SI23928A - Pentadekapeptid in njegove soli ter njihova uporaba v kozmetiki in dermatologiji - Google Patents

Abstract

Izum opisuje nekatere nove soli pentadekapeptida SEQ ID NO 1. s formulo Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Gly Leu Val x Me (SEQ ID NO 1), kjer Me pomeni kation teĹľke kovine, prednostno srebra, indija, cinka in bakra,ter postopek za dobivanje teh soli. Dalje izum opisuje tudi formulacije na osnovi pentadekapeptida SEQ ID NO 1. in njegovih soli, postopke za njihovo pripravo in njihovo uporabo v kozmetiki in dermatologiji.

Description

Pentadekapeptid in njegove soli ter njihova uporaba v kozmetiki in dermatologiji.

Področje tehnike v katero spada izum.

Predloženi izum je s področja kozmetike in dermatologije in se nanaša na izdelke za negovanje in zdravljenje kože in na postopek za njihovo pripravo.

Tehnični problem.

Številne farmakološke raziskave so dokazale zaščitno in regenerativno delovanje pentadekapeptida bepecin in njegovih soli na človeški organizem. Zato je bilo smiselno izdelati preparate, ki bi ugodno delovali tudi na kožo in bi se lahko uporabljali v kozmetiki in dermatologiji.

Stanje tehnike.

Pentadekapeptid bepecin (okrajšano tudi BPC-157) ima naslednje amino kislinsko zaporedje:

Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Gly Leu Val SEQ ID NO:1 15 10 15 in je N-terminalni del naravnega proteina BPC, ki se sicer nahaja v želodčnem soku sesalcev. Naravni protein BPC se pridobiva iz človeškega ali živalskega želodčnega soka s kompliciranimi biokemijskimi metodami (US patent 5,288.708). Ta način dobivanja je ne glede na zahtevno delo tudi z ozirom na negotov vir surovine in možno kontaminacijo z virusi neprimeren. Zato je bil s kemijsko sintezo (P.Sikirič, R.Ručman, B.Ručman,M.Petek, Peptides 1998, Proceed. of 25th EPS, Budapest 1998, str. 814; Z. Pflaum in R.Ručman, Acta Chim.Slov., 2005, 52, 34-39) pripravljen samo N-terminalni del z zgoraj navedeno sekvenco. Presenetljivo je bilo dognanje, da ima ta fragment ohranjene praktično vse učinke naravnega proteina BPC (EP 0572688 in US patent 6,268 346). Izgleda torej, da je za biološko delovanje celega proteina v največji meri odgovoren prav N-terminalni del z zaporedjem 15 amino kislin. Z medicinskega stališča je spojina zelo zanimiva, ker deluje skoraj na vse organe v izjemno nizkih koncentracijah (v območju ng do mg in več/kg telesne teže) in to brez kakršnih koli toksičnih oziroma stranskih učinkov.

S farmakološkimi raziskavami je bilo ugotovljeno, da pentadekapeptid bepecin vnesen v organizem deluje v naslednjem smislu:

- na ulkuse (razjede) v katerem koli delu gastrointestinalnega trakta (P.Sikirič in dr., Exp. Ciin. Gastroenterol., 1991,1, 17-20);

- antiinflamatorno ne glede na etiologijo, (P.Sikirič in dr., J. Physiol./Paris/, 1997,91, 113-122;

- zaščitno na jetra in pankreas (Prkačin in dr., J.Physiol. /Pariš/, 2001, 95, 315-324);

- pospešuje celjenje opeklin (D.Mikuš, P.Sikirič in dr., Burns 2003, 29, 323-334; in: Burns, 2001, 127 ?. 817-827);

- pospešuje celjenje ran (S.Seiwerth, p.Sikirič in dr., J. Physiol./Paris/, 1997, 91, 173178;

- zaščitno proti radioaktivnemu sevanju (P.Sikirič, M.Petek,R.Ručman,

J. Physiol./Pariš/, 1993, 87,313-327);

- pospešuje celjenje kostnih prelomov (B. Sebečič, V. Miklič, P.Sikirič in dr., Bone,

1999, 24,195-202);

- proti vnetni bolezni gastrointestinalnega trakta (Chronova bolezen) (Sikirič in drugi,

J. Physiol.,/Pariš/ 2001,95, 295-301);

- v interakciji z adrenergičnimi in dopaminergičnimi sistemi ščiti sluznice v stresnih pogojih, (P.Sikirič in dr., Dig.Dis.Sci., 1997, 42, 661-671);

