SE531484C2 - Kosmetiska kompositioner - Google Patents

Description

20 25 30 35 53% 484 2 aminosyrorna kan vara i L-, D- eller DL-form. De beskrivna kompositionema har utvecklats för att tillhandahålla behandlande och eller förhindrande behandling för ålderssymptom hos hud och för att förbättra hudens utseende.

US2006/0013794 A1 (motsvarande FR2846883) beskriver användning av minst en peptid med sekvensen (AA)n-Arg-Gly-Ser-(AA)n, där (AA) är någon aminosyra eller ett derivat därav och n= noll till tre, som en aktiv beståndsdel i eller för framställning av en kosmetisk och/eller dermatologisk och/eller farmaceutisk beredning för behandling av effekterna av huds åldrande.

En synergistisk kombination av peptider av enbart naturligt ursprung för användning i kosmetiska produkter, är emellertid inte känd.

Det föreligger därför ett behov av alternativa, effektiva kosmetiska kompositioner för topisk applicering på hud för behandling och/eller fördröjande av de synliga tecknen på åldrande och fotoskadad hud, såsom rynkor, linjer, slapphet, hyperpigmentering, torr hud och åldersfläckar.

Ett syfte med uppfinningen är följaktligen att tillhandahålla en förbättrad kosmetisk komposition som innefattar en kombination av peptider av enbart naturligt ursprung för behandling av eller förhindrande av normala hudtillstånd orsakade av kronologiskt åldrande eller fotoàldrande, såsom rynkor, linjer, slapphet, hyperpigmentering och àldersfläckar, och/eller av torr, fjällande, kliande, irriterad hud.

Sammanfattning av uppfinningen Uppfinning tillhandahåller följaktligen användning av en terapeutisk effektiv mängd av (i) ett extrakt av enkornvete med en hög halt av peptid med sekvensen (H-Cys- Gly-OH)2, vari cysteinerna är sammanbundna genom en disulfidbindning (ii) en hexapeptid med sekvensen Gly-Pro-Gin-Gly-Pro-Gin, och (iii) en tripeptid med sekvensen Arg-Gly-Ser, vid tillverkning av en kosmetisk komposition för behandling av hudtillstånd. Den kosmetiska kompositionen är lämplig för användning vid tillstànd som har valts fràn gruppen bestående av rynkbildning, slapphet, fotoskadad hud, torr hud, tjällande hud, irriterad hud, kliande hud, och åldersfläckar.

Uppfinnarna har överraskande och oväntat funnit att användning av en terapeutisk effektiv mängd av en kombination av ovan nämnda peptider, varav varje enbart är av naturligt ursprung, och vilka var och en verkar på olika biologiska mekanismer, uppvisar en synergistisk effekt vid behandling av hudtillstånd som orsakats av kronologiskt åldrande eller fotoàldrande, såsom rynkor, linjer, slapphet, hyperpigmentering och åldersfläckar, och/eller torr, fjällande, kliande, irriterad hud. 10 15 20 25 30 35 EET 435; 3 l en föredragen utföringsform är varje peptid som används iföreliggande uppfinning enbart av naturligt ursprung. Kombinationen av tre peptider innefattar företrädesvis en terapeutiskt effektiv mängd av (i) ett extrakt av enkornvete med en hög halt av peptid med sekvensen (H-Cys-Gly-OH)2, vari cysteinerna är sammanbundna genom en dlsulfidbindning (ii) hexapeptid med sekvensen Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln, vilken extraherats från ris och (iii) minst en tripeptid med sekvensen Arg-Gly-Ser, vilken extraherats från Saccharomyces Cerevisiae. Man har överraskande nog funnits att effektiv behandling och förebyggande av hudtillstånd orsakade av kronologiskt åldrande eller fotoåldrande, såsom rynkor, linjer, slapphet, hyperpigmentering och åldersfläckar, och/eller av torr, tjällande, kliande, irriterad hud kan erhållas genom applicering av kosmetiska kompositioner på huden, vilka innefattar en specifik synergistisk kombination av dessa tre peptider.

Den terapeutiska effektiva kombinationen av tre peptider innefattar företrädesvis vardera av de tre peptiderna i en mängd av (i) 15-20 ppm av dipeptiddimer fràn extrakt av enkornvete, (ii) 45-55 ppm av hexapeptiden, och (iii) 15-20 ppm av tripeptiden.

Den totala mängden av peptid i kombinationen innefattar vidare företrädesvis mellan 0,0001 och10 viktprocent av kompositionen, mer föredraget mellan 0,001 och 5 viktprocent av kompositionen och ännu mer föredraget mellan 0,01 och 3 viktprocent av kompositionen.

