SA92120348B1 - أنسال ( كلونات) لخلايا cdnaلمفاوية جديدة - Google Patents
أنسال ( كلونات) لخلايا cdnaلمفاوية جديدة Download PDFInfo
- Publication number
- SA92120348B1 SA92120348B1 SA92120348A SA92120348A SA92120348B1 SA 92120348 B1 SA92120348 B1 SA 92120348B1 SA 92120348 A SA92120348 A SA 92120348A SA 92120348 A SA92120348 A SA 92120348A SA 92120348 B1 SA92120348 B1 SA 92120348B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- cells
- cell
- cdna
- sequence
- gene
- Prior art date
Links
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 279
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 240
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 32
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 3
- 101710188306 Protein Y Proteins 0.000 claims 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 113
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 35
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 abstract description 34
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract description 19
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 13
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 abstract description 12
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 abstract description 11
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 abstract description 11
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 abstract description 10
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 abstract description 10
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 abstract description 10
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 abstract description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 5
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 abstract 1
- 210000004837 gut-associated lymphoid tissue Anatomy 0.000 abstract 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 84
- 101150060800 lov gene Proteins 0.000 description 75
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 53
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 42
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 42
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 37
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 36
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 28
- 239000000047 product Substances 0.000 description 26
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 20
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 19
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 19
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 18
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 18
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 18
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 17
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 17
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 210000003386 epithelial cell of thymus gland Anatomy 0.000 description 14
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 14
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 13
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 11
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000006870 function Effects 0.000 description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 9
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 9
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 8
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 8
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 8
- 101150096021 tea gene Proteins 0.000 description 8
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 7
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 7
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 7
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 7
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 7
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 6
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 6
- 208000037065 Subacute sclerosing leukoencephalitis Diseases 0.000 description 6
- 206010042297 Subacute sclerosing panencephalitis Diseases 0.000 description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 6
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 4
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 4
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 4
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 4
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 3
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 3
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 3
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 3
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 3
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 3
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101710196692 Actin A Proteins 0.000 description 2
- 241001136792 Alle Species 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 102000001493 Cyclophilins Human genes 0.000 description 2
- 108010068682 Cyclophilins Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100356020 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) recA gene Proteins 0.000 description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 101100042680 Mus musculus Slc7a1 gene Proteins 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283203 Otariidae Species 0.000 description 2
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 108070000030 Viral receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N clarithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@](C)([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)OC)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 2
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 2
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 2
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052602 gypsum Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010440 gypsum Substances 0.000 description 2
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 2
- 208000019420 lymphoid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 238000000730 protein immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- ZSDSQXJSNMTJDA-UHFFFAOYSA-N trifluralin Chemical compound CCCN(CCC)C1=C([N+]([O-])=O)C=C(C(F)(F)F)C=C1[N+]([O-])=O ZSDSQXJSNMTJDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 1-[(4s,5s)-4-azido-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 0.000 description 1
- PFFIDZXUXFLSSR-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-N-[2-(4-methylpentan-2-yl)-3-thienyl]-3-(trifluoromethyl)pyrazole-4-carboxamide Chemical compound S1C=CC(NC(=O)C=2C(=NN(C)C=2)C(F)(F)F)=C1C(C)CC(C)C PFFIDZXUXFLSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150019315 101 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150062364 19.5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150028074 2 gene Proteins 0.000 description 1
- RICKKZXCGCSLIU-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[carboxymethyl-[[3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methylpyridin-4-yl]methyl]amino]ethyl-[[3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methylpyridin-4-yl]methyl]amino]acetic acid Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CN(CCN(CC(O)=O)CC=2C(=C(C)N=CC=2CO)O)CC(O)=O)=C1O RICKKZXCGCSLIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091092742 A-DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710196038 Actin-10 Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004246 Agave americana Species 0.000 description 1
- PBAMJJXWDQXOJA-FXQIFTODSA-N Ala-Asp-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PBAMJJXWDQXOJA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 240000000662 Anethum graveolens Species 0.000 description 1
- 241000796533 Arna Species 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 1
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000258971 Brachiopoda Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010068051 Chimerism Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 101100129232 Danio rerio mafaa gene Proteins 0.000 description 1
- 208000006558 Dental Calculus Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000224432 Entamoeba histolytica Species 0.000 description 1
- 244000207620 Euterpe oleracea Species 0.000 description 1
- 235000012601 Euterpe oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 101710119892 Gene product 168 Proteins 0.000 description 1
- XHUCVVHRLNPZSZ-CIUDSAMLSA-N Glu-Gln-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XHUCVVHRLNPZSZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 1
- 229930186657 Lat Natural products 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 241000288903 Lemuridae Species 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UETQMSASAVBGJY-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 UETQMSASAVBGJY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 108091027974 Mature messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 101500028890 Mus musculus Neurotensin Proteins 0.000 description 1
- 241001531264 Mus musculus musculus Species 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020003217 Nuclear RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000043141 Nuclear RNA Human genes 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000002390 Pandanus odoratissimus Species 0.000 description 1
- 235000005311 Pandanus odoratissimus Nutrition 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 101150005926 Pc gene Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102100034844 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase E Human genes 0.000 description 1
- 101710111212 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase E Proteins 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 102000001218 Rec A Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 108010055016 Rec A Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N Ser-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101150052863 THY1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 241001664469 Tibicina haematodes Species 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000018265 Virus Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010066342 Virus Receptors Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000003650 acai Nutrition 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000999 acridine dye Substances 0.000 description 1
- 229930183665 actinomycin Natural products 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Chemical compound CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 208000026816 acute arthritis Diseases 0.000 description 1
- 108091005764 adaptor proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035181 adaptor proteins Human genes 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000012805 animal sample Substances 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052792 caesium Inorganic materials 0.000 description 1
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical compound [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 208000002458 carcinoid tumor Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000014107 chromosome localization Effects 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000003021 clonogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005059 dormancy Effects 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000008451 emotion Effects 0.000 description 1
- 229940007078 entamoeba histolytica Drugs 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 125000004395 glucoside group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O guanidinium Chemical compound NC(N)=[NH2+] ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000034435 immune system development Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 231100000567 intoxicating Toxicity 0.000 description 1
- 230000002673 intoxicating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000004922 lacquer Substances 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 208000022766 lymph node neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 description 1
- 230000029052 metamorphosis Effects 0.000 description 1
- 208000011645 metastatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000001400 myeloablative effect Effects 0.000 description 1
- 206010028537 myelofibrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000017239 negative regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009701 normal cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000006548 oncogenic transformation Effects 0.000 description 1
- 239000001048 orange dye Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000001986 peyer's patch Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 208000011866 pituitary adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 101150005648 polB gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000003507 refrigerant Substances 0.000 description 1
- 230000037425 regulation of transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 235000012045 salad Nutrition 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
Abstract
الملخص: يقدم هذا الاختراع تتابعات DNA جديدة، جزيئات DNA معادة الاتحاد ( rDNA ) ، طرق لإنتاج بروتينات proteins خلية T جديدة معبرا عنها في خلية T المتطورة، بروتينات proteins خلية T جديدة على شكل نقي إلى حد كبير والأجسام المضادة التي ترتبط بالبروتينات الجديدة. وبصورة أكثر تحديدا فهي تتعلق بتتابعات DNA الجديدة المعبر عنها في معيلات مناسبة وبروتينات proteins خلية T الجديدة المنتجة في هذه المعيلات . يوفر هذا الاختراع أيضا بروتينات جديدة تمتد عبر الغشاء على شكل نقي إلى حد كبير فعليا، جزيئات rDNA تحدد شفرة بروتينات تمتد عبر الأغشية وطرق لتصنيع البروتينات proteins الجديدة التي تمتد عبر الأغشية.تتميز تتابعات DNA وجزيئات recombinant DNA موضوع الاختراع بانه يمكن التعبير عنها بواسطة خلايا T للورم اللمفاوي وتحتوي على الأقل على إحدى الخصائص التالية: ١- يمكن التعبير عنها في الخلايا الصعترية thymus العادية، خلايا الطحال النشطة أو النسيج اللمفاوي الحشوي.٢- يمكن التعبير عنها في نسيج المبيض، في كبد طبيعي أو / و في مرحلة معينة في تطور الأجنة. ٣- تحمل شفرة وراثية لبروتينات proteins جديدة تمتد عبر الغشاء ومحتوية على مجالات متعددة تمتد عبر الغشاء.٦عناصر حماية ، 40 شكل
Description
Jd (كلونات) CDNA لخلايا 1 لمفاوية جديدة الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الاختراع بتتابعات جديدة من DNA Gl Sa » DNA معادة الاتحاد « طرق لإنتاج بروتينات proteins جديدة تمتد عبر الغشضاء يتم التعبير عنها في خلايا T المتطورة والبروتينات saa Sl القي م تمتد عبر الغشاء بشكلها النقي إلى حد كبير . وأكثر تحديداً ؛ يتعلق الاختراع لتتابعات DNA جديدة يمكن التعبيبر Lge في المعيلات المناسبة وبروتينات proteins جديدة اثتان منها من النوع الذي يرتبط بداخل الغشضناء ويتم تصنيعها في هذه المعيلات . تميبز تتابعات DNA وجزيئات DNA معادة الاتحاد في هذه الاختراع بأن Vo كل منها يستطيع إعطاء الشفرة الوراثية لبناء بروتيسن Wa يتمهيز على الأقل بخاصيتين من الآتي: ١ ) ( يمكن التعبير عنه بواسطة WL A 1 الورم اللمفاوي. Y ) ( يمكن التعبير عنها في الخلاايا الزعترية الطببعيسسة » WL الطحال Ad ad) أو النسيج للمفاوي المعوي.
" (©) يمكن التعبير عنها في النسيج لمبيضيّ ؛ خلايا الكبد الطبيعية أو الملائمة أو أنواع الخلايا السرطانية. (4) يمكن التعبير عنها في تطور الأجنة و / أو. )0( لها مجالات متعددة للامتداد عبر الأغشية.
° وكما يمكن الفهم من التوضيح اللاحق ؛ بأن تتابعات DNA جزيثات DNA المعاد تجميعها وطرق إنتاج البروتينات التي يمكن التعبيبر عنها في LOLA 1 المتطورة وبروتينات خلايا 1 الجديدة على شكلها النقي إلى حد كبير ؛ قد يكون مفيدة في تتظيم تطور DLA 7 ؛ تغيير النوعي الشكلي الورمي وقد تكون مفيدة Lal
٠ في تحديد بؤر الأورام شبه المستقرة . يوفر هذا الاختراعأيضاً أجسام مضادة جديدة ترتبط بالمناطق المحدّدة للمستضد في بروتينات proteins الاختراع الجديدة واستخدام الأجسبام المضادة هذه للتعرف على توجيه العقاقير والعوامل الأخرى لأنواع محادة من الخلايا القادرة على التعبير عن cli fg pled الجديدة.
Vo في تطور نظام المناعة ؛ تشتق خلايا 2 geil all خلايا أولية جزعية تدخل الغدة الصعترية لكي تتمايز وتنضج ؛ حيث يتم تنشيط أو كبح العديد من الجنيات عندما تمر الخلية 17 خلال مراحل متعددة من النمو والتطور داخل الغدة الصعترية.
