SI8911201A - Derivati aminokislin - Google Patents

Abstract

Spojine s splošno formulo .1 J, 'CH' b \ch/BI, v kateri n predstavlja število 0 ali 1; R1 predstavlja alkoksikarbonil, aralkoksikarbonil, alkanoil, cikloalkilkarbonil, aralkanoil, aroil, heterociklil-karbonil, alkilsulfonil, arilsulfonil, monoaralkilkarbamoil, cinamoil ali alfa-aralkoksikarbonil-aminoalkanoil in R2 predstavlja vodik, ali R1 in R2 skupaj z atomom dušika na katerega sta vezana, predstavljata ciklično imidno skupino s formulo alkil ali alkoksikarbonilalkil, ali kadar n predstavlja število 0, lahko R3 tudi predstavlja alkiltioalkii, ati kadar n označuje število 1, lahko R3 prav tako predstavlja alkilsulfonilalkil; R4 predstavlja alkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, aril ali aralkil; R5 predstavlja vodik in R6 predstavlja hidroksi, ali R5 in R6 skupaj predstavljata okso; R7 in R8 skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, katera je lahko substituirana s hidroksi,alkoksikarbonilamino ali acilamino ali v kateri je ena od skupin -CH2- zamenjana z -NH-, -N(alkoksikarbonil)-, -N(acil)- ali -S-, ali katera nosi kondenziran cikloalkanski, aromatski ali heteroaromatski obroč; in R9 predstavlja alkoksikarbonil, monoalkilkarbamoil, monoaralkilkarbamoil, monoarilkarbamoil ali skupino s formulo

Description

F.HOFFMANN-LA ROCHE AG

DERIVATI AMINOKISLIN

Predloženi izum se nanaša na derivate aminokislin. Derivati aminokislin, katerih pridobivanje je omogočeno s tem izumom, so spojine s splošno formulo

4

R R (0) p

I I t>^R h z z

R⁹ v kateri n predstavlja število 0 ali 1; Rl predstavlja alkoksikarbonil, aralkoksikarbonil, alkanoil, cikloalkilkarbonil, aralkanoil, aroil, heterociklil-karbonil, alkilsulfonil, arilsulfonil, monoaralkilkarbamoil, cinamoil ali a-aralkoksikarbonilaminoalkanoil in R^ predstavlja vodik, ali Rl in R^ skupaj z atomom dušika na katerega sta vezana, predstavljata ciklično imidno skupino s formulo

O

N— (a) v kateri P in Q skupaj predstavljata aromatski sistem; R^ predstavlja alkil, cikloalkil, aril, aralkil, heterociklilalkil, cianoalkil, alkilsulfinilalkil, karbamoilalkil ali alkoksikarbonilalkil, ali kadar n predstavlja število O, lahko R^ predstavlja alkiltioalkil, ali kadar n označuje število 1, lahko R^ prav tako predstavlja alkilsulfonilalkil; R^ predstavlja alkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, aril ali aralkil; R^ predstavlja vodik in R^ predstavlja hidroksi, ali R^ in RČ skupaj predstavljata okso;

R⁷ in r8 skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, katera je lahko substituirana s hidroksi, alkoksikarbonilamino ali acilamino, ali v kateri je ena od skupin -CH2' zamenjana z -NH-, -N(alkoksikarbonil)-, -N(acil)- ali -S-, ali katera nosi kondenziran cikloalkan, aromatski ali heteroaromatski obroč; in R^ predstavlja alkoksikarbonil, monoalkilkarbamoil, monoaralkilkarbamoil, monoarilkarbamoil ali skupino s formulo —CO' /^H\ z^co\

CH

JO

NHJ1 (b) v kateri RlO in R^ vsak posebej predstavlja alkil;

in njihove farmacevtsko sprejemljive kislinske adicijske soli.

Spojine s formulo I in njihove farmacevtsko sprejemljive kislinske adicijske soli so nove in imajo dragocene farmakološke lastnosti. Predvsem inhibirajo proteaze virusnega porekla, in se lahko uporabljajo v profilaksi ali za zdravljenje virusnih infekcij, posebno infekcij izzvanih z virusom HIV in z drugimi retroidnimi virusi.

Predmet tega izuma so spojine s formulo I in njihove zgoraj omenjene soli kot take, kot tudi uporaba terapevtsko aktivnih snovi, postopek za proizvodnjo omenjenih spojin in soli, intermediati, ki se uporabljajo v omenjenem postopku, zdravilni pripravki, ki vsebujejo omenjene spojine in soli, uporaba omenjenih spojin in soli pri kontroli ali odpravi bolezni, posebno za zdravljenje ali profilakso virusnih infekcij, in uporaba omenjenih spojin in soli za pripravo zdravil za zdravljenje in profilakso virusnih infekcij.

V tem opisu se izraz alkil uporablja sam ali v kombinaciji, da z njim označimo ravno ali razvejeno alkilno skupino, ki vsebuje največ 8, prednostno največ 4 atome ogljika, kot so metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, sek.-butil, terc.-butil, pentil, heksil in podobno. Izraz alkoksi, sam ali v kombinaciji, predstavlja skupino alkil eter v kateri ima izraz alkil že dani pomen, kot so metoksi, etoksi, n-propoksi, izopropoksi, n-butoksi, izobutoksi, sek.-butoksi, terc.-butoksi in podobni. Izraz cikloalkilalkil predstavlja alkilno skupino, kot smo že definirali, ki je substituirana s cikloalkilno skupino in vsebuje 3-8, prednostno 3-6 atome ogljika, kot so ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil in podobno. Izraz aril, sam ali v kombinaciji, predstavlja fenilno ali naftilno skupino, ki lahko po izboru nosi enega ali več substituentov izbranih iz skupine, ki jo sestavljajo alkil, alkoksi, halogen, hidroksi, amino in podobni, kot so fenil, p-tolil, 4-metoksifenil, 4-terc.-butoksifenil, 4fluorofenil, 4-klorofenil, 4-hidroksifenil, 1-naftil, 2-naftil itd. Izraz aralkil, sam ali v kombinaciji, pomeni alkilno skupino, kot smo jo prej definirali, v kateri je en vodikov atom zamenjan z arilno skupino, kot smo jo prej definirali, kot so benzil, 2-feniletil in podobno. Izraz aralkoksikarbonil, sam ali v kombinaciji, pomeni skupino s formulo -C(O)-O-aralkil, kjer ima izraz aralkil prej omenjeni pomen, kot je benziloksikarbonil itd. Izraz alkanoil, sam ali v kombinaciji, pomeni skupino aeil, ki je izvedena iz alkankarboksilne kisline, kot so acetil, propionil, butiril, valeril, 4metilvaleril itd. Izraz cikloalkilkarbonil označuje acilno skupino, ki je izvedena iz monociklične ali premoščene cikloalkankarboksilne kisline, kot so ciklopropankarbonil, cikloheksankarbonil, adamantankarbonil itd., ali iz benzkondenzirane monociklične cikloalkankarboksilne kisline, ki je lahko substituirana, na primer z alkanoilamino, kot so l,2,3,4-tetrahidro-2-naftoil, 2-acetamido-1,2,3,4tetrahidro-2-naftoil. Izraz aralkanoil pomeni acilno skupino, ki je izvedena iz arilsubstituirane alkankarboksilne kisline, kot so fenilacetil, 3-fenilpropionil (hidrocinamoil), 4-fenilbutiril, (2-naftil)acetil, 4-klorohidrocinamoil, 4-aminohidrocinamoil, 4-metoksihidrocinamoil itd. Izraz aroil predstavlja acilno skupino, ki je izvedena iz aromatske karboksilne kisline, npr. iz benzojske ali naftalenkarboksilne kisline, katere so lahko substituirane, kot so benzoil, 4-klorobenzoil, 4-karboksibenzoil, 4(benziloksikarbonil)-benzoil, 1-naftoil, 2-naftoil, 6-karboksi-2-naftoil, 6-(benziloksikarbonil)-2-naftoil, 3-benziloksi-2-naftoil, 3-hidroksi-2-naftoil, 3-(benziloksiformamido)-2-naftoil itd. Heterociklični del skupine heterociklilkarbonil ali heterociklilalkil je nasičen, delno nenasičen ali aromatski monociklični, biciklični ali triciklični heterocikel, ki vsebuje en ali več hetero atomov, izbranih iz skupine, ki jo sestavljajo dušik, kisik in žveplo, ki je lahko substituiran na enem ali več atomih ogljika s halogenom, alkilom, alkoksi, okso itd. in/ali na sekundarnem atomu dušika (t.j. na -NH-) z alkilom, aralkoksikarbonilom, alkanoilom, fenilom ali fenilalkilom, ali na terciarnem atomu dušika (t.j. na -N-) z oksidom in kateri je vezan preko ogljikovega atoma. Primeri za take heterociklične skupine so pirolidinil, piperidinil, piperazinil, morfolinil, tiamorfolinil, pirolil, imidazolil, (npr. imidazol-4-il, 1-benziloksikarbonilimidazol-4-il itd), pirazolil, piridil, pirazinil, pirimidinil, furil, tienil, triazolil, oksazolil, tiazolil, indolil (npr. 2-indolil itd.), kinolil (npr. 2-kinolil, 3-kinolil, l-oksido-2-kinolil itd.), izokinolil (npr. 1-izokinolil, 3-izokinolil itd.), tetrahidrokinolil (npr. l,2,3,4-tetrahidro-2-kinolil itd.) 1,2,3,4-tetrahidroizokinolil (npr. 1,2,3,4tetrahidro-l-okso-izokinolil itd.), kinoksalinil, β-karbolinil in podobni.

Izraz halogen označuje fluor, klor, brom ali jod.

Skupina cinamoil, ki je označena z Rl, je lahko nesubstituirana ali pa lahko nosi na fenilnem obroču en ali več substituentov izbranih iz skupine, ki jo sestavljajo alkil, alkoksi, halogen, nitro in podobni.

Aromatski sistem, ki je v prej navedeni formuli (a) označen skupaj s P in Q, je lahko monocikličen (npr. 1,2-fenilen ali tienilen), ali policikličen (npr. 1,2-naftilen, 2,3naftilen, 1,8-naftilen, 2,3-antrilen itd.) in je lahko nesubstituiran ali substituiran z enim ali več substituenti izbranimi iz skupine, ki jo sestavljajo alkil, alkoksi, halogen in podobni.

Kot smo prej omenili, je skupina trimetilen ali tetrametilen, označena z R^ in R⁸ skupaj, lahko substituirana s hidroksi skupino ali alkoksikarbonilamino skupino (npr. terc.-butoksikarbonilamino) ali acilamino skupino (t.j. alkanoilamino, cikloalkilkarbonilamino, aralkanoilamino ali aroilamino). Druga možnost je, da je ena od skupin -CH2- iz skupine trimetilen ali tetrametilen, označena skupaj z R^ in R⁸, zamenjana z -NH-, -N(alkoksikarbonil)-, npr. -N(terc.-butoksikarbonil)-, -N(acil)- ali -S-. Kadar skupina trimetilen ali tetrametilen, označena z R^ in R⁸ skupaj, nosi kondenziran cikloalkanski obroč, je le-ta lahko npr. kondenziran cikloalkanski obroč, ki vsebuje 3-6 atomov ogljika, kot je npr. kondenziran ciklopentanski, cikloheksanski ali podoben obroč, in kadar skupina trimetilen ali tetrametilen nosi kondenziran aromatski ali heteroaromatski obroč, je le-ta lahko npr. kondenziran benzenov, indolov ali tiofenov obroč, ki je lahko substituiran na enem ali več atomih ogljika s halogenom, alkilom, alkoksi itd. Tako -N(R^)-CH(R⁸) (R^) lahko predstavlja npr. eno od naslednjih skupin:

kjer ima R^ pomen, ki je prej opisan, R^² predstavlja vodik, hidroksi, alkoksikarbonilamino ali acilamino, R^ predstavlja vodik, alkoksikarbonil ali acil, m označuje i ali 2 in p označuje 1 ali 2.

Farmacevtsko sprejemljive kislinske adicijske soli spojin s formulo I so soli tvorjene z anorganskimi kislinami, kot so npr. halogenovodikove kisline, kot so klorovodikova kislina ali bromovodikova kislina, žveplova kislina, solitrna kislina, fosforjeva kislina itd., ali z organskimi kislinami, kot so npr. ocetna kislina, citronska kislina, maleinska kislina, fumarna kislina, vinska kislina, metansulfonska kislina, p-toluensulfonska kislina itd.

Spojine s formulo I vsebujejo najmanj tri asimetrične atome ogljika in so zato prisotne v obliki optično čistih diastereoizomerov, zmesi diastereoizomerov, diastereoizomernih racematov ali zmesi diastereoizomernih racematov. Ta izum vključuje vse te oblike.

Posebna skupina spojin s formulo I obsega spojine, v katerih n označuje število 0, R^ predstavlja alkil, cikloalkil, aril, aralkil, heterociklilalkil, cianoalkil, alkiltioalkil, karbamoilalkil ali alkoksikarbonilalkil in R² in R& skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, v kateri lahko eno skupino -CH2- zamenjamo z -NH- ali -S- ali katera lahko nosi kondenziran cikloalkanski, aromatski ali heteroaromatski obroč.

V spojinah s formulo I, ki so predhodno prikazane, je zaželeno, da Rl predstavlja alkoksikarbonil, aralkoksikarbonil, alkanoil, cikloalkilkarbonil, aralkanoil, aroil, heterociklilkarbonil ali a-aralkoksikarbonilamino-alkanoil, prednostno benziloksikarbonil, 2-naftoil, l-hidroksi-2-naftoil, 3-hidroksi-2-naftoil, 3-benziloksi-2-naftoil, 2kinolilkarbonil ali 3-kinolilkarbonil in da R² predstavlja vodik. Zaželeno je, da R² predstavlja alkil, cianoalkil, alkiltioalkil ali karbamoilalkil in prednostno cianometil, metiltiometil ali karbamoilmetil. Zaželeno je, da R^ predstavlja aralkil, posebno benzil. Zaželeno je, da R^ predstavlja vodik in da R^d predstavlja hidroksi. Zaželeno je, da -N(R²)-CH(R8)(R9) predstavlja eno od predhodno prikazanih skupin s formulo (c) do (i), posebno skupino s formulo (c), v kateri R^² predstavlja vodik in m označuje 2, ali R^² predstavlja terc.-butoksikarbonilamino in m označuje 1, skupino s formulo (d), v kateri R^d2 predstavlja terc.-butoksikarbonil, skupino s formulo (e), v kateri m označuje 1, skupino s formulo (f), v kateri m in p oba označujeta 1, ali skupino s formulo (g), (i) ali (j). Za R^ je zaželeno, da predstavlja alkoksikarbonil, posebno terc.-butoksikarbonil, monoalkilkarbamoil, posebno izobutilkarbamoil ali

Ί terc.-butilkarbamoil ali skupino s formulo (b), posebno skupino, v kateri β1θ predstavlja sek.-butil in RH predstavlja izobutil.

Iz zgoraj predstavljenega je razumljivo, da imajo posebno prednost spojine s formulo I, v katerih Rl predstavlja benziloksikarbonil, 2-naftoil, l-hidroksi-2-naftoil, 3hidroksi-2-naftoil, 3-benziloksi-2-naftoil, 2-kinolilkarbonil ali 3-kinolilkarbonil in R^ predstavlja vodik, R^ predstavlja cianometil, metiltiometil ali karbamoilmetil, R^ predstavlja benzil, R$ predstavlja vodik in R^ predstavlja hidroksi, in

-N(r7)-CH(R8)(r9) predstavlja skupino s prej omenjeno formulo (c), kjer Rl2 predstavlja vodik in m označuje 2, ali Rl2 predstavlja terc.-butoksikarbonilamino in m označuje 1, skupino s prej prikazano formulo (d), kjer R^ predstavlja terc.butoksikarbonil, skupino s prej prikazano formulo (e), v kateri m označuje 1, skupino s prej prikazano formulo (f), v kateri m in p označujeta 1, ali skupino s prej prikazanimi formulami (g), (i) ali (j), in R^ predstavlja terc.-butoksikarbonil, izobutilkarbamoil, terc.-butilkarbamoil ali skupino s formulo (b), v kateri R^ predstavlja sek.-butil in R^ predstavlja izobutil.

Spojine s formulo I, ki imajo posebno prednost, so:

N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R ali S)-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamid,

N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R ali S)-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-izobutil-L-prolinamid,

N^-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R )-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(R)-tiazolidin-karboksamid, N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-Lasparaginil]amino]butil]-2(S)-piperidinkarboksamid, l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-oktahidro-(3aS,6aS)-ciklopenta[b]pirol-2(S)-karboksamid,

1- [3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-2(S)-piperidin-karboksamid,

2- [3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-l,2,3,4-tetrahidropirido]3,4-b]indol-l-karboksamid, N-terc.-butil-3-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]4(R)-tiazolidinkarboksamid,

Nl-terc.-butil-N2-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-Lasparaginil]amino]-L-prolinamid N^-oksid, l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-3-ciano-L-alanil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutilN-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamid, l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2-(R ali S)-piperazinkarboksamid, l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-3-ciano-L-alanil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R ali S)-piperazinkarboksamid, N^-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]4(R)-(terc.butoksiformamido)-Nl-terc.-butil-L-prolinamid, l-[3(S)-[[N-(3-benziloksi-2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]N-(terc.-butil-2(S)-piperidin-karboksamid,

N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarboniI)-Lasparaginil]amino]butil]-2-piperidinkarboksamid 1-oksid,

N-terc.-butil-l-[3(S)-[[N-(3-hidroksi-2-naftoil)-L-asparaginiljamino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-2(S)-piperidinkarboksamid, trans-2-[3(S)-[[N-benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro-(4aR,8aS)-izokinolin-3(S)-karboksamid,

4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]butil]-2(R ali Sjpiperazinkarboksamid,

N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(l-hidroksi-2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-4fenilbutil]-2(S)-piperidinkarboksamid, trans-N-terc.-butil-dekahidro-2-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-Lasparaginil]amino]butil]-(4aR,8aS)-izokinolin-3(S)-karboksamid in N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-Lcisteinil]amino]butil]-2(S)-piperidinkarboksamid.

Najbolj zaželene spojine s formulo I so:

N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]2(S)-piperidinkarboksamid,

N-terc.-butil-oktahidro-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-Lasparaginil]amino]butil]-(3aS,6aS)-ciklopenta[b]pirol-2(S)-karboksamid in N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidro-2-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)L-asparaginil]amino]butil]pirido[3,4-b]indol-l(R ali S)-karboksamid.

Na osnovi postopka v smislu izuma spojine s formulo I in njihove farmacevtsko sprejemljive kislinske adicijske soli pripravimo tako, da (a) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 0, spojina s splošno formulo

P.

CH / \Z h₂n c

R⁵ R⁶

CH_-N R ²

CH' b

v kateri imajo r£ R³, r6 r7 r8 j_n r9 p_rej dani pomen, reagira s kislino s splošno formulo

R'

R i

-N

CH3

-COOH v kateri imajo Rl, R² in R³ prej dani pomen, ali z njenim reaktivnim derivatom, ali (b) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 0, R³ predstavlja vodik in R^ predstavlja hidroksi, reduciramo spojino s formulo I, v kateri n označuje 0, in R³ in R6 skupaj predstavljata okso, ali (c) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 0 in Rl predstavlja alkanoil, cikloalkilkarbonil, aralkanoil, aroil, heterociklilkarbonil, alkilsulfonil, arilsulfonil, cinamoil ali cr-aralkoksikarbonilaminoalkanoil, in R² predstavlja vodik, ali R³ in R² skupaj z atomom dušika s katerim sta vezana, predstavljata ciklično imidno skupino s prej prikazano formulo (a), spojina s splošno formulo /^co\ . CH NH

R

I

-CH ,CH_-N z

v kateri imajo R³, R£ R³, r6, r7_? r8 j_n r9 p_rej d_anj p_Omen,

IV reagira s sredstvom, ki da skupino alkanoil, cikloalkilkarbonil, aralkanoil, aroil, heterociklilkarbonil, alkilsulfonil, arilsulfonil, cinamoil ali a-aralkoksikarbonilaminoalkanoil, ali s sredstvom, ki tvori skupino cikličnega imida s formulo (a), ki je prej prikazana, ali (d) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 0 in Rl predstavlja monoaralkilkarbamoil in R^ predstavlja vodik, spojina s prej prikazano formulo IV reagira s spojino s splošno formulo r1’_N=C=O V v kateri Rl predstavlja aralkil, ali (e) za pripravo spojine s formulo I, v kateri R^ predstavlja alikilsulfinilalkil in n označuje 0, oksidiramo spojino s formulo I, v kateri R^ predstavlja alkiltioalkil in n označuje 0, ali (f) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 1, oksidiramo spojino s formulo I, v kateri n označuje 0, ali (g) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 1 in Rl predstavlja aromatsko N-heterociklilkarbonil N-oksidno skupino, in R^ predstavlja vodik, oksidiramo spojino s formulo I, v kateri n označuje 1 in Rl predstavlja aromatsko N-heterociklilkarbonilno skupino in R^ predstavlja vodik, ali (h) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje I in R^ predstavlja alkilsulfonilalkil, oksidiramo spojino s formulo I, v kateri n označuje 1 in predstavlja alkilsulfinilalkil, ali (i) za pripravo spojine s formulo I, v kateri Rl predstavlja karboksi-substituirani aroil, hidroksi-substituirani aroil ali hidrocinamoil, in R^ predstavlja vodik, katalitsko hidrogeniramo spojino s formulo I, v kateri Rl predstavlja benziloksikarbonilsubstituiran aroil, benziloksi-substituiran aroil ali cinamoil in R^ predstavlja vodik, ali (j) za pripravo spojine s formulo I, v kateri R^ predstavlja imidazol-4-il in/ali R⁴ predstavlja hidroksi-substituirani aril ali hidroksi-substituirani aralkil in/ali in R⁸ skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, v kateri je ena skupina CH2- zamenjana z -NH-, obdelamo spojino s formulo I, v kateri R^ predstavlja 111 (benzil-oksikarbonil)-imidazol-4-il in/ali R^ predstavlja terc.-butoksi-substituiran aril ali terc.-butoksi-substituiran aralkil in/ali R? in R⁸ skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, v kateri je ena skupina -CH2- zamenjana z -N(terc.butoksikarbonil)- skupino, z močno kislino, ali (k) za pripravo spojine s formulo I, v kateri R? in R⁸ skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, ki je substituirana z acilamino, ali v kateri je ena skupina -CH2- zamenjana z -N(acil)-, aciliramo spojino s splošno formulo ^r1-\ /^co\ /^ch\/^ch^· ^XCH NH £ <2’n R⁷'

-V .

,8'

VI v kateri imajo n, Rl, R^ r3, r4, r5, r6 j_n r9 p_rej dani pomen in R^ in R⁸’ skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, ki je substituirana z amino ali v kateri je ena skupina -CH^- zamenjana z -NH-, in/ali (l) če želimo, ločimo zmes diastereoizomernih racematov na diastereoizomerne racemate ali optično čiste diastereoizomere in/ali (m) če želimo, ločimo zmes diastereoizomerov na optično čiste diastereoizomere in/ali (n) če želimo, dobljeno spojino s formulo I prevedemo v farmacevtsko sprejemljivo kislinsko adicijsko sol.

Reakcijo spojine s formulo II s kislino s formulo III v skladu z izvedbo (a) postopka tega izuma, lahko izvršimo s pomočjo metod znanih v kemiji peptidov. Tako je pri uporabi kisline s formulo III zaželeno, da to reakcijo izvršimo v prisotnosti kondenzirnega sredstva, kot so hidroksibenzotriazol in dicikloheksilkarbodiimid. To reakcijo lahko izvršimo v inertnem organskem topilu, kot npr. etru (npr. dietileter, tetrahidrofuran itd.) ali dimetilformamidu, pri nizki temperaturi, zaželeno pri okoli -10 °C do +5 °C in prednostno okoli 0 °C. Ustrezni reaktivni derivati kisline s formulo III, kijih lahko uporabimo, so npr. ustrezni kislinski halogenidi (npr. kislinski kloridi), kislinski anhidridi, mešani anhidridi, aktivirani estri itd. Kadar uporabimo reaktivni derivat, je priporočljivo, da reakcijo izvršimo v inertnem organskem topilu, kot je halogenirani alifatski ogljikovodik (npr. diklorometan itd.) ali eter (npr. dietileter, tetrahidrofuran itd.) in, kadar to ustreza, v prisotnosti organske baze (npr. N-etilmorfolina, di-izopropiletilamina itd.), pri nizki temperaturi, zaželeno pri okoli 10 °C do + 5 °C in prednostno okoli 0°C.

Redukcijo spojine s formulo I, v kateri R^ in R^ skupaj predstavljata okso, lahko izvedemo v skladu z izvedbo (b) tega izuma s pomočjo metod znanih za redukcijo karbonilne skupine v hidroksi skupino. Tako npr. lahko redukcijo izvršimo z uporabo kompleksnega kovinskega hidrida, kot je borhidrid alkalijske kovine, posebno natrijev borhidrid, v ustreznem organskem topilu, kot je akanol (npr. metanol, etanol, propanol, izopropanol itd.). Primerno je, da to redukcijo izvedemo pri približno sobni temperaturi.

Ustrezno izvedbi (c) tega postopka so primerna sredstva, ki prispevajo alkanoil, cikloalkilkarbonil, aralkanoil, aroil, heterociklikarbonil, alkilsulfonil, cinamoil ali aaralkoksikarbonilaminoalkanoil, primerne kisline ali njihovi reaktivni derivati, kot so ustrezni kislinski halogenidi (npr. kislinski kloridi), kislinski anhidridi, mešani anhidridi, aktivirani estri itd., in primerna sredstva, ki tvorijo skupino cikličnega imida prej predstavljene formule (a), so spojine s formulo HOOC-P-Q-COOAralkil, v kateri imata P in Q prej dani pomen. Reakcijo spojine s formulo IV z zgoraj omenjenimi sredstvi izvršimo na enak način, kot je prej opisano v zvezi z izvedbo (a) postopka tega izuma. Pri reakciji spojine s formulo IV s spojino s formulo HOOC-PQ-COOAralkil prvotno tvorjeni reakcijski proizvod spontano izgubi eno molekulo aralkanola (HO-Aralkil) ob tvorbi skupine cikličnega imida.

Reakcijo spojine s formulo IV s spojino s formulo V, v skladu z izvedbo (d) postopka tega izuma, lahko izvedemo na že znan način. To reakcijo lahko izvršimo v inertnem organskem topilu, kot je halogeniran alifatski ogljikovodik (npr. diklorometan itd.), pri temperaturi med približno 0 °C in sobno temperaturo, prednostno pri sobni temperaturi.