Den kombination av peptider som används i enlighet med den föreliggande uppfinningen innefattar lämpligtvis en antioxidativ peptid, en kollagen-främjande peptid och en energiförhöjande peptid.

Det är känt att peptidextraktet fràn enkornvete befrämjar cellulära antioxidativa mekanismer. Det förstärker aktiviteten hos antioxidativa enzymer såsom Superoxid Dismutas (SOD) och katalas, varvid eliminering av reaktiva syreradikaler (ROS) inom cellerna gynnas.

Det minskar proteinkarbonylering och lipidperoxidering, vilka är resultat av oxidativa skador.

Det minskar DNA-skada och ökar cellens livsduglighet.

Peptiden med sekvensen (Gly-Pro-Gln)2, vilken är homolog med sekvenser som finns i humant kollagen IV och XVll, är känd för att främja dermal kollagensyntes, regenerering av dermo-epidermala förbindelser och epidermal differentiering.

Peptiden med sekvensen Arg-Gly-Ser binder till signalmolekyler som har betydelse för bibehållande och reglering av cellfunktion och är känd för att utlösa både kalcium-signalering och ATP-syntes, vilka verkar i synergi för att öka energiätergången.

Energiåtergång är nödvändig för cellens fysiologi och representerar förmågan att snabbt återhämta sig från fysiologiska eller omgivningsmässiga stressituationer. l frisk och ung hud föreligger en balans mellan energimetaboliter och cellens förmåga att uppfylla energikraven.

Energiätergång tillåter en snabb och effektiv återhämtning från energikrävande processer.

Hos äldrad hud är denna balans störd och energiåtergången är betydligt fördröjd eller 10 15 20 25 30 35 llïl f-jut »in »Dh lïlä å* 4 försvagad. Förbättring av energiåtergàngen hjälper därför huden att bevara sin strukturella och funktionella integritet och motverkar mekanismer vid åldrande, Kombinationen av tre peptider tillhandahöll en anmärkningsvärd synergistisk effekt på uttryck av kollagen IV och pan-keratin jämfört med användning av enbart de enskilda peptiderna.

Uppfinning tillhandahåller i en utföringsform en topisk komposition som innefattar: (a) en terapeutiskt effektiv mängd av (i) ett extrakt av enkornvete med hög halt av peptid med sekvensen (H-Cys-Gly-OH)2, vari cysteinerna är sammanbundna genom en disulfidbindning (ii) en hexapeptid med sekvensen Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln, och (iii) en tripeptid med sekvensen Arg-Gly-Ser, tillsammans med (b) en dermatologiskt acceptabel bärare.

Sådana kompositioner är särskilt användbara för topisk applicering på humanhud för Kosmetisk behandling ochíeller förhindrande av hudtillstånd som har valts från gruppen bestående av rynkbildning, slapphet, fotoskadad hud, torr hud, fjällande hud, irriterad hud, kliande hud och åldersfläckar.

Kompositionen enligt uppfinningen kan innefatta en dermatologiskt/kosmetiskt acceptabel vehikel som spädningsmedel, dispergeringsmedel eller bärare för kompositionen med peptider. Bäraren kan väljas från gruppen bestående av vatten, flytande eller fasta lenande ämnen, silikonoljor, emulgermedel, lösningsmedel, fuktighetsbevarande medel, förtjockningsmedel, pulver, drivgaser och liknande.

Bäraren kommer vanligtvis att utgöra från fem viktprocent till 99,9 viktprocent, företrädesvis från 25 viktprocent till 80 viktprocent av kompositionen, och kan i frånvaro av andra kosmetiska tillsatser utgöra återstoden av kompositionen.

Kompositionen kan vidare innefatta andra specifika aktiva ämnen som är gynnsamma för huden, såsom Solskyddsmedel, fuktgivande ämnen, ämnen som gör huden ljusare. Vehikeln kan även vidare inkludera tillsatser såsom parfymer, täckmedel, konserveringsmedel, färgämnen, buffrar och andra beståndsdelar som hindrar åldrande.

Den topiska kompositionen enligt föreliggande uppfinning kan framställas på ett sätt som är välkänt inom teknikområdet för framställning av hudvårdsprodukter. De aktiv beståndsdelarna införs i allmänhet på ett sedvanligt sätt i en dermatologiskt acceptabel bärare. De aktiva beståndsdelarna kan lämpligtvis först lösas upp eller dispergeras i en andel av det vatten eller annat lösningsmedel eller vätska som ska införas i kompositionen.

De föredragna kompositionerna är emulsioner med olja i vatten eller vatten i olja.