- antitumorski učinek pri nekaterih vrstah tumorjev (Ascites, melanom) (P.Sikirič,

M. Petek, R.Ručman, J. Physiol./Paris/,1993,87, 313-327; S.Radeljak, S.Seiwerth,

P. Sikirič, Melanoma Research, 2004, 14 (4): A14-A15.);

- antivirusni učinek na viruse herpesa (tudi zoster), viruse LCM, HPV, polio, adenoviruse in virus klopovega meningoencefalitisa (P.Sikirič in soavtorji, Journal Physiol. ,/Pariš/, 1993,87,313-327);

- pospešuje regeneracijo pretrganih živčnih povezav (M. Gjurašin in dr.,

Dig. Dis. Sci.,2003, 48, 1879);

- pospešuje celjenje pretrgane Ahilove tetive (M. Starešinič, P.Sikirič in dr.,

J. Orthopedic. Res., 2003,21, 976-983);

- organske motnje povezane s tvorbo NO (Sikirič in dr., Eur.J.Pharmacol., 1997,332,2333;

- učinkuje na imunski sistem in motnje v celularnem imunskem odgovoru, vključno z AIDS in AIDS sorodnimi stanji ( P.Sikirič in dr., J.Physiol./Paris/, 1993,87, 313-327);

- pač pa nima pomembnega antibiotičnega delovanja.

Peptid bepecin, ki je sestavni del našemu telesu lastne snovi, ne kaže nobenih znakov toksičnosti. Poskusi določitve LD₅₀ na miših, podganah in psih z namenom dobiti podatke o akutni, subkronični in kronični toksičnosti niso bili uspešni, ker ta peptid v širokem območju doz od 10 ng do 100 mg/kg telesne teže, apliciran intravenozno ali intraperitonealno, ne povzroča nobenih toksičnih sprememb.

Pri preiskavi na teratogenost in genotoksičnost (Salmonela mikrosomski test) ni nobenih znakov tozadevnega učinkovanja. Prav tako ne kaže nobenega alergenega delovanja, nasprotno učinkovit je pri eliminaciji alergij, kar prikazujemo v primeru 6.

Na osnovi ugotovljenih ugodnih učinkov peptida bepecin in njegovih soli na človeški organizem sklepamo, da je smotrno preučiti in uveljaviti tudi njegovo uporabo v dermatologiji in kozmetiki.

Rešitev tehničnega problema.

Osnoven problem, ki ga moramo rešiti je priprava ustreznih oblik preparatov primernih za uporabo v kozmetiki in dermatologiji.

Peptid bepecin je bela amorfna snov lahko topna v vodi. Ker ima amfoteren značaj se lahko nahaja v obliki soli s kislinami, na primer: acetat, (EP 0572688) ali z bazami, na primer kot natrijeva sol (US pat. 6,288.028). Vse soli so zelo lahko topne v vodi, slabo topne v alkoholih, netopne v organskih topilih in oljih.

Vodne raztopine (1%) imajo naslednje pH vrednosti pri 20° C:

bepecin acetat.................................... 4,29 bepecin natrijeva sol............................5,15 bepecin dinatrijeva sol.........................6,98 *

benzatin bepecin ................................6,22 ★

( benzatin je: N,N'-dibenziletilendiamin).

Iz navedenega sledi, da so za izdelavo kozmetičnih in dermatoloških preparatov navedene soli primerne, zaradi boljše stabilnosti pa imata prednost benzatin bepecin in dinatrijeva sol.

Za peptide je splošno znano, da so kemijsko bolj občutljive snovi in so zlasti pri povišani temperaturi nagnjeni k postopnemu razkroju.

Važen parameter pri sestavi preparatov je tudi stabilnost bepecina v raztopinah z različno pH vrednostjo, ki je prikazana v naslednji razpredelnici:

Raztopina (1 %) Temperatura (° C): Čas inkubacije v dnevih i vsebnost v %:

		0	7	14	28	42
standard (voda)	-15	99,90	98,94	98,72	98,32	98,35
fiziološka raztopina	+5	99,79	97,80	98,46	97,63	97,93
fiziološka raztopina	30	99,79	92,90	92,22	89,93	88,13
fiziološka raztopina	50	99,79	85,80	83,80	81,65	66,50
vodni pufer pH 3,0	30	99,78	89,16	82,38	72,56	70,21
vodni pufer pH 6,0	30	99,91	99,00	98,84	98,74	98,20
vodni pufer pH 9,0	30	99,96	99,68	99,86	99,73	99,01

Fiziološka raztopina vsebuje 0,9% natrijevega klorida v vodi.