Oksidacijo v skladu z izvedbami (e), (f), (g) in (h) tega postopka lahko izvedemo s pomočjo znanih postopkov. Oksidacijo prednostno izvršimo ob uporabi organske perkisline, kot je perocetna kislina, perbenzojska kislina, haloperbenzojska kislina, kot je m-klorperbenzojska kislina, perftalna kislina ali podobno, čeprav jo lahko izvedemo tudi z uporabo vodikovega peroksida. Oksidacijo lahko izvedemo ob prisotnosti organskega topila, ki je inertno v danih reakcijskih pogojih, kot npr.

alkanola, kakršen je metanol, etanol itd., halogenirani ogljikovodik kot metilenklorid itd., in podobni. Oksidacijo lahko izvedemo v širokem območju temperature, npr. v območju od okoli -70 °C do približno sobne temperature.

Katalitsko hidrogeniranje v skladu z izvedbo (i) postopka tega izuma lahko izvedemo na znan način. Priporočljivo je, da se katalitsko hidrogeniranje izvaja v prisotnosti plemenite kovine kot katalizatorja, prednostno paladijevega katalizatorja, kot je paladij na oglju, in v inertnem organskem topilu (npr. alkanolu, kot je etanol, izopropanol itd.), pri približno sobni temperaturi pod atmosferskim tlakom. Kadar spojino s formulo I, v kateri Rl predstavlja nitro-substituirani cinamoil in R^ predstavlja vodik, hidrogeniramo katalitsko ustrezno tej obliki izvajanja, dobimo spojino s formulo I, v kateri Rl predstavlja amino-substituirani hidrocinamoil in R^ predstavlja vodik.

Izvedbo (j) postopka tega izuma lahko izvedemo z uporabo močne anorganske kisline, npr. halogenvodikove kisline, kot je klorovodik ali bromovodik, ali močne organske kisline, npr. halogenirane alkankarboksilne kisline kot trifluorocetne kisline in podobnega. Ta izvedba lahko poteka v skladu z znanimi postopki; npr. v prisotnosti ali odsotnosti inertnega organskega topila (npr. estra alkankarboksilne kisline kot je etil acetat itd.) in pri temperaturi med približno 0 °C in približno sobno temperaturo, prednostno pri sobni temperaturi.

Aciliranje spojine s formulo VI v skladu z izvedbo postopka (k) tega izuma lahko izvršimo na osnovi znanih metod. Primerno je, da aciliranje vršimo z uporabo acilhalogenida, kot je acilklorid ali acilbromid, v prisotnosti inertnega organskega topila, kot je dimetilformamid itd., in pri temperaturi med približno 0 °C in sobno temperaturo. Namesto kislinskega halogenida lahko uporabimo tudi drug reaktiven kislinski derivat, kot je kislinski anhidrid ali podoben.

Neobvezne ločbe v skladu z izvedbami (1) in (m) postopka tega izuma lahko dosežemo s pomočjo običajnih metod; npr. s pomočjo kromatografije na koloni, tankoslojne kromatografije, tekočinske kromatografije pod visokim tlakom itd.

Pretvorbo spojine s formulo I v farmacevtsko sprejemljivo kislinsko adicijsko sol ustrezno izvedbi (n) postopka tega izuma, lahko izvedemo z obdelavo spojine na običajen način z anorgansko kislino, kot je npr. halogenovodikova kislina, kot so npr. klorovodikova kislina ali bromovodikova kislina, žveplova kislina, solitrna kislina, fosforna kislina itd., ali z organsko kislino, kot so ocetna kislina, citronska kislina, maleinska kislina, fumarna kislina, vinska kislina, metansulfonska kislina, ptoluensulfonska kislina.

Spojine s formulo II uporabljene kot izhodne snovi pri izvedbi (a) postopka so nove in tudi tvorijo predmet predloženega izuma.

Spojino s formulo II lahko proizvedemo npr. tako, da spojina s splošno formulo

ch₂—X

II o

VII v kateri ima prej dani pomen, R^ predstavlja amino-zaščitno skupino (npr. terc.-butoksikarbonil ali benziloksikarbonil) in X predstavlja klorov ali bromov atom, reagira s spojino s splošno formulo /

I«

VIII v kateri imajo R^, R& in R^ zgoraj dani pomen, in bodisi odcepimo skupino Rl4 od dobljene spojine s splošno formulo

CH

O

IX v kateri imajo R^, R? r8 r9 j_n r14 prej omenjeni pomen, pri čemer dobimo spojino s formulo II, v kateri in skupaj predstavljata okso, ali reduciramo spojino s formulo IX in odcepimo skupino Rl4 iz dobljene spojine s splošno formulo /\ /^CH2 r¹⁴-h/ \/

H OH

v kateri imajo R^, r7, r8 r9 in Rl4 prej dani pomen, pri čemer dobimo spojino s formulo II, v kateri R$ predstavlja vodik in R⁶ predstavlja hidroksi.

Reakcija spojine s formulo VII, prednostno spojine v kateri Rl4 predstavlja benziloksikarbonil, s spojino s formulo VIII lahko izvedemo na znan način, npr. v inertnem organskem topilu, kot je halogeniran alifatski ogljikovodik (npr. diklorometan itd.), in v prisotnosti baze (npr. trialkilamina kot je trietilamin itd.); primerna je izvedba reakcije pri sobni temperaturi.

Odcepitev skupine Rl4 _od spojine s formulo IX prav tako lahko izvršimo na znan način, npr. z uporabo močne anorganske kisline kot je halogenovodikova kislina, ali močna organska kislina (npr. trifluorocetna kislina itd.), primerno pri okoli 0 °C do okoli sobne temperature. Druga možnost je, da jo lahko, če je amino-zaščitna skupina Rl4 odcepljiva s hidrogenolizo, odcepimo z uporabo vodika v prisotnosti katalizatorja plemenite kovine (npr. paladijevega katalizatorja, kot je paladij na oglju) v organskem topilu ali zmesi topila, ki je inertna pri danih reakcijskih pogojih (npr. v alkanolu, kot je etanol, izopropanol itd., estru alkankarboksilne kisline, kot je etil acetat, itd); primereno reakcija poteka pri sobni temperaturi.

Redukcijo spojine s formulo IX, da dobimo spojino s formulo X, izvedemo tako, kot smo prej opisali v zvezi z redukcijo spojine s formulo I, v kateri n označuje 0 in R^ in R⁸ skupaj predstavljata okso, v skladu z izvedbo (b) postopka tega izuma.

Odcepitev skupine Rl4 od spojine s formulo X lahko izvedemo na način, ki je analogen tistemu, ki smo ga prej opisali v zvezi z odcepitvijo skupine Rl4 od spojine s formulo IX.

Druga metoda za pripravo spojine s formulo II, v kateri R5 predstavlja vodik in R6 predstavlja hidroksi, obsega najprej reakcijo spojine s splošno formulo

v kateri imata R^ in Rl4 prej dani pomen, s spojino s formulo VIII, ki smo jo že prikazali, prikladno v inertnem organskem topilu, kot npr. alkanolu (npr. metanolu itd.), dimetilformamidu ali podobnem, pri zvišani temperaturi, primerno pri temperaturi od okoli 60 °C do okoli 120 °C, nakar odcepimo skupino R^ od produkta te reakcije (spojina s prej prikazano formulo X) na prej opisan način.

Spojine s formulo IV, ki se uporabljajo kot izhodni material za izvedbi (c) in (d) postopka tega izuma, so nove in predstavljajo še en predmet izuma.

Spojine s formulo IV lahko pridobimo npr. tako, da odcepimo benziloksikarbonil ali terc.-butoksikarbonil Rl skupino od spojine s formulo I, v kateri n označuje 0, Rl predstavlja benziloksikarbonil ali terc.-butoksikarbonil in R² predstavlja vodik. To odcepitev izvršimo na način, ki je analogen prej opisanem načinu v zvezi z odcepitvijo skupine Rl4 od spojine s formulo IX.

Spojine s formulo VI, v kateri R² in R& skupaj predstavljata trimetilensko ali tetrametilensko skupino, v kateri je ena skupina -CH2- zamenjana z -NH-, ki jo uporabljamo kot izhodni material pri izvedbi (k) postopka tega izuma, so podskupine spojine s formulo I. Spojine s formulo VI, v kateri R²’ in R^’ skupaj predstavljata trimetilensko ali tetrametilensko skupino, ki je substituirana z amino, ki jo prav tako uporabimo kot izhodni material za izvedbo (k) tega postopka, so nove in prav tako predstavljajo predmet tega izuma. Lahko jih pridobimo npr. tako, da odcepimo alkoksikarbonilno skupino od spojine s formulo I, v kateri R^ in R^ skupaj predstavljata trimetilensko ali tetrametilensko skupino, ki je substituirana z alkoksikarbonilaminom. To cepitev lahko izvedemo s pomočjo običajnih postopkov; npr. z obdelavo s kislino, kot npr. halogenovodikom (npr. klorovodikom) v inertnem organskem topilu (npr. estru alkankarboksilne kisline, kot je etil acetat itd.).

Izhodne materiale s formulo III in njihove reaktivne derivate, izhodne materiale s formulo V kot tudi spojine s formulo VII, VIII in XI, ki smo jih predhodno prikazali, v kolikor niso znane spojine ali analogi znanih spojin, lahko proizvedemo na podoben način, kot proizvajamo znane spojine, ali kot je opisano v Primerih, ki so navedeni kasneje, ali na analogen način. Poleg tega so sredstva, ki jih rabimo za izvajanje postopka (c) tega izuma, v glavnem znane spojine.

Kot smo že omenili, spojine s formulo I in njihove farmacevtsko sprejemljive kislinske adicijske soli inhibirajo proteaze virusnega porekla in so koristne za zdravljenje ali profilakso virusnih infekcij, posebno infekcij izzvanih z virusom HIV in drugimi retroidnimi virusi.

In vitro inhibicijo proteaze virusa HIV s spojinami, ki jih lahko dobimo s pomočjo tega izuma, lahko demonstriramo s pomočjo naslednjega testa:

Proteaza virusa HIV je izražena v bakteriji E. coli in je delno očiščena topnih ekstraktov bakterije s pomočjo frakcionacije z amonijevim sulfatom (0-30%). Proteazno aktivnost analiziramo s pomočjo zaščitenega heksapeptida kot substrata, t.j. sukcinil-Ser-Leu-Asn-Tyr-Pro-Ile izobutilamida. Cepitev substrata je kvantifičirana z merjenjem produkta H-Pro-Ile-izobutilamida s pomočjo spektrofotometrijske analize N-terminalnega prolina.

1.25 mM substrata raztopimo v 125 mM citratnega pufra (pH 5.5), ki vsebuje 0.125 mg/ml Tween 20. V 80 μΐ gornjega zapufranega substrata dodamo 10 /d raztopin različnih koncentracij testirane spojine (raztopljene v metanolu ali dimetilsulfoksidu in razredčene z vodo, ki vsebuje 0.1% Tween 20) in 10 μ\ proteaze. Digestijo izvedemo pri 37 °C za določen čas in jo končamo z dodatkom 1 ml obarvalnega reagenta (30 mg/ml izatina in 1.5 mg/ml 2-(4-klorobenzoil)-benzojske kisline v 10% acetonu v etanolu (vol./vol.)). To raztopino segrevamo na vodni kopeli in nato pigmentirani ostanek ponovno raztopimo v 1 ml 1% pirogalola v 33 % vode v acetonu (mas./vol./vol.). Optično gostoto raztopine merimo s spektrofotometrijo pri 599 nm. Obdelavo H-Pro-Ile izobutilamida v prisotnosti testirane spojine primerjamo s kontrolami in z grafičnim prikazom rezultata za različne koncentracije uporabljene testirane spojine določimo koncentracijo spojine, ki je potrebna za 50 % inhibicijo (bo)·

Rezultati dobljeni z zgornjim testom, ob uporabi reprezentativnih spojin s formulo I kot testirane spojine, so prikazani v naslednji tabeli.

Tabela

Spojina	Ι50(μΜ)
A	0.87
B	0.15
C	0.3
D	0.13
E	0.75
F	0.75
G	0.08
H	0.01
I	0.085

Spojina A: terc.-butil ester N-[N-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]-Lfenilalanil]metil]-L-prolina.

Spojina B: terc.-butil ester N[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina.

Spojina C: terc.-butil ester N-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]2(S)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina.

Spojina D: N2-[N-[3(S)-[[N-(benzioksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R in S)hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolil]-Nl-izobutil-L-izolevcinamid (izomer 1; Primer 13).

Spojina E: N2-[N-[3(S)-[[N[N-(benzioksikarbonil)-L-levcil]-L-asparagmil]-ammo]2(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolil]-Nl-izobutil-L-izo-levcinamid (izomer 1; Primer 14).

Spojina F: N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R in S)hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-izopentil-L-prolinamid (izomer 2; Primer 17).

Spojina G: N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R ali S)hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-izobutil-L-prolinamid (izomer 2; Primer 21).

Spojina H: terc.-butil ester N-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]-L-prolina.

Spojina I: 2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidro-3(R,S)-izokinolinkarboksamid.

Spojine s formulo I in njihove farmacevtsko sprejemljive kislinske adicijske soli, lahko uporabimo kot zdravila (npr. v obliki farmacevtskih pripravkov). Te farmacevtske pripravke lahko apliciramo enteralno, npr. oralno (kot tablete, prevlečene tablete, dražeje, kapsule iz trde in mehke želatine, raztopine, emulzije ali suspenzije), nazalno (npr. v obliki nazalnih sprejev), ali rektalno (npr. v obliki supozitorijev). Apliciranje lahko izvedemo tudi parenteralno, npr. intramuskularno ali intravenozno (npr. v obliki raztopin za injekcije).

Za pripravo tablet, prevlečenih tablet, dražejev in kapsul iz trde želatine, lahko spojine s formulo I in njihove farmacevtsko sprejemljive kislinske adicijske soli obdelamo skupaj s farmacevtsko inertnimi organskimi ali anorganskimi vezivnimi sredstvi. Kot vezivna sredstva za tablete, dražeje in kapsule iz trde želatine lahko uporabimo npr. laktozo, koruzni škrob ali njegove derivate, smukec, stearinsko kislino ali njene soli itd.

Primerna vezivna sredstva za kapsule iz mehke želatine so npr. rastlinska olja, voski, masti, poltrdi in tekolči polioli itd.

Primerna vezivna sredstva za pripravljanje raztopin in sirupov so npr. voda, polioli, saharoza, invertni sladkor, glukoza itd.

Primerna vezivna sredstva za raztopine za injekcije so npr. voda, alkoholi, polioli, glicerol, rastlinska olja itd.

Primerna vezivna sredstva za supozitorije so npr. naravna ali hidrogenirana olja, voski, masti, poltrdi ali tekoči polioli itd.

Razen tega lahko ti farmacevtski preparati vsebujejo konzervirna sredstva, topila, snovi za povečanje viskoznosti, stabilizatorje, vlažila, emulgatorje, sladila, sredstva za obarvanje, sredstva za izboljšanje okusa, soli za variiranje osmotskega tlaka, pufre, prevlečna sredstva ali antioksidante. Lahko vsebujejo tudi druge terapevtsko pomembne snovi.

V skladu s tem izumom lahko spojine s formulo I in njihove farmacevtsko sprejemljive kislinske adicijske soli uporabimo za zdravljenje ali profilakso virusnih infekcij, posebno infekcij izzvanih z retrovirusi. Dozirna količina lahko variira v širokih mejah in razumljivo je, da mora biti prilagojena individualnim zahtevam za vsak posamezen primer. Načelno naj bi bila pri oralnem apliciranju zadostna dnevna dozirna količina od okoli 3 mg do okoli 3 g, prednostno od okoli 10 mg do okoli 1 g (npr. približno 300 mg na osebo), razdeljena prednostno na 1-3 dozirne enote. Zgoraj navedeno mejo doziranja lahko presežemo, kadar se ugotovi, da je to prikladno.

Naslednji Primeri prikazujejo predloženi izum. Sistemi topil navedeni v Primerih so naslednji:

Sistem A: 5 % metanol v kloroformu

Sistem B: 10 % metanol v kloroformu

Sistem C: kloroform:metanol:ocetna kislina:voda (120:15:3:2)

Sistem D: kloroform:metanol:ocetna kislina:voda (90:15:3:2)

Sistem E: kloroform:metanol:ocetna kislina:voda (60:18:2:3)

Sistem F: kloroform:metanol:ocetna kislina:voda (240:24:3:2)

Sistem G: diklorometan:metanol:ocetna kislina:voda (120:15:3:2)

Sistem H: dietileter:n-heksan:metanol (47.5:47.5:5)

Sistemi: diklorometan:metanol:ocetnakislina:voda (60:18:2:3)

Sistem J: diklorometan:metanol:ocetna kislina:voda (120:15:2:3)

Primer 1

0.5 g (1.07 mmol) terc.-butil estra N-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil]-Lprolina smo raztopili v 50 ml izopropanola in 5 ml etilacetata in hidrogenirali 5 ur v prisotnosti 0.406 g (2.14 mmolov) toluen-4-sulfonske kisline in 50 mg 5 % paladija na oglju. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili. Ostanek smo zbrali s 5 ml diklorometana in 5 ml dimetilformamida in ohladili v kopeli z mešanico led/sol. Dodali smo 0.285 g (1.07 mmolov) N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina v 25 ml dimetilformamida in nato dodali 0.145 g (1.07 mmolov) hidroksibenzotriazola, 0.221 g (1.07 mmolov) dicikloheksilkarbodiimida in 0.246 g (2.14 mmolov) N-etilmorfolina. Zmes smo mešali čez noč, izločeno dicikloheksilsečnino smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili do suhega v vakuumu. Dobljeno temno-rjavo gumo smo razslojili med etil acetat in vodo. Organsko fazo smo zaporedoma izprali s 5 % raztopino hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida in jo osušili nad natrijevim sulfatom. Topilo smo odstranili z uparjenjem, trden material smo kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili 5 % izopropanol v etil acetatu. Dobili smo 0.125 g terc.-butil estra N-[N-[[N-(benziloksikarbonil)-Lasparaginil]-L-fenilalanil]metil]-L-prolina v obliki bledo-rumenega trdnega materiala.

Analiza za €3ΐΗ4θΝ4θγ (580.69).

Izračunano: C, 64.12; H, 6.94; N, 9.65 %

Ugotovljeno: C, 63.18; H, 6.79; N, 9.8 %: pepel 1.2 %

Brez pepela: C, 63.91; H, 6.87; N, 9.92 %.

Terc.-butil ester N-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil]-L-prolina, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili tako, da smo mešali 0.77 g [N(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metilbromida z 0.35 g terc.-butil estra L-prolina in 0.203 g trietilamina v 15 ml diklorometana pri sobni temperaturi čez noč. Topilo smo odstranili z uparjenjem, surovi produkt kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo uporabili za eluiranje kloroform in tako dobili 0.65 g terc.-butil estra N-[[N(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil]-L-prolina v trdni obliki, s tal. 98-99 °C.

Primer 2

1.5 g (3’22 mmolov) terc.-butil estra N-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenil-alanil]metil]L-prolina smo hidrogenirali v 10 ml etilacetata in 5 ml izopropanola v prisotnosti 0.15 g 5 % paladija na oglju in 1.223 g (6.44 mmolov) toluen-4-sulfonske kisline. Produkt smo pripajali z 1.24 g (3.27 mmolov) N-[N-(benziloksikarbonil)-L-levcil]-Lasparagina v prisotnosti 0.442 g (3.27 mmolov) hidroksibenzotriazola, 0.675 g (3.27 mmolov) dicikloheksilkarbodiimida in 0.753 g (6.55 mmolov) N-etilmorfolina na analogen način, kot je opisano v Primeru 1. Pri nadaljni obdelavi smo dobili 0.34 g trdnega materiala, ki smo ga kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili 5 % izopropanola v diklormetanu. Dobili smo 310 mg terc.-butil estra N-[[N-[N-[N-(benziloksikarbonil)-L-levcil]-L-asparaginil]-L-fenilalanil]metiljL-prolina; MS: m/e 694 [M+H] + .

N-[N-(benziloksikarbonil)-L-levcil]-L-asparagin, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

4.5 g (12.4 mmolov) sukcinimidnega estra N-(benziloksikarbonil)-L-levcina smo raztopili v 40 ml dimetilformamida in raztopino nato ohladili v kopeli led/sol. Dodali smo raztopino 1.64 g (12.4 mmole) L-asparagina v 3.1 ml (12.4 mmolov) 4M raztopine natrijevega hidroksida, nato smo dodali 2 g (24.8 mmolov) natrijevega hidrogen karbonata. Zmes smo mešali 18 ur pri sobni tempearaturi. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek zbrali s 100 ml vode. pH smo naravnali na 9.5 s pomočjo 2M raztopine natrijevega hidroksida in nato zmes ekstrahirali dvakrat s po 25 ml dietiletra. To vodno raztopino smo nastavili pH 2.5 s pomočjo 3M klorovodikove kisline. Trden kristalni produkt, ki seje izločil iz raztopine, smo izločili s filtriranjem, izprali z dietiletrom in osušili. Dobili smo 3.5 g N-[N-(benziloksikarbonil)-L-levcil]-L-asparagina.

Analiza za (379.42).

Izračunano: C, 56.98; H, 6.64; N, 11.07 %

Ugotovljeno: C, 56.76; H, 6.62; N, 11.05 %.

Primer 3

0.71 g (1.52 mmolov) terc.-butil estra N-[[Nbenziloksikarbonil)-L-fenil-alanil]metiljL-prolina smo hidrogenirali v prisotnosti 0.58 g (3.05 mmolov) toluen-4-sulfonske kisline nad 5 % paladija na oglju. Produkt smo pripajali z 0.35 g (1.52 mmolov) N-(4metilvaleril)-L-asparagina na analogen način, kot je opisano v Primeru 1. Surovi produkt smo prečistili s kromatografijo na silikagelu, tako, da smo za eluiranje uporabili izopropanol v etil acetatu (gradient 5 % - 8 %). Dobili smo 0.23 g terc.-butil estra N-[[-N-[N-(4-metilvaleril)-L-asparaginil]-L-fenilalanil]-metil]-L-prolina v trdni obliki; MS: m/e 545 [M+H]+.

N-(4-metilvaleril)-L-asparagin, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

5.35 g (25 mmolov) sukcinimidnega estra 4-metilvalerianske kisline smo raztopili v 40 ml dimetilformamida, raztopino dodali raztopini 3.3 g (25 mmolov) L-asparagina v 6.25 ml (25 mmolov) 4M raztopine natrijevega hidroksida in 5 ml dimetilformamida, ki smo jo predhodno ohladili na ledu. Dodali smo 5.5 g (65 mmolov) natrijevega hidrogen karbonata in zmes mešali 18 ur pri sobni temperaturi. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek zbrali s 100 ml vode. Naravnali smo pH na 3 s 4M klorovodikovo kislino. Nato smo topilo odstranili z uparjenjem in ostanek zbrali v metanolu. Netopni material smo odstranili s filtriranjem in topilo odstranili z uparjenjem. Surovi produkt smo kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili sistem D. Dobili smo 900 mg N-(4-metilvaleril)-L-asparagina v trdni obliki; Rf (sistem D): 0.25.

Primer 4

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 1, vendar z uporabo N-(terc.butoksikarbonil)-L-asparagina namesto N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, smo dobili terc.-butil ester N-[N-[[N-(terc.-butoksi)-L-asparaginil]-L-fenil-alanil]-metil]-Lprolina v trdni obliki; MS: m/e 546 [M] ⁺ .

Primer 5

1.3 g (2.79 mmolov) terc.-butil estra N-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenil-alanil]metil]L-prolina smo hidrogenirali v zmesi 10 ml etil acetata in 10 ml izopropil alkohola v prisotnosti 0.39 g 5 % paladija na oglju in 1.06 g (5.58 mmolov) toluen-4-sulfonske kisline in dobljeni produkt pripajali z 0.62 g (2.78 mmoli) N-(benziloksikarbonil)-Lalanina v prisotnosti 0.572 g (2.78 mmolov) dicikloheksilkarbodiimida, 0.375 g (2.78 mmolov) hidroksibenzotriazola in 0.64 g (5.57 mmolov) N-etilmorfolina na analogen način, kot smo opisali v Primeru 1. Po nadaljnji obdelavi in kromatografiji na silikagelu, ob uporabi 3 % izopropanola v diklorometanu za eluiranje, smo dobili 0.55 g terc.-butil estra N-[N-[[N-(benziloksikarbonil)-L-alanil]-L-fenilalanil]metil]-Lprolina v trdni obliki; MS: m/e 538 [M+H]⁺.

Primer 6

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 1, smo iz terc.-butil estra N-[[N(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil]-L-prolina in N-(benziloksikarbonil)-Lglutamina dobili terc.-butil ester N-[N-[[N-(benziloksikarbonil)-L-glutaminil]-Lfenilalanil]metil]-L-prolina; MS: m/e 595 [M+H]+.

Primer 7

0.45 g (0.77 mmolov) terc.-butil estra N-[N-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]L-fenilalanil]-metil]-L-prolina, ki smo ga pridobili, kot smo opisali v Primeru 1, smo raztopili v 10 ml izopropanola, to raztopino mešali 45 minut pri sobni temperaturi v prisotnosti 0.075 g (1.98 mmolov) natrijevega borhidrida. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek zbrali s 50 ml etil acetata in izprali najprej z vodo in nato z nasičeno raztopino natrijevega klorida. Po sušenju nad natrijevim sulfatom in uparjenju smo dobili 0.43 g trdnega materiala, ki smo ga kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili 2 % metanol v diklorometanu. Dobili smo 80 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]2(S)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina v trdni obliki; Rf (sistem Β): 0.38;

MS: m/e 583 [M+H]+.

Z nadaljnjim eluiranjem kolone s 5 % metanolom v diklorometanu smo dobili 70 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]2-(R)hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina v trdni obliki: Rf (sistem Β): 0.23;

MS: m/e 583 [M+HJ+

Primer 8

0.3 g (0.45 mmolov) terc.-butil estra N-[[N-[N-[N-(benziloksikarbonil)-L-levcil-]-Lasparaginil]-L-fenilalanil]-metil]-L-prolina, pridobljenega kot smo opisali v Primeru 2, v 10 ml izopropanola, smo obdelali pri sobni temperaturi s 40 mg (1.06 mmoli) natrijevega borhldrida. Po 1 uri smo zmes obdelali, kot smo opisali v Primeru 7. Dobili smo 0.32 g trdnega materiala, ki smo ga kromatografirali na silikagelu, ob uporabi 3 % metanola v diklorometanu za elucijo. Dobili smo 90 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[[N-[N-(benziloksikarbonil)-L-levcil]-L-asparaginil]-amino]-2(R ali S)hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina (izomer 1) v trdni obliki; Rf (sistem Α): 0.26;

MS: m/e 696 [M+H] + .