Kompositionen kan vara i form av sedvanliga hudvårdsprodukter såsom en kräm, gel, lotion eller liknande. Kompositionen kan även vara i form av ett rengöringsmedel, till exempel en bad- eller duschgel, vilken möjligen kan innehålla ett administreringssystem 10 15 20 25 30 35 53? ilåii 5 för de aktiva ämnena för att understödja vidhäftningen till huden vid sköljning. Kompositionen kan även vara en underlagskräm eller annan färgande produkt, till exempel mascara eller läppstift. Produkten är mest föredraget en topisk produkt som skall lämnas kvar ("leave-on”); en produkt som skall appliceras på huden utan ett avsiktligt tvättningssteg snart efter dess applicering på huden.

Kompositionen kan paketeras på vilket lämpligt sätt som helst, till exempel i en behållare, såsom en burk, en flaska, tub, ”roll-ball” eller påsar.

Den kosmetiska kompositionen enligt uppfinningen används lämpligtvis i ett kosmetlskt förfarande för behandling/motverkande av hudtillstånd som har valts från gruppen bestående av rynkbildning, slapphet, fotoskadad hud, torr hud, fjällande hud, irriterad hud, kliande hud, och åldersfläckar, varvid förfarandet innefattar applicering på huden av en topisk komposition som innefattar (i) ett extrakt av enkornvete med en hög halt av peptid med sekvensen (H-Cys-Gly-OH)2, vari cysteinerna är sammanbundna genom en disulfidbindning (ii) en hexapeptid med sekvensen Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln, och (iii) en tripeptid med sekvensen Arg-Gly-Ser.

Det ovanstående förfarandet kan utföras en eller flera gånger dagligen på den hud som kräver behandling. Förbättringen av hudens utseende kommer vanligtvis att bli synlig efter tre till sex månader, beroende på hudens tillstànd, koncentrationen av de aktiva beståndsdelar som använts i förfarandet enligt uppfinningen, den mängd av kompositionen som används, och frekvensen med vilken den appliceras. En liten mängd av kompositionen, till exempel frän 0,1 till fem ml appliceras i allmänhet på huden från en lämplig behållare eller applikator och sprids över och/eller gnuggas in i huden genom användning av händer eller fingrar eller en lämplig anordning. Ett sköljningssteg kan eventuellt följa, beroende på huruvida kompositionen är formulerad som en produkt som skall lämnas kvar ("leave-on") eller en rengöringsprodukt.

Kompositionerna enligt uppfinningen liksom förfarandena vari de används tillhandahåller följaktligen fördelen med motverkande av åldrande, vilket resulterar i befrämjande av len och spänstig hud med förbättrad elasticitet och ett reducerat eller fördröjt uppträdande av rynkor och åldrande hud med förbättrad hudfärg. En allmän förbättring av utseendet, strukturen och tillståndet, i synnerhet med avseende på utstrålning, klarhet, och allmänt ungdomligt utseende hos huden uppnås. Förfarandena och kompositionerna enligt uppfinningen tillhandahåller följaktligen ett brett spektrum av hudvårdsfördelar.

Termen ”behandling” inkluderar såsom använd häri inom sitt omfång reduktion, fördröjning och/eller förhindrande av uppträdande av rynkad, àldrad, fotoskadad, torr och/eller torr och irriterad hud och allmän förhöjning av hudkvaliteten genom förbättring av dess utseende och struktur, genom att förhindra eller reducera rynkbildning och öka hudens flexibilitet, fasthet, mjukhet, spänst och elasticitet. De kosmetiska kompositionerna, 10 15 20 25 30 35 if l u 'Il ...a 43%- LT* å* 6 förfarandena och användningarna av kombinationen av peptider enligt uppfinningen kan vara användbara för behandling av hud som redan är rynkad, åldrad, fotoskadad, torr och irriterad eller för behandling av ung hud för förhindrande eller reduktion av försämrande förändringar orsakade av normalt åldrande, men i synnerhet den fotoåldrande processen.

Kortfattad beskrivning av figurerna Figur 1 visar effekten av en procent av peptidkomplexet, det vill säga kombinationen av tre peptider, pà SOD Mn (Superoxid Dismutas mangan)-aktiviteten.

Figur 2 visar effekten av en procent av peptidkomplexet, det vill säga kombinationen av tre peptider, pä katalas-aktiviteten.

Figur 3 visar effekten av en procent av peptidkomplexet, det vill säga kombinationen av tre peptider, pà proteinkarbonylering.

Figur 4 visar effekten av en procent av peptidkomplexet, det vill säga kombinationen av tre peptider, på lipidperoxidering.