an
¢ على سببيل JUAN ؛ تكتسب الخلايا مسقبل CD8 J / 5CD4 « IL-2 على أسطحها خلال هذه الفقرة » تكون تلك الدلالات المتمايزة مهمة في نمو وتطور الخلية 7 و / أو وظيفتها. تزيد بعض Aldus المنتجات الجينية من نسب التعبير عنها في © تطوير خلايا 7 اللنفاوية ؛ تشتمل هذه على مسققبل الخلية T للمستضدات بالإضافة إلى الدلالات CD4 و .CD8 لقد عمل الكثير من المستضدات تعمل كدلالات لخلية 7 قبل التعرف على وظائفها الصحيحة في الخلايا اللمفاوية وحديثاً أكتشف أن المستضد pepl لخلية T يعاون الخلايا الصعترية في توطنها الغعدة الزعترية ٠ بينما تعمل 1200 (CD45) كجزء في عملية التأشير الخلوي ولا تزال علاامة الخلية 2 الأخرى ؛ Thyl بدون وظيفة معروفة ترتبط بها. تبدي الخلايا 81,124 طرز ظاهرية مزدوجة السابية من النوع CD4 CDB ولذلك تشبه الخلايا الصعترية عند مرحلة النمو المبكرة Yo وعلاوة على ذلك ؛ لا تستطيع الخلايا التعبيبر عن الوحدة ألفا في مستقبل الخلية 7 على أية حال ؛ تستطيع الخلايا 124 ,81 أن تستحدث لكي تعبر بتوازن عن 604 , 008 على أسطحها بعد زراعتها وتنميتها على أسطح الخلايا الطلائية الصعترية أحادية الطبقة . Loaf تستحدث TCR-alpha mRNA بعد هذه المعالجات. an
وبذلك فإنه يبدو أن الخلايا 124 ,81 لها القدرة على أن Jat التصايز والنضج ؛ يحاكي هذا الاستثاء النظام البيو لوجي خارج جسم الكائن الحي ؛ إلى بعض sad) من ؛ البيئة الصعترية الدقيقة. لقد تم التعرف على عدد من الجينات التي يعبر عنها أولاً في نمو
وتطور الخلايا الصعترية تحمل العديد من تلك الجينات الشفرة الدوائية الضرورية لبناء التي يجب التعبير TW alle Se الأولوية لكي تصبح مناسبة وظيفياً في نظام المناعة ؛ على سبيل المقثال : )١ 208 للمستضد اللازم للتعرف على المستضدات من أجل التعرف. (YY 0025 ( مستقبل 12 ) الذي يجب التعبير عنه لكي pki wi الخلايا من الاستجابة لمركب سيتوكين JL2 ") منتجات الجين الهامة اللازمة لتحول الإشارة أثتاء التعرف الخاص بالمستضد مقثل CD45 , CDS , 04 , CD3 . ؛) تتضمن بعض المنتجات الجينية التي تساعد الخلايا الصعترية في yo التوطن في الأعضاء المستهدفة. 0( المنتجات الجينية المشاركة في تتشضيط خلايا T ( فولكس 8 ؛ باردول Pardoll ؛ تطور علم المناعة 46 : ٠١6-١٠ ( 19489 )؛ هود وغيره ( ¢YVA—VYo fed AlN ) ١9858 روتنبرج Rothenberg ولوجو Lugo ؛ علم الأحياء التطوري MY ¢ ١985 ( ١7 - ١ Y. ) ؛ الكنيسز Adkins وغيره نشرة سونوية متقعة
من علم لمناعة ه : (VAAY ) ¥lo —¥Yo ¢ كرابتري Crabtree ¢ العلوم 747 : 743 — Yoo ( 1984 ) ؛ كون و Kwon ويزمان Weissman ؛ أكاديمية البحث العلمي الأمريكية .proc - natl — acad ١184 ( 1597 = 1117 : AT SCI (USA) ) . يوجد لا تجانس واضح 1 في المجاميع الثانوية للخلايا الصعترية التي تظهر إتحادات مختلفة من الجينات المعبّرة. لقد تم تحليل قدرة الجين التعبيرية ally في العديد من رتب الخلايا الصعترية ؛ ولكن ليس جمعيها ؛ ومن المحتمل جداً بأن تبقى جينات يلزمها التعريف مثل تلك التي تحمل الشفرة ٠ الوراثية للمنتجات التي تعمل على تطوير خلايا 1 وتوطينها ء؛ وعلى وجه الخصوص تلك التي يعبر عنها عددياً وبدون انتظام في خلايا الصعترية الانتقالية السلفية. ويسبب اللاتجانس الشامل للخلايا الصعترية ؛ فإنه ليس من السهل الحصول على خلايا صعترية تحوي أعداد كافية من الخلايا السلفية أو نقاوة تامة لسلسلة جينية معدلة التي تحدث خلال النمو. ولهذا السبب ؛ تستعمل سلاسل خلايا الورم الليمفاوية وسرطان الدم بشكل مكثف لدراسة القدرة على التعبير الجيني في نمو الغدة اللبمفاوية ( جريفز Greaves » العلوم 149 : لأحج - ل ( ١45 )؛ هاتلي هايد Hanley-Hyde ولينش Lynch نشرة دورية منقحة في علم ٠ المناعة ؛ : 244-17 ( ك١ A
ل يوضتح جزء كبير من الأدبيات بأن الخلايا الانتقالية السلفية التي يعبّر عنها ya (FS انتظام تكون هي الهدف للتحولات الجينية ؛ وتحفظ بعض خصائص تحويل الخلايا المتحولة المستهدفة في الخلايا السرطانية. ° أستثنى التعبير الجيني غير المتوقع في الخلايا الورمية كانحراف في العمليات التحولية من الخلايا . على أية حال ؛ يكشف التحليل بحرص لانحرافات التعبير الجيني في الخلايا السرطانية الدموية المتكونة مجموعات ثانوية نادرة من خلايا السلف العادية التي تعبر عن مقل تلك الجينات ( جريفز ء العلوم 134 : TAY — يل نححج )؛ 7١ : هائلي - هايد ولينش ؛ المراجعة السنوية عن علم لمناعة ؛ ٠ .) ١1 ( ٠٠١ — 14435 : 48 ¢ Cancer Res بيرش وسبيرز ¢ 169 — يمكن أن ينتج عن للاتجانس في سلاسل خلايا الورم للنفاوي الفأرية والبشرية المشتقة من فرد واحد من اختلافات في مدى النضج المتصل بخلايا نوع معين فقط. تم الاستفادة من اللاتجانس في سلاسل خلايا 7 الورم التفاوي للحصول على أنسال خلوية ذات علاقة ببعضها البعض A ad عدد محدد من الخصائص. dca han ولكن Yor - 144 : 7١8 هيدوريك وغيره ( هيدرويك وغيره ؛ الطبيعة ؛ باستخدام تقنيات طرح الأنسال ؛ وفرت تقديرات على ) 1984 (
Ly, جين ٠٠١ أن خلايا 1 و 3 تختلف في التعبير عن ٠ an
A . ومن المحتمل جداً بأن خلايا الورم اللنفاوي من النوع ذات Dla 3 الوثيقة 7 الصلة قد تختلف في التعبير عن عدد أقل من الجينات . توفر تلك الأنسال الخلوية الفرصة للعمل بتجمعات نقية من الخلايا بأشكال ظاهرية محددة وثابتة حيث تختلف في عدد م محدد من الخصائص. لقد تم تطوير النظام النمونجي من الورم اللتفاوي من النوع 7 8112 وتم استخدامه في التطبيق الحالي لكي يوفر تلك التجمعات الخلوية قريبة الصلة .. هايز وغيره ¢ cancer . ز. لص ١ : لاخ - ٠١١ ( 1987 ) ؛ مالكويد وغيره ؛ بحث علمي عن السرطان 44 : 1784 - ٠ 179600( 1984 ),؛ ماكلوريد وغيره jnat-cancer-inst 6لا : AVe - YaAo ) AAY ( » ماكلويد 5 AY pfoc —natl . acad . sci. usa 6 y—t : تخا - 3997 ( 194853 )؛ سؤغغال وغيره —AVeY : 1١١7 UEXP MED ١87 ( 1 ). وصف عام للاختراع yo توفر البراءة الحالية تتابعات DNA جديدة » DNA il fa معادة الاتحاد (DNA) ؛ طرق لإنتاج بروتينات جديدة يعبر عنها في خلية 1 متطورة ؛ بروتينات جديدة لخلية 1 في شكل نقي إلى حد كبير وأجسام مضادة ترتبط بالبروتينات الجديدة. وأكثر تحديداً فهي تتعلق بتتابعات DNA جديدة معبرعنها في ٠. عوائل مناسبة وبروتينات جديدة لخلية 7 ناتجة في تلك العوائل.
توفر البراءة الحالية أيضاً بروتينات جديدة A040 عبر aie في شكل نقي إلى rDNA al fa ¢ —aS a a معادة الاتحاد وتحوي الشفرة الوراثية للبروتينات الممتدة عبر الأغشضية السابقة وطرق لإنتاج البروتينات الجديدة الممتدة عبر الأغشية.
0 تتميز تتابعات DNA Al Aa DNA المعادة إتحادها الموحدة للبراءة في أنها تعبر بواسطة خلايا ورم لنتفاوي T وتحتوي على الأقل على أحد الخصائص التالية:
a = عنها في الغدة الصعترية العادية ¢ خلايا الطحال النقطةقء أو نسيج لنفاوي معوي. Lge yom -“ ٠١ في نسيج المبيض » الكبد العادي ويكون في مرحلة محددة في نمو J لأجنة . *- توفر شفرة وراثية لبروتينات تمقد عبر الأغفية وتحتوي على مجالات متعددة تمتد عبر الأغشية. ومن الأغراض الأغفرى ؛ توفر البراءة الحالية جين جديد Y4,0 c yo ويشار إليه Loaf هنا ب Lov ممكن استحثاثه في خلايا 12.4 81 بعد : زراعته وتنميته في الطبقات الأحادية الطلائية الصعترية. توفر البراءة الحالية أيضاً أجسام مضادة متعددة الأنسال تولد ضد قليل ببتيدي معتمد على تتابع Lov CDNA ٍ ىا
أ يبدو تخليق Lov أن Bande نظراً لأن al Jl المنعزلة من القدرة على تعبير Lov على مستوى Mma وعلى مستوى البروتين السطحي. o عُيِّن موقع الجين Lov في الكروموزوم الفأري ١١ . ينظم المنتج الجيني #م1 تطورياً ويلعب دور في تطور خلية 12. } لقد تم بناء مكتبة من CDNA 4 . 5112 والتي من خلالها تم عزل CDNA ١ جديدة بواسطة طرح المهجنات المقابلة لسلسلة خلية ورم لنفاوي ذات علاقة وهي 3 . 58112 . تحتوي الخلية 3. 5112 ٠ على خصائص الخلايا الصعترية عند مرحلة أكثر من اللانضج 4. 38112 ¢ ay 5 عن أحد أنسال CDNA « 19,5 » في 4 . 8112 »؛ ولكنه لا يوجد في خلايا SL12.4 يسمى هذا التتابع ب Lov ( التعبير الخلوي اللتفاوي المبيبسضي يظهر البروتين المتوقع عالي للاقطبية واستاناداً إلى التحليل ١ الحاسوبي فإن يحوي ؛ مناطق تمتد عبر الأغشية. لا يوجد تشابه واضح بين Lov CDNA وتتابع البروتين المتوقع مع التتابعات الأخرى المعروفة. يحفظ Tov عبر عينات الأجناس cal al على سيل المقال ؛ الإنسان ؛ القوارض ؛ الأرنب ؛ أسد البحر والطيور + تبدو النسخ
١١ المعوي gal عالية القدرة على التعبير في المبيض والنسيج
(GALT) ¢ كما في الغدة الصعترية. ييكشضف في البراءة عن القدرة على تعبير م10 واستحثاثها في النظام الحيوي ؛ الخصائص الفيزيائية لبروتين Lov بالإضافة إلى
oo موقع الكروموزوم الفأري لذلك الجين. بتوفير تتابعات DNA ؛ وجزيثات DNA معادة التوحيمد ؛ توفر البراءة الحالية Load مجسات وطرق للتعرف على الخلايا المحتوية على أو التي ينقصها تلك التتابعات ؛ وطرقاً لإدخال هذه التتابعات إلى الخلايا التي لا تتواجد بها . وبالإضافة إلى ذلك توفر البراءة ٠ الحالية طرق لمنع التعبير عن التتابعات الجبديدة عن طريق توفير تتابع RNA مضاد للمعنى حيث ؛ عندما يدل للخلية ؛ أو عندما تعطي DNA المشفر ل RNA السابق المضاد all لخلية محتوية على تتابع DNA السابق فإنه سوف ينتج RNA المضاد للمعنى والذي يستطيع أن يرتبط إليه ويضع تصنيع شفرة RNA vo الوراثية الخاصة بتصنيع البروتينات الجديدة للبراءة الحالية.
وإنه من الواضح Lad إلى الخبير في المجال من هذا التوضيح بأن أي أجسام مضادة ضد أية بروتينات من البراءة الحالية يمكن استخدامها لمنع إتحاد الربائط Ligands مع البروتينات وإلى توجيه العقاقهير أو عوامل أخرى ( مثل المواد المعلّمة ) إلى الخلايا القادرة
© على التعبير عن هذه البروتينات.
VY
الذي يشار إليها أيضاً هنا ٠0,5 « CDNA هنا أيضاً نسيلة 53 da uN التي تعرف نسخاً توجد فقط في عدد محدود من Tea ب في خلايا الطحال المنشطة من قبل خلايا من Tea نسخ Cini ud .mitogen ConA النوع على النقهيض للجينات الأخرى المعروفة التي يعبر عنها على ° الشفرة الوراثية الخاصة ببروتين قادر على الامتداد واختراق الغشاء عدة مرات ؛ بينما يكون عدد كبير من بروتينات الأغفية غير السطحية التي تستحث في خلايا 7 النشطة هي بروتينات تخغترق
Yoo : 747 العلوم ) ١988 ( ؛ Crabtree الغشضاء مرة واحدة ( كراب تري -اد). ٠ توقر البراءة أيضاً طرق بروتينات جديدة تمتد عبر الأغشية وبروتينات تمتد عبر الأغشية على شكل نقي إلى حد كبير والتي
GSS قد تكون مفيدة في تنظيم نمو خلية 7 ؛ تنظيم الطراز للخلايا بالورمية وقد تكون أيضاً مفيدة في إيقاف تنشيط خلايا 7 في الأمراض المناعية الذاتية. ١0و جديدة يعبر عنها تفاصلياً في CDNA لقد تم عزل أنسال خلايا 7 السرطانية ذات الصلة الوثيقة وذلك باستخدام المسح Ju التفاضلي الغني بالطرح. ؛ بالخلايا CDNAs تتميز الخلايا 4 . 8112 والتي ينعزل منها ال الصعترية في المرحلة المتوسطة في التطور وتسبب أورام سرطانية ٠ a"
ل مبيضية عقدية خارجية واضحة في الحيوانات ذات التركيسب الوراثي المتزامن ¢ يحتوي نسيلة خلية شقيقة « 3 . Ag Ga ¢« SL12 من نفس الورم السرطاني على طراز ظاهري متميز وتسبب المزيد من الضرر ؛ نثر الأورام السرطانية اللتفاوية. ° يثم التعبير عن ؛ من 0 جينات جديدة في الغدة الصعترية الطبيعية ¢ خلايا الطحال النشطة ؛ أو نسيج لنفاوي معوي. توضّح الأشكال ؟ - co 14و 4-31 تتابعات DNA وتتابعات البروتينات المتوقعة لأتسال CDNA الجديدة ¢ يكف الكلون CDNA 5 الجديد عن mRNA في الغدة الصعترية الطبيعيةء النسيج ٠ اللنفاوي المعوي ونسيج call يحتوي البروتين المتوقع على 3 مناطق إفتراضية ممتدة عبر Lda) . يكبت تعبير النسخة في مهجنات خلية سرطانية لنفاوية 1 بنقصها mRNA مكمّلاً لنسيله CDNA الجديدة. يتوقع من هذا التنظيم السالب بأن يكون تنظيم التعبير عن \o الجين بواسطة i الكبت . يوضصضح شكل ) ١ ( . © أنواع مختلفة من أنسال CDNA الخاصسة ب 4. 8112.