Z nadaljnjim eluiranjem kolone s 5 % metanolom v diklorometanu smo dobili 70 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[[N-[N-(benziloksikarbonil)-L-levcil]-L-asparaginil]amino]-2(R ali S)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina (izomer 2) v trdni obliki;

Rf (sistem Α): 0.19; MS: m/e 696 [M+H]+.

Primer 9

0.18 g (0.33 mmolov) terc.-butil estra N-[[N-[N-(4-metilvaleril)-L-asparaginil]-Lfenilalanil]-metil]-L-prolina, pridobljenega kot smo opisali v Primeru 3, smo reducirali s 30 mg (0.80 mmoli) natrijevega borhldrida v 10 ml izopropanola, kot smo opisali v Primeru 7. Dobljena dva izomera terc.-butil estra 2(R ali S)-hidroksi-3(S)[[N-(4-metilvaleril)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]-L-prolina smo ločili s kromatografijo na silikagelu ob uporabi metanola v kloroformu (gradient 5 % do 8 %) za eluiranje. Dobili smo 35 mg izomera 1 v trdni obliki; Rf (sistem Β): 0.2; MS: m/e 547 [M+H]+, in 27 mg izomera 2 v trdni obliki; Rf (sistem Β): 0.15; MS: m/e 547 [M+H]+25

Primer 10

0.6 g (1.1 mmol) terc.-butil estra N-[N-[[N-(terc.-butoksikarbonil)L-asparaginil]-Lfenilalanil]-metil]-L-prolina, pridobljenega kot smo opisali v Primeru 4, smo reducirali z 0.1 g (2.65 mmoli) natrijevega borhidrida v 10 ml izopropanola, kot smo opisali v Primeru 7. Dobljena dva izomera smo ločili s kromatografijo na silikagelu, s sistemom za eluiranje. Dobili smo 115 mg izomera 1 terc.-butil estra N-[3(S)-[[N(terc.-butoksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R ali S)-hidroksi-4-fenil-butil]-Lprolina v trdni obliki; Rf (sistem D): 0.23; MS: m/e 549 [M+H]+’ in 100 mg izomera 2 v trdni obliki; Rf (sistem D): 0.15; MS: m/e 549 [M+H]+.

Primer 11

0.45 g (0.84 mmolov) terc.-butil estra N-[[N-[N-(benziloksikarbonil)-L-alanil]-Lfenilalanil]-metil]-L-prolina, pridobljenega kot smo opisali v Primeru 5, smo reducirali v 15 ml izopropanola v prisotnosti 80 mg natrijevega borhidrida, kot smo opisali v Primeru 7. Po obdelavi smo dobljena dva izomera ločili s kromatografijo na silikagelu, z uporabo sistema A za eluiranje. Dobili smo 70 mg terc.-butil estra N[3(S)-[[N-(benziolksikarbonil)-L-alanil]amino]-2(R ali S)-hidroksi-4-fenilbutil]-Lprolina (izomera 1) v obliki gume; Rf (sistem Α): 0.38; MS: m/e 540 [M+H]⁺ in 50 mg izomera 2 v obliki gume; Rf (sistem Α): 0.21; MS: m/e 540 [M+H]⁺.

Primer 12

0.55 g (0.93 mmolov) terc.-butil estra N-[[N-[N-(benziloksikarbonil)-L-glutaminil]-Lfenilalanil]metil]-L-prolina, pridobljenega kot smo opisali v Primeru 6, smo reducirali v 15 ml izopropanola v prisotnosti 90 mg natrijevega borhidrida, kot smo opisali v Primeru 7. Po obdelavi smo produkt kromatografirali na silikagelu, z uporabo 2 % metanola v kloroformu za eluiranje. Dobili smo 60 mg izomera 1 terc.-butil estra N[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-glutaminil]amino]-2(R ali S)-hidroksi-4-fenilbutil]L-prolina (izomer 1) v trdni obliki; Rf (sistem Β): 0.37; MS: m/e 597 [M+H]+ in 65 mg izomera 2 v trdni obliki; Rf (sistem Β): 0.25; MS: m/e 597 [M+H]⁺.

Primer 13 g (5.2 mmola) N²-[N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]L-prolil]-Nl-izobutil-L-izolevcinamida smo dali v 25 ml etil acetata in 10 ml izopropanola in hidrogenirali nad 0.3 g 5 % paladija na oglju v teku 5 ur v prisotnosti

1.97 g (10.36 mmolov) toluen-4-sulfonske kisline. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili. Dobljeni trdni material smo osušili nad fosforovim pentoksidom v visokem vakuumu in pripajali z 1.48 g (5.57 mmoli) N-benziloksikarbonil)-L-asparagina na način analogen tistemu, ki smo ga opisali v Primeru 1. Dobili smo 3.3 g surovega N²-[N-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolil]-Nl-izobutil-L-izolevcinamida v trdni obliki. Ta dva izomera smo razdelili s kromatografijo na silikagelu, pri čemer smo uporabili sistem F za eluiranje. Dobili smo 90 mg izomera 1 v obliki trdnega materiala; Rf (sistem F): 0.23; MS: m/e 695 [M+H]+ in 0.55 g izomera 2 v trdni obliki; Rf (sistem F): 0.11; MS: m/e 695 [M+H]⁺.

N²-[N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolil]-Nlizobutil-L-izolevcinamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

(i) raztopino 20.0 g N-(benziloksikarbonil)-L-izolevcina in 9.6 ml N-etilmorfolina v 400 ml tetrahidrofurana smo ohladili do - 20 °C in po kapljicah dodali 9.8 ml izobutilkloroformiata. To zmes smo mešali 5 minut in po kapljicah dodali 5.52 g izobutilamina. Zmes smo mešali 20 minut pri -15 °C in jo segreli do sobne temperature. Dodali smo 20 ml vode in raztopino uparili do suhega. Ostanek smo razslojili med 200 ml vode in 800 ml etil acetata, organsko raztopino smo izprali z 200 ml 5 % raztopine citronske kisline, 200 ml nasičene raztopine natrijevega hidrogen karbonata in 200 ml vode, osušili nad natrijevim sulfatom in uparili do suhega. Ostanek smo triturirali s pomočjo dietiletra, pri čemer smo dobili 18.2 g N²(benziloksikarbonil)-Nl-izobutil-L-izolevcinamida, ki smo ga uporabili v naslednji fazi brez nadaljnjega prečiščevanja.

(ii) Raztopino 18.0 g gornjega produkta v 200 ml etanola smo hidrogenirali nad 1.0 g 10 % paladija na oglju v teku 5 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 9.8 g N^-izobutil-L-izolevcinamida v obliki brezbarvnega olja, ki smo ga direktno uporabili v naslednji fazi.

(iii) Raztopino 17.3 g sukcinimidnega estra N-(benziloksikarbonil)-L-prolina in 9.35 g Nl-izobutil-L-izolevcinamida v 120 ml tetrahidrofurana smo mešali preko noči pri sobni temperaturi. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek razslojili med 200 ml etil acetata in 250 ml 5 % raztopine citronske kisline. Organsko topilo smo osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili do suhega. Ostanek smo prekristalizirali iz zmesi etil acetat in n-heksan, pri čemer smo dobili 13.6 g N²-[N27 (benziloksikarbonil)-L-prolil]-Nl-izobutil-L-izolevcinamida v obliki belega trdnega materiala s tal. 87-88 °C.

(iv) Raztopino 13.6 g gornjega produkta v 500 ml etanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju v teku 2 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 9.10 g N^-L-prolil-Nl-izobutil-L-izolevcinamida v obliki brezbarvnega olja, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega prečiščevanja.

(v) Raztopino 8.86 g [N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]-metil bromida, 6.71 g N^L-prolil-NMzobutil-L-izolevcinamida in 2.60 g trietilamina v 400 ml diklorometana smo mešali pri sobni temperaturi čez noč. Topilo smo odstranili z uparjenjem in surovi produkt kromatografirali na silikagelu, tako, da smo uporabili etil acetat za eluiranje. Dobljeni produkt smo triturirali s pomočjo zmesi petroletra (vrelišče 40-60 °C) in etil acetata, pri čemer smo dobili 8.70 g N^-[N-[[N-(benziloksikarbonil)-Lfenilalanil]metil]-L-prolil]-Nl-izobutil-L-izolevcinamida v obliki umazano-belega trdnega materiala s tal. 80-81 °C.

(vi) Raztopino 3.5 g N2-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil]-L-prolil]-Nlizobutil-L-izolevcinamida v 200 ml etanola smo obdelali z 1.0 g natrijevega borhidrida na način analogen opisanemu v Primeru 7, pri čemer smo dobili 7.1 g N^[N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolil]-N⁴-izobutilL-izolevcinamida.

Analiza za : C33H48N4O5 x 0.5 H2O.

Izračunano: C, 67.21; H, 8.37; N, 9.50 %

Ugotovljeno: C, 67.29; H, 8.31; N, 9.47 %.

Primer 14

0.78 g (1.34 mmolov) N^-[N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolil]-Nl-izobutil-L-izolevcinamida smo hidrogenirali in dobljeni produkt pripajali z 0.53 g (1.39 mmola) N-[N-(benziloksikarbonil)-L-levcil]-L-asparagina na način, analogen opisanemu v Primeru 1. Dobili smo 1.1 g surovega N2-[N-[3(S)-[[N[N-(benziloksikarbonil)-L-levcil]-L-asparaginil]amino]-2(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolil]-Nl-izobutil-L-izolevcinamida v trdni obliki. Oba izomera smo ločili s kromatografijo na silikagelu, tako, da smo uporabili sistem F za eluiranje. Dobili smo 60 mg izomera 1 v trdni obliki; Rf (sistem C): 0.34; MS: m/e 808 [M]+ in 50 mg izomera 2 v trdni obliki; Rf (sistem C): 0.24; MS: m/e 808 [M]⁺.

Primer 15

0.275 g (0.473 mmolov) terc.-butil estra N-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina smo zbrali z 10 ml izopropanola in hidrogenirali 18 ur nad 50 mg 5 % paladija na oglju v prisotnosti 0.18 g (0.94 mmolov) toluen-4-sulfonske kisline. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili. Dobljeni trdni material smo raztopili v 10 ml diklorometana in to raztopino ohladili v ledeni kopeli. Dodali smo 50 mg (0.49 mmolov) anhidrida ocetne kisline in nato 0.10 g (0.99 mmolov) trietilamina in 0.2 ml piridina. Zmes smo mešali 1 uro pri sobni temperaturi. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek razslojili med etil acetat in vodo. Organsko fazo smo izprali s 5 % raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida in nato osušili nad brezvodnimim natrijevim sulfatom. Topilo smo odstranili z uparjenjem, pri čemer smo dobili 35 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[(N-acetil-L-asparaginil)amino]-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina; Rf (sistem Ε): 0.28; MS: m/e 491 [M+H] ⁺ .

Primer 16 g (2.14 mmolov) terc.-butil estra N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2-(R in S)hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina smo zbrali s 25 ml metanola in hidrogenirali nad 250 mg 5 % paladija na oglju v teku 3 ur v prisotnosti 0.81 g (4.26 mmolov) toluen-4sulfonske kisline. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili. Dobljeni trdni material smo osušili nad fosforovim pentoksidom pod visokim vakuumom in ga nato raztopili v 5 ml tetrahidrofurana.

0.566 g (2.134 mmolov) N-(benziloksikarbonil)-L-levcina smo zbrali v 15 ml tetrahidrofurana in ohladili do -15 °C. Dodali smo 0.245 g (2.134 mmolov) Netilmorfolina in 0.291 g (2.134 mmolov) izobutilkloroformiata. Po 5 minutah smo dodali raztopino tetrahidrofurana, ki smo jo pripravili tako, kot smo opisali v prejšnjem odstavku, in nato dodali 0.451 g (4.27 mmolov) N-etilmorfolina. Zmes smo mešali 10 ur pri sobni temperaturi, topilo odstranili z uparjenjem in ostanek razslojili med etil acetat in vodo. Etil acetatno raztopino smo izprali z nasičeno raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida in nato osušili nad brezvodnimim natrijevim sulfatom. Topilo smo odstranili v vakuumu, pri čemer smo dobili 1.5 g surovega terc.-butil estra N-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-Llevcil]aminoj-2-(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina v obliki olja. Oba izomera smo razdelili s kromatografijo na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili % n-heksan v etil acetatu. Dobili smo 180 mg izomera 1 terc.-butil estra N-[3(S)[[N-(benziloksikarbonil)-L-levcil]amino]-2-(R ali S)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina v obliki kristalnega materiala; Rf (sistem Α): 0.34; MS: m/e 582 [M+H]+ in 70 mg izomera 2 v obliki kristalnega materiala; Rf (sistem Α): 0.28; MS: m/e 582 [M+H]+.

Terc.-butil ester N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-Lprolina, ki ga uporabimo kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

2g (4.3 mmole) terc.-butil estra N-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil]-Lprolina (pridobljenega kot je opisano v Primeru 1) smo raztopili v 25 ml izopropanola, 25 ml etanola in 25 ml metanola, nato smo to raztopino mešali 4 ure pri sobni temperaturi v prisotnosti 0.4 g (10.7 mmolov) natrijevega borhidrida. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek razslojili med 50 ml etil acetata in 25 ml vode. Organsko fazo smo izprali z nasičeno raztopino natrijevega klorida in osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom. Topilo smo odstranili z uparjenjem in dobili 2 g terc.-butil estra N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-Lprolina v obliki prozorne gume; Rf (sistem C): 0.68 in 0.57.

Primer 17

1.5 g (3.12 mmolov) N2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2-(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-izopentil-L-prolinamida smo hidrogenirali v 25 ml metanola v prisotnosti 1.19 g (6.24 mmolov) toluen-4-sulfonske kisline in 0.25 g 5 % paladija na oglju. Po 3 urah smo katalizator odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 2.1 g trdnega materiala. Ta material smo osušili nad fosforovim pentoksidom v visokem vakuumu in pripajali z 0.8 g (3.12 mmolov) n-(benziloksikarbonil)-Lasparagina na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 1. Dobili smo 1.45 g N^[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino-2-(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]Nl-izopentil-L-prolinamida v obliki surovega produkta, ki smo ga kromatografirali na silikagelu, ob uporabi sistema C za eluiranje. Dobili smo 60 mg izomera 1 v trdni obliki; Rf (sistem Ε): 0.58; MS: 596 [M+H]⁺ in 0.25 g izomera 2 v trdni obliki;

Rf (sistem Ε): 0.41; MS: m/e 596 [M+HJ+.

N2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2-(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-N 1-izopentil-Lprolinamid, ki smo ga tukaj uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

(i) Raztopino 15.0 g sukcinimidnega estra N(benziloksikarbonil)-L-prolina in 4.15 g izopentilamina v 100 ml tetrahidrofurana smo mešali pri sobni temperaturi čez noč. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek zbrali z 250 ml etil acetata. To raztopino smo izprali z 250 ml 5 % raztopine citronske kisline, dvakrat s po 250 ml nasičene raztopine natrijevega hidrogen karbonata in s 150 ml nasičene raztopine natrijevega klorida, osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili do suhega. Ostanek smo prekristalizirali iz zmesi etil acetata in n-heksana, pri čemer smo dobili 11.1 g N2-(benziloksikarbonil)-Nl-izopentil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala s tališčem 110-112 °C.

(ii) Raztopino 5.73 g N^-(benziloksikarbonil)-Nl-izopentil-L-prolinamida v 600 ml etanola smo hidrogenirali nad 0.8 g 10 % paladija na oglju v teku 3.75 ure. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili pri čemer smo dobili 3.4 g Nl-izopentil-L-prolinamida v obliki olja, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega čiščenja.

(iii) Raztopino 3.4 g Nl-izopentil-L-prolinamida, 6.76 g [N-(benziloksikarbonil)-Lfenilalanil]metil bromida in 2.0 g trietilamina v 360 ml diklorometana smo mešali pri sobni temperaturi preko noči. Dobljeni surovi produkt smo izolirali na analogen način, kot smo opisali v Primeru 1 in prekristalizirali iz zmesi etil acetata in nheksana, pri čemer smo dobili 3.3 g N2-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil]Nl-izopentil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala s tal. 82-84°C.

(iv) Raztopino 0.96 g N2-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil-Nl-izopentil-Lprolinamida v 40 ml etanola smo obdelali z 0.17 g natrijevega borhidrida na analogen način, kot smo opisali v Primeru 2. Dobljeni surovi produkt smo prekristalizirali iz zmesi dietiletra in n-heksana, pri čemer smo dobili 0.65 g N2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2-(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-izopentil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala s tal. 73-82 °C.

Primer 18

0.58 g (1.24 mmolov) N2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2-(R ali S)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida smo raztopili v 25 ml metanola in hidrogenirali 5 ur pri sobni temperaturi v prisotnosti 0.472 g (2.48 mmolov) toluen-4-sulfonske kisline in 0.1 g 5% paladija na oglju. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili. Dobili smo 0.82 g trdnega materiala, ki smo ga osušili nad fosforovim pentoksidom v visokem vakuumu in pripajali z 0.322 g (1.21 mmoli) N-(benzil31 oksikarbonil)-L-asparagina v dimetilformamidu na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 1. Po obdelavi na analogen način kot je opisano v Primeru 10, smo dobili 0.6 g surovega produkta, ki smo ga kromatografirali na silikagelu, ob uporabi sistema C za eluiranje. Dobili smo 225 mg N²-[3(S)-(benziloksikarbonil)-Lasparaginil]-amino]-2-(R ali S)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v trdni obliki; MS: m/e 582 [M+H]⁺.

N²-[3(S)-(benziloksiformamido)-2-(R ali S)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-Lprolinamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

(i) 5.2 g (15 mmolov) sukcinimidnega estra N-(benziloksikarbonil)-L-prolina in 1.63 g (22.3 mmole) terc.-butil amina smo zbrali s 50 ml diklorometana in zmes mešali 1 uro pri -8 °C in nato 18 ur pri sobni temperaturi. Nato smo to raztopino izprali s 5 % raztopino citronske kisline, nasičeno raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida in sušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom. Po uparjenju je izkristaliziral trdni material iz etil acetata/n-heksana, pri čemer smo dobili 3 g N²-(benziloksikarbonil)-Nl-terc.-butil-L-prolinamida;

MS: m/e 305 [M+H]+.

(ii) 2.5 g (8.22 mmolov) N²-(benziloksikarbonil)-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v 25 ml metanola smo hidrogenirali v teku 5 ur nad 0.5 g 5 % paladija na oglju. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in topilo odstranili z uparjenjem, pri čemer smo dobili 1.4 g olja, ki je čez nekaj ur kristaliziralo, medtem ko je bilo shranjeno v hladilniku. 0.35 g (2.05 mmola) tega trdnega materiala smo dodali k raztopini 0.77 g (2.05 mmolov) [N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metilbromida v 15 ml diklorometana in nato dodali še 0.207 g (2.05 mmola) trietilamina. Zmes smo mešali pri sobni temperaturi 2 uri. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek zbrali s 25 ml etil acetata. Dobljeni trdni material smo oddvojili s filtriranjem in zavrgli. Matično lužnico smo izprali z vodo, nasičeno raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida in nato osušili nad brezvodnimim natrijevim sulfatom. Po uparjenju in kristalizaciji iz etra/n-heksana smo dobili 0.65 g N²-[[N(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v trdni obliki; MS: m/e 466 [M+H]+.

(iii) 1.25 g (2.7 mmola) N²-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil]-Nl-terc.butil-L-prolinamida smo zbrali s 25 ml izopropanola in mešali 4 ure pri sobni temperaturi v prisotnosti 0.255 g (6.7 mmolov) natrijevega borhidrida. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek razslojili med etil acetat in vodo. Organski sloj smo izprali z nasičeno raztopino natrijevega klorida, osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili. Dobili smo 1.2 g N2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R in S)hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, ki smo ga kromatografirali na sillkagelu, z uporabo sistema F za eluiranje. Dobili smo 15 mg izomera 1 v obliki gume; Rf (sistem F): 0.38; MS: m/e 468 [M+H]⁺ in 0.225 g izomera 2 v obliki gume; Rf (sistem F); 0.27; MS: m/e 468 [M+H]+.

Primer 19

Raztopino 474 mg terc.-butil estra N-[3(S)-(benziloksiformamido)-4-cikloheksil-2(R ali S)-hidroksibutil]-L-prolina v 100 ml etanola smo hidrogenirali nad 50 mg katalizatorja 10 % paladija na oglju v teku 3 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 380 mg olja. To olje smo pripajali z 285 mg N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina na analogen način, kot smo opisali v Primeru 1. Dobljeni surovi produkt smo kromatografirali na sillkagelu, ob uporabi 7 % metanola v diklorometanu za eluiranje, pri čemer smo dobili 30 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil-]aminoj-4-cikloheksil-2(R ali S)hidroksibutil]-L-prolina v trdni obliki, s tal. 135-136 °C (izomer 1).

Na podoben način smo 474 mg drugega izomera terc.-butil estra N-[3(S)(benziloksiformamido)-4-cikloheksil-2(R ali S)-hidroksibutil]-L-prolina hidrogenirali in uparili z 285 mg N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, pri čemer smo dobili 90 mg izomera 2; MS: m/e 589 [Μ+Η]⁺.

Terc.-butil ester N-[3(S)-(benziloksiformamido)-4-cikloheksil-2(R in S)-hidroksibutil]-L-prolina, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

(i) Raztopino 19.6 g N-(benziloksikarbonil)-3-cikloheksil-L-alanina v 60 ml tetrahidrofurana smo ohladili na -10 °C in dodali 8.9 ml N-etilmorfolina. Po kapljicah smo dodali 11.6 ml izobutilkloroformiata in mešali še 15 minut pri - 10 °C. Dodali smo 250 ml dietiletra in zmes filtrirali. Filtrat smo dali v hladno raztopino diazometana v dietiletru (pridobljenega iz 21.5 g N-metil-N-nitrozo-4-toluensulfonamida) in to zmes mešali 1.5 ure pri sobni temperaturi. Nato smo dobljeno raztopino izprali z vodo in z 200 ml nasičene raztopine natrijevega hidrogen karbonata, osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili, pri čemer smo dobili 6.6 g benzil [233 cikloheksil-l(S)-(2-diazoacetil)etil]karbamata v obliki rumenega olja, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega prečiščevanja.

(ii) Raztopino 6.6 g zgornjega produkta v 60 ml dietiletra smo mešali pri sobni temperaturi in ves čas mešanja vpihavali skozi raztopino klorovodik v teku 30 minut. Topilo smo odstranili in dobljeno olje kristalizirali iz zmesi dietiletra in n-heksana, pri čemer smo dobili 5.8 g [N-(benziloksikarbonil)-3-cikloheksil-L-alanil]metil klorida, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega prečiščevanja.

(iii) Raztopino 4.4 g zgornjega produkta v zmesi 90 ml tetrahidrofurana in 10 ml vode smo ohladili na 0 °C in dodali 0.75 g natrijevega borhidrida. To zmes smo mešali 1 uro pri 0 °C in uparili do suhega. Ostanek smo zbrali s 100 ml diklorometana in 100 ml vode, vodni sloj smo naravnali na pH 3 s pomočjo koncentrirane klorovodikove kisline in organski sloj oddvojili, osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili. Ostanek smo triturirali z 200 ml vročega n-heksana in oddvojili s filtriranjem, pri čemer smo dobili 2.65 g 3(S)-(benziloksiformamido)-lkloro-4-cikloheksil-2(R in S)-butanola v obliki belega trdnega materiala;

MS: 339. 341 [M]+.

(iv) 14 ml 0.71 M etanolne raztopine kalijevega hidroksida smo dodali raztopini

2.65 g zgornjega produkta v 60 ml etanola. To zmes smo mešali 1 uro pri sobni temperaturi in nato uparili do suhega. Ostanek smo razslojili med 100 ml diklorometana in 100 ml vode, organski sloj smo osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili. Ostanek smo kromatografirali na silikagelu ob uporabi 3% metanola v diklorometanu za eluiranje. Dobili smo 1.84 g 3(S)-(benziloksiformamido)-4-cikloheksil-l,2(R in S)-epoksibutana v obliki olja;

MS: m/e 303 [M]+.

(v) Raztopino 1.84 g zgornjega produkta in 1.21 g terc.-butilestra L-prolina v 65 ml metanola smo segrevali na refluksu v teku 24 ur. Zmes smo uparili do suhega in surovi produkt kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili % metanol v diklorometanu. Dobili smo 0.41 g terc.-butil estra N^-[3(S)(benziloksiformamido)-4-cikloheksil-2(R ali S)-hidroksibutil]-L-prolina (izomer 1) v obliki brezbarvnega olja; NMR (CDCI3, 250 MHz) δ 0.78-1.0 (2H, m) 1.1-1.4 (5H, m), 1.43 (9H, s) 1.55-1.7 (5H, m), 1.8-1.95 (4H, m), 2.03-2.15 (IH, m), 2.3-2.4 (IH, m), 2.5 (IH, dd), 2.66 (IH, t), 3.16-3.26 (2H, m), 3.55-3.7 (2H, m), 4.08 (IH, širok, s), 5.02-5.15 (3H, m) 7.25-7.4 (5H, m).

Z nadaljnjim eluiranjem s pomočjo istega topila smo dobili 1.18 g izomera 2 v obliki brezbarvnega olja; NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 0.75-0.85 (IH, m), 0.9-1.0 (IH, m), 1.1-1.4 (5H, m), 1.43 (9H, s), 1.58-1.70 (5H, m), 1.75-1.9 (5H, m) 2.05-2.18 (IH, m), 2.54-2.75 (3H, m), 3.05-3.15 (2H, m) 3.45-3.52 (IH, m), 3.7-3.8 (IH, m), 4.96-5.15 (3H, m), 7.3-7.38 (5H, m).

Primer 20

0.663 g (1.42 mmolov) N^-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R in S)-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-izobutil-L-prolinamida smo hidrogenirali v 30 ml metanola v prisotnosti 0.539 g (2.84 mmolov) toluen-4-sulfonske kisline in 0.1 g 5 % paladija na oglju. Nato smo ta produkt pripajali z 0.378 g (1.42 mmoli) N-(benziloksikarbonil)-Lasparagina in nadalje obdelali, kot smo opisali v Primeru 1. Dobljeni surovi produkt smo podvrgli Flash kromatografiji na silikagelu z uporabo sistema F, in tako dobili 80 mg N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R ali S)-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-izobutil-L-prolinamida (izomer 1) v trdni obliki; Rf (sistem Ε): 0.46; MS: m/e 582 [M+H]+.