Figur 5 visar behandlade (peptidkomplex, det vill säga kombinationen av tre peptider) och obehandlade hudprover från snittade stansbiopsier, vilka har odlats under 16 till 24 timmar och dubbelinfärgats genom användning av immunfluorescens, varvid: Figur 5a visar infärgning av kollagen l Figur 5b visar infärgning av filaggrin Figur 5c visar infärgning av beta1-integrin Figur 5d visar infärgning av laminin 5 Figur 5e visar infärgning av kollagen IV Figur 6 vissa jämförande ATP-utvärderingsanalyser, varvid kontroll jämförs med peptidkomplexet (kombinationen av tre peptider).

Figur 7 visar inverkan av administrering av peptidkomplexet (kombinationen av tre peptider) på Cazïfluorescensen.

Figur 8 visar Cazïbilder genom användning av konfokalmikroskopi.

Figurerna 9-10 visar immuninfärgning av kollagen lV efter 24 timmar.

Figurerna 11 till 12 visar immuninfärgning av pan-keratin efter 24 timmar.

Detalierad beskrivning av urmfinninqen Hudens åldrande är en komplex process som kontrolleras av ett antal faktorer som kan delas upp i inre och yttre faktorer vilka inkluderar genetik, exponering för omgivningsstress (UV, mekanisk stress), hormonförändringar eller metabolism. De kombinerade resultaten av dessa olika faktorer är försämring av hudens struktur, dess funktion och dess utseende (Rittie et al., 2002). Omgivningens och UV-stràlnings påverkan är i synnerhet mycket viktig vid processen för hudens åldrande (Rittie at al., 2002). Det är 10 15 20 25 30 35 7 känt att dessa effekter är direkt relaterade till utjämning av förbindelserna mellan dermis och epidermis, till nedbrytningen av hudens fibersystem, den extracellulära matrisen (ECM), och till förändringen av epidermis.

ECM produceras av fibroblaster och keratinocyter. Den utgörs av makromolekyler vilka inkluderar kollagener, elastin, proteoglykaner och fibronektin. Kollagen och elastin är de huvudsakliga beståndsdelarna i ECM och föreligger i vävnader i form av olösliga, rigida och stabila fibrer. De är kraftigt sammanflätade och organiserade l ett nätverk av mikrofibrlller som ger bindvävnad fasthet och mekanisk motståndskraft. ECM verkar följaktligen som ett fysiskt stöd men utför även biologiska, intracellulära utbytes- och kommunikationsfunktioner, vilka är nödvändiga för nära kontakt mellan dermis och epidermis och för hudvävnadens integritet.

Kronologiskt åldrande eller omgivningsstress (i synnerhet solljus) förstör denna balans. Cellulär metabolisk aktivitet minskar och förnyelsen av kollagenfibrer reduceras.

Enzymatiska aktiviteter ökar samtidigt dramatiskt och resulterar i en våldsam och anarkisk nedbrytning av kollagenfibrer och en strukturförlust i ECM. Huden förlorar sin spänst och elasticitet och blir slapp.

Alltsedan McCords och Fridovichs insatser avseende superoxid dismutas 1969 har betydande intresse fokuserats på relationen mellan fria radikaler [superoxid (Og och hydroxyl (OH')-anjoner och andra reaktiva syreradikaler (ROS)] och hudens åldrande. De fria radikalernas ursprung kan vara endogent (aktivering av arakidonsyrametabolismen, aktivering av fagocytos eller ackumulering av reducerade metaboliter) eller exogent (strålning, UV fràn solljus, luftförorening, tobaksrök, bekämpningsmedel med mera).

Alla celler har i varierande grad en kemisk och enzymatisk arsenal mot fria radikaler. Det gör det möjligt för dem att utöva ett naturligt skydd mot dessa mycket reaktiva molekyler och att optimalt kontrollera deras skadliga effekter. Cellresponserna kan emellertid variera beroende pà den oxidativa stressens omfattning. Låga kvantiteter av ROS stimulerar cellproliferation och överuttryck av antloxidatlva enzymer som kan anpassa sig till och reagera på stressen. När ROS à andra sidan produceras i överskott attackeras en serie av biologiska substrat. Dessa skyddssystem är ofta övermannade och kan inte hantera en överväldigande ström av radikaler. Detta mättnadsfenomen blir mer uttalat med åldern. ROS orsakar i detta fall ofta irreversibel cellskada som till och med kan leda till celldöd (McCord et al., 1996). De huvudsakliga effekterna av denna okontrollerade oxidativa stress är intensiva, riktade och irreversibla: oxidation av proteiner och enzyminaktivering, DNA-kedjebrott och lipidperoxidering.

