SE459258B - Anordning och foerfarande foer spridning av mikroorganismer - Google Patents

Description

o,- 459 258 5 10 15 20 25 30 Ett vanligt problem vid s.k. utspädningsutstrykning är att utspädningen ej blir tillräcklig, dels p.g.a. för mycket ma- terial på ympnálen dels p.g.a. att man ej stryker ut provet tillräckligt mycket, d.v.s. att man ej kan utnyttja agar- gplattans hela yta pà ett tillfredsställande vis.

Flera försök att förenkla dessa tidskrävande och arbetssamma; metoder har gjorts. Bl.a. har en automatisk spridningsanord- ning för bestämning av antalet kolonibildande enheter (l) och för renodling av bakterieisolat (2) utvecklats. Dessutom finns det beskrivet en eldriven roterande platta pá vilken man sätter agarplattan och med en ympnål stryker ut bakterie- provet för att kunna renodla enskilda bakteriearter (3).- Trots god reproducerbarhet verkar de flesta automatiska an- ordningar bli både komplicerade, med dyra i inköp. dyra att tillverka och där- För att förenkla spridningen av mikro- organismer på agarplattor, dels för bestämning av antalet kolonibildande enheter och dels för isolering av bakterie- isolat har enligt föreliggande uppfinning konstruerats en anordning som delvis bygger på Frazer-Williams och Banburys arbete (3). Anordningen, rotaplatorn, roteras av magneten i en magnetomrörare.

Denna kommer att hålla och rotera agarplattan vid spridningen av mikroorganismer för bestäm- ning av antalet kolonibildande enheter. Dessutom kan agar- _ ytan användas optimalt vid isoleringen av bakterieisolat.

Uppfinningen kommer att närmare beskrivas med hänvisning till bifogade ritningar,där Fig. l visar övre delen av rotaplatorn, där Pig. 2 visar undre delen av rotaplatorn och där Pig. 3 visar de båda delarna hopsatta till en enhet.

Dessutom hänvisas-till fem. fotografier (Fiq.4A-B)0Ch (Fig.5A-C) l9 15 20 25 459 258 Beskrivning Rotaplatorn består av två delar, en övre del 1 och en undre del 2.

Det är denna enhet som sättes på magnetomröraren.

Fig. 3 viëar de tvâ delarna hoppsatta som en enhet 3.

Den övre delen l består av en platta 4 och en under denna fäst del S, som innehåller en magnet 6. Hela övre delen 1 kan dock i stället tillverkas i ett stycke, varpå magneten 6 insättes. ' Den undre delen 2 stabiliseras på magnetomröraren med dubbel- häftande tejp, alternativt kan den tillverkas i ett tyngre material, varvid man slipper den dubbelhäftande tejpen. Med hjälp av magneten 6 som sitter i delen 5 som illustreras i Fig. l roterar övre delen 1 i den undre delen 2.

Rotaplatorn kan lämpligen tillverkas av plast. Ett lämpligt material är delrin. Den roterande delen 5 och den undre delen 2 kan med fördel vara tillverkade av teflon eller över- dragna med teflon; detta för att minska friktionen. Materialet kan dock varieras om hänsyn tages till att friktionen mel- lan den roterande övre delen 1 och den undre delen 2 skall använda metall i undre delen och vara låg. Man kan t.ex. plast i övre delen eller omvänt. Metallen skall vara omag- netisk.

Som exempel på dimensioner som visat sig lämpliga kan anges att plattan 4 kan vara en cirkulär skäl med yttre diametern 88,5 mm och höjden 6 mm. Delen 5 som innehåller magneten 6 kan vara en cirkulär skiva med diametern. 59 mm och höjden ll mm och den undre delen 2 kan ha formen av en cirkulär skål med yttre diametern 76 mm, inre diametern 60 mm, yttre höjden 10 mm och inre höjden (djupet) 8 mm. 10 15 20 25 30 -antalet kolonibildande enheter (Pig. '._. 459 258 Handhavande Som tidigare nämnts i introduktionen kan rotaplatorn'använ- das både vid spridning av mikroorganismer för bestämning av 4A) och för renodling av mikroorganismer (Pig. 4B) Metoder.

Beräkning av antalet kolonibildande enheter. Efter omfattan- de tester på laboratoriet testades rotaplatorn av en arbets- grupp bestående av 5 personer under ett 5 veckor långt fält- försök. Gruppen skulle sprida ungefär 500 plattor per vecka' med glasrackla, varvid två personer skulle använda rotapla- torn och de andra tvâ skulle sprida plattorna på konventio- nellt sätt för att sen skifta varje vecka.

Bsëeëlàeäßyßëlsseïieiäelëër- Agafvlatfmfna imkulefadss På tvà olika sätt beroende pá om provet var fast eller flytande.