Pufri: fosfatni pufri z ionsko jakostjo 0,5 mol/L, s pH vrednostmi nastavljenimi na 3,0, 6,0 in 9,0 z raztopino natrijevega hidroksida.

S stanjem raztopin se peptid sicer počasi razkraja, še najbolj v močno kislem mediju, medtem, ko je v območju pH vrednosti med 6 in 9 dobro stabilen. Vidimo tudi, da peptid bepecin raztopljen v fiziološki raztopini ni posebno stabilen.

V smislu izuma bomo za izdelavo kozmetičnih in dermatoloških preparatov uporabili bepecin ali njegove soli z netoksičnimi organskimi in anorganskimi kislinami kot so na primer: acetat, formiat, propionat, sukcinat, maleat, malat, laktat, citrat, benzoat, substituirani benzoati, salicilat, tartrat, metansulfonat, etansulfonat, sulfat, sulfaminat, hidroklorid, nitrat, fosfat in njihovi hidrati, seveda z nastavitvijo optimalne pH vrednosti. Prav tako lahko uporabimo tudi soli bepecina z alkalijskimi kovinami, zemljoalkalijskimi kovinami, amonijeve soli, soli z organskimi bazami, na primer s primarnimi, sekundarnimi in terciarnimi amini, kot so Ν,Ν'-dibenziletilendiamin, terc. butilamin, dietilamin, Ν,Ν'-dimetiletilendiamin, hidroksietilamin in amino kislinami.

Nadalje, prav tako v smislu izuma uporabimo tudi nekatere nove soli bepecina, kot soli s srebrom, bakrom, cinkom in redkimi kovinami kot so na primer indij, cer in skandij. Zlasti nekatere teh soli, kot na primer s cinkom, cerom in srebrom, imajo tudi določeno, blago antibiotsko delovanje. Pričakujemo koristno možnost uporabe srebrove soli pri obravnavi površinskih opeklin, zaradi sinergetskega delovanja cinkove soli pa pri lokalni obravnavi herpesa.

Te soli pripravljamo z nevtralizacijo in dodatnim čiščenjem na semipreparativni HPLC koloni z reverzno fazo, ki mu sledi izolacija z liofilizacijo.

Peptid bepecin in njegove soli bomo v kozmetičnih in dermatoloških preparatih uporabili kot sredstvo za regeneracijo kožnih celic, za povečanje imunske sposobnosti kože, za izboljšanje celjenja mehanskih poškodb, za zmanjševanje in preprečevanje poškodb zaradi vpliva sevanja in sončne svetlobe, pikov insektov in meduz ter za zmanjševanje oziroma preprečevanje eritemov in alergičnih reakcij na koži in lasišču. Zanimivo je delovanje bepecina in njegovih soli pri obsevanju kože z ultravijolično svetlobo: bepecin sam ne kaže pomembne absorbcije UV žarkov, pač pa učinkovito preprečuje nastanek eritema in opeklin ter hkrati pospešuje naravno porjavitev kože. S tem posredno povečuje tvorbo prekurzorjev vitamina D v koži in vpliva na osteoporozo. Peptid bepecin bomo v kozmetičnih in dermatoloških preparatih uporabili kot sredstvo za regeneracijo kožnih celic, za povečanje imunske sposobnosti kože, za izboljšanje celjenja mehanskih poškodb, za zmanjševanje in preprečevanje poškodb zaradi vpliva sevanja in sončne svetlobe, pikov insektov in meduz ter za zmanjševanje eritemov in alergičnih reakcij na koži in lasišču.

V pripravkih so lahko tudi dodatne aktivne snovi, na primer polifenoli (na pr.: hidroksitirosol, oleoeuropein, secoiridoidi) iz deviškega, hladno stiskanega oljčnega olja in vegetacijske vode pri predelavi oljčnega olja. Za doseganje določenega sinergističnega delovanja se lahko kombinirajo tudi z antagonisti substance P, kot so na primer: sendide, spantide in peptidi opisani v US pat. 4,472.305, in drugi, ter se ta kombinacija uporablja za tretiranje lišajev, srbečice, kožne rdečine nevrogenega izvora, rozaceje in eritemov.