De tre peptider som används i enlighet med den föreliggande uppfinningen har företrädesvis naturligt ursprung. Den använda kombinationen av peptider innefattar en antioxidativ peptid, en kollagen-främjande peptid och en energiförhöjande peptid. Den 10 15 20 25 3D 35 8 använda kombinationen av tre peptider innefattar en effektiv mängd av (i) ett extrakt av enkornvete med en hög halt av peptid med sekvensen (H-Cys-G|y-OH)2, vari cysteinerna är sammanbundna genom en disulfidbindning (ii) en hexapeptid med sekvensen Gly-Pro-Gln- Gly-Pro-Gln som extraherats från ris, och (iii) minst en tripeptid med sekvensen Arg-Gly-Ser, vilken har extraherats från Saccharomyces Cerevisiae. Kombinationen av de tre enskilda peptiderna kommer mest föredraget att användas i mängderna (1) 15-20 ppm av dipeptiddimeren från det ovan specificerade extraktet av enkornvete, (ii) 45-55 ppm av den ovan specificerade hexapeptiden, och (iii) 15-20 ppm av den ovan specificerade tripeptiden.

Terapeutiskt effektiva mängder av den beskrivna kombinationen av tre peptider används vid framställning av de topiska kompositioner som beskrivits häri, Den totala mängden av kombinationen av tre peptider föreligger företrädesvis i en mängd mellan 0,0001 till 10 viktprocent av kompositionen. Mängden är mer föredraget från 0,001 till 5 viktprocent av kompositionen och mest föredraget från 0,01 till 3 viktprocent av kompositionen, för att maximera fördelarna vid minimal kostnad.

Uppfinnaren har överraskande funnit att kombinationen av vardera av de ovannämnda peptiderna ger en anmärkningsvärd synergistisk effekt på uttrycket av kollagen lV och pan-keratin, jämfört med användning av endast de enskilda peptiderna.

För att underlätta förståelsen av den föreliggande uppfinningen tillhandahålls de följande exemplen, vilka emellertid endast åskådliggör uppfinningen.

Exempel 1 Effekten av kombinationen av tre peptider för skydd av humana fibroblaster från UVA- inducerad oxidativ stress Aktiva syrespecies och andra fria radikaler antas delta vid aktinåldrande. För att bestämma de skyddande aktiviteterna för kombinationen av tre peptider, genomfördes UVA- inducerad oxidativ stress vid olika betingelser. Cellodlingar med humana fibroblaster utsattes artificiellt för UVA-stressbetingelser. De fria radikaler som bildats under dessa stressbetingelser mättes. Den antioxidativa aktiviteten hos kombinationen av tre peptider bestämdes medelst olika förfaranden.

Fibroblaster odlades till 70 % konfluens och behandlades med 'l % av kombinationen av peptider under 24h före och under UVA-exponeringen. Medlet avlägsnades före bestrålningen och cellerna sköljdes med 5 ml PBS. Fibroblasterna bestrålades därefter i 5 ml PBS i skålar utan lock med 5 J/cmz genom användning av en lampa av typen Vilber Lourmat (VL-215M fisher Bioblock). Efter bestrålningen behandlades cellerna såsom tidigare beskrivits och placerades återigen i en inkubator under 4h (SOD, katalas & karbonylering) eller under 24h (lipidperoxidering). 10 15 20 25 30 35 531 å-B-ft- 9 Effekten av 1 % av kombinationen av tre peptider på SOD-aktiviteten Elektrofores utfördes genom användning av 8% polyakrylamidgel i sedvanlig Tris- glycinbuffert vid 4°C. Därefter användes ett modifierat fotokemiskt förfarande enligt Beauchamp och Fridovitch (1971) för att lokalisera SOD-aktiviteter på gelerna (se Figur 1 för resultat).

Effekten av 1 % av kombinationen av tre peptider på katalasaktiviteten Katalasaktiviteten analyserades genom mätning av hur H2O2 försvinner genom användning av en spektrofotometer (se Figur 2 för resultat).

Effekten av 1% av kombinationen av tre gegtider på groteinkarbonyleringen Proteinkarbonyleringen bestämdes med ELlSA genom användning av anti-2,4- dinitrofenylhydrazinantikropp. Absorbansmätningar gjordes vid 490 nm genom användning av en Dynatech mikroplattläsare (se Figur 3 för resultat).

Effekten av 1% av kombinationen av tre peptider på lipidperoxiderinqen Lipidperoxideringen bestämdes medelst mätning av tiobarbitursyra-reaktiva substanser (TBARS). Mätningar gjordes genom användning av en spektrofotometer med en excitationsvàglängd vid 525 och 547 för emission (se Figur 4 för resultat).

Studier av UVA-inducerad oxidativ stress hos fibroblaster visade att administrering av kombinationen av peptider ökade SOD Mn (Superoxid Dismutas mangan)- uttrycket i UVA-stressade celler, i förhållande till kontrollerna.