٠ :)١( شكل CDNA يوضح طبع ونقل سزرن لهجين أنواع مختلفة من أسال .8112 .4 الخاصسة ل : ( 7 ) شكل . 19.5 CDNA والتتابع المتوقع للبروتين الخاص بالنسيلة DNA ه يوضح
P(E) شكل على 19.5 CDNA يوضح تخطيط البروتين المتوقع من النسسيلة أساس التحليل الحاسوبي لخواصه الفيزيائية. شكل(ه): الخاصة باستراتيجية التنسيل CDNA يوضح المناطق الحصرية في 5 وتعيين التتابع. : ( 1 ) شكل في خلاياجسسية 19.5 20.2 CDNA يوضح نماذج التعبير ل : ( 7 ) شكل yo يوضتح نماذج التعبير ل 19.5 في نسيج فأر طبيعي. : ( A ) شكل يوضح بواسطة تقنية سزرن للطبع والنقل تتابعات مكملة ل ومحتواة في سلاسل خلوية سرطانية مبيضية 19.5 CDNA اللإنسان. ٠٠
Vo شكل(): يوضح بواسطة سزرن للطبع والتقل بأن التتابعات المتمّسة إلى تتواجد في العديد من الأجناس الثدية وبذلك تتم المحافطللة 5 عليها أثتاء التطور. : ( Ye. ) هه شكل يوضح بواسطة تقنية نورذن للطبع والتقل بأن كلا النسختين تستحث استجابة للزراعة والنمو المترافق. Lov الخاصسة ب :)١١( شكل يوضح تحليل بالجسم المضاد والمتوهج لخاايا 4 . 5112 للتعبير
Lov السطحي ل ٠ :)١١( شكل 5112 . 4 cc TEL يوضح تحليل بالجسم المضاد والمتوهمج لخايا
Lov للتعبير السطحي ل :) ١ ) شكل يوضح البيانات التوهجية لنسيلة شقيقة لنسيلة خالاايا السرطان yp أي Baie وليس Lov الخاص ب mRNA اللنفاوي التي لم تعبر عن
Lov تعبير على أسطحها ل : ( VE) شكل يوضح خصوصية الجسم المضاد 19.5 للمستضد المناعي ولكن ليس تعديل الببيتيد عديم القتلة. y, an
"١ :)٠١( شكل يوضح إستحثاث بروتين «مآ بواسطة الخاايا بالطلائية الصعتوية. :)٠١( شكل بواسطة النقل والطبع بتقنية سزرن. Lov هه يوضح ثاتية تعبير :)٠١( شكل FACS بتحليل Lov يوضح ثباتية تعبير :)٠“( شكل NY يوضح موقع 7م1 في الكروموزوم : ( 14 ) شكل ٠ .20.5 CDNA التتابع المتوقع للبروتين للنسيلة DNA يوضح : ( Y. ) شكل .SL12.4,SL12.3 في سلاسل الخلايا Tea للجين MRNA يوضح تعبير : ( 71١ ) شكل الخلوي والسيتبلازمي IH RNA في Tea mRNA يوضح تعبير Yo
SL12. 4 والنووي من خلايا :)7( شكل في سلاسل من الخلايا بالفأرية. TeamRNA يوضح التعبير عن : ( yy ) شكل A Gall من الأنسجة الطبيعية RNA في Tea يوضح التعبير عن جين Y. هو نسيج لنفاوي معوي. GAL/T. BAlb/e من فئثران
VY
: ( Y¢ ) شكل Ab di يوضح حركية استحثاث الجين 168 في خلايا طحال : ( Yo ) شكل Gaal يوضح حركية استحثاث في خلايا طحال منشطة شين المحمل في كل mRNA م الضابط الكمية النسبية للحمض النووي . مسلر : ( 4 ) شكل EPR, 20.5 الخاص ب CDNA يوضح ترتيب تتابعات : ( شكل ) لال
EPR CDNA أعلى ) رو ( 20.5 CDNA يوضح ترتيب التتابعات بين .) أسفل ( :)7٠8( شكل المتوقع مع Tea يوضح رسم خطئ يوضح ترتيب بروتين البروتين المستقبل الخاص بالففران. :)7٠١( شكل + المتوقع من ترتيب المستقبل في Tea يوضح ترتيب التتابع لبروتين الفقكران. PY) شكل المتوقع. Tea للتركيب المتوقع لبروتين lady ai ض يبين
YA
: ( 71 ) شكل تم تحليلها ومقارنتهما ally يوضح منطقة البروتينين المتوقعين والحمض الأمينتي Tea لبروتين 407 - ١ اللاقطبية ( الحمض الأميني
EPR للبروتين 109 — 4 :)"”"( هه شكل يوضح الخواص اللاقطبية للنواتج المتوقعة للبروتين الخاص بالجين . Tea : ( vy ) شكل يوضح الخاصائص اللاقطبية للنواتج المتوقعة للبروتين الخاص
Rec-1 بالجينات ٠ :) ) 3 المأخوذ من أجناس مختلفة. DNA يوضح التحليل بتقنية سزرن ل : ( Yo ) شكل المعاد اتحاده لموقع جين DNA يوضح التحليل بتقنية سزرن ل . + على الكروموزوم Tea yo : ( 74 ) شكل .19.1 CDNA والتتابع المتوقع للنسيلة DNA يوضح : ( vy ) شكل .19.1 CDNA والتتابع المتوقع للنسيلة DNA يوضح (YA) شكل vy, 19.1 CDNA والتتابع المتوقع للنسيلة DNA يوضح a
شكل ) 4 ( : يوضح عرض تخطيطي ل PN20/TFR-NC AEX ) JE يوضح عرض تخطيطي — PMAMneo-Bwe هه الوصف التفصيلى : لكي يكون الوصف الكامل للاختراع أكثر اكتمالاً للفهم فإنه يُبيَن الوصف التفصيلي التالي. تستخدم التعبيرات التالية في الوصف ؛ يفير el 5 العائل ' هنا ليشتمل على بدائية الأنوية ولكي Lad ٠ حقيقية الأنوية مثل الخميرة والخيطيات بالإضافة إلى الخلايا النباتية والحيوانية. يشير التعبير " بدائية الأنوية " ليتضمن البككريا التي يمكن أن تتحول ل 0118 لكي تعبر عن بروتينات خلية 17 في البراءة الحالية الممتدة عبر الأغشية أو المعاد اتجاها عبر الأغشية ( 210 ) ١٠ الحالية . يشير التعبير حقيقية الأنوية ليتضسمن على الخمافقر ؛ الفطريات ؛ الخلايا النباتية أو الحيوانية التي تستيع أن تتحول مع DNA للتعبير عن بروتينات خلية 7 الممتدة عبر الأغشضية أو بروتينات خلية 7 الممقدة عبر الأغشضية في البراءة ٠ الحالية. a"
Ya | يمكن انضتقاق CDNA لبروتينات خلية 7 للبراءة A Mal من أية نوع من التثدييات . ويتطلب ذلك التعببر عن التتابعات الوراثية dye lad لبروتينات الخلية 7 (100) في أنظمة Jape a gay cl wi) حقيقية الأنوية . ويففضل DNA الخلية 1 الذي يعبر عن البروتينات TCP من الفقفران . ويففضسل بصفة خاصة تتابع 0118 من TA Ja حيث تكون مناعياً ممتزجة التشاط خلال عينات حيوانية متتوعة ( مثلاً tal ؛ الأرانب ؛ أسد البحر أو الإنسان ). يمكن استخدام جزئ DNA معاد الاتحاد ويحمل شفرة وراثية لأية cl sign ov. خلية 7 في البراءة الحالية لكي تحول المعيل باستخدام أية تقنية من التقنيات الغالبة الشيوع للخبراء في المجال . ويفضل بصفة خاصة استعمال ناقل يحتوي على تتابع شفري لبروتينات خلية 7 من البراءة الحالية بهدف إحداث تحولات في الخلايا بدائية الأنوية. يمكن أن يحتوي البروتين المعاد اتجاه للخلية 2 (rTCP) للبراءة على كثير أو قليل من الأحماض الأمينية عند نهاياتها الجانبية بالمقارنة إلى تتابع الحموض الأمينية للبروتينات الأصسلية للخلية 1. يشير التعبير " إلى حد كبير " عندما يُطبق على بروتين © خلية 7 العابر للأغشية في البراءة الحالية أن يكون عييد a"
Y) ببتيد فعلياً حراً من البروتينات الأخغرى لمرتبطة عادة مع بروتين خلية 1 في حالتها الطبيعية وإظهار ثبات واستجابة كروماتوجرافية أو إمكانيسة عمل هجرة كهربائية وسلوك إزاحة معروف ؛ وفعالية مستضدية . لا يعني التعبير نقي إللى حد كبير " إلى أنه لا يشفتل على مخاليط " صناعية أو اصطناعية من بروتين خلية 7 مع لمركبات الأخرى. تعرف وتوضح تحضير الجينات الممتزجة ؛ الجينات القابلة لإجراء ترابطها وتعديلها في البكتريا ؛ على سيبل المفال حيث تندممج بواسطة EVEN في البراءة الأمريكية رقم ٠ المرجع. يمكن استخدام البناءات الوراثية وطرق الوصف هنا للتعبير عن بروتينات خلية الممتدة عبر الأغشضية في العوائل بدائية الأنوية وحقيقية الأنوية. يمكن أن تشتمل العوائل بدائية الأنوية على بكتريا سالبة الجبرام yo
Bacillus subtilis , Serratia J— بالإضافة إلى البكتيريا موجبة الجرام marcescens , S. Tymphimurium , E. cloli de Heddle يمكن أن تتضمن العوائل حقيقية الأنوية خلايا تدييات. Jf Pichia. pastoris
YY | وبصفة عامة ؛ تستعمل النواقل المعبرة المحتوية على تتابعات محفزة حيث تسهل التنسيخ الفعال لجزء DNA المندرج المتعللق
بالمعيل. ويحتوي J 8a) المعبسر Lad sad على مصدر استخراج نسخ مه مطابقة ؛ محفزات ؛ موقفات J fee الجينات المحدودة حيث المتحولة. يمكن تخغمر معيلات المتحولة واستتباتها طبقاً إلى Goal المعلومة في المجال لكن تحقق أقصى نمو خلوي. ٠ وتتضمن AL AY للمحفزات التي يمكن استعمالها في البراءة ولكن لا تقتصر عليها : tac, lac, trp , rec A , ع MMTV , pL, lambda , 581740 تدرج بعض الأمثلة للبلازميدات أو آكلات البكتيريا التي يمكن استعمالها للبراءة في ماتنياتيس 5 3 » ¢ MOLECULAR CLONING «¢ معامل كولد سبرنج هاربور YAAY ؛ءوغيرهامما هو معروف لدى yo الخبر اء في المجال ويمكن بسهولة التحقق منها. تمتد البراءة لتشمل أي عائقل متحور طبقاً إلى الطرق الموصوفة ؛ أو محور بواسطة أي طرق أخرى ؛ الشضائعة المعروفة للخبر اء في المجال ‘ على سبيل المثال ؛ ib dg نقل مادة dy, باستعمال آكلة حالة والتي تنتج بدائية النواة أو حقيقية النواة an
YY
قادرة على تعبير لجين لبروتين الخلية 1 من النوع الممقد عبر الأغشضية. ويكون الجين عبارة عن تتابع DNA حيث تنقل شفرته خلال مرصاف أو تتابع RNA مراسل تتابع لأحماض أمينية المميزة م Sha 5d 3 . يشل التعبير CDNA على الجينات التقسي تزال منها التتابعات المتخللة يعني التعبير IDNA إلى الجزئ الذي أعيد اتحاده بعد تقطيع تتابعات CDNA أو تتابعات DNA ورائية خارج جسم الكائن الحئ. يكون الناقل التنسيل عبارة عن بلازميد أو DNA AKT أو تتابع ٠ 0108 آخر حيث يكون SE للتضاعف في خلية العائل والتقي تتميز بواسطة عدد واحد أو قليسل من مواضسع تعسرف الإندونيوكلياز Allg يمكن عندما قطع تلك التتابعات ل لان في Sada a تقديره بدون فقد في الوظائف البيولوجية الأساسية ل DNA والتي تحتوي على دليل مناسب للإستعمال في التعرف على ٠ الخلايا المتحولة. تكون cAI على سبييل المثال ؛ مقاومة التتراسيكلين ؛ مقاومة النيوميسين أو مقاوم الأمبيسيلين Jai atc أحياناً الكلمة " ناقل " بدلاً من حامل التنسيل. a4
ص يكون حامل التعبير مشابهاً لحامل التتسيل ولكن يكون قادراً على تعبير جين بنائي في العائل ؛ عادة تحت الضبط بواسطة تتابعات ضبط خاصسة. وتكون J Hall المتحولة بواسطة المادة الوراثية للبروتينات العابرة للأغشضية لخلية 7 مفيدة بمصسورة خامسة في إنتاج عديدة الببتيد والبروتينات العابرة للغفغاء Talal يمكن أن يتضمن بروتين الخلية T المعاد إتحاده على تتابع حمض أميني لبروتين خلية 7 أو يمكن أن يتضمن فقط على ٠ محدد خاص . ينتج حيوان محصن بواسطة بروتين معاد اتحاده لخلية T أجسام مضادة ترتبط بمكان ارتباط المستضدات الموجودة في عديدة الببتيدات المعاد اتحادها أو الطبيعية الحدوث . وبذلك يمكن أن يتم الإنتاج التجاري لخلايا 7 الحاوية لبروتين معاد الإتحاد . vo يعني التعبير " فرد " إلى أن يشتمل على أية حيوان ؛ ويفضل من الثدييات ؛ والأكثر تفضيلاً من القوارض ؛ القطط + الكلب ؛ البر أو الإنسان. يمكن أن تكون الأصسناف المعلمسة الممكن الكشضسف عنها عبارة عن أي جزئ ممكن الكفف عنه . وتكون الأصسناف الممكنة الكشف عبارة عن المعلبات الإشعاعية شاملة وليلس
Yo 0 يمك أن . gH, Bp, Uc, ¥p le 3 قا أو DNA في biotinylated التيوكليوتيدات 5 المعلمة ببيوتين وسائل أنزيمية أو وسائل » nick translation بواسطة ترجمة الشق RNA بعد التهجين باستعمال biotinylat عن المجسات البيوتينية a IS, ° مقترنات ¢ streptavidin ستربتو أفيدين / avidin توهمج أفيدين أو غروية ذهيبية. enzymatic ad توهجية؛ يمكن تعليم الأحماض النووية بواسطة مركبات توهجية بمشتقات توهجية يكشف عنها مناعياً أو بواسطة مركبات شيبيههة للبيوتين biotin ٠ يمكن تعليم الأحماض النووية أيضا بواسطة ربطها ببروتين .protein مشسسع أو histone CJ Siig يمكن ربط الحموض النووية متوهج :؛ بأتزيمات مغل ( الفوسفاتاز القلوية ؛ biotin أو بروتين ( alkaline phosphatase , peroxidases بيروكسددازات yo . (ssB) منفرد الشريط الحالية قادرة على توفير جسم مضاد be وبذلك ¢ تصبح الببر ضد بروتين الخلية 7 العابرة للأغضية للاستعمال كمجس للبروتينات العابرة للأأغشية في البراءة الحالية وكمثبطات لارتباط
الربائط الطبيعية الخاصسة ببروتينات الخلية 7 العابرة للأغشضية للبراءة الحالية أو كأنظمة حاملة لتوجيه العقاقير والمواد Adel
لقد تم اختيار نتسيلتان خلويتان مشتقتان من مجموعة ٠ خلايا ورم لتفاوي 5112 لعزل جينات معبرة بتمايز معتمدة على معرفة الاختلافات في التعبير الجيني وفي اختلاف Lgl pia على إحداث الأورام في الحيوانات العائلة ( هايز Hays (Y4AT) 30٠ —04Y : ¥A (Int.