Zgornjo kolono smo nato eluirali s sistemom C, pri čemer smo dobili 70 mg izomera 2 v trdni obliki; Rf (sistem Ε): 0.33; MS: m/e 582 [M+H]⁺.

N2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R in S)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-izobutil-Lprolinamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

(i) Nl-izobutil-L-prolinamid smo pridobili kot smo opisali v Primeru 17(i), z uporabo izobutilamina namesto izopentilamina.

(ii) Raztopino 1.5 g (3.98 mmolov) [N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil bromida, 0.678 g (3.98 mmolov) Nl-izobutil-L-prolinamida in 0.402 g (3.98 mmole) trietilamina v 30 ml diklorometana smo mešali 4 ure pri sobni temperaturi. Topilo smo odstranili z uparjenjem in dodali 50 ml etil acetata. Dobljeni trdni material smo odstranili s filtriranjem in zavrgli. Filtrat smo izprali z vodo, raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida in osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom. Topilo smo odstranili z uparjenjem in surovi produkt kromatografirali na silikagelu, ob uporabi kloroforma za eluiranje, pri čemer smo dobili 1.6 g N2-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]metil]-Nl-izobutil-Lprolin-amida v trdni obliki; MS: m/e 466 [M+H]⁺· (iii) Raztopino 0.7 g (1.5 mmolov) N2-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]-metil]Nl-izobutil-L-prolinamida v 20 ml etanola smo obdelali z 0.143 g (3.75 mmoli) natrijevega borhidrida pri sobni temperaturi v teku 2 ur. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek razslojili med etil acetat in vodo. Etil acetatno fazo smo izprali z nasičeno raztopino natrijevega klorida, osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili, pri čemer smo dobili 0.67 g N^-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R in S)hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-izobutil-L-prolinamida v trdni obliki; Rf (sistem A) 0.39 in 0.33; MS: m/e 467 [M] + ·

Primer 21

Raztopino 249 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[[L-asparaginil]-amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-L-prolina, 106 mg 2-naftoilklorida in 72 mg diizopropiletilamina v 10 ml suhega diklorometana smo mešali 20 ur pri 20 °C. Želatinasto reakcijsko zmes smo razslojili med diklorometan in vodo. Organsko fazo smo uparili in dobljeno olje kristalizirali iz etil acetata/n-heksana, pri čemer smo dobili 215 mg terc.-butil estra N[2(R)-hidroksi-3(S)[[N-(2-naftoil)-L-asparaginiljamino]-4-fenilbutil]-L-prolinav obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 603 [M+H]⁺. Terc.-butil ester N-[3(S)-[[Lasparaginilj-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

Raztopino 1,75 g terc.-butil estra N-[3(S)-[[(N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginiljamino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina v 100 ml etanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju v teku 64 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili. Ostanek v obliki gume smo razslojili med etil acetat in 2M klorovodikovo kislino. Vodno fazo smo naalkalili s pomočjo razredčene raztopine natrijevega hidroksida in ekstrahirali z etil acetatom. Etil acetatni ekstrakt smo uparili, pri čemer smo dobili 1.14 g terc.-butil estra N-[3(S)-[[L-asparaginil]amino]2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina v obliki bele trdne pene;

MS: m/e 449 [M+H]+.

Primer 22

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 21, smo iz 223 mg terc.-butil estra N[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 95 mg toluen-4sulfonilklorida in 65 mg di-izopropiletilamina dobili 170 mg terc.-butil estra N-[2(R)hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(p-toluensulfonil)-L-asparaginil]amino]butil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala (iz etil acetata/n-heksana); MS: m/e 603 [M+H]⁺.

Primer 23

Na analogen način kot smo opisali v Primeru 21, smo iz 223 mg terc.-butil estra N[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 77 mg fenilacetilklorida in 65 mg diizopropiletilamina dobili 190 mg terc.-butil estra N-[2(R)-hidroksi4-fenil-3(S)-[[N-(fenilacetil)-L-asparaginil]amino]butil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala (iz etil acetata/n-heksana); MS: m/e 567 [Μ+Η]+.

Primer 24

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 21, smo iz 249 mg terc.-butil estra N[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 94 mg hidrocinamoil-klorida in 72 mg diizopropiletilamina dobili 214 mg terc.-butil estra N-3(S)[(N-hidrocinamoil-L-asparaginil)amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala (iz etil acetata/n-heksana); MS: m/e 581 [M+H] ⁺ .

Primer 25

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 21, smo iz 270 mg terc.-butil estra N[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 114 mg 1-naftoilklorida in 77 mg diizopropilamina dobili, po kromatografiji na silikagelu ob uporabi 10 % metanola v diklorometanu za eluiranje, 130 mg terc.-butil estra N-[2(R)hidroksi-3(S)[[N-(l-naftoil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 603 [M+H]⁺.

Primer 26

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 21, smo iz 270 mg terc.-butil estra N[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 100 mg cinamoilklorida in 77 mg di-izopropiletilamina dobili, po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi 10 % metanola v diklorometanu za eluiranje, 99 mg terc.-butil estra N[3(S)-[(N-cinamoil-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina v trdni obliki; MS: m/e 579 [M+HJ+

Primer 27

Raztopino 270 mg terc.-butil estra N-3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-L-prolina in 98 mg 4-fenilmaslene kisline v 10 ml suhega tetrahidrofurana smo ohladili v zmesi led/sol. Dodali smo 81 mg hidroksibenzotriazola, 69 mg Netilmorfolina in 136 mg dicikloheksilkarbodiimida in zmes mešali 64 ur. Nato smo zmes razredčili z etil acetatom in prefiltrirali. Filtrat smo izprali z vodno raztopino natrijevega hidrogen karbonata in raztopino natrijevega klorida. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu, za kar smo uporabili sistem G za eluiranje, pri čemer smo dobili 79 mg terc.-butil estra N-[2(R)hidroksi-4-fenil-3(S)[[N-(4-fenilbutiril)-L-asparaginil]amino]butil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 595 [M+H]⁺.

Primer 28

Na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 27, smo iz 249 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 104 mg 2-naftilocetne kisline, 75 mg hidroksibenzotriazola, 64 mg N-etilmorfolina in 126 mg dicikloheksilkarbodiimida dobili, po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi 10 % metanola v diklorometanu, 62 mg terc.-butil estra N-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N(2-naftil)acetil]-Lasparaginil]amino]-4-fenilbutil]-L-prolina, v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 617 [M+H]⁺.

Primer 29

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 270 mg terc.-butil estra N[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 108 mg 4-metoksihidrocimetove kisline, 81 mg hidroksibenzotriazola, 69 mg N-etilmorfolina in 136 mg dicikloheksilkarbodiimida dobili, po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi sistema G za eluiranje, 113 mg terc.-butil estra N-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(4metoksihidrocinamoil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]-L-prolina, v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 611 [M+H]+.

Primer 30

0.179 g dicikloheksilkarbodiimida, 0.016 g hidroksibenzotriazola in 0.09 g Netilmorfolina smo dodali v premešano raztopino 0.238 g terc.-butil estra N-3(S)amino-2(R ali S)-hidroksi-5-metilheksil]-L-prolina in 0.210 g N-(benzil-oksikarbonil)38

L-asparagina v 10 ml tetrahidrofurana pri 0 °C. To zmes smo mešali 16 ur in jo nato filtrirali. Filtrat smo razslojili med etil acetat in vodo, nato organsko fazo izprali z raztopino natrijevega hidrogen karbonata in raztopino natrijevega klorida. Organsko fazo smo uparili in ostanek kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili etil acetat/metanol (9:1), pri čemer smo dobili po prekristalizaciji iz etil acetata/n-heksana, 0.13 g terc.-butil estra N-3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-Lasparaginil]amino-2(R ali S)-hidroksi-5-metilheksil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 549 [M+H]⁺.

Terc.-butil ester N-[3(S)-amino-2(R ali S)-hidroksi-5-metilheksil]-L-prolina, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

(i) Raztopino 1.31 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2(R ali S)-epoksi-5-metil-heksana in 0.855 g terc.-butil estra prolina v 10 ml dimetilformamida smo mešali 16 ur pri

100 °C in nato topilo odstranili z uparjenjem. Ostanek smo razslojili med etil acetat in vodo. Organsko fazo smo izprali z raztopino natrijevega klorida in uparili. Ostanek smo kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili etil acetat/ocetno kislino/etanol (4:1:1). Material, ki je imel Rf približno 0.24, smo ponovno kromatografirali na silikagelu ob uporabi sistema H za eluiranje, pri čemer smo dobili 0.358 g terc.-butil estra N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R ali S)hidroksi-5-metilheksil]-L-prolina v obliki brezbarvnega olja;

MS: m/e 435 [M+H]+.

(ii) Raztopino 0.35 g terc.-butil estra N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R ali S)hidroksi-5-metilheksil]-L-prolina v 20 ml etanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju v teku 16 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 0.238 g terc.-butil estra N-[3(S)-amino-2(R ali S)hidroksi-5-metilheksil]-L-prolina v obliki brezbarvne gume; MS: m/e 301 [M+H]⁺.

Primer 31

Raztopino 0.28 g terc.-butil estra N-[3(S)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-L-prolina in 0.083 g benzil izocianata v 5 ml diklorometana smo mešali 2 uri pri 20 °C. Topilo smo nato odstranili z uparjenjem in ostanek triturirali s pomočjo dietiletra, pri čemer smo dobili 0.174 g terc.-butil estra N-[3(S)-[[N(benzilkarbamoil)-L-asparaginil]amino]-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 582 [M+H]+.

Primer 32

Raztopino 0.28 g terc.-butil estra N-[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil] -L-prolina, 0.124 g 1-adamantankarbonilklorida in 0.081 g diizopropiletilamina v 5 ml diklorometana smo mešali 8 ur pri 20 °C. Dodali smo 0.124 g 1adamantankarbonilklorida in 0.081 g di-izopropiletilamina in nadaljevali z mešanjem pri 20 °C še 16 ur. Dobljeno raztopino smo razredčili z 20 ml diklorometana in izprali zapovrstjo z vodo, raztopino natrijevega karbonata, raztopino kalijevega bisulfata in raztopino natrijevega klorida. Nato smo organsko raztopino uparili in ostanek triturirali s pomočjo dietiletra, pri čemer smo dobili 0.2 g terc.-butil estra N[3(S)-[[N-(l-adamantilkarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Lprolina v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 611 [M+H]⁺.

Primer 33

0.208 g dicikloheksilkarbodiimida, 0.124 g hidroksibenzotriazola in 0.106 g Netilmorfolina smo dodali v premešano raztopino 0.315 g N2-3(S)-amino-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-fenil-L-prolinamida in 0.244 g N-(benziloksikarbonil)-Lasparagina v 10 ml tetrahidrofurana pri 0 °C. To zmes smo mešali 16 ur in jo nato razredčili z etil acetatom in filtrirali. Filtrat smo izprali z raztopino natrijevega hidrogen karbonata in raztopino natrijevega klorida ter topilo odstranili z uparjenjem. Ostanek smo kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili diklorometan/metanol (9:1), pri čemer smo dobili 0.22 g N^-3(S)-[[N(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-fenil-Lprolinamida v obliki belega trdnega materiala; s tališčem 169-171 °C (iz metanola).

N2-3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-fenil-L-prolinamid, ki smo ga uporabili za izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

(i) 3.5 g natrijevega borhidrida smo dodali v ledeno in premešano raztopino 21 g [N(benziloksikarbonil)-L-fenilalaniljmetil klorida v 500 ml vodnega tetrahidrofurana. Nadaljevali smo z mešanjem še 0.5 ure in nato odstranili topilo z uparjenjem. Ostanek smo razslojili na diklorometan in vodo in nato previdno nakisali s koncentrirano klorovodikovo kislino. Po nadaljnji obdelavi organske faze smo dobili bel trden material, ki je pri kromatografiji dal dve lisi; Rf 0.4 in 0.5 (5 % metanol/kloroform). Trden material smo ekstrahirali z vrelim heksanom, dokler se ni ekstrahirala hitrejša komponenta. Združene n-heksanske ekstrakte smo uparili in ostanek ponovno ekstrahirali z vrelim N-heksanom, da smo oddvojili manjšo količino (0.5 g) počasnejše komponente. Tako smo dobili 11.5 g 3(S)-(benziloksiformamido)l-kloro-4-fenil-2(S)-butanola s tališčem 151-153 °C (iz etil acetata/n-heksana).

(ii) Raztopino 11.4 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l-kloro-4-fenil-2(S)-butanola v 300 ml etanola, ki vsebuje 2.24 g kalijevega hidroksida, smo pustili stati 15 minut. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek razslojili med vodo in diklorometan. Z nadaljnjo obdelavo smo dobili 10.1 g surovega 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2(S)epoksi-4-fenilbutana v obliki umazano-belega trdnega materiala, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega prečiščevanja.

(iii) Raztopino 0.594 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2(S)-epoksi-4-fenilbutana in 0.38 g Nl-fenil-L-prolinamida v 5 ml dimetilformamida smo segreli na 90 °C v teku 16 ur, in nato na 120 °C v teku 8 ur. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili dietileter/metanol (96:4), in dobili 0.48 g N^-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-fenil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala s tališčem 133-135 °C (iz dietiletra).

(iv) Raztopino 0.45 g terc.-butil estra N²-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi4-fenilbutil]-Nl-fenil-L-prolinamida v 20 ml etanola smo hidrogenirali 4 ure nad 10 % paladijem na oglju, pri čemer smo dobili 0.315 g N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-fenil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala;

MS: m/e 354 [M+H]+.

Primer 34

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 33, smo iz 0.987 mg 2-[3(S)(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidro3(R,S)-izokinolinkarboksamida, 0.665 g N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, 566 mg dicikloheksilkarbodiimida, 0.337 g hidroksibenzotriazola in 0.287 g N-etil-morfolina dobili 0.5 g 2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]-amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidro-3(R,S)-izokinolin-karboksamida v obliki bledo-rumene pene; MS: m/e 644 [M+H]+.

Primer 35

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 33, smo iz 0.225 dicikloheksilkarbodiimida, 0.135 g hidroksibenzotriazola, 0.115 g N-etilmorfolina, 0.38 g N^41 [3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-benzil-L-prolinamida in 0.266 g N(benziloksikarbonil)-L-asparagina, dobili 0.056 g Nl-benzil-N2-3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 616 [M+H]⁺.

Primer 36

Raztopino 270 mg terc.-butil estra N-[3(S)-(benziloksiformamido)-4-(4-fluorofenil)2(R)-hidroksibutil]-L-prolina v 50 ml etanola smo hidrogenirali 2 uri nad 30 mg 10 % paladija na oglju. Katalizator smo odstranili s filtriranjem, filtrat uparili, pri čemer smo dobili olje, ki smo ga pripajali s 158 mg N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, na način analogen tistemu, ki smo ga opisali v Primeru 1. Dobljeni surovi produkt smo kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili 10 % metanol v diklorometanu. Dobili smo 120 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)L-asparaginil]amino]-4-(4-fluorofenil)-2(R)-hidroksibutil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala s tališčem 163-164 °C.

Terc.-butil ester N-[3(S)-(benziloksiformamido)-4-(4-fluorofenil)-2(R)-hidroksibutil]-L-prolina, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

(i) Na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 19(i), smo 7.70 g N(benziloksikarbonil)-3-(4-fluorofenil)-DL-alanina obdelali z izobutilkloroformiatom in nato privedli do reakcije z diazometanom, pri čemer smo dobili 7.15 g benzil [2-(4fluorofenil)-l(RS)-(2-diazoacetil)etil]karbamata v obliki rumenega trdnega materiala s tališčem 97 °C.

(ii) Z obdelavo zgornjega produkta s klorovodikom na način analogen tistemu, ki smo ga opisali v Primeru 19(ii), smo dobili 6.70 g [N-(benziloksikarbonil)-3-(4fluorofenil)-DL-alanil]metilklorida, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega čiščenja.

(iii) Z redukcijo 6.30 g zgornjega produkta z natrijevim borhidridom na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 19(iii), smo dobili 5.83 g zmesi alkoholov. To zmes smo kromatografirali na koloni silikagela, s tem, da smo za eluiranje uporabili 2 % metanola v diklorometanu, pri čemer smo dobili 0.95 g treo-3(benziloksiformamido)-l-kloro-4-(4-fluorofenil)-2-butanola v obliki belega trdnega materiala. Z nadaljnjim eluiranjem zgornje kolone z istim sistemom topil smo dobili

3.25 g eritro-3-(benziloksiformamido)-l-kloro-4-(4-fluorofenil)-2-butanola v obliki belega trdnega materiala s tališčem 148-149 °C.

(iv) Z obdelavo 3.20 g eritro-3-(benziloksiformamido)-l-kloro-4-(4-fluorofenil)-2butanola z etanolno raztopino kalijevega hidroksida na analogen način, kot smo opisali v Primeru 19(iv), smo dobili 2.03 g eritro-3-(benziloksiformamido)-l,2-epoksi4-(4-fluorofenil)butana v obliki belega trdnega materiala; MS:m/e 315 [M]⁺.

(v) 0.63 g zgornjega produkta smo obdelali s terc.-butil estrom L-prolina na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 19(v). Dobljeni surovi produkt smo kromatografirali na koloni silikagela, s tem, da smo za eluiranje uporabili 5 % metanola v diklorometanu. Dobili smo 0.26 g terc.-butil estra N-[3(R)-(benziloksiformamido)-4-(4-fluorofenil)-2(S)-hidroksibutil]-L-prolina v obliki brezbarvnega olja; NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 1.47 (9H, s), 1.75-1.95 (4H, m), 2.05-2.15 (IH, m), 2.25-2.35 (IH, m), 2.50-3.00 (4H, m), 3.20 (2H, m), 3.58 (IH, m), 3.85 (IH,m), 4.88 (IH, d), 5.00 (2H, dd), 6.94 (2H, t), 7.13-7.37 (7H, m).

Z nadaljnjim eluiranjem z istim topilnim sistemom smo dobili 0.275 g terc.-butil estra N-[3(S)-(benziloksiformamido)-4-(4-fluorofenil)-2(R)-hidroksibutil]-L-prolina v obliki brezbarvnega olja; NMR (CDCI3), 300 MHz) δ 1.42 (9H, s), 1.75-1.95 (4H, m), 2.05-2.20 (IH, m), 2.54-2.80 (3H, m), 2.85-2.98 (2H, m), 3.03-3.24 (2H, m), 3.44 (IH, m), 3.92 (IH, m) 4.88-5.06 (3H, m), 6.93 (2H, t), 7.10-7.40 (7H, m).

Primer 37

Raztopino 730 mg terc.-butil estra N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4(4-metoksifenil)butil]-L-prolina v 20 ml etanola smo hidrogenirali 2 uri nad 50 mg 10 % paladija na oglju. Katalizator smo odstranili s filtriranjem, filtrat uparili, pri čemer smo dobili olje, ki smo ga pripajali s 340 mg N-(benziloksikarbonil)-Lasparagina, na način analogen tistemu, ki smo ga opisali v Primeru 1. Dobljeni surovi produkt smo kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili 10 % metanola v diklorometanu. Dobili smo 82 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[[N(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-(4-metoksifenil)butil]-Lprolina v obliki belega trdnega materiala; MS:m/e 613 [M+H]⁺.

Terc.-butil ester N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-(4-metoksifenil)butil]-L-prolina, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

(i) Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 19(i), smo 3.10 g N(benziloksikarbonil)-3-(4-metoksifenil)-L-alanina obdelali z izobutil kloroformiatom in nato z diazometanom, pri čemer smo dobili 2.83 g benzil-[2-(4-metoksifenil)-l(S)(2-diazoacetil)etil]karbamata v obliki bledorumenega trdnega materiala s tališčem 88-90 °C.

(ii) 2.80 g zgornjega produkta smo obdelali s klorovodikom, na način analogen tistemu, ki smo ga opisali v Primeru 19(ii), in dobili 2.85 g [N-(benziloksikarbonil)-3(4-metoksifenil)-L-alanil]metil klorida, v obliki belega trdnega materiala s tališčem 107 °C.

(iii) Zgornji produkt smo obdelali z natrijevim borhidridom na analogen način, kot smo opisali v Primeru 19(iii). Dobljeni surovi produkt smo triturirali s pomočjo 30 ml 5 % metanola v diklorometanu, pri čemer smo dobili 1.15 g 3(S)(benziloksiformamido)-l-kloro-4-(4-metoksifenil)-2(S)-butanola v obliki belega trdnega materiala. MS: m/e 363. 365 [M]+.

(iv) Zgornji produkt smo obdelali z etanolno raztopino kalijevega hidroksida na analogen način, kot smo opisali v Primeru 19(iv), pri čemer smo dobili 0.86 g 3-(S)(benziloksiformamido)-l,2(S)-epoksi-4-(4-metoksifenil)butana v obliki belega trdnega materiala, s tališčem 86-87 °C.

(v) 0.51 g zgornjega produkta smo obdelali s terc.-butil estrom L-prolina na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 19(v), pri čemer smo dobili 0.63 g terc.-butil estra N-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-(4-metoksifenil)-butil]-L-prolina v obliki brezbarvnega olja; MS: m/e 498 [M] + .

Primer 38

Raztopino 1.58 g N2-[3(S)-(benziloksiformamido)-4-(4-terc.-butoksifenil)-2(R)hidroksibutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v 200 ml etanola smo hidrogenirali 4 ure nad 100 mg 10 % paladija na oglju. Katalizator smo odstranili s filtriranjem, filtrat uparili, pri čemer smo dobili olje, ki smo ga pripajali z 0.74 g N-(benziloksikarbonil)L-asparagina, na način analogen tistemu, ki smo ga opisali v Primeru 1. Dobljeni surovi produkt smo kromatografirali na koloni silikagela, pri čemer smo za eluiranje uporabili 10 % metanol v diklorometanu. Dobili smo 0.59 g N^-[3(S)-[[N(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-4-(4-terc.-butoksifenil)-2(R)-hidroksibutil]-N^-terc.-butil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala;

MS: m/e 654 [M+H]+.

N2-[3(S)-(benziloksiformamido)-4-(4-terc.-butoksifenil)-2(R)-hidroksibutil]-Nlterc.-butil-L-prolinamida, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

(i) Na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 19(i), smo N-(benziloksikarbonil)-3-(4-terc.-butoksifenil)-L-alanin (pridobljen iz 7.45 g dicikloheksilamonijeve soli) obdelali z izobutil kloroformiatom in nato dovedli do reakcije z diazometanom, pri čemer smo dobili 3.58 g benzil [2-(4-terc.-butoksifenil)-l(S)-(2diazoacetil)etil]karbamata v obliki rumenega trdnega materiala s tališčem 80-82 °C.

(ii) Z obdelavo zgornjega karbamata s klorovodikom, na način analogen tistemu, ki smo ga opisali v Primeru 19(ii) smo dobili 3.6 g [N-(benziloksikarbonil)-3-(4-terc.butoksifenil)-L-alanil]metilklorida, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega čiščenja.

(iii) Z redukcijo zgornjega klorida z natrijevim borhidridom na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 19(iii), smo dobili zmes alkoholov, ki smo jo triturirali s pomočjo vročega n-heksana, pri čemer smo dobili 3.14 g belega trdnega materiala. Ta material smo prekristalizirali iz zmesi etil acetata in n-heksana, pri čemer smo dobili 1.88 g 3-(S)-(benziloksiformamido)-4-(4-terc.-butoksifenil)-l-kloro-2(S)butanola, v obliki belega trdnega materiala; NMR (CDCI3, 250 MHz) δ 1.35 (9H, s), 2.85-3.05 (3H, m), 3.50-3.70 (2H, m), 3.80-3.90 (IH, m), 3.92-4.04 (IH, m), 4.85 (IH, d), 5.00-5.10 (2H, m), 6.93 (2H, d), 7.10 (2H, d), 7.25-7.40 (5H, m).

(iv) 5.52 g zgornjega produkta smo obdelali z etanolno raztopino kalijevega hidroksida na analogen način, kot smo opisali v Primeru 19(iv), pri čemer smo dobili 4.98 g 3-(S)-(benziloksiformamido)-4-(4-terc.-butoksifenil)-l,2(S)-epoksi-butana v obliki brezbarvne gume; NMR (CDCI3), 250 MHz) δ 1.36 (9H, s), 2.75-3.05 (5H, m), 3.76 (IH, m), 4.73 (IH, d), 5.07 (2H, s), 6.95 (2H, d), 7.10 (2H, d), 7.25-7.40 (5H, m).

(v) 2.50 g zgornjega produkta smo obdelali z Nl-terc.-butil-L-prolinamidom na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 19(v), pri čemer smo dobili 1.58 g N^[3(S)-(benziloksiformamido)-4-(4-terc.-butoksifenil)-2(R)-hidroksibutil]-Nl-terc.butil -L-prolinamida v obliki brezbarvnega olja; MS: m/e 539 [M]⁺.

Primer 39

Raztopino 200 mg N²-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]4-(4-terc.butoksifenil)-2(R)-hidroksibutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v 5 ml trifluorocetne kisline smo mešali 20 ur pri sobni temperaturi. Raztopino smo izlili v prenasičeno raztopino hidrogen karbonata in zmes ekstrahirali trikrat s po 30 ml diklorometana in trikrat s po 30 ml etil acetata. Združene ekstrakte smo osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom, jih uparili, pri čemer smo dobili 100 mg brezbarvne gume. To smo kromatografirali na koloni silikagela, pri čemer smo za eluiranje uporabili 10 % metanol v diklorometanu in dobili 42 mg steklastega trdnega materiala. Ta material smo triturirali s pomočjo zmesi 1 ml dietiletra in 3 ml n-heksana, pri čemer smo dobili 28 mg trifluoroacetata N²-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksifenil)-butil]N l-terc.-butil-L-prolinamida v obliki steklastega trdnega materiala; MS:m/e 598 [M-CF3CO2]⁺.

Primer 40

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 1, smo iz 4-metil estra N²-[3(S)(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida in N(benziloksikarbonil)-L-aspartamske kisline dobili N²-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)4-O-metil-L-a-aspartil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamid v obliki steklastega trdnega materiala s tališčem 55-60 °C.

MS: m/e 597 [M+H]+.

Primer 41

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 1, smo iz N²-[3(S)(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N l-terc.-butil-L-prolinamida in N(benziloksikarbonil)-L-metionina dobili N²-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-Lmetionil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamid v obliki belega trdnega materiala s tališčem 132-133 °C.