Behandling av dessa fibroblaster med kombinationen av peptider 24h före UVA-exponeringen gav vidare katalasaktivitet på högre nivå som svar på UVA-stress, medan UVA-inducerad proteinkarbonylering och lipidperoxidering minskade betydligt.

Exempel 2 Effekten av kombinationen av tre peptider på den dermo-epidermala förbindelsen och på extracellulära matrisproteiner 1% av kombinationen av tre peptider applicerades på den epidermala sidan av 6 mm färska stansbiopsier. Behandlade och obehandlade hudprover odlades under 16 till 24h. Trippelfärgning med immunfluorescens utfördes genom användning av specifika antikroppar riktade mot (i) kollagen lll, följt av en sekundärantikropp som kovalent koniugerats till Alexa Fluor® 594 (röd); (ii) pankeratin, följt av en sekundär antikropp som kovalent konjugerats till Alexa Fluor® 488 (grön), (iii) färgning av cellkärnan genomfördes genom användning av DAPl (blå). Dubbel fluorescensfärgning genomfördes genom användning av en specifik antikropp riktad mot kollagen l, filaggrin, ß1-integrin, laminin-5, 10 15 20 25 30 35 531 434 10 kollagen lV, följt av den specifika sekundärantikroppen kovalent konjugerad till FITC (grön).

Färgning av cellkärnan utfördes genom användning av DAPI (blå).

Försök med immunfärgning avslöjade vidare att syntesen av kollagen l, lll, IV, laminin 5, betal-integrin och filaggrin ökade vid applicering av kombinationen av peptider på huden (se Figurerna 5a-5e).

Exempel 3 Effekten av kombinationen av tre peptidegaå den cellu_läflra enerqin Utvärdering av cellulärt ATP hos humana fibroblaster som behandlats med 10-6 M av kombinationen av tre peptider avslöjade en snabb ökning av cellulärt ATP (se Figur 6).

Behandling av de utvalda keratinocyterna med kombinationen av tre peptider framkallade en maximala Ca2+-mobiliseringsnivåer 90s efter behandlingen, såsom utvärderats genom användning av en fluorescent probe och konfokalmikroskopi (se Figurerna 7 och 8). Dessa resultat antyder starkt ökad cellulär differentieringsaktivitet.

Exempel 4 Bevis för den sjmerqistiska effekten hos kombinationen av tre Debtider Låkolladen IV och pankeratin Syftet med försöket var att undersöka effekten av kombinationen av tre peptider pä syntesen av kollagen lV och pan-keratin. 20ul av kräm A (endast peptid) eller B (kombinationen av tre peptider) applicerades två gånger dagligen pá den epidermala sidan av 6mm färska stansbiopsier. Behandlade och obehandlade hudprover odlades under 24h.

Dubbel immunfluorescensfärgning utfördes genom användning av en specifik antikropp riktad mot kollagen lV och pankeratin, följt av den specifika sekundära antikroppen kovalent konjugerad till Alexa Fuor® 488 (grön). Färgning av cellkärnan utfördes genom användning av DAPl (blå). Se Figurerna 9-12.

Denna studie visade att hud som behandlats med kräm B uppvisade mycket starkare uttryck av kollagen lV och pankeratin jämfört med hud som behandlats med kräm A, vid odling av hud ex vivo. Ökningen har observerats inom 24h från appliceringen av krämerna.

Denna studie visar att kombinationen av tre peptider verkar synergistiskt på syntesen av kollagen IV och pankeratin, på ett mycket starkare sätt än varje peptld enskilt.

Exempel 5 Rynkhämmande effekt av kombinationen av tre gegtider 10 15 20 25 531 484 11 Syftet med denna studie var att kvantifiera den rynkhämmande effektiviteten hos produkterna med nummer 472 (placebo + 3% av kombinationen av tre peptider) och 638 (placebo) in vivo på kràkfötter. Studien utfördes som dubbelblind på 22 frivilliga försökspersoner som uppvisade kråkfots-rynkor. Platsen för applicering av produkterna valdes ut slumpmässigt (vänster/höger kråkfot). Replikat av de tvâ kràkfötterna gjordes före och efter 28 dagar med behandling två gånger dagligen.

Den rynkhämmande effekten hos produkterna med nummer 472 och 683 analyserades genom observation av replikat med hjälp av en profilometer utrustad med en bildanalysator. Silikonpolymerreplikat gjordes innan och efter applicering av produkten och undersöktes medelst S.I.A. (silikonbildanalys; silicone image analysis). Studsande ljus som faller med 35° kastar skuggor på avtryckets yta, vilka därefter observeras med en CCD- kamera kopplad till en dator. Det undersökta området var 1 cmz. Analys av gràskalan hos den erhållna datorbilden tillhandahåller följande parametrar genom användning av mjukvarorna QUANTIRIDES och QUANTILINES (MONADERM): - Total rynkyta - Rynkornas genomsnittliga längd - Rynkornas genomsnittliga djup Resultaten beräknades genom användning av variansen av de rynkparametrar som observerats som ett resultat av produktens effekt jämfört med DO.