J. cancer ¢ s y— 3 ء ماكلويد Macleod وغيره « us la (VAAL) 17/40 - 17/84 : £5 Cancer Research وغيره AAY - 0AY : 2 . J Nat.
Cancer Inst ٠ « ماكلويد وغيرة Proc.
Natl. (Y4A1) 1947 — 1444 : AY Acad.
Sci.
USA. « سوؤغغال o s— 5 Siegal (YAAY) ١/1١ — 11/7 : 116 J.
Exp . Med. ¢ وينروث Weinroth وغيره ¢ (YAA0) 4804 — 4/54 : £0 Cancer Research ؛ ويلكتنسون Wilkinson وغيره (VAM) ٠١-١٠١ 22080 J. ا لوحةرقماعن
م ملخص للطرز الظاهرية. تُعبر سلسلة الخلية 3 . 85112 عدد قليل جداً من cl al اللازمة لوظائف خلية 7 وتكون خبيشثة جداً في الحيوانات السينجينية syngeneic وتكون أورام خبيشة منتشرة وفي المقابل ¢ تعر Wal 4 . 5112 عن JS ImRNAs مكونت المعقد TCR vy, / 003 فيما عدا TCR-alpha ومن alg عديدة كون
ٍ
ال الخلايا مشابهة للخلايا الصعترية في المراحل المتوسطة في نمو الخلية الصعترية. وتكون الخلايا 4 . 8112 أقل توليداً للأورام السرطانية وتسبب السرطانات الخارج عقد في إناث في الحيوانات م العائلة ؛ يكون الموضع الأولى لتكون السرطان في المبيض . ويمكن أن تعلب البروتينات الجديدة العابرة للأغشية دوراً في اتخاذ الغاايا السرطانية موضعها في المبيض. : لقد تم عزل أسال CDNA الجديدة من سلاسل خليتان مختلفان في القدرة على la af السرطان من خصفص ٠ التوطن وحالة النضج . تمثل أسال CDNA التي تتسخ المنتجات المتعلقة بقدرة سلاسل الخليتان المختلفة لأحداث الأورام و - أو تلك التي تعمل في تطوير الخليتين 1. تكشضف البراءة عن عزل وخصائص ٠ أسال CDNA جيديدة تمثل الجينات التي تعجر بتفضيل لنسيلة خلية 417 ¢SL12. yo وتكون غير SHA Kae أو ذات تعبيبر ضعيف في نسيلة خلية شقيقة ؛ 3 . 61712 . لقد تم الحصول على أسال CDNA بواسطة ترافق من مهجنات مطروحة مُخصتّّتبة بالمجسات وفصل تمايزي تقليدي. ca i عن أنسال CDNA جديدة تمثل الجينات التي يعبر ٠ عنها بتمايز بين نسيلتان خلويتان . تحدث كل الجينات
ٍ YA المتعلقة ضرر جزئي محدد للأنسيةة . النسخ على وجبه الحصر في الخلايا للينفاوية ولكن توضح نظام متصل للقدرة على التعبير. بأن ) ٠,5 » ٠,5 ) CDNA من ال (pil توضح تتابعات منتجات الجينات هي بروتينات جديدة عابرة للغفاء بقسكل عادي ؛ غدة JL dm mem wi متكرر ويعبر عنها في صعترية ؛ نسيج لينفاوي معوي ¢ الطحال والكبد . يهجبن أيضاً تتابع واحد مع خلايا ورم سرطاني لمبيبض بشري ونسيج وصف البراءة بصورة عامة ؛ يمكن (Vl وبذلك فإنه قد تم ١ الحصول على فهم أكثر بواسطة الرجوع إلى الأمثلة الخاصمسة هذا قدمت لأغراض التوضيح فقط ولا تعني أي تحديد أو مله A ما لم يذكر عكس ذلك. :) ١٠ مقال عزل ؛ خصائص واستتبات الخلايا yo أ- سلاسل خلية ورم لبنتفاوي. يتم وصف عزل ؛ خصائص ومتطلبات الاستنبات لسلاسل خلايا 1 ورم لينقفاوي 1 11 , 5112.3 » 4 . 51,12 ومهجنات بينها يوصف تفصيلي بواسطة هايز Lad خلايا جسدية مكونة
Ya
Ae ؛ ماك ( ١5 ) نح —04Y : YA cInt . J. Cancer + 6 ؛ حيث تتدمج ( ١5 ) EAA — نل : £0 Cancer Research وغير ب . لإشارة إلى مصادرها J كلها هنا بواسطة 8112 .4 » 8112 . 3 خلية Jw Nay, alll تلخص الطرز تم تحديد النفسخ المغبرة ¢ التعبيسر aa.) في الجدول رقم o عن البروتين المسطحي ¢ التكعون الورمي ونوخع الورم
Wal بحقن ge IW بواسطة تحليل سزرن ؛ إنسياب القياس على التو اللي Aman ul المنسلة داخل الجسم البشري للحيوانات الشفرة الورافهية الخاصسة 1208-0 1.0 and 1.3kb, TCRm . 381 تحمل على التوالي. V-D-J-C,(D)-T-C بالتتابعات ٠ بواسطة نمو glucocorticoid تقاس استجابة الكوريتكويدات السكرية .1 mM dexamethasone مللمول ديكسا ميثازون ١ الخلايا في ١ رقم Jer a 5112.4 » SL12.3 الظاهرية لكونات الخلية 5, Li خصائص — ” ض ١ | Thy , تن“ “ذ د لادبلبدقىز ض tam
TT | ERTS ض
LTT TT ae ma an
Ye بلطلل “الب سل لس ااا م١همهمر]ب نالل" ل.لسلللس0قي لل- اب a ewe n | rem
To wd و «٠ oes
Ts er a
I #“للج_ن ب االلللا سس ند لل ل[ ل للتثبثاا اتام
To ree لمممستست TN Wed
CL الكورتيكويداز السكرية خارج Cl | توليد الورم الخبيث ae لور | | خلايا مقاومة للتحلل | =R ma ies) جاسون وبورجواز ( SAK8 تم الحد ول على الخاايا من د. ) 1987 ( 419 — 404: 456 «J . cell . Biol « Gasson & Bourgeois
جاسون (Gasson) - تنبت خلايا الورم اللنفاوي في وسط ذليبكوس 15 إيغلز JA ad Eagle's يحوي bas 56 ٠١ جنين عجل؛ جلوتامين glutamine ¢ بنسيالين penicillin وسترتبوميسين .streptomycin تستتبت سلسلتان لخلية مبيض بشري مصابة بورم سرطاني - 579 : ١١4 AM. J. obstet gynecol ¢ وغيرة Disaea (ديزابية 008 ٠
Cancer Res » وغيره Woods وودز } 97 COLO وكولو ( ١7 ) 84 % © في وسط 8141 1146 يحوي ) 1974 ( 4404 — 4444 : 4 إرفين ) Fungi-bact . % ١٠ ١ glutamine عجل بقري « جلوتامين Jae . ( كاليفورنيا » Santa Ana العلمية ؛» سانتا أنا Irvine 0 عندما تستخدم الخلايا لتحضير RNA تجنى أنثتاء النمو الأسسي بكثافة تقرب إلى * - 8 ٠١ x خلية / yale ( ويلكنسون Wilkinson « ماكتلوير (Y4AA) 4-١١ : V 220807 « macLeod . تفاً خايا الطحال المشضتقة من فئران ٠١ XY aie BALB/C خلية / مللي لتر وتحفز ب ٠١ ميكروجرام ConA alla لمدة يومان قبسل الحصسول
RNA على yo وخلايا طلائية صعترية SL 12 . 4 wal افق Da ب- رعاية ونمو أحادية الطبقة. الطلائية الصعترية أحادية SL 12 . 4 ظروف والنمو المترافق لخلية الطبقة . بإيجاز تزرع الخلايا 4. 51,12 عند كثشافة بحيث كعون
ض YY كثافتها النهائية بعد * أيام من فترة الرعاية المرافقة مساوية ل ٠١ x خلية / ملتر. وتتجمع TEL أو 12871 عند اليوم الثالث . لقد تم تنمية الخايا في وسط دوبلكو Dubellco's إيجلز Eagles المعذل Lyin على 79٠ ٠. مصل جنين Jae من يحوي جلوتامين glutamine وبنسللين penicillin / ستربتوميسين streptomycin عند درجة حرارة FY م. ج- دراسات قدرة تعبير سلاسل Need a تعمل سلاسل خلوية من المصادر التالية في دراسات قدرة تعبير Yeo ١ ورم سرطاني جنيني PCCU , FG ( برنستاين 136018006 وغيره ¢ Natl . Acad . Sci . USA . عمط لا (AYP) © - ¥AA4 ؛ أورام سرطانية متعلقة بالغدة النخامية ATt20 ( بيونا سيسي Buonassisi وغيره £A Proc . Natl . Acad . Sci . USA كتخا = 417ل ((Y47Y) ¢ الطلائيات fie all 4 1271 ( بيرديذلي Beardsley وغيره؛ Gl DL dae ((YAAY) ١4 = ١١ : Av ¢ Proc.
Natl . Acad . Sci.