Ugodna je tudi uporaba bepecina v preparatih s keratolitičnim delovanjem, ki sicer vsebujejo agresivne in iritirajoče snovi, kot so: retinoidi, benzoil peroksid, salicilna kislina, n-oktanoilsalicilna kislina, resorcin, 5-n-dekanoilsalicilna kislina in druge, ker se s tem bistveno zmanjša draženje kože in hitreje vzpostavi normalno stanje.

Bepecin ali njegove soli vgradimo v pripravke skupaj s stabilizatorji za kar uporabimo vodne in fiziološko sprejemljive puferske sisteme na bazi šibkih kislin kot so: fosforna, citronska, mlečna, vinska, jabolčna ali druge, v optimalnem pH območju.

Lahko pa bepecin vgradimo v liposome na bazi amfifilnih lipidov v kombinaciji z lipofilnimi komponentami in uporabimo kot liposomski gel ali kremo. Bepecin v primeru liposomskega gela s kolagenom preprečuje tudi antigenski efekt kolagena.

Bepecin in njegove soli so aktivne že v zelo nizkih koncentracijah, od 0,0001% do 1%. Uporabimo ga za pripravo preparatov negovalne kozmetike kot so: raztopine (losjoni), razne emulzije, kreme za roke in telo - tako dnevne kot nočne, hidratantne kreme, kreme za zmanjšanje eritema po sončenju, šamponi, losjoni za boljšo rast las, obliži in drugo.

Za pripravke uporabimo običajne sestavine kot so: lipofilne, hidrofilne in amfifilne spojine, kozmetično učinkovite spojine in pomožne snovi kot konzervansi, zgoščevala, antioksidanti, snovi za uravnavanje pH vrednosti, dišave, barvila in UV zaščitne snovi. Kot lipofilne snovi uporabimo razne živalske, rastlinske ali mineralne voske, maščobe ali olja, tudi silikonska olja in maščobe. Sem prištevamo: vazelin, lanolin, parafin, čebelni vosek, dalje olja jojobe, oljčno, mandljevo, laneno, palmovo, sezamovo, sončnično, olje grozdnih pečk, avokada in arganovo olje, dalje cetanol, stearol, betasitosterol, stearinsko, palmitinsko in oleinsko kislino in njihove estre, ter dimetilpolisiloksane (Dimeticon).

Kot hidrofilno komponento najpogosteje uporabimo vodo, v smislu našega izuma sterilno raztopino bepecina v vodnem pufru.. Hidrofilne snovi so tudi vlažilci za preprečevanje prekomerne izsušitve kože, na primer: sečnina, aminokisline, pirolidonkarboksilna kislina, anioni kot citrat, laktat in sestavine naravnega vlažilnega faktorja kože. Pogoste hidrofilne sestavine so tudi nižji alkoholi kot etanol, izopropanol, propilenglikol inglicerin.

Emulgatorji so površinsko aktivne snovi, ki se umestijo ne mejni površini med oljno in vodno fazo ter skrbijo, da je zmes stabilna, se ne razsloji in taka tudi ostane po daljšem času.

Konzervansi so važni za preprečevanje rasti mikroorganizmov. Razne bakterije ali spore plesni lahko povzročijo spremembe barve, vonja in izgleda ali celo razpad emulzije. Kot konzervanse uporabimo alkohole (etanol, propilenglikol, benzilalkohol), fenol in njegove derivate (krezol, klorkrezol), organske kisline in njihove estre (phidroksibenzoati.sorbinska in benzojeva kislina), kvarterne amonijeve spojine (cetrimid, benzalkonijev klorid).

Antioksidanti ščitijo nenasičene maščobne kisline pred oksidacijo in vežejo proste radikale. Naravni antioksidanti so tokoferoli, askorbinska kislina, citronska kislina in njihovi derivati.

Včasih se uporabljajo tudi sintetični antioksidanti kot BHA (butil-4-hidroksianizol) in BHT (2,6-diterc.butil-p-hidroksi toluen).

Sestavni del so tudi naravne ali sintetične dišave, vsekakor v tako nizki koncentraciji!, da ne povzročajo morebitnih alergičnih reakcij. Služijo za zakrivanje neprijetnega vonja in odišavljenje.

Sredstva za negovanje kože z uporabo sterilne stabilizirane raztopine peptida BPC 157 pripravljamo na naslednji način: v ogrevani mešalni posodi najprej pripravimo točno zatehtano mešanico lipofilnih sestavin, posebej pripravimo mešanico hidrofilnih sestavin, nato k sterilni vodi dodamo alkohole in konzervanse. V mešalniku za mazila počasi in med mešanjem dodamo hidrofilno fazo k lipofilni fazi, mešamo pri nekoliko znižanem tlaku in počasi ohladimo na 30 do 40°C. Šele nato dodamo dišave in antioksidante ter povsem na koncu pri temperaturi pod 30°C homogeno vmešamo raztopino bepecina oz. njegove soli.