Primer 42

N²-[3(S)-[[N,3-bis(benziloksikarbonil)-L-histidil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenil-butil]Nl-terc.-butil-L-prolinamid smo proizvedli iz N²-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida in N,3-bis(benziloksikarbonil)-Lhistidina na analogen način, kot smo opisali v Primeru 1; dobili pa smo ga v obliki brezbarvnega steklastega materiala; MS: m/e 739 [M + H]⁺.

Primer 43

Raztopino 30 mg N2-[3(S)-[[N,3-bis(benziloksikarbonil)-L-histidil]amino]-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v 6 ml 2M klorovodikove kisline smo mešali pri sobni temperaturi čez noč. Zmes smo nevtralizirali z dodatkom 2M raztopine natrijevega hidroksida in ekstrahirali dvakrat s po 10 ml diklorometana. Združene ekstrakte smo osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in jih uparili. Dobljeni surovi produkt smo triturirali s pomočjo dietiletra, pri čemer smo dobili 14 mg N²-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-histidil]amino]-2(R)-hidroksi-[4-fenilbutil]Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala, s tališčem 100 °C (razpad); MS: m/e 604 [M ]+.

Primer 44

Na analogen način kot smo opisali v Primeru 21, smo iz 224 mg terc.-butil estra N[3(S)-[[L-asparaginil]-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 70 mg benzoilklorida in 65 mg di-izopropiletilamina dobili, po končani kromatografiji na sillkagelu, in ob uporabi 10 % metanola v diklorometanu za eluiranje, 20 mg terc.-butil estra N[3(S)-[N-(benzoil-L-asparaginil)-amino]-2(R)-hidroksi-[4-fenilbutil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala iz metanola/dietiletra; MS: m/e 553 [M + H] ⁺ .

Primer 45

Na analogen način kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 224 mg terc.-butil estra N3(S)-[[L-asparaginil]-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 93 mg 1-naftilocetne kisline, 68 mg hidroksibenzotriazola, 58 mg N-etilmorfolina in 113 mg dicikloheksilkarbodiimida po končani kromatografiji na sillkagelu, in ob uporabi 10 % metanola v diklorometanu za eluiranje, dobili 106 mg terc.-butil estra N-[2(R)hidroksi-3(S)-[[N-[2-(l-naftil)acetil]-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala iz metanola/dietiletra; MS: m/e 617 [M + H]⁺.

Primer 46

Na analogen način kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 493 mg terc.-butil estra N3(S)-[[L-asparaginil]-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 190 mg kinaldinske kisline, 149 mg hidroksibenzotriazola, 127 mg N-etilmorfolina in 249 mg dicikloheksilkarbodiimida po končani kromatografiji na sillkagelu, in ob uporabi 10 % metanola v diklorometanu za eluiranje, dobili 167 mg terc.-butil estra N-[2(R)hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]butil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala iz metanola/dietiletra; MS: m/e 604 [M + H]⁺.

Primer 47

Na analogen način kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 234 mg terc.-butil estra N3(S)-[[L-asparaginil]-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 96 mg 4-klorohidrocimetove kisline, 70 mg hidroksibenzotriazola, 60 mg N-etilmorfolina in 118 mg dicikloheksilkarbodiimida, po končani kromatografiji na silikagelu in ob uporabi sistema G za eluiranje, dobili 171 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[[N-(4klorohidrocinamoil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 615 [M -I- H]⁺.

Primer 48

Na analogen način kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 234 mg terc.-butil estra N3(S)-[[L-asparaginil]-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina, 90 mg 1-izokinolinkarboksilne kisline, 70 mg hidroksibenzotriazola, 60 mg N-etilmorfolina in 118 mg dicikloheksilkarbodiimida, po končani kromatografiji na silikagelu in ob uporabi 10 % metanola v diklorometanu za eluiranje, dobili 146 mg terc.-butil estra N-[2(R)hidroksi-3(S)-[[N-(l-izokinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]-L-prolina v obliki bledo-rumenega trdnega materiala iz etil acetata/n-heksana;

MS: m/e 604 [M + H]+.

Primer 49

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 21, smo iz 209 mg N^-3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, 89 mg 2naftoil klorida in 61 mg di-izopropiletilamina dobili 191 mg Nl-terc.-butil-N^-[2(R)hidroksi-3(S)-[[N-(2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 602 [M + H]+.

Izhodni material smo pridobili s hidrogeniranjem N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida;

MS: m/e 582 [M + H]⁺, To zadnjo spojino smo dobili na analogen način, kot smo opisali v Primeru 33, le z uporabo Nl-terc.-butil-L-prolinamida v odstavku (iii) namesto Nl-fenil-L-prolinamida.

Primer 50

Raztopino 2.798 g l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-oktahidrociklopenta[b]pirol-2-karboksamida (štirje diastereomeri) in 2.72 g sukcinimidnega estra N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina v 50 ml dimetoks-etana smo mešali 2 uri pri 20 °C, nato pa topilo odstranili z uparjenjem. Ostanek smo zbrali v etil acetatu in raztopino izprali z vodno raztopino natrijevega karbonata in raztopino natrijevega klorida. Organsko raztopino smo uparili in ostanek kromatografirali na silikagelu, ob uporabi sistema G za eluiranje. Dobili smo 434 mg l-[3(S)-[[N-benziloksikarbonil)-Lasparaginil]amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-oktahidro-(3aS,6aS)ciklopenta[b]pirol-2(S)-karboksamida v obliki belega trdnega materiala iz etil acetata; MS: m/e 622 [M + H]+; Rf 0.22.

1- [3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-oktahidro-ciklopenta-[b]pirol2- karboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način.

(i) Raztopino 2.98 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana in 2.1 g N-terc.-butil-oktahidro-ciklopenta[b]pirol-2-karboksamida v 50 ml etanola smo segrevali 10 ur na refluksu in nato topilo odstranili z uparjenjem. Nato smo s kromatografijo na silikagelu, ob uporabi sistema H za eluiranje, dobili 4.7 g 1-[3(S)(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-oktahidrociklopenta[b]pirol-2-karboksamida v obliki zmesi štirih diastereomerov,

MS: m/e 508 [M + H] + .

(ii) Raztopino 4.6 g l-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-oktahidro-ciklopenta-[b]pirol-2-karboksamida (štirje diastereomeri) v 90 ml etanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C in pod atmosferskim tlakom v teku 72 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 2.958 g l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-oktahidro-ciklopenta-[b]pirol-2-karboksamida (štirje diastereomeri) v obliki rjavkastega olja; MS: m/e 374 [M + H]⁺

Primer 51

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 310 mg 1-3(S)-[[Lasparaginil]aminoJ-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-oktahidro-(3aS,6aS)ciklopenta[b]pirol-2(S)-karboksamida, 111 mg kinaldinske kisline, 86 mg hidroksi49 benzotriazola, 74 mg N-etilmorfolina in 132 mg dicikloheksilkarbodiimida dobili, po končani kromatografiji na silikagelu s tem, da smo za eluiranje uporabili diklorometan/metanol (9:1), 200 mg N-terc.-butil-oktahidro-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)[[N-(2-kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]butil-(3aS,6aS)-ciklopenta-[b]pirol-2(S)karboksamida, v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 643 [M + H] ⁺ l-3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-oktahidro(3aS,6aS)-ciklopenta-[b]pirol-2(S)-karboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

Raztopino 397 mg l-[3(S)-[[N-benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-oktahidro-(3aS,6aS)-ciklopenta[b]pirol-2(S)karboksamida v 20 ml etanola smo hidrogenirali 4 ure nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C in pod atmosferskim tlakom. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 312 mg l-3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-oktahidro-(3aS,6aS)-ciklopenta-[b]pirol-2karboksamida v obliki bledo-rumene gume; MS: m/e 488 [M + H] +

Primer 52

Na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 27, smo iz 295 mg N²-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, 204 mg 6-(benziloksikarbonil)-2-naftalenkarboksilne kisline, 20 mg hidroksibenzo-triazola, 77 mg N-etilmorfolina in 151 mg dicikloheksilkarbodiimida dobili, po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi sistema G za eluiranje, 340 mg N²-[3(S)-[[N[6-benziloksikarbonil)-2-naftoil]-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nlterc.-butil-L-prolinamida v obliki umazano-belega trdnega materiala iz etil acetata/nheksana; MS: m/e 736 [M + H]+.

Primer 53

294 mg N²-[3(S)-[[N-[6-(benziloksikarbonil)-2-naftoil]-L-asparaginil]amino]-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v 100 ml izopropanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C pod atmosferskim tlakom v teku 16 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 145 mg N²-[3(S)-[[N-(6-karboksi-2-naftoil)-L-asparaginil]-amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki bele trdne snovi iz metanola/-etil acetata; MS: m/e 646 [M + H] + .

Primer 54

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 295 mg N²-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, 171 mg 4-(benziloksikarbonil)benzojske kisline, 90 mg hidroksibenzotriazola, 77 mg Netilmorfolina in 151 mg dicikloheksilkarbodiimida dobili, po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi sistema G za eluiranje, 390 mg N²-[3(S)-[[N-[4(benziloksikarbonil)benzoil-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenil-butil]-Nlterc.-butil-L-prolinamida v obliki umazano-bele trdne snovi iz etil acetata/n-heksana; MS: m/e 686 [M + H]+.

Primer 55

274 mg N²-[3(S)-[[N-[4-(benziloksikarbonil)benzoil]-L-asparaginil]amino]-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v 100 ml izopropanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C pod atmosferskim tlakom v teku 16 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 193 mg N²-[3(S)-[[N-(4-karboksibenzoil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala iz metanola/etil acetata; MS: m/e 596 [M + H]⁺.

Primer 56

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 228 mg N²-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, mg 4-nitrocimetove kisline, 69 mg hidroksibenzotriazola, 59 mg N-etilmorfolina in 116 mg dicikloheksilkarbodiimida dobili, po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi diklorometana/metanola (9:1) za eluiranje, 68 mg Nl-terc.-butil-N²-[2(R)hidroksi-3(S)-[[N-(4-nitrocinamoil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala iz metanola/dietiletra; MS: m/e 623 [M + H]+.

Primer 57

Raztopino 200 mg Nl-terc.-butil-N²-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(4-nitrocinamoil)-Lasparaginil]amino]-4-fenilbutil]-L-prolinamida v 20 ml etanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C pod atmosferskim tlakom v teku 5 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili. Ostanek smo kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili diklorometan/metanol (9:1) in dobili mg N2-[3(S)-[[N-(4-aminohidrocinamoil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala iz metanola/etil acetata; MS: m/e 595 [M + H]⁺.

Primer 58

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 418 mg N2-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida,

205 mg l-acetil-l,2,3,4-tetrahidro-2(R,S)-kinolinkarboksilne kisline, 127 mg hidroksibenzotriazola, 108 mg N-etilmorfolina in 212 mg dicikloheksilkarbodiimida, po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi diklorometana/metanola (9:1) za eluiranje, dobili 220 mg N2-3(S)-[[N-[(l-acetil-1,2,3,4-tetrahidro-2(R,S)-kinolil)karbonil]-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida (dva diastereomera) v obliki belega trdnega materiala iz diklorometana/dietiletra; MS: m/e 649 [M + H]⁺.

Primer 59

Na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 27, smo iz 418 mg N^-[3(S)-[(Lasparaginil)amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, 179 mg l,2,3,4-tetrahidro-l-okso-3(R,S)-izokinolinkarboksilne kisline, 127 mg hidroksibenzotriazola, 108 mg N-etilmorfolina in 212 mg dicikloheksilkarbodiimida, po končani kromatografiji na silikagelu, ob uporabi sistema I za eluiranje, dobili 132 mg Nl-terc.-butil-N2-[3(S)-[[N-[(l,2,3,4-tetrahidro-l-okso-3(R ali S)-izokinolil)karbonil]-L-asparaginil]-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolinamida (diastereomer A) v obliki belega trdnega materiala iz metanola/dietiletra,

MS: m/e 621 [M + H]⁺, in 66 mg Nl-terc.-butil-N2-[3(S)-[[N-[(l,2,3,4-tetrahidro-lokso-3(R ali S)-izokinolil)karbonil]-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]L-prolinamida (diastereomer B) v obliki belega trdnega materiala iz metanola/dietiletra; MS: m/e 621 [M + H]⁺.

Primer 60

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 418 mg n2-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida,

218 mg 2-acetamido-l,2,3,4-tetrahidro-2-naftalenkarboksilne kisline, 127 mg hidroksibenzotriazola, 108 mg N-etilmorfolina in 212 mg dicikloheksilkarbodiimida, po končani kromatografiji na silikagelu, ob uporabi diklorometana/metanola (9:1) za eluiranje, dobili 142 mg N^-[3(S)-[[N-[2(R ali S)-acetamido-l,2,3,4-tetrahidro-2naftoil]-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil]-L-prolinamida (diastereomer A) v obliki belega trdnega materiala MS: m/e 663 [M + H]⁺ in 80 mg N2-[3(S)-[[N-[2(R ali S)-acetamido-1,2,3,4-tetrahidro-2-naftoil]-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N^-terc.-butil-L-prolinamida (diastereomer B) v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 663 [M+H]⁺.

Primer 61

Na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 27, smo iz 209 mg N^-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, 81 mg kinaldinske kisline, 63 mg hidroksibenzotriazola, 54 mg N-etilmorfolina in 106 mg dicikloheksilkarbodiimida, po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi diklorometana/metanola (9:1) za eluiranje, dobili 88 mg N2-[2(R)-hidroksi-4-fenil3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]butil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala MS: m/e 603 [M + H]⁺.

Primer 62

Raztopino 844 mg l-[3(S)-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)piperidinkarboksamida in 882 mg sukcinimidnega estra N-(benziloksikarbonil)-Lasparagina v 25 ml tetrahidrofurana smo mešali 16 ur pri 20 °C in nato uparili. Ostanek smo raztopili v 50 ml diklorometana in organsko raztopino izprali z nasičeno raztopino natrijevega klorida in vodo. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu, s tem, da smo za eluiranje uporabili diklorometan/metanol (9:1). Dobili smo 461 mg l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida v obliki bledo-rumenega trdnega materiala; MS: m/e 596 [M + H]⁺.

l-[3(S)-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

(i) 2.576 g N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida in 4.158 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2(S)-epoksi-4-fenilbutana v 70 ml etanola smo segrevali 16 ur ob refluksu. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek raztopili v 100 ml dietiletra in obdelali z 10 g aktiviranega magnezijevega silikata. Nato smo topilo odstranili z uparjenjem in dobili 6.16 g l-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-453 feni!butil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida v obliki brezbarvnega steklastega materiala, MS: m/e 482 [M + H]⁺ (ii) Raztopino 1.25 g l-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida v 80 ml etanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C in pod atmosferskim tlakom v teku 16 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 0.844 g 1-[3(S)amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida v obliki bledo-rumene gume; MS: m/e 348 [M + H] ⁺

Primer 63

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 21, smo iz 226 mg 1-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida, 93 mg 2-naftoilklorida in 63 mg di-izopropiletilamina, po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi diklorometana/metanola (9:1) za eluiranje, dobili 76 mg N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]-2(S)-piperidinkarboksamida v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e616[M + H]⁺ l-[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)piperidinkarboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili s hidrogeniranjem l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)piperidinkarboksamida.

Primer 64

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 226 mg 1-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida, 85 mg kinaldinske kisline, 56 mg N-etilmorfolina, 66 mg hidroksibenzotriazola in 111 mg dicikloheksilkarbodiimida, po končani kromatografiji na silikagelu, ob uporabi diklorometana/metanola (9:1) za eluiranje, dobili 100 mg N-terc.-butil-l[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-L-asparaginil]-amino]butil]-2(S)piperidinkarboksamida v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 617 [M + H]+.

Primer 65

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 228 mg N^-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, 88 mg 3izokinolinkarboksilne kisline, 69 mg hidroksibenzotriazola, 59 mg N-etilmorfolina in 116 mg dicikloheksilkarbodiimida, po končani kromatografiji na silikagelu, ob uporabi diklorometana/metanola (9:1) za eluiranje, dobili 88 mg N^-terc.-butil-N^[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(3-izokinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]-Lprolinamida v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 603 [M + H]⁺.

Primer 66

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 228 mg N^-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, 88 mg 3kinolinkarboksilne kisline, 69 mg hidroksibenzotriazola, 59 mg N-etilmorfolina in 116 mg dicikloheksilkarbodiimida, po končani kromatografiji na silikagelu, ob uporabi diklorometana/metanola (9:1) za eluiranje, dobili 86 mg Nl-terc.-butil-N2-[2(R)hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(3-kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]butil]-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 603 [M + H]+.

Primer 67

Na analogen način kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 295 mg N^-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, 214 mg 3-(benziloksiformamido)-2-naftalenkarboksilne kisline, 90 mg hidroksibenzotriazola, 77 mg N-etilmorfolina in 151 mg dicikloheksilkarbodiimida, po končani kromatografiji na silikagelu, ob uporabi sistema G za eluiranje, dobili 380 mg N⁷[3(S)-[[N-(3-benziloksiformamido)-2-naftoil]-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, v obliki belega trdnega materiala iz metanola; MS: m/e 751 [M + H]⁺.

Primer 68

Raztopino 216 mg l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2,3dihidro-lH-indol-2(R ali S)-karboksamida (diastereomer A), 151 mg N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, 76 mg hidroksibenzotriazola, 65 mg N-etilmorfolina in 128 mg dicikloheksilkarbodiimida v 10 ml tetrahidrofurana smo mešali 16 ur pri 20 °C. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu, s tem, da smo za eluiranje uporabili diklorometan/metanol (92:8). Dobili smo 70 mg 1[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-2,3-dihidro-lH-indol-2(R ali S)-karboksamida (diastereomer A) v obliki bledo-rumenega trdnega materiala; MS: m/e 630 [M + H]⁺.

l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2,3-dihidro-lH-indol-2(R ali S)-karboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

Raztopino 891 mg N-terc.-butil-2,3-dihidro-lH-indol-2(R ali S)-karboksamida in 654 mg 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana v 5 ml dimetilformamida smo segrevali pri 140 °C v teku 40 ur. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu, s tem, da smo za eluiranje uporabili dietileter/n-heksan (2:1). Dobili smo 300 mg l-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2,3-dihidro- lH-indol-2(R ali S)-karboksamida (diastereomer A) v obliki bledo-rumenega olja; m/e 516 [M + H]⁺, in 290 mg 1[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2,3-dihidro-lHindol-2(R ali S)-karboksamida (diastereomer B) v obliki bledo-rumenega olja;

MS: m/e 516 [M + H]+.

(ii) Raztopino 300 mg l-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-2,3-dihidro-lH-indol-2(R ali S)-karboksamida (diastereomer A) v 20 ml etanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C in pod atmosferskim tlakom v teku 16 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 216 mg l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-2,3-dihidro-lH-indol-2(R ali S)-karboksamid (diastereomer B) kot rjavkasto olje.

Primer 69

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 68, smo iz 223 mg l-[3(S)-amino-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2,3-dihidro-lH-indol-2(R ali S)-karboks-amida (diastereomer B), 151 mg N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, 76 mg hidroksibenzotriazola, 65 mg N-etilmorfolina in 128 mg dicikloheksilkarbodiimida dobili 210 mg l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-N-terc.-butil-2,3-dihidro-lH-indol-2(R ali S)-karboksamida (diastereomer B), v obliki bledo-rumenega trdnega materiala; MS: m/e 630 [M + H]⁺.

Primer 70

Raztopino 0.422 g N2-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-Lasparaginil]amino]butil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida in 142 mg 3-klorperbenzojske kisline v 10 ml diklorometana smo mešali 1 uro pri 20 °C. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu, tako, da smo za eluiranje uporabili diklorometan/metanol (9:1), pri čemer smo dobili 289 mg N^-oksida Nlterc.-butil-N2-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]-butil]-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala;

MS: m/e 619 [M + H]+.

Primer 71

Raztopino 0.123 mg N^-oksida Nl-terc.-butil-N2-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]butil]-L-prolinamida in 35 mg 3-klorperbenzojske kisline v 5 ml diklorometana smo mešali 24 ur pri 25 °C. Dodali smo še 70 mg 3-klorperbenzojske kisline in mešali 48 ur pri 20 °C. Raztopino smo izprali z vodno raztopino natrijevega karbonata in raztopino natrijevega klorida, nato smo topilo odstranili z uparjenjem. Ostanek smo kromatografirali na silikagelu ob uporabi sistema J za eluiranje, pri čemer smo dobili 70 mg N^-oksida Nl-terc.-butilN2-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(l-oksido-2-kinolilkarbonil)-L-asparaginil]-amino]-4fenilbutil]-L-prolinamida v obliki umazano-belega trdnega materiala iz etil acetata; MS: m/e 635 [M + H]+

Primer 72

Raztopino 98 mg dihidrobromida 3-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc,butil-4(R)-tiazolidinkarboksamida v 0.5 ml suhega dimetilformamida smo mešali in hladili do -10 °C v kopeli led/sol ob dodajanju 44 mg N-etilmorfolina in nato 76 mg sukcinimidnega estra N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina. Zmes smo pustili segreti do sobne temperature, nato smo jo mešali preko noči. Dimetilformamid smo odstranili z uparjenjem pod zmanjšanim tlakom in ostanek raztopili v kloroformu. Raztopino smo izprali z vodo, nato osušili nad natrijevim sulfatom in uparili. Ostanek v obliki gume smo prečistili s Flash kromatografijo na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili 4 % metanol v diklorometanu. Dobili smo 66 mg 3-[3(S)-[[N(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil4(R)-tiazolidinkarboksamida v obliki brezbarvne pene. Analitsko čist produkt smo dobili s prekristalizacijo iz etil acetata; MS: m/e 600 [Μ+Η]⁺.

Dlhidrobromid 3-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-4(R)tiazolidin-karboksamida, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način;

(i) Raztopino 2.67 g N-benziloksikarbonil-4(R)-tiazolidinkarboksilne kisline v 42 ml suhega tetrahidrofurana smo mešali in ohladili na -15 °C v kopeli led/sol ob dodajanju 1.15 g N-etilmorfolina, 2 minuti kasneje pa smo dodali 1.87 g izobutilkloroformiata. Po 3 minutah smo po kapljicah dodali 0.73 g terc.-butil amina in zmes pustili segreti do sobne temperature preko noči. Tetrahidrofuran smo odstranili z uparjenjem pod zmanjšanim tlakom in ostanek raztopili v diklorometanu. Raztopino smo zapovrstjo izprali z vodo, 10 % raztopino citronske kisline, vodo, nasičeno raztopino natrijevega hidrogen karbonata in vodo, nato osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom, odfiltrirali in uparili, pri čemer smo dobili 2.85 g 3(benziloksikarbonil)-N-terc.-butil-4(R)-tiazolidinkarboksamida v trdni obliki, ki ima tališče pri 96-98 °C po prekristalizaciji iz dietiletra/n-heksana.

(ii) Zmes 3.2 g 3-(benziloksikarbonil)-N-terc.-butil-4(R)-tiazolidinkarboksamida in 10 ml 32 % (mas./mas.) bromovodika v ledoctu smo mešali 2 uri pri sobni temperaturi. Dobljeno raztopino smo izlili v dietleter, izločeno hidrobromidno sol smo oddvojili s filtriranjem, izprali z dietiletrom in nato raztopili v vodi. To raztopino smo naalkalili z dodajanjem IM raztopine natrijevega hidroksida in dvakrat ekstrahirali z diklorometanom. Združene diklorometanske ekstrakte smo izprali z vodo, posušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom, prefiltrirali in uparili, pri čemer smo dobili 1.57 g N-terc.-butil-4(R)-tiazolidinkarboksamida v kristalni obliki s tališčem 68-71 °C.

(iii) Raztopino 3.2 g N-terc.-butil-4(R)-tiazolidinkarboksamida in 5.0 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2(S)-epoksi-4-fenilbutana v 130 ml izopropanola smo mešali v argonu in segreli na 90 °C pod refluksom v teku 3 dni. Raztopino smo uparili pod zmanjšanim tlakom in ostanek prečistili s Flash kromatografijo na silikagelu, pri Čemer smo za eluiranje uporabili dietileter/n-heksan (2:1). Dobili smo 3.47 g 3-[3(S)(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-4(R)-tiazolidinkarboksamida. S prekristalizacijo iz etil acetata smo dobili analitsko čist material s tališčem 62-65 °C.

(iv) Zmes 2 g 3-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil4(R)-tiazolidinkarboksamida in 4.1 ml 32 % (mas./mas.) bromovodika v ledoctu smo mešali 1 uro pri sobni temperaturi. Dobljeno raztopino smo razredčili z brezvodnim dietiletrom in izločeni proizvod hitro odfiltrirali in izprali s svežim dietiletrom. Dobili smo 2.01 g dihidrobromida 3-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil4(R)-tiazolidinkarboksamida v obliki belega trdnega materiala; NMR (300 MHz): δ (D₂O) 1.37 (9H, s), 3.0 (2H, m), 3.09 (2H, dq), 3.29 (2H, d), 3.85 (2H, m), 4.16 (IH, m), 4.3 (2H, q) in 7.42 (5H, m) ppm.

Primer 73

Na analogen način kot smo ga opisali v Primeru 21, smo iz 110 mg 3-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(R)-tiazolidin-karboksamida, 46 mg 2-naftoilklorida in 31 mg di-izopropiletilamina dobili, po Flash kromatografiji na silikagelu ob uporabi 2 % metanola v diklorometanu za eluiranje, 83 mg N-terc.-butil-3-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(2-naftoil)-L-asparaginil]-amino]-4fenilbutil]-4-(R)-tiazolidinkarboksamida; MS: m/e 620 [M+H]⁺.

3-[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-4(R)tiazolidin-karboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na naslednji način:

Zmes 170 mg 3-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-N-terc.-butil-4(R)-tiazolidinkarboksamida in 0.3 ml 32% (mas./mas.) bromovodika v ledoctu smo mešali 1 uro pri sobni temperaturi. Raztopino smo razredčili z dietiletrom in izločeni trdni material hitro prefiltrirali, izprali z dietiletrom in raztopili v vodi. Raztopino smo naalkalili z dodajanjem kalijevega karbonata in ekstrahirali trikrat s kloroformom. Združene kloroformske ekstrakte smo osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom, prefiltrirali in uparili, pri čemer smo dobili 110 mg 3-[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil4(R)-tiazolidinkarboksamida; MS: m/e 466 [M+H]+.