Resultaten visas i tabell 1: Tabell 1: Rynkhämmande effekt av produkterna 472 och 638 Total rynkyta Produkt 472 Produkt 638 D28-D0 D28-DO Genomsnitt SEM Genomsnitt SEM s -2,4 7,1 1,8 7.9 P 0,0368 Genomsnittlig längd Produkt 472 Produkt 638 10 15 20 25 sai 434 12 D28-DO D28-D0 Genomsnitt SEM Genomsnitt SEM L -O,1 0,2 -0,1 0,3 P 0,02845 Genomsnittligt diug Produkt 472 Produkt 638 D28-D0 D28-D0 Genomsnitt SEM Genomsnitt SEM D -2,s 18,1 7,7 18,2 P 0,0327 Efter 24 dagar med applicering två gånger per dag, och vid betingelserna enligt denna studie: - Produkten med nummer 638 (placebo) tenderar att öka de olika rynkparametrarna.

- Produkten med nummer 472 (placebo + 3 % av kombinationen av tre peptider) minskar signifikant (P<0,05) de olika rynkpararnetrarna.

Exempel 6 Effekt av kombinationen av tre peptider pà hudens elasticitet Syftet med denna studie var att in vivo kvantifiera effekten av produkterna med nummer 472 (placebo + 3 % av kombinationen av tre peptider) och 638 (placebo) på hudens elasticitet. Studien genomfördes dubbelblint på ansiktet hos 22 frivilliga personer. Området för applicering av produkterna randomiseras (vänster/höger ansiktshalva). Mätningar gjordes pä hakan före och efter 28 dagars behandling två gånger per dag genom användning av samma instrument och principer som tidigare har beskrivits, men denna gång mättes parametern genomsnittlig grovhet (Ra).

Resultaten beräknades genom användning av variansen för den genomsnittliga grovhet som observerats som ett resultat av produktens effektjämfört med DO.

Resultaten visas i tabell 2: 10 15 531 484 13 Tabell 2: Effekt av produkterna 472 och 638 på hudens elasticitet Genomsnittlig grovhet representerar hudens elasticitet.

Exempel 7 Formuleringen nedan beskriver en kräm med olja i vatten som innefattar kombinationen av tre peptider. De angivna procentsatserna är per viktandel av kompositionen, såvida annat inte angivits.

Efter 28 dagars applicering, och vid betingelserna enligt denna studie: Produkten med nummer 638 (placebo) tenderar att öka Ra-parametern, vilken Produkt 472 Produkt 638 028-00 D28-DO Genomsnitt SEM Genomsnitt SEM Ra -o,4s3 0,409 P 0,01 365 Produkten med nummer 472 (placebo + 3 % av kombinationen av tre peptider) minskar signifikant (P<0,05) Ra-parametern, vilken representerar hudens elasticitet. viktprocenl HYDROGENERAD POLYISOBUTEN 4,5 CYKLOPENTASILOXAN 4,5 DlMET|KON 2,5 GLYCERYL STEARAT 2 CETYL ALKOHOL 2 PEG~4O STEARAT 1,25 NATRlUM AKRYLAT/AKRYLOYLDIMETYL TAURAT 1 SAMPOLYMER TOKOFERYL ACETAT 0,5 KONSERVERINGSMEDEL QS PARFYM QS KOMBlNATIONEN AV TRE PEPTIDER 3 VATTEN till 100 531 434 14 Exempel 8 Formuleringen nedan beskriver en underlagskräm som innefattar kompositionen enligt uppfinningen, vilken är lämplig för förfarandena och tillstånden enligt den föreliggande uppfinningen. De angivna procentsatserna är per viktandel av kompositionen, såvida annat inte angivits.

Viktprocent CYKLOPENTASlLOXAN 14 PlGlVlENT 9 POLYGLYCERYL-4 ISOSTEARAT 5 ISODODEKAN 4 BUTYLEN GLYKOL 2 BIS-PEG/PPG-14/14 DIMETIKON 2 HYDROGENERAD POLYISOBUTEN 1,5 BIVAX 1,2 MAGNESIUM SULFAT 1 KONSERVERINGSMEDEL QS PARFYM QS KOMBlNATlONEN AV TRE PEPTlDER 3 VATTEN till 100 Exempel 9 Formuleringen nedan beskriver en kroppsdoft som innefattar kompositionen enligt uppfinningen, vilken är lämplig för förfarandena och tillstànden enligt den föreliggande uppfinningen. De angivna procentsatserna är per viktandel av kompositionen, såvida annat inte angivits.