V nadaljevanju navedeni primeri so ilustrativni in v ničemer ne omejujejo obsega patentne prijave:

PRIMER 1. Dinatrijeva sol bepecina

Bepecin acetat (1 g, 0,68 mmola) raztopimo v 16 ml vode, med intenzivnim mešanjem dodamo natrijev hidrogenkarbonat (172 mg, 2,04 mmola) ter mešamo 15 min. Raztopino nato prepihamo z dušikom, da izženemo ogljikov dioksid ter jo filtriramo skozi filter 0,22 μ. pH raztopine znaša 6,4.

To bistro raztopino nanesemo na start semi-preparativne kromatografske kolone , premera 4,5 cm, višine 25 cm, napolnjene z adsorbensom HD-Sil-18-30-100 in uravnotežene z vodo. V nadaljevanju najprej z vodo izperemo vse soli, nato pa z 5 % do 10%-nim izopropanolom eluiramo čisto sol bepecina. Eluat zmrznemo in liofiliziramo. Dobimo 1,0 g bele amorfne soli, ki se odlično topi v vodi. Vsebuje 3,14% natrija (AAS), kar odgovarja dinatrijevi soli.

PRIMER 2. Srebrova sol bepecina

Bepecin (1,0 g, 0,7 mmola) raztopimo v 20 ml vode. Posebej pripravimo suspenzijo srebrovega hidroksida (oksida) iz 242 mg srebrovega nitrata (1,42 mmola) v 10 ml vode in 1,8 ml raztopine natrijevega hidroksida (31,0 mg/ml). Obe raztopini v zatemnjenem prostoru zmešamo in mešanje nadaljujemo dokler se raztopina ne zbistri. Raztopino sterilno filtriramo in čistimo na HPLC koloni kot je opisano v predhodnem primeru. Dobimo 0,93 g bele amorfne snovi, ki vsebuje 13% Ag (AAS). Snov potemni na zraku in je lahko topna v vodi.

PRIMER 3. Cinkova sol bepecina

Cinkovo sol bepecina pripravimo po postopku opisanem v predhodnem primeru s tem, da kot izhodni snovi vzamemo raztopino bepecina in suspenzijo cinkovega hidroksida. Po liofilizaciji dobimo belo amorfno snov, lahko topno v vodi, ki vsebuje 2,7% Zn (določeno po metodi AAS).

PRIMER 4. Indijeva sol bepecina

Indijevo sol bepecina pripravimo po postopku opisanem v predhodnem primeru s tem, da kot izhodni snovi vzamemo raztopino bepecina in susspenzijo indijevega hidroksida. Po liofilizaciji dobimo rahlo rumenkasto amorfno snov, ki vsebuje 7,2% indija (AAS).

PRIMER 5. Bakrova sol bepecina

Bakrovo sol bepecina pripravimo po postopku opisanem v predhodnem primeru s tem, da kot izhodni snovi vzamemo raztopino bepecina in suspenzijo bakrovega hidroksida. Po liofilizaciji dobimo modrikasto amorfno snov, ki vsebuje 4,1% bakra (AAS).

PRIMER 6. Antialergeno delovanje

Anafilaksa in anafilaktoidna reakcija sta akutni sistemski alergični reakciji, ki se manifestirata s kardiovaskularnimi, pulmonarnimi, nevrološkimi in dermatološkimi simptomi (srbenje, kožni edemi in urtikarija). Pri anesteziranih miših in podganah jo povzročimo z intravenozno injekcijo dekstrana (6%, 10%, 20%, itd. do 90%) in / ali jajčnega beljaka (1ml/podgano oz. 015 ml/ miš). Bepecin doziramo i.p. v dozah 10 pg, 1 pg, 10 ng in 10 pg/kg tel. teže živali; primerjalno pa klopiramin (20 mg/kg t.t.) in cimetidin (10 mg/kg, i.p.) in sicer neposredno po administraciji dekstrana, oz. 5 min potem, ali 24 oz. 48 ur predtem. V kontrolni skupini je opazen izrazit edem lica, smrčka, tačk in skrotuma z opazno cianozo, slaba respiracija in več smrtnih primerov.