Primer 74

Raztopino 330 mg N^-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-4-(4terc.-butoksifenil)-2(R)-hidroksibutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v 30 ml etanola smo hidrogenirali nad 50 mg 10 % katalizatorja paladija na oglju v teku 3 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili. Ostanek smo raztopili v diklorometanu in obdelali z 72 mg di-izopropiletilamina in 106 mg 2-naftoilklorida na analogen način, kot smo opisali v Primeru 21, pri čemer smo dobili 165 mg N^^_[4-(459 terc.-butoksifenil)-2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(2-naftoil)-L-asparaginil]amino]butil]-Nlterc.-butil-L-prolinamida v obliki umazano-belega trdnega materiala.

Primer 75

Raztopino 90 mg N^'[4-(4-terc.-butoksifenil)-2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(2-naftoil)-Lasparaginil]amino]butil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v 40 ml 3.5M klorovodika v etil acetatu smo mešali 30 minut pri sobni temperaturi. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek triturirali s pomočjo dietiletra in prefiltrirali, pri čemer smo dobili 80 mg hidroklorida N2-2(R)-hidroksi-4(4-hidroksifenil)-3(S)-[[N-(2-naftoil)-Lasparaginil]-amino]butil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala s tališčem 171-174°C.

Primer 76

Raztopino 59 mg 2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-l,2,3,4tetrahidropirido[3,4-b]indol-l-karboksamida (izomer A) in 71 mg sukcinimidnega estra N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina v 3 ml suhega tetrahidrofurana smo mešali 16 ur pri sobni temperaturi in nato uparili. Ostanek smo raztopili v diklorometanu in raztopino izprali dvakrat z vodo in dvakrat z nasičeno vodno raztopino natrijevega hidrogen karbonata. Topilo smo odstranili z uparjenjem pod zmanjšanim tlakom, pri čemer smo dobili 103 mg surovega produkta. 32 mg tega produkta smo očistili s pomočjo tekočinske kromatografije z visokim tlakom in reverzno fazo, pri čemer smo za eluiranje uporabili 55 % 0.05M amonijevega formiata v acetonitrilu. Dobili smo 9.9 mg 2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidro-pirido[3,4-b]-indol-l(R ali S)-karboksamida (izomer A) v obliki brezbarvnega olja; MS: m/e 683 [M+H]⁺.

2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-1,2,3,4-tetrahidro-pirido[3,4-b]-indol-1-karboksamid (izomer B) smo pridobili iz 2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil-N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidropirido[3,4-b]indol-l(R ali S)-karboksamida (izomer B) analogno načinu za pridobitev izomera A, ki smo ga zgoraj opisali, z enakim načinom čiščenja, pri čemer smo dobili brezbarvno olje; MS: m/e 683 [M+H]⁺.

2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil-N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidropirido[3,4b]indol-l-karboksamide, ki smo jih uporabili kot izhodne materiale, smo pridobili na naslednji način:

(i) Raztopini ohlajeni na ledu, ki je bila sestavljena iz 3.0 g 1,2,3,4-tetrahidropirido[3,4-b]indol-l-karboksilne kisline v 7 ml 2M raztopine natrijevega hidroksida, 17 ml vode in 17 ml dioksana, smo izmenično in v majhnih količinah dodali 12.5 ml 2M raztopine natrijevega hidroksida in raztopino 3.6 ml benzilkloroformiata v 9 ml dioksana. Po končanem dodajanju smo zmes mešali pri sobni temperaturi preko noči, nato smo dioksan odstranili z uparjenjem pod znižanim tlakom. Dobljeno raztopino smo razredčili z vodo, izprali dvakrat z dietiletrom, nakisali s 25 ml IM žveplove kisline in trikrat ekstrahirali z etil acetatom. Organske ekstrakte smo združili, izprali dvakrat z vodo in uparili, pri Čemer smo dobili 4.54 g 2benziloksikarbonil- l,2,3,4-tetrahidropirido[3,4-b]indol- 1-karboksilne kisline;

MS: m/e 351 [M+H]+, ki smo jo uporabili brez nadaljnjega čiščenja.

(ii) Raztopino 4.54 g 2-benziloksikarbonil-1,2,3,4-tetrahidropirido[3,4-b]indol-lkarboksilne kisline v 45 ml brezvodnega tetrahidrofurana smo ohladili v kopeli led/aceton, ob istočasni zaščiti s cevjo za sušenje. Dodali smo 1.82 ml izobutilkloroformiata in 1.82 ml N-etilmorfolina in zmes mešali 10 minut in nato dodali 2.1 ml terc.-butilamina. Nato smo zmes mešali 40 minut pri 0 °C in 45 minut pri sobni temperaturi, nato smo razredčili z etil acetatom in izprali dvakrat z vodo, dvakrat z 0.5M raztopino natrijevega hidroksida in ponovno z vodo. Raztopino smo osušili nad magnezijevim sulfatom in uparili do suhega. S prekristalizacijo iz etil acetata in nheksana smo dobili 1.21 g terc.-butil 2-benziloksikarbonil-l,2,3,4-tetrahidropirido[3,4-b]indol-l-karboksamida; MS: m/e 406 [M+H]⁺. 0.76 g identičnega materiala smo dobili tako, da smo matično lužnico podvrgli kromatografiji na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili etil acetat/n-heksan (1:1).

(iii) 1.62 g terc.-butil 2-benziloksikarbonil-l,2,3,4-tetrahidro-pirido[3,4-b]indol-lkarboksamida smo raztopili v 10 ml 45 % raztopine bromovodika v ocetni kislini. Po 30 minutah smo raztopino uparili in ostanek zbrali v vodi. Po filtraciji smo filtrat izprali trikrat z dietiletrom in nato nevtralizirali z dodajanjem nasičene raztopine natrijevega hidrogen karbonata v vodi. Dobljeni produkt smo ekstrahirali iz motnega vodnega sloja s pomočjo etil acetata. Združene organske ekstrakte smo osušili nad brezvodnim magnezijevim sulfatom in uparili, da smo dobili 0.84 g terc.-butil 1,2,3,4tetrahidro-pirido[3,4-b]indol-l-karboksamida v obliki belega, kristalnega materiala s tališčem 144 °C.

(iv) Raztopino 0.60 g terc.-butil l,2,3,4-tetrahidro-pirido[3,4-b]indol-l-karboksamida in 0.66 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana v 20 ml metanola smo segrevali na refluksu v argonu v teku 16 ur in nato uparili, pri čemer smo dobili bistro olje. Ta dva diastereomerna produkta smo odločili s Flash kromatografijo na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili n-heksan/etil acetat (3:1). Dobili smo 268 mg izomera A 2-[3(S)-(benzil-oksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-l,2,3,4-tetrahidropirido-[3,4-b]indol-l-karboksamida;

MS: m/e 569 [M+H]+in 65 mg izomera B iste spojine; MS: m/e 569 [M+H]+(v) Raztopino 150 mg 2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-l,2,3,4-tetrahidro-pirido[3,4-b]indol-l-karboksamida (izomer A) v 5 ml etanola smo hidrogenirali pod tlakom 3.4 bar nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C v teku 16 ur. Katalizator smo odstranili s filtracijo in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 120 mg 2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil-N-terc.-butil-l,2,3,4tetrahidropirido[3,4-b]indol-l-karboksamida (izomer A); MS: m/e 435 [M+H]⁺2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil-N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidropirido[3,4bjindol-1-karboksamid (izomer B), MS: m/e 435 [M+H]⁺, smo proizvedli na analogen način iz 2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.butil-l,2,3,4-tetrahidropirido[3,4-b]indol-l-karboksamida (izomer B).

Primer 77

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 70, smo iz 154 mg N-terc.-butil-l-2(R)hidroksi-3(S)-[[N-(kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino-4-fenilbutil]-2(S)-piperidinkarboksamida in 51 mg 3-klorperbenzojske kisline dobili 114 mg 1-oksida N-terc.butil-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-L-asparaginil]-amino]butil]-2-piperidinkarboksamida v obliki belega, trdnega materiala;

MS: m/e 633 [M+H]+·

Primer 78

Na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 27, smo iz 230 mg 1-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida, 139 mg 3-benziloksi-2-naftalenkarboksilne kisline, 113 mg dicikloheksilkarbodiimida, 68 mg hidroksibenzotriazola in 58 mg N-etil-morfolina dobili, po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi sistema G za eluiranje, 242 mg 1[3(S)’[[N-(3-benziloksi-2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-4-fenil-butil]-N-terc.butil-2(S)-piperidinkarboksamida v obliki pene; MS: m/e 722 [M+H]⁺·

Primer 79

Raztopino 181 mg l-[3(S)-[[N-(3-benziloksi-2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-2(R)hidroksi-4-fenil-butil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida v 5 ml etanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C, pod atmosferskim tlakom v teku 16 ur. Katalizator smo odstranili s filtracijo in filtrat uparili. Po trituriranju s pomočjo dietiletra smo dobili 110 mg N-terc.-butil-l-[3(S)-[[N-(3-hidroksi-2-naftoil)-Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-2(S)-piperidin-karboksamida, v obliki bledo-rumenega trdnega materiala, MS: m/e 632 [M+H]+·

Primer 80

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 400 mg cis-l-[3(S)-amino2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro-2(R ali S)-kinolinkarboksamida, 226 mg N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, 226 mg dicikloheksilkarbodiimida, 135 mg hidroksibenzotriazola in 115 mg N-etilmorfolina, dobili po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi diklorometana/metanola (94:6) za elucijo, 225 mg cis-1[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-dekahidro-2(R ali S)-kinolinkarboksamida, v obliki belega, trdnega materiala; MS: m/e 650 [M+H]⁺.

Cis- l-[3(S)-amino]2(R)-hidroksi-4-fenil-butil]-N-terc.-butil-dekahidro-2(R ali S)kinolinkarboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pripravili kot sledi:

(i) Raztopino 2.376 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana in 1.904 g cis-N-terc.-butil-dekahidro-2(R,S)-kinolinkarboksamida v 32 ml etanola smo mešali 24 ur pri 80 °C. Dodali smo še 0.474 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)epoksi-4-fenilbutana v dveh delih in zmes mešali pri 80 °C 5 ur. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili diklorometan/metanol (97.5:2.5) in dobili 1.17 g cis-l-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]N-terc.-butil-dekahidro-2(R ali S)kinolinkarboksamida (izomer A) v obliki belega trdnega materiala iz dietiletra/n-heksana, MS: m/e 536 [M+H]⁺ in 1.146 g cis-l-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro-2(R ali S)-kinolinkarboksamida (izomer B) v obliki bledo-rumene gume; MS: m/e 536 [M+H]⁺.

(ii) Raztopino 0.535 g cis-l-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]N-terc.-butil-dekahidro-2(R ali S)-kinolin-karboksamida (izomer B) v 25 ml etanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C in pod atmosferskim tlakom v teku 16 ur. Katalizator smo odstranili s filtracijo in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 400 mg cis-l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro2(R ali S)-kinolin-karboksamida v obliki brezbarvne gume.

Primer 81

Raztopino 561 mg trans-2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butildekahidro-(4aR,8aS)-izokinolin-3(S)-karboksamida in 372 mg N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina v 20 ml suhega tetrahidrofurana smo ohladili s pomočjo zmesi led/sol. Dodali smo 189 mg hidroksibenzotriazola, 161 mg N-etilmorfolina in 317 mg dicikloheksilkarbodiimida in zmes mešali 16 ur. Nato smo zmes razredčili z etil acetatom in filtrirali. Filtrat smo izprali z vodno raztopino natrijevega hidrogen karbonata in raztopino natrijevega klorida. Topilo smo odstranili in ostanek kromatografirali na silikagelu, z uporabo diklorometana/metanola (9:1) za eluiranje, pri čemer smo dobili 434 mg trans-2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-Lasparaginil]amino]2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro-(4aR,8aS)izokinolin-3(S)-karboksamida v obliki belega trdnega materiala iz metanola/dietiletra; MS: m/e 650 [M+H]⁺.

Trans-2-[3(S)-amino]2(R)-hidroksi-4-fenil-butil]-N-terc.-butil-dekahidro-(4aR,8aS)izokinolin-3(S)-karboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili kot sledi:

(i) Raztopino 440 mg trans-N-terc.-butil-dekahidro-(4aR,8aS)-izokinolin-3(S)karboksamida in 549 mg 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana v 6 ml etanola smo mešali 7 ur pri 60 °C. Dodali smo 54 mg 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana in raztopino mešali 16 ur pri 20 °C. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu, ob uporabi sistema H za eluiranje, pri čemer smo dobili 771 mg trans-2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro-(4aR,8aS)-izokinolin-3(S)-karboksamida, v obliki belega trdnega materiala;

MS: m/e 536 [M+H]+.

(ii) Raztopino 747 mg trans-2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro-(4aR,8aS)-izokinolin-3(S)-karboksamida v 40 ml etanola smo hidrogenirali nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C in pod atmosferskim tlakom v teku 5 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 561 mg trans-2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]N-terc.-butil-dekahidro-4aR,8aS)-izokinolin-3(S)-karboksamida v obliki bledorjavega trdnega materiala.

Primer 82

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 276 mg 1-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida, 167 mg l-benziloksi-2-naftalenkarboksilne kisline, 81 mg hidroksibenzotriazola, 69 mg N-etilmorfolina in 136 mg dicikloheksilkarbodiimida dobili, po kromatografiji na sillkagelu ob uporabi diklorometana/metanola (9:1) za eluiranje, 97 mg l-[3(S)-[[N-(l-benziloksi-2-naftoil)-L-asparaginil]amino]2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida v obliki belega trdnega materiala iz metanola/dietiletra; MS: m/e 722 [M+H]⁺.

Primer 83

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 79, smo iz 119 mg 1-[3(S)-[[N(benziloksi-2-naftoil)-L-asparaginil]amino]2(R)-hidroksi-4-fenil-butil]-N-terc.-butil2(S)-piperidinkarboksamida dobili po kromatografiji na aktiviranem magnezijevem silikatu ob uporabi diklorometana/metanola (9:1) za eluiranje, 67 mg N-terc.-butil-1[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(l-hidroksi-2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]2(S)-piperidin-karboksamida v obliki belega trdnega materiala;

MS: m/e 631 [M+H]+.

Primer 84

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 276 mg 1-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida, 183 mg 3-(benziloksikarbonil)-2-naftalenkarboksilne kisline, 81 mg hidroksibenzotriazola, 138 mg N-etilmorfolina in 136 mg dicikloheksilkarbodiimida, po kromatografiji na sillkagelu ob uporabi sistema J za eluiranje, dobili 98 mg N-terc,butil-l-3(S)-[l(S)-(2,3-dihidro-l,3-diokso-lH-benz[f]izoindol-2-il)-3-karbamoilpropionamido]-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-2(S)-piperidinkarboksamida;

MS: m/e 642 [M+H]+

Primer 85

Raztopino 650 mg N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N^-terc.-butil-Lprolinamida in 538 mg N-(benziloksikarbonil)-S-metil-L-cisteina v 20 ml suhega tetrahidrofurana smo ohladili v zmesi led/sol. Dodali smo 270 mg hidroksibenzotriazola, 230 mg N-etilmorfolina in 412 mg dicikloheksilkarbodiimida in zmes mešali 16 ur. Zmes smo razredčili z etil acetatom in filtrirali. Filtrat smo izprali z vodno raztopino natrijevega hidrogen karbonata in raztopino natrijevega klorida. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu ob uporabi sistema G za eluiranje, pri čemer smo dobili 800 mg N2-[3(S)-[[N(benziloksikarbonil)-S-metil-L-cisteinil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.butil-L-prolinamida; MS: m/e 585 [M+H]+.

N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili na analogen način kot izhodni material v Primeru 33, le z uporabo Nl-terc.-butil-L-prolinamida v odstavku (iii) namesto N^fenil-L-prolinamida.

Primer 86

Raztopino 193 mg N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-S-metil-L-cisteinil]amino]2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v 2 ml metanola smo ohladili na -70° C . Dodali smo raztopino 62 mg 3-klorperbenzojske kisline v 5 ml metanola in zmes mešali 30 minut pri -70 °C. Nato smo topilo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu z uporabo sistema G za eluiranje, pri čemer smo dobili 62 mg N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-3-(metilsulfinil)-L-alanil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.butil-L-prolinamida v obliki zmesi 1:1 diastereomerov; MS: m/e 601 [M+H]⁺.

Primer 87

Raztopino 450 mg N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-S-metil-L-cisteinil]amino]2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.butil-L-prolinamida v 4 ml metanola smo ohladili do -70 °C. Dodali smo po deležih v teku 10 minut 166 mg 3-klorperbenzojske kisline, raztopino smo mešali 15 minut na -70 °C in nato pustili segreti do 20 °C. Raztopino smo ponovno ohladili na -70 °C, dodali 33 mg 3-klorperbenzojske kisline in zmes mešali 30 minut pri -70 °C. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek razslojili med diklorometan in 2N raztopino natrijevega hidroksida. Organsko fazo smo uparili in ostanek kromatografirali na silikagelu ob uporabi sistema G za eluiranje, pri čemer smo dobili 100 mg N²-oksida N²-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-3(metilsulfinil)-L-alanil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida (diastereomer A), MS: m/e 617 [M+H]⁺ in 154 mg N²-oksida N²-[3(S)-[[N(benziloksikarbonil)-3-(metilsulfinil)-L-alanil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nlterc.-butil-L-prolinamida (diastereomer B); MS: m/e 617 [M+H]⁺.

Primer 88

Raztopino 154 mg N²-oksida N²-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-3-(metilsulfinil)-Lalanil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida (dva diastereomera) v 5 ml metanola smo obdelali s 84 mg 3-klorperbenzojske kisline in raztopino mešali 16 ur pri 20 °C. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek razslojili med diklorometan in 2M raztopino natrijevega hidroksida. Organsko fazo smo uparili in ostanek kristalizirali iz etil acetata/n-heksana, pri čemer smo dobili 28 mg monohidrata N²-oksida N²-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-3-(metilsulfonil)-Lalanil]-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida;

MS: m/e 633 [M+H]+.

Primer 89

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 400 mg cis-l-[3(S)-amino2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro-2(R ali S)-kinolinkarboksamida, 266 mg N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, 226 mg dicikloheksilkarbodiimida, 135 mg hidroksibenzotriazola in 115 mg N-etilmorfolina dobili, po končani kromatografiji na silikagelu ob uporabi diklorometana/metanola (94:6) za eluiranje, 225 mg cis-1[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-dekahidro-2(R ali S)-kinolinkarboksamida v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 650 [M+H]⁺.

Cis- l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro-2(R ali S)kinolinkarboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili kot sledi:

(i) Raztopino 2.376 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana in 1.904 g cis-N-terc.-butil-dekahidro-2(R,S)-kinolinkarboksamida v 32 ml etanola smo mešali 24 ur pri 80 °C. V dveh delih smo dodali 0.474 g 3(S)-(benziloksiformamido)l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana in zmes mešali pri 80 °C 5 ur. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu, tako, da smo uporabili za eluiranje diklorometan/metanol (97.5:2.5), pri čemer smo dobili 1.17 g cis-l-[3(S)67 (benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbuti]-N-terc.-butil-dekahidro-2(R ali S)kinolinkarboksamida (izomer A) v obliki belega trdnega materiala iz dietiletra/nheksana; MS: m/e 536 [M+H]⁺ in 1.146 g cis-l-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)hidroksi-4-fenilbuti]-N-terc.-butil-dekahidro-2(R ali S)-kinolinkarboksamida (izomer B) v obliki bledo-rumene gume; MS: m/e 536 [M+H]⁺.

(ii) Raztopino 0.535 g cis-l-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbuti]N-terc.-butil-dekahidro-2(R ali S)-kinolinkarboksamida (izomer B) smo hidrogenirali v 25 ml etanola nad 10 % paladijem na oglju pri 20 °C in pod atmosferskim tlakom v teku 16 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 400 mg cis-l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro2(R ali S)-kinolinkarboksamida v obliki brezbarvne gume.

Primer 90

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 27 mg terc.-butil estra N3(S)-[[-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina in 11.3 mg 2-indolkarboksilne kisline dobili 15 mg terc.-butil estra N-[3(S)-[[N-(2-indolilkarbonil)-Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-L-prolina; MS: m/e 592 [M+H]⁺.

Primer 91

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 72, smo iz 240 mg 3-[3(S)-amino-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-tetrahidro-2H-l,3-tiazin-4(R in S)-karboksamida in 234 mg sukcinimidnega estra N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, dobili 162 mg 3-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-tetrahidro-2H-l,3-tiazin-4(R in S)-karboksamida v obliki zmesi dveh diastereomerov. S Flash kromatografijo na silikagelu, ob uporabi 3 % metanola v diklorometanu za eluiranje, smo dobili 20 mg manj polarnega diastereomera (izomer A); MS: m/e 614 [M+H]⁺, in z uporabo 5 % metanola v diklorometanu 32 mg bolj polarnega diastereomera (izomer B); MS: m/e 614 [M+H]⁺.

3-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-tetrahidro-2H-l,3-tiazin-4(R in S)-karboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili iz znane spojine tetrahidro-2H-l,3-tiazin-4(R in S)-karboksilne kisline s pomočjo N-benziloksikarbonilacije na znan način in nato z reakcijo na analogen način, kot smo opisali v primeru 72 (i)-(iv), ter z naalkaljenjem dobljenega dihidrobromida s pomočjo raztopine natrijevega hidrogen karbonata.

Primer 92

0.122 g N-(benziloksikarbonil)-3-ciano-L-alanina smo raztopili v 2 ml suhega dimetilformamida. Raztopino smo mešali in ohladili v kopeli led/sol in obdelali z 0.066 g hidroksibenzotriazola in 0.1 g dicikloheksilkarbodiimida. Zmes smo mešali 5 minut, nato pa obdelali z 0.163 g N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nlterc.-butil-L-prolinamida v 2.5 ml suhega diklorometana. Zmes smo pustili segreti do sobne temperature in nato mešali preko noči. Dobljeno dicikloheksilsečnino smo odločili s filtriranjem in izprali z metilenkloridom. Združen filtrat in izpirke smo uparili pri 40 °C v vakuumu, pri čemer smo dobili olje, ki smo ga razslojili med etil acetat in vodo. Organsko fazo smo izprali zaporedoma z vodno raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida ter osušili nad natrijevim sulfatom. Topilo smo odstranili z uparjenjem, pri čemer smo dobili olje, ki smo ga kromatografirali na silikagelu ob uporabi 14 % metanola v diklorometanu za eluiranje. Na ta način smo dobili 50 mg produkta, ki smo ga prekristalizirali iz dietiletra/n-heksana, pri čemer smo dobili 0.045 g hemihidrata N^-[3(S)-[[N(benziloksikarbonil)-3-ciano-L-alanil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenil-butil-Nl-terc,butil-L-prolinamida v trdni obliki s tališčem 65-70 °C (zmehčanje).

N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili kot sledi:

(i) Raztopino 0.425 g 3(S)-(benzilokosiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana in 0.244 g terc.-butilamida L-prolina v 10 ml suhega izopropanola smo segrevali 20 ur na 80 °C. Topilo smo odstranili z uparjenjem v vakuumu in ostanek kromatografirali na silikagelu, ob uporabi 5 % metanola v diklorometanu za eluiranje. Dobili smo 0.44 g N^-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-Lprolinamida v obliki bele pene.

(ii) Raztopino 0.46 g N^'[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nlterc.-butil-L-prolinamida v 40 ml etanola smo hidrogenirali nad 40 mg 10 % paladija na oglju pri sobni temperaturi in pod atmosferskim tlakom v teku 1.5 ur, pri čemer smo dobili 0.33 g N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-Lprolinamida v obliki gume, ki kristalizira med stanjem.

Primer 93

0.167 g N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida smo raztopili v 10 ml suhega dimetilformamida in raztopino mešali pri 0 °C ob dodajanju 0.191 g trdnega sukcinimidnega estra N-(benziloksikarbonil)-L-fenil-glicina. Dobljeno raztopino smo mešali 1 uro pri 0 °C in nato hranili preko noči pri 4 °C. Nato smo raztopino uparili v vakuumu in ostanek razslojili med etil acetat in vodo. Organsko fazo smo izprali z nasičeno vodno raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida. Vodne faze smo povratno ekstrahirali z etil acetatom. Združene organske faze smo osušili nad natrijevim sulfatom in uparili, pri čemer smo dobili gumo, ki smo jo kromatografirali na silikagelu ob uporabi acetona/adiklorometana (1:1) za eluiranje. Združene frakcije, ki so vsebovale produkt, smo uparili in dobili gumo, ki smo jo ponovno uparili z dietiletrom, pri čemer smo dobili 0.127 g trdnega materiala. Ta material smo ekstrahirali z diklorometanom in združene organske faze uparili, da smo dobili trden material, ki smo ga z dietiletrom triturirali. Tako smo dobili 0.05 g N2-[3(S)-[[N(benziloksikarbonil)-L-fenilglicil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-Lprolinamida v trdni obliki s tališčem 101-103 °C.

Primer 94

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 92, smo iz 0.15 g N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanina, 0.066 g hidroksibenzotriazola, 0.1 g dicikloheksilkarbodiimida in 0.166 g N^-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N⁴-terc.-butil-Lprolinamida, dobili 0.1 g N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-fenilalanil]amino]2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki belega trdnega materiala s tališčem 78-80 °C.

Primer 95

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 92, smo iz 0.152 g N-(benziloksikarbonil)-3-cikloheksil-L-alanina, 0.066 g hidroksibenzotriazola, 0.1 g dicikloheksilkarbodiimida in 0.166 g N^-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.butil-L-prolinamida dobili 0.1 g N2-[3(S)-[[-N-(benziloksikarbonil)-3-cikloheksil-Lalanil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida s tališčem 71 do 75 °C.

Primer 96

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 92, smo iz 0.1 g N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, 0.05 g hidroksibenzotriazola, 0.078 g dicikloheksilkarbodiimida in 0.17 g l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R in S)-piperazinkarboksamida, po trituriranju z dietiletrom, dobili 0.11 g belega trdnega materiala. Dobljeni material smo prečistili s Flash kromatografijo na silikagelu, ob uporabi 10 % metanola v diklorometanu za eluiranje. Proizvod, ki smo ga prvega eluirali (izomer A), je bil 0.043 g 1-[3(S)-[[N(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R ali S)-piperazinkarboksamida; MS: m/e 697 [M+H]⁺. Drugi eluirani proizvod (izomer B) je bil 0.007 g l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R ali S)-piperazinkarboksamida; MS:m/e 697 [M+H]⁺.

l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R in S)-piperazinkarboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili kot sledi:

(i) 0.65 g 2-piperazinkarboksilne kisline smo raztopili v zmesi 5 ml vode in 5 ml dioksana, obdelali z 0.42 g natrijevega hidrogen karbonata in mešali 5 minut. Dodali smo 1.09 g di(terc.-butil)dikarbonata in zmes mešali preko noči. Zmes smo koncentrirali z uparjenjem in ostanek temeljito ekstrahirali s pomočjo etil acetata. Postopek smo ponovili s pH 6 in pH 4. Vodni sloj s pH 4 smo nato ekstrahirali z nbutanolom. Združene organske ekstrakte smo osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili, da smo dobili 0.34 g 4-(terc.-butoksikarbonil)-2-piperazinkarboksilne kisline v obliki bledo-rumenega trdnega materiala s tališčem 226-229 °C.