Wt% DENATURERAD ALKOHOL 55 PROPYLEN GLYKOL GLYCERlN BENSOFENON-2 0,1 PARFYM 6 SOLUBlLlSERlNGSMEDEL 2 KOMBlNATlONEN AV TRE PEPTIDER 3 VATTEN till 100 10 15 53? 484 15 Samtliga ovanstående, toplska kompositioner tillhandahåller en effektiv kosmetisk behandling för förbättring av utseendet hos rynkad, åldrad, fotoskadad, och/eller irriterad hud. när de appliceras på hud som har försämrats genom åldrande eller fotoàldrande eller när de appliceras på ung hud för att hjälpa till att förhindra eller försena sådana försämrande förändringar. Samtliga kompositioner kan beredas på sedvanligt sätt.

Orden "innefattar/innefattande” och orden ”har/inkluderar” används när de används häri med hänvisning till den föreliggande uppfinningen för att specificera förekomsten av nämnda särdrag, enheter, steg eller beståndsdelar men utesluter inte förekomsten eller tillsats av ett eller flera andra särdrag, enheter, steg, beståndsdelar eller grupper därav.

Det torde inses att vissa särdrag hos uppfinningen, vilka för tydlighetens skull har beskrivits i ett sammanhang av enskilda utföringsformer, även kan tillhandahållas i kombination i en enda utföringsform. Omvänt gäller att olika särdrag enligt uppfinningen som för konoishet har beskrivits i sammanhang av en enda utföringsform även kan tillhandahållas separat eller i vilken lämplig underkombination som helst.

Claims (1)

1. 0 15 20 25 30 35 Krav (W 10. 531 Ãäël 16 . Användning av en terapeutiskt effektiv mängd av en kombination av tre peptider vid framställning av en Kosmetisk komposition för behandling av hudtillstånd, varvid kombinationen av de tre peptiderna innefattar (i) ett extrakt av enkornvete med en hög halt av peptid med sekvensen (H-Cys-Gly-OH)2, vari cysteinerna är sammanbundna genom en disulfidbindning, (ii) en hexapeptid med sekvensen Gly- Pro-Gln-Gly-Pro-Gln, och (iii) en tripeptid med sekvensen Arg-Gly-Ser. Användning enligt kravet 1, vari kombinationen av tre peptider innefattar (i) ett extrakt av enkornvete med en torrvikt av 6 g/l innehållande 15-20 ppm av dipeptiddimer, (ii) 45-55 ppm av hexapeptiden, och (iii) 15-20 ppm av tripeptiden. Användning enligt något av de föregående kraven, vari kompositionen innefattar 0,0001 till 10 viktprocent av kombinationen av tre peptider. Användning enligt kravet 3, vari kompositionen innefattar 0,001 till 5 viktprocent av kombinationen av tre peptider. Användning enligt kravet 4, vari kompositionen innefattar 0,01 till 3 viktprocent av kombinationen av tre peptider. Användning enligt något av de föregående kraven, vari det hudtillstånd som skall behandlas har valts från gruppen bestående av rynkbildning, slapphet, fotoskadad hud, torr hud, fjällande hud, irriterad hud, kliande hud, och åldersfläckar. En lokal komposition som innefattar: en terapeutiskt effektiv mängd av en kombination av tre peptider som innefattar (i) ett extrakt av enkornvete med en hög halt av peptid med sekvensen (H-Cys-Gly-OH)Z, vari cysteinerna är sammanbundna genom en disulfidbindning, (ii) en hexapeptid med sekvensen Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln, och (iii) en tripeptid med sekvensen Arg- Gly-Ser; tillsammans med en dermatologiskt acceptabel bärare. En lokal komposition enligt kravet 7, vari kombinationen av tre peptider innefattar (i) ett extrakt av enkornvete med en torrvikt av 6 g/l innehållande 15-20 ppm av dipeptiddimer, (ii) 45-55 ppm av hexapeptiden, och (iii) 15-20 ppm av tripeptiden. En lokal komposition enligt något av kraven 7 eller 8, vari den dermatologiskt acceptabla bäraren har valts från gruppen bestående av vatten, flytande eller fasta lenande ämnen, silikonoljor, emulgermedel, lösningsmedel, , fuktighetsbevarande medel, förtjockningsmedel, pulver, och drivgaser. En lokal komposition enligt något av kraven 7 till 9, vari bäraren utgör 5 till 99,9 viktprocent av kompositionen. 531 484 17 11. En lokal komposition enligt kravet 10, vari bäraren utgör 25 till 80 viktprocent av kompositionen.