Bepecin v vseh koncentracijah ščiti pred anafilaktoidno reakcijo, oziroma že obolele živali ozdravi. Klopiramin in cimetidin delujeta znatno slabše. Eksperiment dokazuje izrazito antialergeno delovanje bepecina.

PRIMER 7. Priprava sterilne raztopine bepecina.

Bepecin oz. njegovo sol (1 g) raztopimo v 50 ml vode za injekcije ter med blagim mešanjem dodamo 100 ml 0,1 molarne raztopine mlečne kisline v vodi in 1 ml benzilalkohola kot konzervansa. Z raztopino natrijevega hidroksida nastavimo ustrezno pH vrednost (prednostno 6,0), z vodo dopolnimo do 1000 ml in sterilno filtriramo skozi tlačni filter 0,22 p v sterilne steklenice in dobro zapremo. Hranimo v hladilniku pri 5° C.

PRIMER 8. Krema za roke.

Mešanico lipofilnih sestavin za 1 kg kreme, ki vsebuje: stearinsko kislino, cetearilni in stearilni alkohol, nasičene srednjeverižne trigliceride s kaprilno in kaprinsko kislino, silikonsko olje Dimeticon in natrijev cetearil sulfat, skupaj 164 g, stalimo v posodi z grelnim plaščem in mešalom pri 60°C in dobro zmešamo.

Posebej pripravimo hidrofilne sestavine: k sterilno filtrirani čisti vodi (700 g) dodamo propilenglikol (30 g) in konzervans butil-4-hidroksibenzoat (5 g), zmešamo in segrejemo na 60°C.

Hidrofilno fazo nato med mešanjem dodamo k lipofilni fazi ter pri nekoliko znižanem tlaku hladimo in mešamo toliko časa, da dosežemo 30-35°C.

Tej mešanici dodamo dišavo (0,5 g) in antioksidant tokoferol acetat (0,5 g), dobro premešamo, na koncu dodamo še 100 g raztopine bepecina, ki smo ga pripravili predhodno po postopku opisanem v primeru 7 in dobro zmešamo. Nato pri vključenem mešalu kremo polnimo v končno embalažo na polnilni napravi. Dobimo 1 kg kreme za roke.

PRIMER 9. Nočna krema za kožo.

Lipofilne sestavine za 1 kg kreme: stearinska kislina, avokadovo olje, nasičeni srednjeverižni trigliceridi s kaprilno in kaprinsko kislino, deviško oljčno olje, silikonsko olje, cetearil alkohol, natrijev cetearil sulfat, gliceril stearat, arganovo olje, skupaj: 385 g; pripravimo s taljenjem pri 60°C in mešanjem.

Nato na enak način kot v primeru 2. vmešamo hidrofilno fazo sestavljeno iz sterilno filtrirane vode (500 g) in konzervansa (butil-4-hidroksibenzoat,0,75 g). Na koncu dodamo še dišavo (0,25 g) in 100 g raztopine bepecin iz primera 7., homogeno zmešamo in polnimo v končno embalažo.

PRIMER 10. Dnevna krema za kožo.

Dnevno kremo pripravljamo po enakem postopku kot je opisan v primeru 3. Dodatno ta krema vsebuje še tokoferol acetat kot antioksidant (0,5%) in titan dioksid (0,5%) kot sredstvo za motnjenje in UV zaščitno snov. Dnevna krema vsebuje 64% vodne faze.

PRIMER 11. Emulzija za tretiranje aken in gub.

Mešanico lipofilnih sestavin za 1 kg emulzije, ki vsebuje: mandljevo olje (160 g), hladno stiskano deviško oljčno olje (60 g), propil hidroksibenzoat (1 g), mešanica maščobnih alkoholov (10 g, stearil-, arahidil-, behenilalkohol), sorbitan monostearat (25 g), cetilstearil-2-etil-heksanoat (25 g), izopropil miristat (10 g), skupaj 291 g.

Hidrofilne sestavine: benzilalkohol (5 g), želirna snov (5 g), glicerol (60 g), oksietilsorbitan (25 g), 5-n-oktanoil-salicilna kislina (15 g) in čista voda (459 g).

Lipofilne in hidrofilne sestavine zmešamo v homogeno snov in šele nato dodamo raztopino bepecina (140 g, pripravljeno po primeru 7).

PRIMER 12. Hidratantna krema z oljčnimi polifenoii.

