0976

Sherwood a kol. „Zavedenie línie výroby ľudského erytropoetínu renálnymi bunkami karcinómu“, Clinical Research, 31:323A, 1983.

Claims (18)

1. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje erytropoetín a benzethonium chlorid v množstve účinnom na inhibíciu mikrobiálneho rastu v uvedenej kompozícii.

s

2. Kompozícia podľa nároku 1, v y z n koncentrácii od 0,01 do 1,0 % hmotn.

3. Kompozícia podľa nároku 1, v y z n koncentrácii od 0,01 do 0,1 % hmotn.

4. Kompozícia podľa nároku 1, v y z n koncentrácii 0,01 % hmotn.

5. Kompozícia podľa nároku 1, v y z n koncentrácii 0,02 % hmotn.

tý tý tý tý že obsahuje benzethoníum chlorid v že obsahuje benzethoníum chlorid v že obsahuje benzethoníum chlorid v že obsahuje benzethoníum chlorid v t ý m, že ďalej obsahuje fenoxyetanol tým, že ďalej obsahuje fenoxyetanol tým, že ďalej obsahuje fenoxyetanol sa t ý m , že ďalej obsahuje fenoxyeta-

6. Kompozícia podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje fenoxyetanol.

7. Kompozícia podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5,vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje fenoxyetyl alkohol.

8. Kompozícia podľa nároku 2, vyznačujúc koncentrácii od 0,01 do 1,0 % hmotn.

9. Kompozícia podľa nároku 3, vyznačujúc koncentrácii od 0,1 do 0,75 % hmotn.

10. Kompozícia podľa nároku 4, vyznačujúc koncentrácii 0,25 % hmotn.

11. Kompozícia podľa nároku 4 alebo 5, vyznačujúca nol v koncentrácii 0,5 % hmotn.

12. Kompozícia podľa nároku 7, vyznačujúca sa tým, že obsahuje benzethonium chlorid v koncentrácii asi 0,02 % hmotn. a fenyletyl alkohol v koncentrácii asi 0,25 % hmotn.

13. Kompozícia podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje soľ.

14. Kompozícia podľa nároku 13, vyznačujúca sa tým, že uvedenou soľou je chlorid sodný.

15. Kompozícia podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje pufer.

16. Kompozícia podľa nároku 15, vyznačujúca sa tým, že týmto pufŕom je fosforečnan sodný.

17. Ampulka, vyznačujúca sa tým, že obsahuje kompozíciu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 16.

18. Spôsob inhibície mikrobiálneho rastu v roztoku obsahujúcom erytropoetín, vyznačujúci sa t ý m, že zahŕňa pridanie benzethonium chloridu k uvedenému roztoku a voliteľne ďalších zložiek kompozície podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 16.