USA yo شيية ) إيفانز (V4AA) Evans العلوم 146 : 44م - (ARE 74 ) - ATCC ) 3 رقم ؟ ) و MEF حضرت طبقاً لطريقة فريشني Freshney ( فريشني « )٠1987( في " استتبات Lal الحيوانية ". شركة ألان ر. ليز Alan 18. Liss, ص 49 - ٠١١ . استتبتت الخلايا في ,+ وسط دوبلكو Dubellco's إيجلز Eagles المعذل ومزؤد ب Jae % ٠١ vy جنين عجل ؛ جلوتامين ؛ بنسيللين وسترتبوميسين . تجنى الخلايا خلية / مللتر. ٠١ x 8 - ٠ تحتوي على فأر عند BALB/C تُزّرع الخلايا الطحالية التي يحصل عليها من في 1640 80141 مُزود كما سبق ومحفز iW / خلية ٠١» © م Alu VY EAC YE » ١ لمدة ConA lla / ميكرو جم ٠ بواسطة RNA قبل الحصول على مقال ؟ sally إستراتيجية التتسيل من خلايا 4 . 8112 كمرصاف لتحضير Poly "(ه) mRNA أستعمل ye « Hoffman وهوفمان Gubler جبلر ( (ds) ثتائي الشريط CDNA (VAY) Y14 = 11“ : Yo Gene الجين ثتائي الشريط الذي تمت 48 DNA إلى EcoRI تضاف الرابطات
CDNA منزوعة الفوسفور ب lambda gt10 مثيلته مسبقاً . تربط أزرعة ظبقاً Stratagene باستعمال المستخلص التحزيمي lambda وتحزم في أكلة yo في د ¢ oy gHuynh المصسنعيسن ) هيون Gl adda الطريقة : DNA تقنيات تتسيل . IND. GLOUER (ED) ,— ds la ؛ أوكسفورد ¢ المملكة المتحدة RL الموضوع ؛ مطبعة a gil العملية (Y9A€)
ve تم إنجاز التهجين الطرحي فعلياً كما هو موصوف بواسطة تمبرلاك (VAAL) ٠57 — 144 : 708 وغيره ( الطبيعة Hedrick هيدريك CDNA تم تصويع (YaA+) e«¥ — £4Y : VA Dev . Biol « Timberlake
You ؛ بامستخدام poly (A) 8112.4 مللجرام ٠١ أحادية الشريط من ميكرو غرام ٠٠١ في وجود Amersham أمرشام Pp dCTP م سكوري من مول ( Rot 177١ وتهجين مع D actinomycin مللقر من أكتينوميسين / poly (A)" RNA مللجرام Yo لتر « ثانية ( مع / nucleotide نيوكليوتيد عند درجة حرارة 148 م لمدة yale + من خلايا 8112.3 في حجم ساعة. ٠8 بواسطة الكروماتوجرافقي : CDNA بعد التهجين ؛ يجمع Ye من ٠ hydroxyapatite خلال عمود هيدروكسي أباتيت chromatography 76١١ ( نانو غرام ٠٠١١ ؛ يستخلص 5712.4 CDNA ميكرو غرام من ١ وتستعمل لكي (CPM ٠١ XY المدخلة المحتوية على CDNA من Ode Goyal من pn Water مرشحات أقطارها pan ad مرشقح. [ lambda . gt10 . plaques ٠٠.٠٠١ محتوية على nitrocellulose ١م 8112.4 lambda 8010 المرشضحين (apse Jf حمولة ja ail وتفحص حمولة المرشح الثاني مع 8112.3 mRNA من CDNA بواسطة الذي تم تحضيره كما سبق وصفه. CDNA طرح 8112.4 غنية ب الإستراتيجية المستعملة مماشظة لتلك المستعملة بواسطة فيلموس وغيره. Filmus vy,
Yo لقد تم التعرف على أنسال آكلة البككريا المنقاة بأنها خاصة ب بواسطة طريقتي مسح ( باستخدام مجسات مسقطة محضرة 4 للتأكد Northern على اتنفعال ) . تبع ذلك لمستخدم تحليل نورزرن من الخلايا 5112.4 وليس من الخلايا mRNA من أن النسيلة هجنت مع بواسطة الهضم DNA ما عدا CDNA لقد تم إزالة مدخلات . 8012.3 ٠ ذا agarose ؛ معزولة في ربط أجاروز Bgl, Hind IT بأنزيمات حصرية في البلازميد Ly ls تم تنسيلها (Sea kem ) نقطة ذوبان منخفضة البحثي ) هضم بواسطة Bethesda الناقل 017/13 ( معمل بدا 40 لم يكن ممكناً إزالة المدخلات من الآكلة بواسطة . BamHI و Hind 0 kuziel تتلف في كل العازلات ؛ كوزيل EcoRI لأن مواضع EcoRI ٠ .)١٠14ا/( 81 : ٠١ Nucl . Acid Res. وغيره vow (Northern) بنقل وطبع نورذرن J lanl : أ. الطرق العامة الكلي الخلوي من سلاسل الخلية والأنسجة RNA تم فصل ١ guanidine isothiocyanate بواسطة استخدام طريقة أيزوسيانات جوانيدين ) وغيره ؛ في التنسيل الجزيئ : كتيب يدوي Maniatis مانياتيس ( « Spring Harbor معملي . مطبعة مختبر كولد 1ه سبرنج هاربور معدل كما (VAY) 17 . Y « Spring Harbor _s— la سبرنج cold كولد ٠١1-٠١ : VEMBO J. وغيره Wilkinson موصوف ( ويلكنسون sa ٠
(YAAA) في تحليل نورذرن Northern ؛ ٠١ ميكرو جم من RNA تم ap كهربياً في ١ 96 جلام أجاروزي Cyr agarose ls فورمالدهيد formaldehyde ونقلها إلى أغشضية نيت روسيليلوز nitrocellulose ( مينكوث Meinkoth « واهل ٠١ Anal . Biochem ¢« Wahl : ()2A¢) YAEL — YY 0 قيمت الحمولة المتساوية ونقل ARNA كل مسار بواسطة صغة الأكريدين acridine البرتقالية اللون ) ماتياتيس Maniatis وغيره ؛ التتسيل الجزيئ : كتيب يدوي معملي . مطبعة مختبر كولد zi su cold هاربور Spring Harbor ؛ كولد سبرنج هاربور N-Y (VAAY) ٠ وبواسطة التهجين مع الأكتين A « actin — 10 و / أ .Cyclphillin CDNA تهجن المنقولات والمطبوعات تقنية نورذرن Northern برسم عشوائي ( أمرشام Amersham ( ب *p لمدخلات CDNA في وجود ٠١ % سلفات ديكستر ان dextran sulphate و ٠٠ % فورماميد fromamide لمسدة ١18-١7 Do ساعة عند درجة حرارة 47م ؛ تغسل خطوة بخطوة بغسلة نهائية مدتها Vo دقيقة والغسيل في 990,1 SDS 70,1 « SSPE عند 7م أو 6 م. لكي نزيل المجس المصنف ؛ تغسل RNA blots في 960.1 SSPE «¢ SDS 96601 عند درجة حرارة 0" م ؛ يسمح بالتبريد إلى درجة an
Yv حرارة الغرفة ؛ تجفيف في الهواء الطلق ؛ وتخزين في الفراغ حتى تهجن مرة أخرى.
Lov (19.5) RNA ب. تحليل نورذرن ل ض تم الحصول على خلايا 4. 8112 بعد تنمية مرافقة ثم خللت في ١ ١ guanidinium isothiocynate جوانيدينيوم Cll ws fd مول 4 © ميكرومول YO ¢ 2-mercaptoethano]l Js—illy مول من ؟ - مركابتو
Cm ag ) ٠," أسيتات 8 ( رقم هيدروجين sodium صوديوم chloride مول كللوريد 0,V المواد المحللة فيما بعد على طبقة من
YAv ee وطردت مركزياً عند EDTA ملليمول ¥ / cesium ps oul ساعة عند ؛ م. ١8 دورة / دقيقة لمدة ٠ ويستخلص TE بعد في محلول منظم من Lad RNA يعلق راسب ٠١ ¢ chloroform / butanol Js Gs / مرتين بواسطة كلوروفورم 96 ١ ميكروجم من 18218 تم تفريدها كهربائياً في كل مسار من ثم نقلت إلى formaldehyde agarose gel أجاروز فورالدهيد الهلامي nitrocellulose أغشضية نيتروسيليلوز ١ تهجن نسخ الطبع والنتقل بواسطة تقنية نورذرن مع مدخلات
Adel مع م باستعمال الكواشفف code التي Lov gene من CDNA - ١١ يسمح باستمرار التهجين لمدة Amersham عشوائياً من أمرشام سلفات ديكستران 96 ٠١ ساعة في درجة حرارة 45" م وفي وجود VA oll pla SY تحلل صورة . formaldehyde و .5 6 فورمالدهيد vy,
YA
ماسح ليزر ila ug Lov RAN مرة أخرى لمعرفة تغيسر ات في
RNA لقياس الكثافة . لقد تم تطبيع الاستحثاث الظهري ل التي CHO - A + باسستعمال تهجين لاحق مع إكتين RNA لحمل Proc. Natl. Acad تستحث أثتناء الأستنبات المرافق ( ماكلويد وغيرة؛ تمثل القهيم المقررة لتقلك . (V4AT) 144“ - 484 : AY Sci USA. ٠
Cli WN في Lov الزيادة المضاعفة المصححة للزيادة في تعبير
A alles المرافق مقارنة مع خلايا 4. 51,12 غير .20.5 (Tea) RNA ج- تحليل طبع ونقل تورذرن ل خلوي كلي من 8112.4 » 3. 5112 وتحضيرات RNA تم عزل بواسطة طريقة أيزوشئيوسيانات Balb/c أنسجة نقية من فثران Ye كما سبق وصفه. guanidine isothiocyanate جوانيدين النووي أو السيتوبلازمى كما سبق وصفه . في تحليل RNA zi إلى tang فردت كهربائيا RNA ميكرو جم من ٠١ نورذرن ؛ )١٠987( وغيره Maniatis مانياتيس ( nitrocellulose نيتروسليلوز i ged تنسيل جزيئ : كتيب يدوي معملي. ١ ؛ كونلد 0011 spring Harbor مطبعة مختبر كولد سبرنج هاربور (VAAL) ؛ واهمسي meinkoth سبرنج هاربور ¢ 17-7 مينكوث .) ١6 = اا : ١١ Anal Bio chem. a1
Yq مقال ؛ (Southern) التحليل بتقنية نقل وطبع سزرن : أ- الطريقة العامة الخلوي الكلي من خلايا 1 ورم لتفاوي ومهجنات خلية DNA غُزل جسدية همسترية - فأرية وهضمت أنسجة من عينات أخرى مع الأنزيمات الحصرية المذكورة في شروحات الشكل طبقاً إلى مهضوم في DNA ميكرو جم من ٠١ ظروف المواد المتوفرة — وضع كل مسار من 96 من هلام أجاروزي وفرد كهربائياً وطبع ونقل كما هو موصوف عملياً ( مينكوث واهي Nytran على دعائم نيتران ؛ ومن ثم مُجنت وغسلات (VAAE) YAL - 117 : 1١7 Anal . Biochem ٠ كما هو موصوف في تحليل النقل والطبع بتقنية نورذرن.
Yeo ب- التحليل بتقنية سزرن للطبع والنقل ل لقد تم التحليل بتقنية سزرن للطبع والنقل ل 70,8 كما سبق
BLA خلوي كلي من DNA عدا ما سيلي ذكره لقد تم عزل Lad ومن مهجنات خلية جسدية تم hamster كبد فأري أو همستري » 8112.4 ٠ من كبد دجاجة أو إنسان من DNA الحصول تجارياً على مع الأتزيمات الحصرية المذكورة في DNA . بخ palo Alto , clonetec ميكرو جم ٠١ الأمثلة طبقاً للظروف المحددة من مصدرها . يضاف المهضوم إلى كل مسار من ترس أسيتات لمدة تقرب من DNA من ؛ تهجن وتغسل Jal ساعة ثم تتقل لتطبع على دعامة من 48
كما هو موصوف في التحليل بتقنية سزرن للنقل والطبع . تغسل النسخ المنقولة والمطبوعة المحتوية على 0118 من عينات أخرى عند صرامة Jd ينفذ الغسيل Hel عند درجة حرارة الغرفة مع .Y X SSPE هه مثال ° عزل CDNA Jd جديدة باستعمال مسح تمايزي محسن بالمطروحات لقد تم التعرف على وعزل أنسال CDNA جديدة والتقي يعبر عنها على وجه الحصثر أو تكون أكثر غزارة بواسطة خالايا 4 عنها بواسطة خلايا 3 . 8112 كما وصف في ALAN من (7-١1 ١ نتج عن المسح الأولى ل 40,00 أكلة recombinant ggtl0 phage. فقط ١١ نسيلة واحدة ؛ حيث تم إستعادة ثماتية منها بعد مسح إضافي بمجسات مطرحة وتبدو أنها تمثل + منتجات جينية متنوعة ٠ ثم تحديد خصائص © CDNA Jw . أوضحت نورذرن للطبع yo والتقل ل «RNA خلايا 3 . 8112 , 4 . 8112 أن CDNA Jd المنفصلة قد تم التعبير عنها تمايزياً في الخلايا 3. 8112 , 4 . 8112 كما هو موضحاً في شكل .١ لقد تم تقنية المدخلات المنقاة من أنسال CDNA الخاصة لخلية 7 . 8112 واستعمالها كمسار للمواد المطبوعة والمنقولة بتقنية نورذرن . أحتوى كل مسار على ٠١ ميكرو جم 8178 خلوي كامل
١ من سلاسل خلية 4. 58112 , 3 . 51,12 كما هو مشار إليه . لقد تم dit andl CDNA سير العينات المنقولة والمطبوعة على التوالي مع النشطة إشعاعياً. .185 , 288 rRNA تميز الأسهم حركة النسبية للنسخ
° وجد بأن كمية حمولة RNA 4 . 5112 , 3 . 8112 لكل مسار متكاففة كما هو محدداً بواسطة التهجين مع مجس CHO-A CDNA كمافي مثال .
تم التعبير عن بعض أسال ختاتن في الغخلايا 4 . 5112 ( 19,5 ؛ 70,5 ) بشكل استثنائي بينما تكون أسال الخلايا الأخرى
. 8112 . 4 أكثر قدرة على التعبير بواسطة الخلايا ) ١9,4 V4 (V4) ٠ على أكثر من رتبة حجمية من سخ CDNAs لقد تم بواسطة ويقترح أنها يمكن أن تبداً أو تتتهي عند مواضع مختلفة ¢ تقطع بتمايز أو يمكن أنها تشتق من جينات قريبة النسب لها.