Lipofilne sestavine: mandljevo olje, hladno stiskano deviško oljčno olje, avokadovo olje, stearinska kislina, cetearilni in stearilni alkohol, nasičeni srednjeverižni trigliceridi s kaprilno in kaprinsko kislino, silikonsko olje in natrijev cetearil sulfat, skupaj 164 g , stalimo v posodi z grelnim plaščem in pri 60°C dobro premešamo.

Hidrofilne sestavine: sterilno filtrirani čista voda in oljčna vegetacijska voda, glicerin, BHA kot konzervans, ter v končni fazi dodatek sterilno filtrirane raztopine bepecina, pripravljenega po primeru 7.

PRIMER 13. Krema za lokalno uporabo pri pikih žuželk, klopov in meduz.

Lipofilne sestavine za 1 kg kreme: stearinska kislina, cetearilni in stearilni alkohol, nasičeni srednjeverižni trigliceridi s kaprilno in kaprinsko kislino, silikonsko olje Dimeticon in natrijev cetearil sulfat, lidokain (0,5 g), skupaj 165 g, stalimo v posodi z grelnim plaščem in mešalom pri 60°C in dobro zmešamo.

Hidrofilne sestavine: k sterilno filtrirani čisti vodi (650 g) dodamo propilenglikol (29 g) in konzervans butil-4-hidroksibenzoat (5 g), zmešamo in segrejemo na 60°C.

Hidrofilno fazo nato med mešanjem dodamo k lipofilni fazi ter pri nekoliko znižanem tlaku hladimo in mešamo toliko časa, da dosežemo 30-35°C.

Tej mešanici dodamo dišavo (mentol,0,5 g) in antioksidant tokoferol acetat (0,5 g), dobro premešamo, na koncu dodamo še 150 g raztopine bepecina, ki smo ga pripravili predhodno po postopku opisanem v primeru 7. Nato pri vključenem mešalu kremo polnimo v končno embalažo na polnilni napravi.

PRIMER 14. Gel za lokalno uporabo pri lišajih.

Sestavine: hidroksipropilceluloza (10 g), izopropilalkohol (400 g), Sendide (10 g), antioksidant (0,5 g), konzervans (5 g), raztopina peptida iz primera 7 (160 g),in vode do 1000 g.

PRIMER 15. Krema z liposomi.

a. Priprava liposomov.

Jajčni lecitin raztopimo v etanolu, da dobimo 2,3 odstotno raztopino. Posebej pripravimo raztopino z 0,1% bepecina in 1,5% kalijevega klorida. Med intenzivnim mešanjem obe raztopini združimo, nastalo suspenzijo dializiramo skozi dializno membrano (MWCO=1000), da odstranimo kalijev klorid in etanol. Z ultrafiltracijo jo nato koncentriramo na 2 odstotno vsebnost liposomov.

To vodno raztopino liposomov med zmernim mešanjem združimo z raztopino kolagena (1%), ki vsebuje 0,1% konzervansa (natrijeva sol metilparabena) v razmerju 1 : 1 tako, da končna raztopina vsebuje 1% stabiliziranih liposomov. To raztopino po potrebi lahko tudi zamrznemo in liofiliziramo.

b. Krema z liposomi.

V prvi fazi pripravimo emulzijo, ki vsebuje: stearil alkohol (4 g), glicerol stearat (2 g), polioksipropilen (15 g), natrijevo sol 2-stearoil laktata (4 g), estre polioksietilen maščobne kisline (3 g), metil p-benzoat (0,3 g), dioktonat propilenglikola (2 g), polipropilenglikol(2 g), alantoin (0,5 g), trietanolamin (0,5 g) in 508 g vode ter dobro emulgiramo.

Nato pri največ 30°C dodamo predhodno pripravljeno raztopino z liposomi (458,7 g) iz točke a) in zmerno mešamo 2 uri.

Na ta način dobimo stabilizirano emulzijo/kremo z liposomi, ki vsebuje bepecin.

PRIMER 16. Šampon

Šampon za negovanje lasišča in proti prekomernemu izpadanju las vsebuje: vodo, natrijevlaurilsulfonat, kokamidopropil betain, kokamid DEA, glicerin, metilkloroizotiazolinon, heksil cinamat, benzil salicilat, butilfenil-metilpropional, citroneloljimonen, pantenol (0,1 %) in bepecin v obliki soli (0,01%).

PRIMER 17. Obliž za lokalno uporabo pri pikih žuželk.