(ii) 0.1 g 4-(terc.-butoksikarbonil)-piperazin-2-karboksilne kisline smo raztopili v 10 ml IN raztopine natrijevega hidroksida, ohladili do 0 °C in obdelali z 0.2 g benzilkloroformiata. Zmes smo pustili segreti na sobno temperaturo in nato mešali čez noč. Zmes smo ekstrahirali z dietiletrom. Nato smo vodno fazo nakisali do pH 4 s pomočjo 2M klorvodikove kisline in ekstrahirali z etil acetatom, pri čemer smo dobili 0.06 g l-(benziloksikarbonil)-4-(terc.-butoksikarbonil)-2-piperazinkarboksilne kisline v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 365 [M+H]⁺.

(iii) 0.285 g l-(benziloksikarbonil)-4-(terc.-butoksikarbonil)-2-piperazinkarboksilne kisline smo raztopili v 10 ml suhega tetrahidrofurana in ohladili do -15 °C ob mešanju. Nato smo dodali 0.09 g N-etilmorfolina in nato 0.107 g izobutilkloroformiata. To zmes smo mešali 5 minut in nato po kapljicah dodali 0.2 g terc.butilamina. Z mešanjem smo nadaljevali čez noč in zmes nekaj časa pustili, da je dosegla sobno temperaturo. Topilo smo odstranili z uparjenjem in dobili svetlo-rjavo olje, ki smo ga razslojili na etil acetat in vodo. Organsko fazo smo izprali zapored z 10 % raztopino citronske kisline, raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida, nato pa osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom. Topilo smo odstranili z uparjenjem, pri čemer smo dobili 0.185 g l-(benziloksikarbonil)-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2-piperazinkarboksamida v obliki svetlo-rjavega olja; MS: m/e 420 [M+H]⁺.

(iv) 1.1 g l-(benziloksikarbonil)-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2-piperazinkarboksamida smo raztopili v 40 ml etanola. Dodali smo 0.1 g 10 % paladija na oglju in zmes hidrogenirali pri sobni temperaturi in pod atmosferskim tlakom v teku 2 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem. Filtrat smo uparili, pri čemer smo dobili 0.74 g surovega produkta, ki smo ga prečistili s hitro Flash kromatografijo na silikagelu, ob uporabi 5 % metanola v diklorometanu za eluiranje. Po uparjenju topil smo dobili 0.44 g 4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2-piperazinkarboksamida v obliki olja; MS: m/e 286 [M+HJ+.

(v) 0.395 g 4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2-piperazinkarboksamida smo raztopili v 50 ml suhega izopropanola in obdelali z 0.413 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana. Zmes smo mešali 72 ur pri sobni temperaturi. Topilo smo odstranili z uparjenjem in dobili rjavo poltekočo snov, ki smo jo prečistili s Flash kromatografijo na silikagelu, pri čemer smo za eluiranje uporabili 5 % metanol v diklorometanu. Dobili smo 0.234 g l-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R ali S)-piperazinkarboksamida v obliki zmesi diastereomerov.

(vi) 0.234 g l-[3(S)-(benziIoksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R in S)-piperazinkarboksamida smo raztopili v 20 ml etanola in obdelali s 100 mg 10 % paladija na oglju. Zmes smo hidrogenirali pri sobni temperaturi in pod atmosferskim tlakom v teku 2.5 ure. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 0.17 g l-[3(S)-amino2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R in S)piperazinkarboksamida, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega prečiščevanja.

Primer 97

0.035 g l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R ali S)-piperazinkarboksamida (izomer A) smo raztopili v 5 ml etil acetata in obdelali s 5 kapljicami nasičene raztopine klorovodika v etil acetatu. Zmes smo pustili stati pri sobni temperaturi 1 uro in nato obdelali tako, da smo dobili po prekristalizaciji iz etanola/dietiletra, 0.024 g hidroklorida l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)hidroksi-4-fenil-butil]-N-terc.-butil-2(R ali S)-piperazinkarboksamida (izomer A) s tališčem 175 do 180 °C.

Primer 98

0.01 g l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R ali S)-piperazinkarboksamida (izomer B) smo obdelali s nasičeno raztopino klorovodika v etil acetatu, kot smo opisali v Primeru 97, pri čemer smo dobili 0.007 g hidroklorida 1-[3(S)-[[N(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil(2R ali S)-piperazinkarboksamida (izomer A) v obliki zelo higroskopnega trdnega materiala; MS: m/e 597 [M+H]⁺.

Primer 99

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 92, smo iz 0.091 g N-(benziloksikarbonil)-3-ciano-L-alanina, 0.05 g hidroksibenzotriazola, 0.076 g dicikloheksilkarbodiimida in 0.164 g l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R,S)-piperazinkarboksamida dobili 0.075 g zmesi 60:40 diastereomerov l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-3-ciano-L-alanil]-amino]-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2-piperazin-karboksamida v obliki svetlo-rjavega trdnega materiala s tališčem 80-85 °C.

Primer 100

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 92, smo iz 0.108 g 3-ciano-N-(2naftoil)-L-alanina, 0.054 g hidroksibenzotriazola, 0.083 g dicikloheksilkarbodiimida in 0.18 g l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.butil-2(R,S)-piperazinkarboksamida dobili 0.015 g zmesi 1:1:1:1 izomerov 4-(terc.73 butoksikarbonil)-N-terc.-butil-l-[3(S)-[[3-ciano-N-(2-naftoil)-L-alanil]-amino]-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-2(R,S)-piperazinkarboksamida v trdni obliki;

MS: m/e 699 [M+H]+.

3-ciano-N-(2-naftoil)-L-alanin, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili kot sledi:

0.114 g 3-ciano-L-alanina smo raztopili v 5 ml IN raztopine natrijevega hidroksida in obdelali z 0.285 g 2-naftoilklorida pri 0 °C. Po nakisanju z 2M klorovodikovo kislino in Flash kromatografiji na silikagelu ob uporabi 25 % metanola v diklorometanu za eluiranje, smo dobili 0.049 g 3-ciano-N-(2-naftoil)-L-alanina s tališčem 95-100 °C.

Primer 101

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 92, smo iz 0.048 g 1-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-4-terc.-butil2(R in S)-piperazinkarboksamida, 0.015 g kinaldinske kisline, 0.012 g hidroksibenzotriazola in 0.018 g dicikloheksilkarbodiimida dobili po temeljiti Flash kromatografiji na silikagelu ob uporabi 10 % metanola v diklorometanu za eluiranje, 0.004 g čistega izomera A, t.j. 4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-l-[2(R)hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]butil]-2(R ali S)piperazinkarboksamida, MS: m/e 718 [M+H]⁺in 0.003 g izomera B, t.j. 4-(terc.butoksikarbonil)-N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-Lasparaginil]amino]butil]-2(R ali S)-piperazinkarboksamida, MS: m/e 718 [M+H]⁺.

1- [3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-4terc.-butil-2(R in S)-piperazinkarboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pripravili kot sledi:

0.06 g l-[3(S)-[[-N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2(R,S)-piperazinkarboksamida (t.j.

produkta iz Primera 96 pred odločenjem izomerov A in B) smo raztopili v 20 ml etanola. Dodali smo 0.03 g paladija na oglju in zmes hidrogenirali pri sobni temperaturi in pod atmosferskim tlakom v teku 2 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 0.048 g 1-[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4-(terc.-butoksikarbonil)-4-terc.-butil2- piperazinkarboksamida, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega prečiščevanja.

Primer 102

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 92, smo iz 0.151 g N-(benziloksikarbonil)-3-ciano-L-alanina, 0.082 g hidroksibenzotriazola, 0.126 g dicikloheksilkarbodiimida in 0.212 g l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)piperidinkarboksamida, dobili po prekristalizaciji iz dietiletra/n-heksana 0.085 g 1[3(S)-[[-N-(benziloksikarbonil)-3-ciano-L-alanil]amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida, v obliki belega trdnega materiala s tališčem 74-77 °C.

Primer 103

Na analogen način, kot smo pisali v Primeru 92, smo iz 0.372 g N-(benziloksikarbonil)-L-aspartamske kisline, 0.189 g hidroksibenzotriazola, 0.288 g dicikloheksilkarbodiimida in 0.54 g N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-(2-naftil)-butil]Nl-terc.-butil-L-prolinamida dobili po prekristalizaciji iz izopropanola/n-heksana (1:4) 0.105 g N2[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi4-(2-naftil)butil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida s tališčem 149-151 °C.

N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-(2-naftil)-butil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili kot sledi:

(i) 5 g 3-(2-naftil)-L-alanina in 0.93 g natrijevega hidroksida v 12 ml vode smo ohladili do 0 °C in mešali ob istočasnem dodajanju raztopine 1.4 g natrijevega hidroksida v 9 ml vode in 5 ml benzilkloroformiata v teku 10 minut. Nadaljevali smo z mešanjem še 2 uri, nato smo zmes pustili segreti do sobne temperature. Zmes smo razredčili z vodo in ekstrahirali z dietiletrom. Vodni sloj smo nakisali s 4 ml koncentrirane klorovodikove kisline in ekstrahirali z etil acetatom. Etil acetatne ekstrakte smo ponovno izprali z vodo. Združene etil acetatne ekstrakte smo osušili nad natrijevim sulfatom, prefiltrirali, uparili in triturirali s pomočjo petroletra (vrelišče 40-60 °C), pri čemer smo dobili 7.5 g N-(benziloksikarbonil)-3-(2-naftil)-L-alanina s tališčem 109-111 OC.

(ii) Raztopino 7.5 g N-(benziloksikarbonil)-3-(2-naftil)-L-alanina v 20 ml suhega tetrahidrofurana smo mešali pri -8 °C in obdelali s 3.5 ml N-etilmorfolina in nato s 4 ml izobutilkloroformiata, ki smo ga po kapljicah dodajali v teku 10 minut. Zmes smo mešali pri -8 °C še 20 minut in dodali hladen (0 °C) brezvodni dietileter. Dobljeno belo usedlino smo odfiltrirali, hladni filtrat pa po kapljicah dodajali k 100 ml premešane, hladne (-8 °C) raztopine diazometana v dietiletru. Prenehali smo s hlajenjem in raztopino mešali 3 ure. Med mešanjem smo dodajali vodo. Organsko fazo smo izprali zaporedoma z vodo, raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida in nato osušili nad natrijevim sulfatom. Topilo smo odstranili z uparjenjem, pri čemer smo dobili rumeno olje, iz katerega smo po uparjenju s petroletrom (vrelišče 40-60 °C) dobili 9.4 g trdnega materiala. Material smo triturirali s pomočjo dietiletra in ga shranili v hladilniku preko noči pri 4° C, pri čemer smo dobili 3.2 g benzil [3-diazo-l(S)-[(2-naftil)metil]-2-oksopropil]karbamata.

(iii) 3.13 g benzil [3-diazo-l(S)-[(2-naftil)metil]-2-oksopropil]karbamata smo raztopili v 200 ml brezvodnega dietiletra in mešali ob prepihavanju plinastega klorovodika skozi raztopino. Po 1 uri je prvotna usedlina postala zrnata in pri tem je izhajal prebitni klorovodik. Topilo smo odstranili z uparjenjem pri sobni temperaturi in dobljeni trdni beli material smo osušili in ostranili klorovodik v vakuumu nad natrijevim hidroksidom v teku 2 ur. Dobljeni benzil [3-kloro-l(S)-[(2-naftil)-metil]-2oksopropiljkarbamat smo takoj uporabili v naslednji fazi.

(iv) Zgornji benzil [3-kloro-l(S)-[(2-naftil)-metil]-2-oksopropil]karbamat smo raztopili v 100 ml 10 % vodnega tetrahidrofurana, ohladili do 0 °C in obdelali z 0.456 g natrijevega borhidrida, ki smo ga previdno dodajali v trdni obliki. Zmes smo mešali 1 uro pri 0 °C in nato pri sobni temperaturi preko noči. Zmes smo uparili in dobili bel trden material, ki smo ga razslojili med diklorometanom in vodo. Premešano zmes smo previdno nakisali do pH 1 s koncentrirano klorovodikovo kislino. Fazi smo oddvojili in vodno fazo ponovno ekstrahirali z diklorometanom. Združene organske faze smo osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili, pri čemer smo dobili 4.325 g surovega produkta s tališčem 155-160°C. Surovi produkt smo ekstrahirali z vrelim n-heksanom. Po odstranitvi topila z uparjenjem smo ostanek prekristalizirali iz etil acetata/n-heksana, pri čemer smo dobili 1.046 g čistega benzil[3-kloro-2(S)-hidroksi-l(S)-[(2-naftil)metil]propil]karbamata s tališčem 173-174°C.

(v) 1.02 g benzil [3-kloro-2(S)-hidroksipropil-l(S)-[(2-naftil)metil]propil]karbamata smo mešali v 40 ml etanola s 4 ml 0.7M raztopine kalijevega hidroksida v etanolu v teku 0.75 ur. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek razslojili med diklorometan in vodo. Organsko fazo smo osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili, pri čemer smo dobili bel trden material, ki smo ga prekristalizirali iz etil acetata/n-heksana. Dobili smo 0.879 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2(S)epoksi-4-(2-naftil)butana v obliki belega trdnega materiala s tališčem 115-116°C.

(vi) 0.465 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-(2-naftil)butana in 0.251 g terc.-butilamida L-prolina v 10 ml suhega izopropanola smo segrevali 23 ur pri 80 °C in nadalje obdelali, kot smo opisali v Primeru 92(i), pri čemer smo dobili 0.483 g N^[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-(2-naftil)-butil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki bele pene s tališčem okoli 75-85 °C.

(vii) Raztopino 0.725 g N2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-(2-naftil)butil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida smo raztopili v 25 ml etanola in hidrogenirali pri sobni temperaturi in pod atmosferskim tlakom nad 0.5 g 10 % paladija na oglju v teku 20 ur. Katalizator smo odfiltrirali in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 0.54 g N^-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-L-(2-naftil)-butil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki bele pene, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega čiščenja.

Primer 104

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 92, smo iz 0.133 g N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, 0.068 g hidoksibenzotriazola, 0.103 g dicikloheksilkarbodiimida in 0.16 g N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil4(R)-hidroksi-L-prolinamida, le z uporabo diklorometana namesto etil acetata kot ločilnega sredstva in 20 % metanola v diklorometanu za kromatografijo, in s ponovnim uparjenjem z dietiletrom, dobili 0.1 g N2-[3(S)-(benziloksikarbonil)-Lasparaginil-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(R)-hidroksi-L-prolinamida s tališčem 115 °C.

N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(R)-hidroksi-L-prolinamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili kot sledi:

(i) 2.65 g N-(benziloksikarbonil)-4(R)-hidroksi-L-prolina smo raztopili v 10 ml suhega tetrahidrofurana in ohladili do -10 °C z mešanjem z magnetnim mešalom. Dodali smo 1.15 g N-etilmorfolina in takoj nato 1.36 g izobutilkloroformiata. Zmes smo mešali 30 minut pri -10 °C in nato dodali 2.19 g terc.-butilamina. Nadaljevali smo z mešanjem pri -10 °C še 1 uro in nato zmes pustili stati 2 uri, da se je segrela do sobne temperature in pustili stati še 2 uri. Topilo smo odstranili z uparjenjem v vakuumu in ostanek razslojili med etil acetat in vodo. Organski sloj smo izprali z 10 % raztopino citronske kisline in raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nato osušili nad natrijevim sulfatom. Topilo smo odstranili z uparjenjem, da smo dobili trden material, ki smo ga triturirali s pomočjo dietiletra in odfiltrirali. Dobili smo 2.23 g surovega produkta, ki smo ga prekristalizirali iz etil acetata/dietiletra, pri čemer smo dobili 1.57 g N2-(benziloksikarbonil)-Nl-terc.-butil-4(R)-hidroksi-L-prolinamida s tališčem 128-130 °C.

(ii) 0.224 g N2-(benziloksikarbonil)-Nl-terc.-butil-4(R)-hidroksi-L-prolinamida smo raztopili v 20 ml etanola in hidrogenirali nad 50 mg 10 % paladija na oglju pri sobni temperaturi in pod atmosferskim tlakom v teku 2 ur. Katalizator smo odfiltrirali in filtrat uparili, da smo dobili 0.13 g Nl-terc.-butil-4(R)-hidroksi-L-prolinamida, ki smo ga uporabili v naslednji fazi brez nadaljnjega prečiščevanja.

(iii) 0.13 g Nl-terc.-butil-4(R)-hidroksi-L-prolinamida in 0.208 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana v 10 ml suhega izopropanola smo segrevali 24 ur pri 80 °C. Z nadaljnjo obdelavo na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 33(iii), smo dobili po trituriranju s pomočjo dietiletra 0.236 g N2-[3(S)(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(R)-hidroksi-Lprolinamida v obliki belega želatinastega trdnega materiala s tališčem pri 135 °C.

(iv) 0.226 g N^-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.butil-4(R)-hidroksi-L-prolinamida smo raztopili v 20 ml etanola in hidrogenirali nad 40 mg 10 % paladija na oglju pri sobni temperaturi in pod atmosferskim tlakom v teku 2 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 0.16 g N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(R)-hidroksiL-prolinamida v obliki gume, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega prečiščevanja.

Primer 105

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 92, le z uporabo diklorometana namesto etil acetata kot sredstva za razslojevanje, ob uporabi 20 % metanola v diklorometanu za kromatografijo in z izvedbo ponovnega uparjenja z dietiletrom, smo iz 0.067 g N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, 0.034 g hidroksibenzotriazola, 0.052 g dicikloheksilkarbodiimida in 0.08 g N^-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(S)-hidroksi-L-prolinamida dobili 0.03 g N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil-]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(S)hidroksi-L-prolinamida v obliki bledo-rumenega trdnega materiala s tališčem okoli 140 °C.

N^-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(S)-hidroksi-L-prolinamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili kot sledi:

(i) 1.7 g N-(benziloksikarbonil)-4(S)-hidroksi-L-prolina smo z mešanjem raztopili v 15 ml suhega dimetilformamida in raztopino ohladili na 0 °C. Dodali smo 0.817 g Nhidroksisukcinimida in zmes mešali, dokler ni dosegla temperature 20 °C. Nato smo zmes mešali preko noči pri sobni temperaturi. Dobljeno dicikloheksilsečnino smo odfiltrirali in filtrat ohladili do -10 °C. Nato smo ob mešanju dodali 2 ml terc.butilamina. Z mešanjem smo nadaljevali in istočasno zmes pustili segreti na sobno temperaturo in nadaljevali z mešanjem preko noči. Izločeni trdni material smo odfiltrirali, filtrat uparili v vakuumu in dobili gumo, ki smo jo razslojili med etil acetat in vodo. Organski sloj smo izprali z 10 % raztopino citronske kisline in nato z nasičeno raztopino natrijevega hidrogen karbonata. Vodne faze smo povratno ekstrahirali dvakrat z etil acetatom. Združene organske faze smo osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili, pri čemer smo dobili trden material, ki smo ga prečistili s Flash kromatografijo na silikagelu, ob uporabi 5 % metanola v diklorometanu za eluiranje. Dobili smo 1.36 g surovega produkta, ki smo ga prekristalizirali iz etil acetata/dietiletra/petroletra (vrelišče 40-60 °C) (1:4:4) in nato shranili pri 4° C v hladilniku Čez noč. Tako smo dobili 1.127 g N^*(benziloksikarbonil)-Nl-terc.-butil-4(S)-hidroksi-L-prolinamida s tališčem 131-132 °C.

(ii) 0.224 g N2'(benziloksikarbonil)-Nl-terc.-butil-4(S)-hidroksi-L-prolinamida smo hidrogenirali na analogen način, kot smo opisali v Primeru 104(ii), pri čemer smo dobili 0.135 g Nl-terc.-butil-4(S)-hidroksi-L-prolinamida v obliki trdne snovi podobne gumi, ki smo jo uporabili v naslednji fazi brez predhodnega čiščenja.

(iii) 0.135 g Nl-terc.-butil-4(S)-hidroksi-L-prolinamida in 0.208 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenil-butana v 10 ml suhega etanola smo mešali 4 dni pri sobni temperaturi. Zmes smo nadalje obdelali, kot smo opisali v Primeru 92(i), le da smo kromatografijo izvedli tako, da smo za eluiranje uporabili 10 % metanol v diklorometanu. Dobili smo 0.11 g N2-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(S)-hidroksi-L-prolinamida v obliki pene.

(iv) 0.11 g N^-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil4(S)-hidroksi-L-prolinamida smo raztopili v 10 ml etanola in hidrogenirali nad 20 mg 10 % paladija na oglju pri sobni temperaturi in pod atmosferskim tlakom v teku 2 ur. Katalizator smo odfiltrirali in filtrat uparili, da smo dobili 0.08 g N2-[3(S)-amino2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(S)-hidroksi-L-prolinamida v obliki gume, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega prečiščevanja.

Primer 106

Na analogen način, kot smo ga opisali v Primeru 92, vendar ob uporabi diklorometana namesto etil acetata kot sredstva za razslojevanje, ob uporabi 20 % metanola v diklorometanu za kromatografijo in z izvršitvijo ponovnega uparjenja z dietiletrom, smo iz 0.105 g N-(benziloksikarbonil)-L-asparagina, 0.054 g hidroksibenzotriazola, 0.082 g dicikloheksilkarbodiimida in 0.17 g N^-[3(S)-amino-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-4(R)-terc.-butoksiformamido-Nl-terc.-butil-L-prolinamida dobili 0.045 g N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil-]amino]-2(R)hidroksi-4-fenilbutil]-4(R)-terc.-butoksiformamido)-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki umazano-belega trdnega materiala s tališčem 170-175 °C.

N2-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4(R)-terc.-butoksiformamido-Nl-terc.butil-L-prolinamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili kot sledi:

(i) 0.32 g N2-(benziloksikarbonil)-Nl-terc.-butil-4(S)-hidroksi-L-prolinamida smo raztopili v 5 ml suhega piridina, ohladili do 0 °C, mešali in obdelali z dokapavanjem 0.82 ml metansulfonilklorida. Raztopino smo mešali pri 0 °C še 2 uri. Dobljeno zmes smo izlili v zmes ledu in vode in nato ekstrahirali z etil acetatom. Združene organske ekstrakte smo izprali z 2M klorovodikovo kislino in z nasičeno raztopino natrijevega hidrogen karbonata, nato pa osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom. Po uparjenju smo dobili 0.5 g N^-(benziloksikarbonil)-Nl-terc.-butil-4(S)-(metansulfoniloksi)-L-prolinamida v obliki olja, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega čiščenja.

(ii) 0.5 g N2-(benziloksikarbonil)-Nl-terc,-butil-4(S)-(metansulfoniloksi)-L-prolinamida smo raztopili v 10 ml suhega dimetilformamida in obdelali z 0.330 g natrijevega azida. To heterogeno zmes smo mešali in segrevali pri 75 °C v teku 18 ur. Zmes smo uparili v oljni vakuumski črpalki tako, da smo dobili trden material, ki smo ga razslojili na etil acetat in vodo. Etil acetatno fazo smo izprali z nasičeno raztopino natrijevega klorida in osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom. Topilo smo odstranili z uparjenjem in dobili 0.345 g N^-(benziloksikarbonil)-4(R)-azido-Nlterc.-butil-L-prolinamida v obliki gume.

(iii) 0.345 g N^-(benziloksikarbonil)-4(R)-azido-Nl-terc.-butil-L-prolinamida smo raztopili v 5 ml suhega tetrahidrofurana in raztopino uparili. Ostanek v obliki gume smo raztopili v 10 ml suhega tetrahidrofurana in obdelali v atmosferi dušika z 0.262 g trifenilfosfina. Dobljeno raztopino smo pustili stati v atmosferi dušika pri sobni temperaturi v teku 18 ur. Dodali smo 0.027 g vode in raztopino pustili stati 24 ur pri sobni temperaturi. Nato smo topilo odstranili z uparjenjem in ostanek v obliki gume razslojili med vodo in dietileter. Vodno fazo smo povratno ekstrahirali z dietiletrom. Nato smo vodno fazo uparili, pri čemer smo dobili 0.09 g N2-(benziloksikarbonil)4(R)-amino-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki gume. Pustili smo stati preko noči pri sobni temperaturi, dietiletrske ekstrakte smo združili in uparili, da smo dobili 0.7 g olja, ki smo ga kromatografirali na silikagelu ob uporabi 10 % metanola v diklorometanu za eluiranje, pri čemer smo dobili še 0.16 g N^-(benziloksikarbonil)4(R)-amino-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki gume.

(iv) 0.21 g N2-(benziloksikarbonil)-4(R)-amino-Nl-terc.-butil-L-prolinamida smo raztopili v zmesi 5 ml dioksana in 5 ml vode. Dodali smo 0.056 g natrijevega hidrogen karbonata in dobili raztopino, v katero smo dodali 0.144 g di(terc.-butil)-dikarbonata. Tako dobljeno zmes smo mešali pri sobni temperaturi čez noč. Topila smo odstranili z uparjenjem in ostanek razslojili med vodo in dietileter. Vodno fazo smo povratno ekstrahirali z dietiletrom in nato z etil acetatom. Združene organske ekstrakte smo izprali z nasičeno raztopino natrijevega klorida in osušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom. Osušene ekstrakte smo združili in uparili tako, da smo dobili 0.27 g N^(benziloksikarbonil)-4(R)-(terc.-butoksi-formamido)-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki umazano-bele pene.

(v) 0.25 g N2-(benziloksikarbonil)-4(R)-(terc.-butoksiformamido)-Nl-terc.-butil-Lprolinamida smo raztopili v etanolu in hidrogenirali nad 0.1 g 10 % paladija na oglju pri sobni temperaturi in pod atmosferskim tlakom v teku 4 ur. Katalizator smo odfiltrirali in filtrat uparili, pri Čemer smo dobili 0.17 g 4(R)-(terc.butoksiformamido)-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki steklastega materiala, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega čiščenja.