CDNA Jud JL إلى رقم نسخ قليلة أو نسخ جينات مفردة ١ الموجودة في سلاسل خلية SLI2 . ينقص الخلايا 3 . 58712 إمكانية التعبير عن نسخ 19,5 0 ٠0,5 . استقصينا عما إذا كان الجين حذف
أو ترتيبه لكي تفسر غياب النسخ. DNA ab الوراثفي من 3 . 5112 , 4 . 5112 , 0148 كبد عادي مع Hind IT, EcoRI أو 280 وخُْلّل بمداخلات مجسّات نقية إلى Jed CDNA vy, . يبين شكل ؟ الطبع والنقل التهجيني بتقنية سزرن لأسال
CDNA خاصة من 4 . 5112 . مهُضم 0118 وراثي ( ٠١ ميكرو جم مسار ) من كبد فأر AKR , 3 . 8112 ,4. 5112 وسلاسل خلية 7 ورم لتنفاوي ونسيلة 51 كلون سلاسل خلية ورم لنتنفاوي T ومن مهجنات خلايا 4. 81712 SAK x SL12.3,SAK x SL12.4,SL12.3 x مع م EcoRl وحللت بتقنية سزرن للطبع والنقل المهجنة مع نسيلة CDNA الموضح كما هو موصوف في مثال 4. يشار إلى حجبم الأجزاء بالكيلوباز kilobase من الأزواج القاع_دية ( تقدر بواسطة هجره مرافقة من لامبدا Hind I مُبينة في Chala البراءة . يتعرف على واحد أو قليل من الأجزاء المقيدة بواسطة ٠ المجسات التي توضح أن الجينات المتقابلة توجد في كلا سلسلتي الخلية عند رقم نسخ قليل المادة الوراثية للفأر. تكون قوة التهجين متشابهة في جميع المسارات موضحة أن جينات موجودة في DNA خلية 3 . 51112 بكميات متساوية وبدون إعادة ترتيب باستعمال ؛ أنزيمات متنوعة (شكل ؟ ) لذلك فإنه من م المحتمل أن تنشاً الاختلافات في قدرة تعبير الجينات Jw الخلية 2 عن تتظيم خلوي خاص وليس عن نقص في أو إلى إعادة ترتيب في الجينات ذات العلاقة . على df حال Magid Say Vo إعادة ترتيبات صغيرة أو طفرات وراثية عند نقاط معينة في الخلايا .SL12.3
تمثل CDNA Jil المحددة من 4 . 8112 جينات جديدة لقد تم تعيين سلسل أسال CDNA + لك ابق» فرح » Yeo بالكامل . لا توجد أية تشابهات واضحة مع التتابعات المنشورة . وضتح التتابعات في FAFA com YC) o على الرغم من أنه تم تحديد تتابع ١9,4 جزئياً ( حوالي KB’ YA في بنوك بيانات DNA أو عن طريق أحجام النسخ . أضسف إلى ذلك ؛ لا يوجد أي من أنسال CDNA يقابل جينات خلية 7 المعروفة الأنتكوجينات oncogenes أو جينات genes فأرية أرتجاعية فيروسية معروفة التعبير في سلاسل خلايا AKR بالإعتماد على حجم ٠ النسخ أو وجود قدرة على التعبير ( هاجي وارا Hagiwara وغيره J.
Immunol 2 : 4ه - 7617 ( ١1487 ) ؛ مكفوره Heckford وغيره. Immunol . ز 17 : 367 = 117 ( 14087 ) ؛ لي كلاير Leclair وغيره EMBO J. 0 : 2777 - 27734 ( 1985 ) ؛ موشينسكي Mushinski ١ وغيره » العلوم 77١ : 198-745 ( 19487 )؛ ياجو Yague وغيره ¢ الخلية 47 : LAV - AY ( 19858 ) فينت وغيره ؛ جيه فيرول J.
Virol (VAAY ) ٠١-١ 4 سيلتون 801100 ١747 : 4 EMBo J. copes - حلا ( ١88 ). : يوضح حجم 0017188 والنسخ المتعرف عليها مع طول الإطار المفتوح ((087) في لوحة رقم .١
£4 جدول رقم (Y) حجم مُدخلات CDNA ونسخ من MRNA ١6 | 14,4 | 7 | 14, | | v4 | | A$ | CDNA | | ار سخ | £1 | 8 | £ | 8 AYA | YE Z | ++ | - | LORF" | * يعطي حجم % CDNA COL AD بالكيلوباز kilobase قاعدة مزدوجة © وتحدد من تحليل تتابع DNA * لقد تم تقدير حجم النسخ التقريبي بالكيلو قاعدة مزوجة بواسطة هجرتها النسبية إلى 28S , 18S الريبوزومي ribosomal في هلام أجاروز الفورمالدهيد كما هو موصوف في المواد والطرق. 087 = إطار طويل مفتوح معطي بالقواعد المزدوجة . لقدتم ٠ تفحص تتابعات DNA باستخدام برامج ميكروجينية للحاسوب لكي تحدد ال ORFs ويتضمن مع ال ٠١٠٠١ قاعدة مزدوجة ترمز - إلى أنه لم يكف عن LORF ٠9,4 . ORFs الخاصة بالألفين وأربعمائة قاعدة مزدوجة هي مبدئية اعتماداً على تعيين تتابع غير مكتمل . ++ يحتوي على 19.2 CDNA أثتنان من ORFs أطول من 45٠ قاعدة
م مزدوجة وربما بإعادة الفحص تظهر بأنها متقارنة وبهذا الشكل حوالي 9٠١ قاعدة مزدوجة. بالإضافة على مقارنة حجم النسخ وحجم مدرجات CDNA فإنه قد
يستنتج أنه لا يكون أي من CDNAS مكتمل الطول . لا يحتوي التتابع ٠ في G3CDNA الطول ٠,6 كيلو قاعدة مزدوجة على ORFs iJ
طويلة ٠ وتحتوي على بقع متعددة من polyA tract ومن المحتمصسل أن
تحوي " 3 " تتابع غير مترجم ويكون CDNA 19.5 في الطول 0,¥
كيلو قاعدة مزدوجة ولكن يحتوي على ORFs قصيرة Lai ( 971
مه ؛ لوحة رقم ؟ ) . يُظهر التتابع الجزئي الخاص ل CDNA 19.4 على ٠ 03828 ذات YE كيلو قاعدة مزدوجة وكالنسيلة 14,4 تحوي النسسيلة
CDNA 19.5 على تتابع شفري تام ويكون تقريباً تام الطول.
مقال > تحليل CDNA 19.5 يبوو أن النسيلة CDNA 19.5 تحمل شفرة لبروتين عابر
م١ للأغشية عدة مرات . يوضح CDNA 95 1 وتتابع الحمض الأميني
المتوقع في شكل ؟ . توضح استراتيجية التتابع في شكل “أيوفر
تتابع CDNA خطوط عديدة من القرائن بأنه كل منطقة الشفرة
التامة توجد في النسيلة ٠١5,8 :
-١ توجد إشارات وقف في كل ؟ إطارات مقروءة قبل موضع 7 البدء المتوقع وضمن منطقة 38 الغير مترجمة المتوقعة.
"- يحافظ موضع بداية الميثونين methionine المتوقعة بواسطة التتابع الذي يضاهي 6 GXC AUG ( حيث « يمكن أن تكون ه , 6 , 6 ؛ أو (U تتابع كوزاك !1:20 لموضع بداية أمثل للترجمة .)٠١( ٠ *- إشارة عديد الأدينين الممكنة " (YY) ATTAAA توجد '3 شفرة نهائية. يعطي تتابع الحمض الأميني المشتق لحجم بروتيني متوقع ( غير مُعدل ) إلى حوالي ١7,58؟ دالقتون Daltons وتكشف موضعان جلوكوسيدات glycosylation محتملان حيث تمثل بواسطة نجبوم في ٠٠ شكل ؟. any تتابع الحمض الأميني amino acid المتوقع تقدير دقيق للوزن الجزيئ الذي يمكن أن يتحول بواسطة كل من أو كلا عمليتي شلر أو الفسفرة باستعمال برامج عقل إليكتروني ؛ يمكن التعرف على ؛ مناطق غير قطبية عابرة الأغضية محتملة عالية للاقطبية ve ( الخط السفلي في (FOSS . لم يتم stall على تتابع خاص بالإشارة. يوضح كروكي لبناء غشاء محتمل ؛ يعتمد على الخصائشص الفبزيائية للبروتين المتوقع في شكل LY على الرغم من أن البناء المتوقع يكون من مستقبل أسيتيل كولين acetylcholine 00( لم ٠ يتم العثخور على تشابه بين تتابع بروتين و DNA
يوضح شكل ¥ تتابع DNA وتتابع ig المتوقع للنسيلة CDNA 19.5. مثال ل التتظيم السلبي لتعبير الجين ©, 8 في خلايا جسدية مهجنسة o تم البحث عن التعبير التفاضلي للنسخ المتعلقة ب 14,0 لسلاسل بواسطة دمج خلية (SL12.3 x SL12.4) SL12.4,SLI12.3 . ويكون هذا الهجين مفيداً بصورة خاصة لأنه يحتوي بصورة استقائية على عدد كروموزومات chromosome ثابت وعدد رباعسي ٠ ا cael ad عدد بسيط كروموزومات . يحتوي هجين خلية 3 . 8112 x 8112.4 على 74 كروموزماً ولم يفقد أية كروموزوم لسنوات عديدة . يوضح شكل 1 أن قدرة تعبير نسخ ١19,59 تكبح بقوة في الخلايا المهجنة 4 . 5112 x 4. 5112 . علاوة على ذلك ؛ ينتج أيضاً الدمج المكون بين 5112.4 ١ وسلسلتين أخريين من خلايا الورم اللتفاوي SAK8 « T أو 1 . 8112 التي ينقصها القدرة على التعبير عن {TJC 5} 19.5 mRNA — الخلايا المهجنة كما هو ينتج عنه LOL A مهجنة ينقصها نسسخ كما في الشكل . لا تنتج الكمية القليلة من تعبير جين ١٠١,٠ في جميع الخلايا ٠٠ الجسدية الثلاثة المهجنة بسبب فقد الجينات أو إعادة ترتيب الجيسن
£A
DNA الرئيسي وذلك لأن استخدام التقل والطبع لتقنية سزرن لمقارنة لسلاسل خلية 3. 8112 ,4. 8112 فشلت في توضيح أية اختلافات عن حجم وكثافة الشريط كما هو مبيناً في شكل ؟. بالإضافة إلى ذلك ؛ فإنه من غير المحتمل أن يكون كلا 8112 . 4 م الكروموزمين المحتويان على الجين المقدم بواسطة الأمصسل المزدوج البسيط ell قد فقدا في ¥ مهجنات مستقة إذا اعتبرنا للكروموزومات في الخلايا وثبات مجموعة خصائص نواة الخلية.
Gl sade سلبياً في 19.5 CDNA يُنظم الجين الممثل بواسطة خلية جسدية مكونة بين خلايا 4. 61712 و ؟ خطوط خلية 7 مختلفة
N50 “التي ينقصها القدرة على تعبير الجين ٠ تقترح تلك النتائج بأن عوامل الكبت بواسطة 3 . 5112 يمكن أن تكون على الأقل مسئولة بصورة جزئية عن التعبير التفاضلي للجين المكتشف بواسطة مجس 00118 19.5 . بالمثل ؛ فإنه قد وضح بواسطة عوامل سالبة موجودة CD3 - delta - TCR - beta أن تنظيم النسخ 7 نظراً لاستخدام " سلاسل خلية ورم لنفاوي . ١,“ في الخلايا مختلفة ومشتركة في الدمج مع خلايا 4 . 5112 وفشل ال ؟ دمجبات )؛ لذا فإنه من المحتمل أن تشارك 19.5 mRNA في التعبير عن .٠9,5 الجين Jamis nda lan عوامل سالبة في
ومن غير المحتمل أن يحدث التغير الأحيائي أو حذف نسختي من أصل الخلايا 4 . 8112 في ال * دمجات المستقلة المشتقة من مصادر خلوية A ahd, في Ady مهجنات خلية جسدية Wal من ذريات مختثلفةء م تلاح _ظ ig, alls انقراض الطسرز ayy alll بينما لا شوق معظم الرسالات الخاصة بالتمايز إلى التراكم ( ديفيدسون Davidson ¢ نشرةدوريسة في علم الورانة م : ave ) YYA=1Y40 ( ؛ هيمان Hyman وستالينجز Stallings ؛ المناعة الررائية : صن — oA Y4AVYA ) ( . المكونة بيسن الخلايا قريبة الصلة ذات نفس الذرية ) هيمان وغيره؛ المناعة الورائية YVY = YY : ٠١ ) 8 ( . غالباً تعزى إلى الكابحات الخاصة التي تقوم بالتعبير بواسطة أحد ye سلاسل الخلايا الأصسل. في حالة نمو هرمون جيني ؛» يزاول الكبت في مهجنات خلية جسدية بطريقة غير مباشرة في منشط إيجبابي خاص 06101 ( مكورميك McCromick وغيره ؛ خلية 00 : 374 - ١1 ( FAQ ).