Aktivne sestavine: bepecin (5,0 mg), in antihistaminik difenhidramin hidroklorid (250 mg) raztopimo v mešanici vode (10 g), dietilenglikolmonoetiletra (2,0 g) in polietilenglikol-monolaurata (0,5 g). Dodamo 25 g polimerne raztopine GEL VA. RTM.2484 (Monsanto) in dobro premešamo. Nato pustimo raztopino stati 20 minut, da se odzrači. Nanesemo jo na nepropustno membrano, (polietilenski film ali aluminizirani polietilenski film, na primer: 3M-Scotchpack 1006) in posušimo pri 40 do 50°C. To plast nato prekrijemo s porozno folijo za kontrolirano sproščanje snovi in zaščitno folijo ter jo razrežemo na primerno velikost.

Claims (14)

1. Patentni zahtevki

   1. Nove soli pentadekapeptida s formulo:

   Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Gly Leu Val x Me 1 5 10 15

   SEQ ID NO.1.

   kjer Me pomeni kation težke kovine, prednostno srebra, indija, cera, cinka in bakra.
2. 2. Postopek za pripravo soli po patentnem zahtevku 1, označen s tem, da ena ali dve karboksilni skupini pentadekapeptida SEQ ID NO. 1 reagirata s hidroksidom težke kovine, dobljeno sol pa očistimo s kolonsko HPLC kromatografijo in liofiliziramo.
3. 3. Pripravki na osnovi pentadekapeptida SEQ ID NO.1 in njegovih soli z anorganskimi in organskimi kislinami za uporabo v kozmetiki in dermatologiji.
4. 4. Pripravki na osnovi pentadekapeptida SEQ ID NO.1 in njegovih soli z anorganskimi in organskimi bazami za uporabo v kozmetiki in dermatologiji.
5. 5. Pripravki po zahtevkih 3 in 4, označeni s tem, da so v obliki raztopine, losjona, gela, kreme, mazila, emulzije, kreme z liposomi, šampona in obliža za lokalno uporabo.
6. 6. Pripravki po zahtevkih od 3 do 5, označeni s tem, da poleg pentadekapeptida SEQ ID NO.1 ali njegovih soli vsebujejo tudi druge farmakološko aktivne snovi, ki delujejo sinergistično ali njihovo delovanje dopolnjujejo.
7. 7. Pripravki po zahtevkih od 3 do 5, označeni s tem, da vsebujejo tudi drugače delujoče biološke učinkovine, prisotnost pentadekapeptida SEQ ID NO.1 ali njegovih soli pa zmanjšuje njihove stranske učinke.
8. 8. Pripravki po zahtevkih od 3 do 5, označeni s tem, da vsebujejo pentadekapeptid SEQ ID NO.1 ali njegove soli vgrajen v liposome.
9. 9. Pripravki po zahtevkih od 3 do 6, označeni s tem, da vsebujejo pentadekapeptid

   SEQ ID N0.1 ali njegove soli v koncentraciji od 0,0001% do največ 1%.
10. 10. Pripravki po zahtevkih od 3 do 9, označeni s tem, da vsebujejo pentadekapeptid SEQ ID NO.1 ali njegove soli, stabilizirane z vodnimi pufri na osnovi šibkih organskih ali anorganskih inertnih in fiziološko sprejemljivih kislin v pH območju prednostno od 5,0 do 7,5.
11. 11. Postopek za izdelavo gelov, mazil, emulzij in krem po zahtevku 5, označen s tem, da najprej ločeno pripravimo lipofilno fazo z mešanjem sestavin pri največ 60°C, ohladimo in vmešamo hidrofilno fazo, raztopino pentadekapeptida SEQ ID NO.1 ali njegovih soli pa dodamo na koncu pri temperaturi pod 30°C.
12. 12. Postopek za izdelavo pripravkov z liposomi, označen s tem, da najprej ločeno pripravimo suspenzijo liposomov in vgradimo pentadekapeptid SEQ ID NO. 1. ali njegove soli v hidrofilni fazi, nato liposome očistimo z dializo in ultrafiltracijo ter stabiliziramo s kolagenom, in v končni fazi homogeno zmešamo z lipofilnimi sestavinami v liposomsko kremo.
13. 13. Pripravki po zahtevkih od 5 do 10 za uporabo v kozmetiki za negovanje kože.
14. 14. Pripravki po zahtevkih od 5 do 10 za uporabo v dermatologiji za lokalno obravnavo aken, srbečice, eritemov, izpuščajev, zlasti herpetičnih, pikov insektov in meduz, površinskih poškodb kože, opeklin in sončnih opeklin.