(vi) 0.17 g 4(R)-(terc.-butoksiformamido)-Nl-terc.-butil-L-prolinamida in 0.178 g 3(S)-(benziloksiformamido)-l,2-(S)-epoksi-4-fenilbutana v 15 ml suhega etanola smo premešali in dobljeno raztopino pustili stati 4.5 dni pri sobni temperaturi. Raztopino smo nadalje segrevali 96 ur pri 40 °C. Z nadaljnjo obdelavo, kot smo opisali v Primeru 92(i), le-da smo za kromatografijo uporabili 10 % metanol v diklorometanu za eluiranje, smo dobili 0.230 g N^-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-4(R)-(terc.-butoksiformamido)-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki gume.

(vii) 0.22 g N²-[3(S)-(benziloksiformamido)-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4(R)-(terc.butoksiformamido)-Nl-terc.-butil-L-prolinamida smo raztopili v 10 ml etanola in hidrogenirali nad 0.05 g 10 % paladija na oglju pri sobni temperaturi in pod atmosferskim tlakom v teku 2 ur. Katalizator smo odstranili s filtriranjem in filtrat uparili, pri čemer smo dobili 0.17 g N^-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4(R)(terc.-butoksiformamido)-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki gume, ki smo ga uporabili brez nadaljnjega čiščenja.

Primer 107

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 27, smo iz 162 mg 2-[[3(S)-[[Lasparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenil]butil]-N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidro-pirido[3,4-b]-indol-l(R ali S)-karboksamida (izomer B), 55 mg kinaldinske kisline, 43 mg 1hidroksibenzotriazola, 0.04 ml N-etilmorfolina in 66 mg dicikloheksilkarbodiimida dobili po kromatografiji na silikagelu ob uporabi 3 % metanola v etil acetatu za eluiranje, 95 mg N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidro-2-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]butil]pirido[3,4-b]indol-l(R ali S)-karboksamida; MS: m/e 707 [M+H]⁺.

2-[[3(S)-[[L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenil]butil]-N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidropirido[3,4-b]indol-l(R ali S)-karboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili s hidrogeniranjem 2[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-Lasparaginil] amino] -2(R)-hidroksi-4-fen ilbu til ] -N-terc.-butil-1,2,3,4-tetrahidro-pirido[3,4-b]indol-l(R ali S)-karboksamida.

Primer 108

Raztopino 154 mg trans-2-[3(S)-[(L-asparaginil)amino]-2(R)-hidroksi-4-fenil-butil]N-terc.-butil-dekahidro-(4aR,8aS)-izokinolin-3(S)-karboksamida in 52 mg kinaldinske kisline v 6 ml suhega tetrahidrofurana smo ohladili v zmesi led/sol. Dodali smo 41 mg hidroksibenzotriazola, 35 mg N-etilmorfolina in 68 mg dicikloheksilkarbodiimida in zmes mešali 64 ur. Zmes smo razredčili z etil acetatom in filtrirali. Filtrat smo izprali z vodno raztopino natrijevega hidrogen karbonata in raztopino natrijevega klorida in nato uparili. Ostanek smo kromatografirali na silikagelu tako, da smo uporabili diklormetan/metanol (9:1) za eluiranje, pri čemer smo dobili 50 mg transN-terc.-butil-dekahidro-2-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-Lasparaginil]amino]butil]-(4aR,8aS)-izokinolin-3(S)-karboksamida v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 671 [M+HJ⁺.

Trans-2-[3(S)-[(L-asparaginil)amino]-2(R)-hidroksi-4-fenil-butiI]-N-terc.-butildekahidro-(4aR,8aS)-izokinolin-3(S)-karboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili s hidrogeniranjem trans-2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-Lasparagenil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro-(4aR,8aS)izokinolin-3(S)-karboksamida.

Primer 109

Raztopino 1.02 g l-[3(S)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)piperidinkarboksamida in 685 mg N-(terc.-butoksikarbonil)-S-metil-L-cisteina v 7 ml suhega tetrahidrofurana smo ohladili v zmesi led/sol. Dodali smo 394 mg hidroksibenzotriazola, 335 mg N-etilmorfolina in 661 mg dicikloheksilkarbo-diimida in zmes mešali 3 ure. Zmes smo razredčili z etil acetatom in filtrirali. Filtrat smo izprali z vodno raztopino natrijevega hidrogen karbonata in raztopino natrijevega klorida in uparili. Topilo smo odstranili z uparjenjem in ostanek kromatografirali na silikagelu, ob uporabi diklorometana/metanola (96:4) za eluiranje, pri čemer smo dobili 630 mg l-[3(S)-[[N-(terc.-butoksikarbonil)-L-cisteinil]amino-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 565 [M+H]⁺.

Primer 110

Raztopino 650 mg N-terc.-butil-l-[3(S)-(L-cisteinil)-amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-2(S)-piperidinkarboksamida in 242 mg kinaldinske kisline smo ohladili v zmesi ledu/soli. Dodali smo 189 mg hidroksibenzotriazola, 161 mg N-etil-morfolina in 317 mg dicikloheksilkarbodiimida in zmes mešali 64 ur. Zmes smo razredčili z etil acetatom, filtrirali, filtrat pa uparili. Ostanek smo razslojili med diklorometan in vodno raztopino natrijevega hidrogen karbonata. Organsko fazo smo izprali z raztopino natrijevega klorida in nato uparili. Ostanek smo kromatografirali na silikagelu ob uporabi diklorometana/metanola (19:1) za eluiranje, pri čemer smo dobili 350 mg N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-Lcisteinil]amino]butil]-2(S)-piperidinkarboksamida v obliki belega trdnega materiala; MS: m/e 620 [M+H]+.

N-terc.-butil-l-[3(S)-[(L-cisteinil)amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-2(S)-piperidinkarboksamid, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pridobili kot sledi:

Raztopino 930 mg l-3(S)-[[N-(terc.-butoksikarboniI)-L-cisteinil]amino-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-N-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamida v 7 ml trifluoroocetne kisline smo mešali 1 uro pri 20 °C. Nato smo zmes uparili do suhega in ostanek razslojili med diklorometan in vodno raztopino natrijevega hidrogen karbonta. Organsko fazo smo uparili, pri čemer smo dobili 650 mg N-terc.-butil-l-[3(S)-[(Lcistenil)-amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-2(S)-piperidinkarboksamida v obliki brezbarvne gume; MS: m/e [M+H]+.

Primer 111 mg sveže destiliranega acetilklorida smo dodali v predhodno ohlajeno in premešano raztopino 12 mg hidroklorida 4(R)-amino-N²-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida in 21 mg natrijevega hidrogen karbonata v 0.5 ml vode in 0.25 ml dimetilformamida. Zmes smo intenzivno mešali 5 ur pri 0 °C in jo nato pustili stati pri sobni temperaturi preko noči. Zmes smo razredčili z vodo in ekstrahirali z diklorometanom. Združene diklorometanske ekstrakte smo uparili, pri čemer smo dobili gumo, ki smo jo prečistili s Flash kromatografijo na silikagelu ob uporabi 20 % metanola v diklorometanu za eluiranje. Dobili smo 2 mg 4(R)-acetilamino-N²-[3(S)[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi’4-fenilbutil]-Nl-terc.butil-L-prolinamida v poltrdni obliki; MS: m/e 639 [M+H]⁺.

Hidroklorid 4(R)-amino-N²-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]-amino]2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida, ki smo ga uporabili kot izhodni material, smo pripravili kot sledi:

mg N²-[3(S)-[[N²-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-4(R)-(terc.-butoksiformamido)-N l-terc.-butil-L-prolinamida smo raztopili v 0.5 ml nasičene raztopine klorovodika v etil acetatu in pustili stati 1 uro pri sobni temperaturi. Raztopino smo uparili in ostanek triturirali z dietiletrom in shranili pri 0 °C čez noč. Izločen trden material smo smo odfiltrirali in izprali z dietiletrom, pri čemer smo dobili 19 mg hidroklorida 4(R)-amino-N²-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamida v obliki trdnega materiala s tališčem 206-210 °C.

Naslednji Primer prikazuje pripravo farmacevtskega pripravka, ki vsebuje spojino s formulo I ali njeno farmacevtsko sprejemljivo kislinsko adicijsko sol kot aktivno sestavino:

Primer A

Vodno raztopino aktivne sestavine smo sterilno prefiltrirali in ob segrevanju premešali s sterilno raztopino želatine, ki vsebuje fenol kot konzervirno sredstvo, ob uporabi take količine, da 1.00 ml dobljene raztopine vsebuje 3.0 mg aktivne sestavine, 150.0 mg želatine, 4.7 mg fenola in destilirane vode do 1.0 ml. S to zmesjo smo napolnili stekleničke po 1.0 ml pod aseptičnimi pogoji.

Claims (20)

1. PATENTNI ZAHTEVKI

   1. Spojine s splošno formulo

   R² R⁴ (0) _B7 i I I t>

   V /'“Χ /^C\/^CH-^N

   CH NH C

   R' v kateri n predstavlja število 0 ali 1; Rl predstavlja alkoksikarbonil, aralkoksikarbonil, alkanoil, cikloalkilkarbonil, aralkanoil, aroil, heterociklil-karbonil, alkilsulfonil, arilsulfonil, monoaralkilkarbamoil, cinamoil ali a-aralkoksikarbonilaminoalkanoil in R^ predstavlja vodik, ali Rl in R^ skupaj z atomom dušika na katerega sta vezana, predstavljata ciklično imidno skupino s formulo

   O

   N— (a)

   O v kateri P in Q skupaj predstavljata aromatski sistem; R^ predstavlja alkil, cikloalkil, aril, aralkil, heterociklilalkil, cianoalkil, alkilsulfinilalkil, karbamoilalkil ali alkoksikarbonilalkil, ali kadar n predstavlja število 0, lahko R^ predstavlja alkiltioalkil, ali kadar n označuje število 1, lahko R^ prav tako predstavlja alkilsulfonilalkil; R⁴ predstavlja alkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, aril ali aralkil; R^ predstavlja vodik in R^ predstavlja hidroksi, ali R^ in R^ skupaj predstavljata okso; R^ in R⁸ skupaj predstavljata trimetilensko ali tetrametilensko skupino, katera je lahko substituirana s hidroksi, alkoksikarbonilamino ali acilamino, ali v kateri je ena od skupin -CH2- zamenjana z -NH-, -N(alkoksikarbonil)-, -N(acil)- ali -S-, ali katera nosi kondenziran cikloalkan, aromatski ali heteroaromatski obroč; in R^ predstavlja alkoksikarbonil, monoalkilkarbamoil, monoaralkilkarbamoil, monoarilkarbamoil ali skupino s formulo _C/^H\ /^co\ —co CH l·⁰

   NH-R (b) v kateri Rl® in R^ vsak posebej predstavlja alkil;

   in njihove farmacevtsko sprejemljive kislinske adicijske soli.
2. 2. Spojine po zahtevku 1, v katerih n označuje 0 (nič), R^ predstavlja alkil, cikloalkil, aril, aralkil, heterociklilalkil, cianoalkil, alkiltioalkil, karbamoilalkil ali alkoksikarbonilalkil in R? in R^ skupaj predstavljata trimetilensko ali tetrametilensko skupino, v kateri je ena od skupin -CH2- zamenjana z -NH-, ali -S-, ali katera lahko nosi kondenzirani cikloalkanski, aromatski ali heteroaromatski obroč.
3. 3. Spojine po zahtevku 1 ali 2, v katerih R^ predstavlja alkoksikarbonil, aralkoksikarbonil, alkanoil, cikloalkilkarbonil, aralkanoil, aroil, heterociklil-karbonil ali α-aralkoksikarbonilaminoalkanoil, prednostno benziloksikarbonil, 2-naftoil, 1hidroksi-2-naftoil, 3-hidroksi-2-naftoil, 3-benziloksi-2-naftoil, 2-kinolilkarbonil ali 3kinolilkarbonil in R^ predstavlja vodik.
4. 4. Spojine po kateremkoli od zahtevkov od 1 do 3, v katerih R^ predstavlja alkil, cianolakil, alikiltioalkil ali karbamoilalkil, prednostno cianometil, metiltiometil ali karbamoilmetil.
5. 5. Spojine po kateremkoli od zahtevkov 1 do 4, v katerih R^ predstavlja aralkil, prednostno benzil.
6. 6. Spojine po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 5, v katerih R$ predstavlja vodik in R^ predstavlja hidroksi.
7. 7. Spojine po kateremkoli od zahtevkov 1 do 6, v katerih -N(R7)-CH(R8)(R9) predstavlja eno od naslednjih skupin kjer ima R^ pomen, ki je naveden v zahtevku 1, Rl2 predstavlja vodik, hidroksi, alkoksikarbonilamino ali acilamino, Rl3 predstavlja vodik, alkoksikarbonil ali acil, m označuje 1 ali 2 in p označuje 1 ali 2, prednostno skupino s formulo (c), v kateri Rl2 predstavlja vodik in m označuje 2, ali Rl2 predstavlja terc.-butoksikarbonilamino in m označuje 1, skupino s formulo (d), v kateri R^ predstavlja terc.-butoksikarbonil, skupino s formulo (e), v kateri m označuje 1, skupino s formulo (f), v kateri m in p oba označujeta 1, ali skupino s formulo (g), (i) ali (j).
8. 8. Spojine po kateremkoli izmed zahtevkov od 1 do 7, v katerih R^ predstavlja alkoksikarbonil, monoalkilkarbamoil ali skupino s formulo (b), navedeno v zahtevku 1, prednostno terc.-butoksikarbonil, izobutilkarbamoil, terc.-butilkarbamoil ali skupino s formulo (b), navedeno v zahtevku 1, kjer R^ predstavlja sek.-butil in R^ predstavlja izobutil.
9. 9. Spojine po kateremkoli izmed zahtevkov od 1 do 8, v katerih R^ predstavlja benziloksikarbonil, 2-naftoil, l-hidroksi-2-naftoil, 3-hidroksi-2-naftoil, 3-benziloksi-2naftoil, 2-kinolilkarbonil ali 3-kinolilkarbonil in R^ predstavlja vodik, R^ predstavlja cianometil, metiltiometil ali karbamoilmetil, R^ predstavlja benzil, R$ predstavlja vodik in R^ predstavlja hidroksi, in -N(R7)-CH(R8)(R9) predstavlja skupino s formulo (c) navedeno v zahtevku 7, kjer Rl2 predstavlja vodik in m označuje 2, ali Rl2 predstavlja terc.-butoksikarbonilamino in m označuje 1, skupino s formulo (d), navedeno v zahtevku 7, kjer predstavlja terc.-butoksikarbonil, skupino s formulo (e), dano v zahtevku 7, v kateri m označuje 1, skupino s formulo (f), prikazano v zahtevku 7, v kateri m in p označujeta 1, ali skupino s formulami (g), (i) ali (j), navedenmi v zahtevku 7, in R^ predstavlja terc.-butoksikarbonil, izobutilkarbamoil, terc.-butilkarbamoil, ali skupino s formulo (b), navedeno v zahtevku 1, v kateri R^ predstavlja sek.-butil in R^ predstavlja izobutil.
10. 10. N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R ali S)-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-terc.-butil-L-prolinamid ali N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-Lasparaginil]amino]-2(R ali S)-hidroksi-4-fenilbutil]-N 1-izobutil-L-prolinamid.
11. 11. Spojine po zahtevku 1, izbrane iz skupine, ki jo sestavljajo:

    N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R )-hidroksi-4fenilbutil]-Nl-terc.-butil-4(R)-tiazolidin-karboksamid,

    N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]2(S)-piperidinkarboksamid, l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-oktahidro-(3aS,6aS)-cik!openta[b]pirol-2(S)-karboksamid,

    1- [3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-2(S)-piperidin-karboksamid,

    2- [3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-Nterc.-butil-l,2,3,4-tetrahidropirido[3,4-b]indol-l-karboksamid, N-terc.-butil-3-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-4-fenilbutil]4(R)-tiazolidinkarboksamid,

    Nl-terc.-butil-N²-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-Lasparaginil] amino] -L-prolinamid N^-oksid, l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-3-ciano-L-alanil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutilN-terc.-butil-2(S)-piperidinkarboksamid, l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4-fenilbutil]-4(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-2-(R ali S)-piperazinkarboksamid, l-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-3-ciano-L*alanil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butiI-2(R ali S)-piperazinkarboksamid, N2-[3(S)-[[N-(benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]4(R)-(terc.-butoksiformamido)-Nl-terc.-butil-L-prolinamid, l-[3(S)-[[N-(3-benziloksi-2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4-fenilbutil]N-(terc.-butil-2(S)-piperidin-karboksamid, N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-Lasparaginil]amino]butil]-2-piperidinkarboksamid 1-oksid,

    N-terc.-butil-l-[3(S)-[[N-(3-hidroksi-2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-2(R)-hidroksi-4fenilbutil]-2(S)-piperidinkarboksamid, trans-2-[3(S)-[[N-benziloksikarbonil)-L-asparaginil]amino]-2-(R)-hidroksi-4fenilbutil]-N-terc.-butil-dekahidro-(4aR,8aS)-izokinolin-3(S)-karboksamid,

    4-(terc.-butoksikarbonil)-N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]butil]-2(R ali S)piperazinkarboksamid,

    N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-3(S)-[[N-(l-hidroksi-2-naftoil)-L-asparaginil]amino]-4fenilbutil]-2(S)-piperidinkarboksamid, trans-N-terc.-butil-dekahidro-2-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarboml)-Lasparaginil]amino]butil]-(4aR,8aS)-izokinolin-3(S)-karboksamid in N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)~[[N-(2-kinoIilkarbonil)-Lcisteinil]amino]butil]-2(S)-piperidinkarboksamid.
12. 12. N-terc.-butil-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarboniI)-Lasparaginil]amino]butil]-2(S)-piperidinkarboksamid.
13. 13. N-terc.-butil-oktahidro-l-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)L-asparaginil]amino]butil]-(3aS,6aS)-ciklopenta[b]pirol-2(S)-karboksamid.
14. 14. N-terc.-butil-l,2,3,4-tetrahidro-2-[2(R)-hidroksi-4-fenil-3(S)-[[N-(2-kinolilkarbonil)-L-asparaginil]amino]butil]pirido[3,4-b]indol-l(R ali S)-karboksamid.
15. 15. Spojine s splošno formulo ,CH„—N' R

    6 i?

    5 Λ v kateri R predstavlja vodik ali skupino

    CH

    R^ predstavlja alkil, cikloalkil, aril, aralkil, heterociklilalkil, cianoalkil, alkiltioalkil, alkilsulfinilalkil, karbamoilalkil ali alkoksikarbonilalkil; R4 predstavlja alkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, aril ali aralkil; R^ predstavlja vodik in R^ predstavlja hidroksi, ali R^ in R^ skupaj predstavljata okso; R? in R& skupaj predstavljata trimetilensko ali tetrametilensko skupino, katera je lahko substituirana s hidroksi, alkoksikarbonilamino ali acilamino, ali v kateri je ena od skupin -CH2- lahko zamenjana z -NH-, *N(alkoksikarbonil)-, N(acil)- ali -S-, ali katera nosi kondenziran cikloalkanski, aromatski ali heteroaromatski obroč; in R^ predstavlja alkoksikarbonil, monoalkilkarbamoil, mono-aralkilkarbamoil, monoarilkarbamoil ali skupino s formulo

    NH CO / \ z \ —CO CH NHi¹⁰ .11 (b) ;

    VI v kateri vsak izmed in predstavlja alkil.
16. 16. Spojine s splošno formulo ^r1-\ ^XCH NH .C

    CH₂-N z\ v kateri n predstavlja število 0 ali 1; Rl predstavlja alkoksikarbonil, aralkoksikarbonil, alkanoil, cikloalkilkarbonil, aralkanoil, aroil, heterociklil-karbonil, alkilsulfonil, arilsulfonil, monoaralkilkarbamoil, cinamoil ali a-aralkoksikarbonilaminoalkanoil in R^ predstavlja vodik, ali Rl in R^ skupaj z atomom dušika na katerega sta vezana, predstavljata ciklično imidno skupino s formulo

    O

    O v kateri P in Q skupaj predstavljata aromatski sistem; R^ predstavlja alkil, cikloalkil, aril, aralkil, heterociklilalkil, cianoalkil, alkilsulfinilalkil, karbamoilalkil ali alkoksikarbonilalkil, ali kadar n predstavlja število 0, R^ lahko tudi predstavlja alkiltioalkil, ali kadar n označuje število 1, R^ prav tako lahko tudi predstavlja alkilsulfonilalkil; R^ predstavlja alkil, cikloalkil, cikloalkilalkil, aril ali aralkil; R^ predstavlja vodik in R^ predstavlja hidroksi ali R$ in R^ skupaj predstavljata okso; R?’ in R^ skupaj predstavljata trimetilensko ali tetrametilensko skupino, katera je lahko substituirana z amino; in R^ predstavlja alkoksi-karbonil, monoalkilkarbamoil, monoaralkilkarbamoil, monoarilkarbamoil ali skupino s formulo

    NH —CO z^co\

    CH NH· (b) ,11 v kateri vsak izmed βΐθ in predstavlja alkil.
17. 17. Derivati aminokislin po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 14 za uporabo kot terapevtsko aktivne snovi.
18. 18. Derivati aminokislin po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 14 za uporabo pri zdravljenju ali profilaksi virusnih infekcij.
19. 19. Postopek za proizvodnjo spojine po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 14, označen s tem, da obsega (a) za pripravo spojin s formulo I, v kateri n označuje 0, spojina s splošno formulo

    R

    I

    CH

    R'

    CH -N / \z ²

    H₂N c

    R⁵ V

    Z/ 'CH' .9 v kateri imajo R^, R-’, R^, R^, R^ in R^ v zahtevku 1 navedeni pomen, reagira s kislino s splošno formulo

    R¹—N

    CH.3

    -COOH

    III v kateri imajo Rl, R^ in R^ v zahtevku 1 navedeni pomen, ali z njenim reaktivnim derivatom, ali (b) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 0, R³ predstavlja vodik in R^ predstavlja hidroksi, reduciramo spojino s formulo I, v kateri n označuje 0, in R³ in r6 skupaj predstavljata okso, ali (c) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 0 in R³ predstavlja alkanoil, cikloalkilkarbonil, aralkanoil, aroil, heterociklilkarbonil, alkilsulfonil, arilsulfonil, cinamoil ali α-aralkoksikarbonilaminoalkanoil, in R² predstavlja vodik, ali Rl in R² skupaj z atomom dušika s katerim sta vezana, predstavljata ciklično imidno skupino s formulo (a), navedeno v zahtevku 1, spojina s splošno formulo

    IV v kateri imajo R³, R^, R³, r£ r7, r8 j_n r9 _v zahtevku 1 prikazani pomen, reagira s sredstvom, ki da skupino alkanoil, cikloalkilkarbonil, aralkanoil, aroil, heterociklilkarbonil, alkilsulfonil, arilsulfonil, cinamoil ali a-aralkoksikarbonilaminoalkanoil, ali s sredstvom, ki tvori skupino cikličnega imida s formulo (a), ki je prikazana v zahtevku 1, ali (d) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 0 in Rl predstavlja monoaralkilkarbamoil in R² predstavlja vodik, spojina s prej prikazano formulo IV reagira s spojino s splošno formulo r1’-N=C=O V v kateri Rl predstavlja aralkil, ali (e) za pripravo spojine s formulo I, v kateri R³ predstavlja alikilsulfinilalkil in n označuje 0, oksidiramo spojino s formulo I, v kateri R³ predstavlja alkiltioalkil in n označuje 0, ali (f) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 1, oksidiramo spojino s formulo I, v kateri n označuje 0, ali (g) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 1 in R^ predstavlja aromatsko N-heterociklilkarbonil N-oksidno skupino, in R² predstavlja vodik, oksidiramo spojino s formulo I, v kateri n označuje 1 in R^d predstavlja aromatsko N-heterociklilkarbonilno skupino in R² predstavlja vodik, ali (h) za pripravo spojine s formulo I, v kateri n označuje 1 in R^ predstavlja alkilsulfonilalkil, oksidiramo spojino s formulo I, v kateri n označuje 1 in R^ predstavlja alkilsulfinilalkil, ali (i) za pripravo spojine s formulo I, v kateri R^d predstavlja karboksi-substituirani aroil, hidroksi-substituirani aroil ali hidrocinamoil, in R² predstavlja vodik, katalitsko hidrogeniramo spojino s formulo I, v kateri Rl predstavlja benziloksikarbonilsubstituiran aroil, benziloksi-substituiran aroil ali cinamoil in R² predstavlja vodik, ali (j) za pripravo spojine s formulo I, v kateri R^ predstavlja imidazol-4-il in/ali R^ predstavlja hidroksi-substituirani aril ali hidroksi-substituirani aralkil in/ali R² in R^ skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, v kateri je ena skupina -CH2- zamenjana z -NH-, obdelamo spojino s formulo I, v kateri R^ predstavlja 1(benziloksikarbonil)-imidazol-4-il in/ali R^ predstavlja terc.-butoksi-substituiran aril ali terc.-butoksi-substituiran aralkil in/ali R² in R& skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, v kateri je ena skupina -CH2- zamenjana z -N(terc.butoksikarbonil)- skupino, z močno kislino, ali (k) za pripravo spojine s formulo I, v kateri R² in R& skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, kije substituirana z acilamino, ali v kateri je ena skupina -CH2- zamenjana z -N(acil)-, aciliramo spojino s splošno formulo

    H^{2 R} /J _Zo A ^XCH NH C h z \« <°>n R⁷'

    V ,

    VI v kateri imajo n, Rl, R⁷, r3_? r4 r5_? r6 j_n r9 _v zahtevku 1 navedeni pomen in R⁷’ in R& skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, ki je substituirana z amino ali v kateri je ena skupina -CH2- zamenjana z -NH-, in/ali (l) če želimo, ločimo zmes diastereoizomernih racematov na diastereoizomerne racemate ali optično čiste diastereoizomere in/ali (m) če želimo, ločimo zmes diastereoizomerov na optično čiste diastereoizomere in/ali (n) če želimo, dobljene spojine s formulo I prevedemo v farmacevtsko sprejemljive kislinske adicijske soli.
20. 20. Postopek po zahtevku 19, označen s tem, da spojine s formulo I, v kateri n označuje 0, R⁷ predstavlja alkil, cikloalkil, aril, aralkil, heterociklilalkil, cianoalkil, alkiltioalkil, karbamoilalkil ali alkoksikarbonilalkil in R⁷ in R^ skupaj predstavljata skupino trimetilen ali tetrametilen, v kateri je ena skupina -CH2- lahko zamenjana z -NH- ali -S-, ali katera lahko nosi kondenzirani cikloalkanski, aromatski ali heteroaromatski obroč, in njihove farmacevtsko sprejemljive kislinske adicijske soli pripravimo na osnovi izvedb (a), (b), (c), (d) in/ali (n) postopka.