Vid flytande prov togs 0.1 ml av bakteriesuspensionen med pipett och placerades i mitten på agarplattan varvid en ympnâl fördes från mitten av plattan och ut längs plattans radie. Vid fast prov placerades en droppe steril buffert i mitten av agarplattan och en i en bakterie koloni inoku- lerad ympnål sattes i bufferten varvid cellerna suspendera- des i denna. Ympnàlen fördes från mitten och ut längs plat- tans radie som beskrivits ovan.

Resultat :ííí De fem personer som under fältförsöket skulle utvärdera ro- taplatorn var mycket nöjda med resultatet och fortsatte att använda den även efteråt. Efter det första av 5 fältförsök krävde alla medlemmar i gruppen att få varsin rotaplator, vilket innebär att resultat där jämförelse gjorts mellan ro- taplatorn och en manuell spridningsmetod enbart kan redovisas 10 15 20 25 459 258 från ett försök. Operatör A minskade tiden att sprida 60 plattor med 50% och operatör B med 40%. sprida plattor manuellt och operatör D som var ovan vid ma- nuell plattspridning led av handledsbesvär flera dagar efter att ha spridit 150 plattor. Typiska resultat från fältför- söket redovisas i Pig. SA. En jämn spridning av kolonier Operatör C vägrade erhölls för alla spädningarna odigjorde därmed räkningen av kolonierna lätt. Testgruppen fastslog att plattorna som spri- dits med rotaplatorn var mycket enklare att räkna än de ma- nuellt spridda plattorna. Resultat från renodlingsförsök Kolonier isolerade från flytande kultur illustreras i Fig. SB och kolonierna i Fig. SC är redovisas i Fig. SB ochaC. tagna fràn ett fast prov. Separationen av kolonier var mycket bra och gav fler kolonier än med den vanliga separa- tionsmetoden.

Slutsats Rotaplatorn har visat sig vara en okomplicerad, tidsbespar- - ande, billig samt lätthanterlig anordning som ger bättre re- sultat jämfört med motsvarande konventionella metoder.

Referenser (l) Jarvis, B., Lach, V.H., Wood, J.M.(l977) Evaluation of the spiral plate maker for the enumuration of Microorganisms in floods. J. Appl. Bact. 43, 149157. (2) Trotman, R.E.(l97l) The automatic spreading of bacterial cultures over a solid agar plate. J. Appl. Bact. 34,6l56l6. (3) Ffagerwilliams, R,, Banbury, J.M.(1968) Mechanical rotary device for plating out bacteria on solid medium. J. Clin.

Path. 21, 784. '459 258 Enligt en vidareutveckling av uppfinningen kan användas i stället för magneten 6 en kärna av ett material som kan få den övre delen l att rotera i inverkan av ett magnetiskt fält. sig lämpligt att an den undre delen 2 under Det har exempelvis visat vända en kärna 7 av järn i stället för magneten 6. Även andra material kan användas.

Claims (7)

10 15 20 25 30 459 258 PATENTKRAV

1. l. Anordning för spridning av mikroorganismer på en yta, företrädesvis på en agarplatta, k ä n n e t e c k n a d av, att anordningen består av en övre del (l) innehållande en magnet (6), vilken Övre del (1) är avsedd som underlag för en platta, företrädesvis en agarplatta, vilken övre del (l) kan rotera i en undre del (2) under inverkan av ett magnetiskt fält och där friktionen mellan glid- ytorna på övre (1) och undre (2) delarna år låg.

2. Anordning enligt patentkrav 1, k ä n n e t e c k n a d av, att den övre delen (l) består av en cirkulär platta (4) i form av en skål i vilken en agarplatta kan placeras och en under plattan (4) fäst cirkulär skiva (5) som inne- håller en magnet (6).

3. Anordning enligt patentkrav 2, k ä n n e t e c k n a d av, att den övre delen (1) är tillverkad i ett stycke.

4. Anordning enligt patentkrav 1, k ä n n e t e c k n a d av, att den undre delen (2) har formen av en cirkulär skål, avpassad för för skivan (5) så att skivan (5) kan rotera i den undre delen (2).

5. Anordning enligt patentkraven l - 4, k ä n n e t e c k n a d av, att den är tillverkad _ av plast.

6. Anordning enligt patentkrav 5, k ä n n e t e c k n a d av, att den är tillverkad av delrin. 459 258

7. 5 a. 10 9- Anordning enligt patentkrav 5, k ä n n e t e c k n a d av, undre delen att delen (5) och den (2) är tillverkade av teflon eller över- dragna med teflon. Anordning enligt patentkrav l - 4, .k ä n n e t e c k n_a d av, att den är delvis till- verkad av metall, företrädesvis så att undre delen är tillverkad av ett omagnetiskt metallñaterial och övre delen av plast eller vice versa. Förfarande för spridning av mikroorganismer k ä n n e t e c k n a t av, att spridningen sker med användande av en anordning enligt patentkraven 1 - s för spiràlinokulering. p