Oa
A مقال 8112 .4 التوزيع النسيجي للتتابعات الخاصة بالنسيلة
Lae المشضتق من أنسجة متنوعة فأرية لكي نحدد RNA يفحص إذا كان الجين المتتاظر إلى 18,0 05 قادراً على التعبير في كل م الكائنات والأماكن أما في نسيج محدد . تبين الأشكال + و 7 نمااج في نسيج ١9,5 في مهجنات خلية جسدية و 19.5 , 20.5 CDNA التعبير ل فأري طبيعي. ١ يعد الطبع والتنقل بطريقة سزرن كما هو موصوف في شكل خلايا أمسلية وخلايا J WOU WRNA + ومثال ؟ . يوضح الشكل مهجنة من 8112.3 ,4. 8112 , 588158 , 1. 8112 » تم تقييم مقدرتها ٠ هتلع من أنسجة ١ للتعبير عن الجينات 14,0 70.7 . يوضح الشكل
BALB/C طبيعية وأعضاء مشتقة من فأر ¢ ACTIN تقدر أحجام النسخ بالاعتماد على الهجرة النسبية مع مع 19.5 CDNA ريبوزومي . يهجن RNA 8 YA (VA +» سيكلو فيللين المطبوعة مع Ay Gall تختبر ال الموال KBY,0 »؛ ٠,“ نسختين من yp بعد تجبس مع Lay 19.5 CDNA عشضوائية ذات أصل Dl Laie للتأكد من أن كل المسارات (CP) ؛ أكتين أ ؛ سيكلو فيللين CHO - A
CP يبدو الضابط . RNA تحتوي على كميات مكافئة تقريبية من للأنسجة العادية أككر من RNA بأنه أكثر اعتماداً لقياس حمولة للخلايا العادية للتقهيم. RNA .؟ الأكتين عندما يفخضع
يبدو بأن الجميع متساوي الحمل بواسطة صبغ أكريدين من iB البرتقالية هلام قبل النقل والطبع . توجد كميات
Peyers , خلايا la ia ) نسيج لنفاري معري ( GALT في 19.5 mRNA .) ١ المخ القلب ؛ الرئة ؛ والخلايا متوفرة صباني المبيض ( الشكل Patch ؛ والبنكرياس ؛ (VJs) في الكبد والأمعاء ١9,5 لم تظهر النسخ 0 العظمي ؛ خلايا الطحال الساكنة أو خلايا الطحال pla ¢ الخصية .) الجدول رقم ؟ ( ConA ب dla idl على الرغم من عدم ظهور النسخ ذات العلاقة إلى 19,8 في ولا في الخلايا الصعترية (VY الخلايا الصعترية الغير مجزئة ( شكل ؛ CD4 CD8 الخالية من i all المزدوجة ولا في الخلايا الصعترية ٠ وأحد سلاسل ) ١ كل الغد الصعترية ( شكل mRNA يوجد وبذلك فإنه من المحتمل أن . (TEL ( الخليبة الطلائية الصعترية للغدة الصعترية على التعبير عن تلك النسخ. (Stromal ) تقدر خلايا والقي لا mRNAs الجديدة على CDNA يتعرف عدد من أنسال تكون محددة في القدرة على التعبير لنفس سلسلة الخلاايا اللنفاوية. ١
Tada وهذه النتائج مشابهة للجينات الأخرى معروفة الوظيفة في التي يعبر أيضاً في خلايا المخ العادية ( لونبرج وغيره؛ 004 , 71-1 والمستضد 303 كدليل ) ١68 ( YYYA = 717174 : A Mol . cell Biol لمرحلة ما قبل الورم خبيث لخلية 3 حيث توجد أيضافي an oY ¢ وغيره Adkins الصعترية ) أدكينز 3a all الخلايا الطلائية القشضرية . ( ١ ) مف —YYo : © Ann.Rev. Immunol العادي وفي سلاسل all يعتبر تعديل النسخة *,؟٠١ في 5112 . 4 . خلية مبيض مصابة بورم سرطاني نظراً لأن سلسلة الخلية من / Qe تحت الأورام السرطاتية العقدية الشهيرة في المبيض في o .)١؛؟( إنان الحيوانات المتعلقة من أورام 51112 .3 Tal all وفي المقابل ؛ تكون خلايا الدم
MacLeod السرطانية المنتشسرة التي لا ثبت في المبيض ) ماكلويد وهي للتعبير ) ) ١985 ( AAY - دلا : VE J. Nat. Cancer Inst وغيره ؛
A q,0 أ عن النسخ تنبت أحد الأورام اللتفاوية - 3 البشضرية الشهيرة في المبايض eV) في الطب الباطني ) الطبعسة Harrison's) su la أسس ( .) ) ١١87 (133 . 7 + المحررون: براون والد وآخرون ؛ ماكجرو هيل يهجن إلى سلسلتين من خلية مبيض بشري 19.5 CDNA حيث أن مختلفتان مصابتان بورم سرطاني 3 فإنه قد يكون هنالك وظيفة Vo تعرف أو توطين لنواتج الجين 19,0 والذي يسمح لها أن تثبت نفسها وتنمو في المبيبض. في كل الغخاييا 19.5 mRNA على الرغم من عدم وجود الصعترية أو في الخلايا المجزية ثنائية السالبية ؛ من المحتمل أن oy
يقدر الجين على التعبير في نوع ثانوي نادر من الخلايا الصعترية
أو يعبر بطريقة عابرة خلال تكون اللنف في الأفراد الجينية أو البالغة .
تحدد دراسات التهجين في موضعها الأصسلي أنواع الخلايا في
الغدة الصعترية ؛ المبيض والقلب والتي تعبر عن النسخ القريبة ل 24,0
هه يلخص جدول رقم ¥ دراسات قدرة التعبير المتغيرة في © Ju
.) للمقارنة ١9,5 يشمل ( CDNA : ( V) جدول رقم جديدة في أنسجة فأرية. CDNA لأنسال mRNA تعبير 0 صرق ae ١ لبق vay + ee + | Thymus الغدة الصعترية - | - | + | - ١ Splenocytes طحالية LMA = | + | +4 | + | ConA" ا GALT - | - | - | - | Bone Marrow النخاع العظمي + | = | + | - | Brain المخ = | = | = | = | Lg.
Intest المعي الغليظ - | - | - | = | Pancreas البنكرياس +t | - | - | = | Ovary المبيض - | - | - | - | Testes الخصيتان ot من RNA في كل الحالات ؛ تهاجر النسخ من أنسجة فأرية مع سلسلة خلية 4 . 81712 . يوضح الرمز (-) إلى قدرة التعبير على . 8112 .4 Wald Ma ضعف أقل من 70-٠١ الأقل عن يكف ؛ من ال * أسال نستةاً في سيج لتلغفاري : ارق ؛ 19,5 يمكن التعبير عنها في الغدة الصعترية يستحث 14,4 19,7 0 يعبر . ConA تعبير 15,1 » 14,7 19,4 في خلايا الطحال المحفزة ب da wll تحتوي العديد من . GALT في 19,5 » 18,7 » ١19,١ عن 19,0 57 الغير اللنفاوية على نسخ حيث تهجن مع لمجسات .) وجدول رقم ؟ ١ شكل ( CDNA تعبّر سلسلة خلية سرطانية مبيضية تتابعات متتامة إلى Ye بما أنه مستو عال من قدرة التعبير للجين 149,9 في . 19.5 CDNA نسيج مبيض الفأر تم إظهارها فقد تم فحص مجموعة سرطانية عن تواجد التتابع 14,8 » لقد تم فحص الطبع والنقل بتقنية 5112 . 4 ميكرو غرام من ات الكلسي من خايا ٠١ نتورذرن وسلسلة خليتان سرطانيتان لمبيض كما هو موصوف في شكل ؟. ١ كان الغسيل النهائي للنتقل والطبع بتقنية نورذرن على اليسار مع عند درجة حرارة الغرفة ؛ نفس النقل والطبع الموضح في SSPE عند درجة حرارة الغرفة 0.2 x SSPE اليمين تم غسله لاحقاً مع
RNA حيث ينتج عنه فقدان الإشارة من المسارات المحتوية على مشتق من 5112 .4 RNA بشري ولكن ليس من المسار المحتوي على ٠ a
ده فأر . لقد تم تقييم 8218 من سلاسل خلية بشرية مثبته من 2008 0010316 بواسطة تحليل نورذرن ووجد أنه يحتوي على سغ ١ كيلو قاعدة مزدوجة تهجن مع مجس 00178 19.5 ( شكل + ). وجد أن الخلايا ذات Lidl الميزودرمي Ll mesodermal — ه المعبر للنسخ تكون غير متوقعة إلسى حد ما حيث تتضسمن تنك الخلايا فقط على نسبة صغيرة من كتلة المبيض العادي ( توجد في طبقة سميكة لخلية واحدة في السطح الخارجي من المبيض ). يمكن أن تعبر خلايا المبيض اللحمية عن الجين ad . وجود النسخ التي تهجن مع CDNA 19.5 تقترح أن الجين المتعلق بأحد ٠ > شفرات 00118 19.5 توجد في المورثة البشرية. تعبر العديد من أنواع الثدييات على تتابع مكمل ل CDNA 19.5 . لكي نحدد Lae إذا كانت cl pa A DNAs الأخرى تحتوي على تتابعات مشتركة مع 19,0 بواسطة نقل وطبع سزرن ل DNA من أسد البحر ؛ همستر ؛ فأر ؛ إنسان يجس ٠١ ميكرو جم من DNA yo لنقل وطبع سزرن من المصادر الموضحة المهضومة مع Pst مع مدخلة CDNA 19.5 مّمة ب ١ . تغسل المطبوعات والمنقولات بصراحة نهائية ب x SSPE 1 عند درجة الغرفة . يحتوي المسار المحتوي على DNA بشرية على خلفية عالية نسبياً . توضح النقاط على يمين المسار عن أجزاء DNA ٠ المكتشفة القابلة للإثبات التي تهجن بالتبادل مع مجس فأري. a4
تحتوي كل DNAs على نماذج بسيطة للتهجين حيث يقترح بأن الجين يحافظ عليه خلال أنواع الشدييات (شكل ).ماهو موضحاً في شكل 4 ؛ تم الكشضف عن تتابعات مكمل في DNA ؛ الأرنب ؛ الليمور وإنسان الغاب . وبذلك ؛ فإنه يبدو أن الجين م الممثل بنسيلة CDNA 19.5 يحافظ عليه عبر الثذييات . تقرح المحافظة على هذا الجين بأنه قد يكون له دور وظيفي هام غير ب مكتشف . لم يتحدد مباشرة توفر النسخ المتعرف عليها كثافة Gill المتعرف عليها بواسطة مجسات CDNA الجديدة ؛ على أية حال ؛ ٠ بالمقارنة للنتقل والطبع وتقنية نورثرن ؛ يكون 4,7 19,0 سيا غير موجود بكثافة ويعبر في عدد نسخ أقل من TCR —~ 3274 mRNA تظهر ؛ جينات مستتسلة من Wal 4 . 8112 المعبر عنها ممكنة الكشف في الغدة الصعترية ؛ * في خلايا الطحال النشطة و ؟ في خلايا GALT أن نماذج الورم السرطاني هي مفيدة لعزل الجينات ١ التي تنظم في أنسجة اللنف الطبيعية وربما في نمو TAS لا يطابق أحداً CDNA Jud الجديدة الموصوفة في هذا التقرير تتابعات الجين المنشورة add ih. برنامج Prosite , PC Gene a ASH (IntelliGenetics) عن البروتينات المتوقعة الممثلة ب VY ¢ 54 + مرق CDNAs ٠١# للينوكليوتيد nucleotide المتوقع أو مواضع ٠ ارتباط DNA « أصابع الزنك ¢ Leucine zippers مواقع أنزيم نشطةء؛ a" ov مواضع خلوية مستهدفة ¢ أو ملامح بروتينات بنائية ؛ مستقبلات ؛ وعوامل نمو لم يُعرف هذا التحليل على cytokines سيتوكينات المواضع المتعلقة بتلك المسجلة من قبل في أي من البروتينات المتوقعة . في هذه المرة لا يوجد أي دليل عن وظيفتها المحتملة. من المحتمل أن تتضمن شفرة هذه الجينات نواتج تشترك في ° أحداث تمايزية. 5112 .4 » 8112 . 3 خلية J uf يعبر عن الجينات تفاضلياً في -١ الي تبوو أنها تمثل مراحل مميزة لنضج خلية صعترية. تبدي الجينات تخصصيه نسيجية في تعبيرها. -*" ؛ 19,7 + 14,4 في خلايا 1 طحالية 15,١ يستحث تعبير الجينات -* ٠ .T — cell mitogen Con-A; منشطة بواسسطة في مرحلة محددة في 19,8 Veo ؛- تعبير الجينات ذات الصلة ب الأجنة المبكرة. الجديدة بواسطة الجينات التي تحوي ض CDNA تشفر سلاسل نسال نماذج هامة للتعديل والتنظيم . وبذلك فهي تكون مفيدة في فحص ١ الميكانيكية الجزيئية التي تتظم الخلايا ؛ توطن ورم لتنفاوي وخصائص تولد الأورام السرطانية في ذرية خلية 1 متحولة. أيضاً مفيدة كمجسات لكي تحدد موقع CDNA تكون أنسال الخلايا الحاملة لجينات خلية - 1 الجديدة ؛ وكمصدر نقي إلى حد .1 كبير لبروتينات جديدة لخلية 6 oA 4 Jie
Lov إنتاج أجسام مضادة عديدة النسيلة مضادة ل تم تصتيع قليل ببتيدي مكون من VE حمضا Lid في مركز
K-G*-H-A-D-R-E-Q-BE-S-E-E-E-V : هو Ld تتابع الببتيد UCSD حمض أميني عند النهاية الطرفية VY AY يمثل هذا التتابع ° للإستخدام كدليل للربط 146 glycine مع إضافة Lov المتوقعة ل C - ¢ peptide مللي حجم من هذا الببتيد Ja’ . مع الحامل hemocyanin حامل إلى هيموسيانين protein مطللجرام من بروتين ٠١ ببطء لمدة glutaraldehyde بواسطة إضافة جلوتار الدهيد ) KLH) دقيقة . ثم أجريت ديلزة ضد 0388 لمدة ليلة كاملة. ٠١ ٠ تم جمع ٠١ مللتر من أمصال إناث زوج من أرانب نيوزلنيية بيضاء ( عمر 1 شهور Holbarts ) قبل التحصين. خصتت الحيوائنات بقرين الببتيد بوجود مساعدة كاملة من فروندر Freunds . يحقن oY مللجرام ببتيد تام تحت الجلد في ٠# ١ مواضع للحيوان . تعطي حقنة مُعززة من oY مللغرام ببتيد في فروندز Freunds غير كامل اختبار أسبوعي Ja المستنزفة لتقييم إنتاج مضادات للأجسام salad) ل Lov بواسطة ELISA
04 مقال ٠١ تحليل أضرار المصل ل Lov تم قياس تواجد الأجسام المضادة المميزة ل Lov بواسطة lid) بتقنية ELISA م يجفف قليل ببتيد و 0111 مباشرة في حجيرات أطباق ELESA ثم تضاف محاليل مخففة de sie من مضادات الأمفصال ) antisera ( ويسمح لها بالتفاعل لمدة ساعتان. بعد الغسيل في 31000 ؛ تحضن العينات في محلول مخفف ٠٠٠١ : ١ من جسم ثانوي مضاد IgG أرنبي ضد مغري متصسل لمدة ٠ ساعتان إلى بيروكس يداز جرجار peroxidase يحفز بي روكسدداز تفاعلاً لونياً باستخدام HO, و OPD كمادتين تحلل النتائج في قارئ ELISA أتوماتيكي . عندما يصل العيار للجسم المضاد إلى مرحلة الاستقرار تذبح الأرانب ( تقريياً بعد 4 ١ أسابيع من الحقن الأولى ) . وباستخدام مقايمة BLESA بامستخدام مكونات خلوية تم تكشضير الخلايا بالموجات الصوتية ذات الذبذبات العلمية. تم فصل الجزء الخلوي بواسطة طرد مركزي للمتحللات عند 6 ع ولمدة Ye دقيقة. an
تم تجفيف كلا من الغشاء والأجزاء السيتوبلازمية cytoplasm في حجرات ELISA طوال الليل. مقال ١١ تحليل الجسم المضاد aa sil o يعلق ٠١ خلية 5112.4 غير معالجة أو معالجة في Yo ميكرو لكر في محلول منظم أ PBS) محتوي على * % ممصمل جنيني بقري + BY صوديوم أزيد ) . ثم يضاف 5٠ ميكرو لقر من ٠٠١/١ محلول مخفف لمضاد Lov Jad ويسمح لأن يحضن لمدة © دقيقة في pla) . وبعد ؟ غسلات في الكاشف أ ؛ تحضن ٠ الخلايا لمدة Ye دقيقة مع 150 أرنبي ضد معري ( محلول مخفف ٠٠٠١ ) في الثلج . في التجارب » حيث تختبر خصوصية التفاعل ؛ يضاف حجم مساوي من ١ مللقر من محلول قليل ببتيجدي إلى مضاد الأمصال لمدة Ye دقيقة قبل إضافتها إلى الخلايا. Yo تحلل الخلايا بواسطة محدد خلوي توهجي (10100:08:801ر ) بقوة توهجية SOH تعمل مع مولد ليزر عند EAA نانومتر. تطرد الخلايا And) بسبب الصبغ مع أيوديد البروبييديوم propidium iodide » تحلل 595000٠ خلية لكي تنتج الهيستوجرامات ع0 الناتجة.
+41١ ٠١١ مثال Lov الترسيب المناعي لبروتينات تمت دراسات الترسيب المناعي التحصيني باستخدام الطريقة : في الأجسام المضادة Harlow & Lane الموصوفة بواسطة هارلو ولين .) ٠548 ( 1] . هو كتيب موجز معملي . مطبعة هاربور كولد سبرنج . ا في وسط خال من . methionine تم تعليم الخلايا ب 325 - مثيونين الميشونين لمدة ؛ ساعات . ثم تكشر الخلايا إما في محلول ينظم
NP40 أو RIPA تحليل ميكرو قر من YO يعاد توضيح المتحللات بواسطة إضافة أمصال مسبقة التحصين محضنة في التلج لمدة ساعة وترسب ٠ البروتينات متداخلة التفاعل مناعياً باستخدام بكتيريا عنقودية ذهبية .) Calbiochem ) من شركة ) Staphylococcus aureus من ثم يضاف * ميكر ولتر من المصل المناعي ؛ يحضن لمدة : ساعة ثم يرسب مناعياً . تغسل المادة وتفرد كهربائياً في هلام ثم يعرض الهلام إلى شريحة فيلم لكي تحلل . SDS-PAGE ٠ الصورة الإشعاعية الذاتية بواسطة طرق معروفة للخبراء في dad
ب مقثفال ٠١“ تحديد الخريطة الورافية ل Lov تم وصف إنتاج وخصائص مهجنات خلية جسدية فأرية » همستر hamster جيني ( كرزاك Virol ) )١97( Kozak . م ١١ - ٠١ ). ٠ تم 0118 من تلك الخلايا المهجنة وهضمها حتى التمام مع Pst. ¢ أنزيم حيث تعطي نماذج مُفردة مع كل نوع عندما يجس الهضيم DNA الفأري أو الهمستري مع مدخلات CDNA 19.5 طولها ٠١ كيلو قاعدة مزدوجة يُفرد DNA المهقوم كهربائياً في 8,. a أجاروزي لمدة VY ساعة عند Yo فولت ؛ وتتنقل إلى diel من ٠ النيتران. ثم تجس المطبوعات والمنقولات الناتجة مع Lov CDNA مُعلم ب م وتعرض إلى شريحة فيلم كوداك XAR Kodak . لوحظت الأدلة على محتويات الكروموزدم chromosomal الفأرية المهجنة مع Lov في سلاسل خلوية متتوعة وحلات النتائج بواسطة الكمبيوكقر لكي yo تحدد أفضل مرشح لتحديد موقع الكروموزوم الفأري في Lov مثال ٠ يحث التعبير عن Lov في WA 4. 5112 بعد الاستنبات المرافق على الطبقات أحادية الطبقة الطلائية الصعترية تل TEL ( جليمشر J.
Immunol هريغو Glimcher . صوق YY =) : VY (Y4AY) ٠ ) و 121 ( بيريديزلي وهايز Beardsley & Hays Proc . Natl . Acad . Sci.
(VIAY) 104-1505 : 86 USA هي سلاسل خلوية خالدة طلائية صسعترية حيث يمكن أن تحث تعبير جيني ثابت ل 004 و 008 في Wa 4. 5112. بعد الاستنبات المرافق 4 . 5112 إما على الطبقات الأحادية ل TEL هو أو 1271 لمدة Y لمدة أيام ؛ ثم تقييم مستويات mRNA الخاص ب Lov توضح المواد المطبوعة والمنقولة بطريقة نورذرن في شكل Vo بأن كلا النسخ ( ٠,7 » 11,0 5 قاعدة مزدوجة )من Lov تستحث استجابة للاستنبات المرافق . تستطيع كلا السلاسل الخلوية الطلائية الصعترية من إحداث ذلك الاستحثاث ؛ على الرغم من أن قدرة تعبير 10177 بعد الاستنبات المرافق ل TEL هي أكبر في القيمة بالمقارنة مع TEPI ( جدول رقم 4 ). تمثل القيم المعطاة متوسط والخطاً القياسي ل 0 تجارب مفردة بعد تحليل قياس كثافة . علاوة على ذلك ؛ تصستمر dll المتزايدة من Lov mRNA في خلية 4 . 8112 حتى بعد استخلاص yo الطبقات ala الصعترية المحفزة. لا تحتوي الخلايا الغهير الصعترية الملتحمة ( 100101238 : سلسلة طلائية شية فأرية و 28 - AKRI : سلسلة خلية ليفية على تأثير Stan على تعبير #م1 في الخلايا 4 . 8112 . استعمل ٠٠١ oly af BP مقابلة لمناطق الطرفين 5 و 3 من CDNA م1 لكي تجس نواتج #٠ نورذرن . يميز كلا المجسين كلا نسخ Lov an
1+ جدول رقم ؛ مقارنة التعبير الجيني بعد الاستنبات المرافق ل TEL و TEPI LYE 4 | ١ + ١ | D4. | Cree ws mea Lov. | | باك ل LYE 4 | GY ° هجنت الصور الإشعاعية الذاتية الناتجة من نسخ الطبع والتقل بتقئنية نورذرن على التتابع مع (Lov) 14,0 TCR, CDS , CD4 وآخراً مع ACTIN/ CHO - A ومسحت بواسطة أشضعة ليزر لقياس الكثافة . طلعت إشارات قياس الكثافة باستخام ACTIN / CHO - A كضابط للكمية المحملة من RNA تمثل القهيم المسجلة نسب كثشافة ٠ التهجين ل mRNA المستحث مقسوماً على MRNA غير المستحث ( بذلك تمثل متوسط ضعف الزيادة + الخطاً القيأسي للوسط لتجمع mRNA فوق المكتشف في خلايا 4 . 51.12 غير المعالجة ) . الاستنبات المرافق لتلك الخلايا في طبقة أحادية طلائية صعترية يُبدي بأن يُحدث نضج للخلايا 4. 8112 . في هذه الورقة ؛ لقد vo وضحنا بأن جين #مآ الجديد يبدو بأنه يستحث في خايا 4 . 5112 متبوعاً لتلك المعالجة.
دو“ يوضح تتابع Lov بأن شفرة البروتين المتوقهحة تكون جزئ سطحي محتوياً على مجالات متتوعة متعددة عابرة للغشاء . لوحظ زيادة الرسالة ( © - ؛ ضعف الاستحثاثات والتعبير السطحي ل Lov بعد الأستنبات المساعد في طلائيات صعترية. هه تبدو هذه الاستحثاثات لتعبير Lov ثابتة من حيث أن Jl المعزولة بعد الاستنبات المرافق حافظت على المستوى العالي للتعبير عن Lov حتى بعد شهور من استتبات الأنسجة بسسبب الحث القليل نسبياً فإن اختبارات النووية المستمرة التي تهدف إلى تحديد عما إذا كان الاستحثاث يفسر بواسطة ميكانيكية النسخ أو ميكانيكية ما بعد النسخ لم يكن بالمكان بإنجاز ذلك. يتكون Lov mRNA من حجمين للنسخ لا , ١ و ©, ١ كيا و قاعدة مزدوجة . تكون كلا تلك النسخ متساوية الاستحثاث خالا الاستبات المرافق لخلايا 4 . 5112 في طبقات أحادية طلائية صعترية . علاوة yo على نلك ¢ يتم التعرف على كلا النسختين بواسطة مجسات 5 , 3 من .Lov CDNA ومن غير المعروف عما إذا كانت قنك النسخ an من مواضع بداية متناوبة ؛ انشقاق ؛ إشارات ano الأدينين ؛ أو ربما ميكانيكيات أخرى . على أية حال ؛ أن النسخة الكبيرة فقط هي التي a" |
تلاحظ في الأنسجة البالغة المختبرة التي تعبر عن Ste) Lov المبيض ¢ القلب ( . بالإضافة ؛ خلال تطور الجنين الفأري ؛ فإنه يبدو انتقال من كلا التعبير عن كلا النسختين إلى التعبير عن النسخة الأكبر فقط ىو عند اليوم ١5 ( لم توضح في البيانات ) . من المحتمل أن تحمل النسخة ١ VY كيلو قاعدة مزدوجة فقط لشفرة بروتين الفعال فشي الحيوان البالغ. مقثال Yo يمكن ca isl عن بروتين #م1 في أغشية خلية 4. 5112 Ye تتعرف مضادات الأجسام المضادة ل Lov على أماكن ارتباط المستضدات الموجودة على أغشية البلازما لغاايا 4 . 8112 EA a5. الأجسام المضادة لعديدة الأنسال لآخر ١ حمض أميني من Lov il NY | باستخد ام Af مصنع كمستضد. تتعرف هذه الأجسام المضادة على مستضد gd علاقة بغشاء ١٠ البلازما للخلايا 4 . 8112 . توضح الأشكال anal ١ و١" » ١١ المضاد المتوهج للخلايا 4. 5112 للتعبير السطحي ل Lov الخلايا 4 . 581712 المصبوغة بأمصال مناعية مرسومة مانع ضد خلايا 4 . 5112 مصبوغة بأمصسال مسبقة التحصين . بمشاهدة الخلايا wy ؛ لقد تمت ملاحظة الجسم microscope المخترقة تحت الميكرسكوب . المضاد فقط على غشاء البلازما ولم يصبغ المسيتوبلازم يوضح أيضاً بيانات توهج خلية ورم لنفاوي شقيقة ¢ 3. 8112 ؛ #مآ ولا تبدي أية تعبيبيرل JmRNA لم تعبر خلايا 3 . 5112 عن
Lads “”مآعلى أسطح ه المحصنة Jad أقفل ارتباط الأجسام المضادة مع المستضد المحصن للأجسام منافسة من قليل ببتيد Jad) عند إضافة كميات ولكن ليس بواسطة قليل الببتيد غير الذي (VE المحصتن ( شكل صلة. أظهرت التحعضيرات الغشضائية وليس الأأجزاء السيتلازمية Ya عندما تم تقييمها بواسطة Lov بروتين Loaf 8112 .4 LDL al
ELISA
من قليل ببتيد مصنع تقابل الطرف SA يميز الجسم المضاد على وجه الخصسوص موقع ارتباط Lov من carboxy كربوكسيلي j المستضد على سطح الخلايا 4 . 8112 . لا تعبر سلسلة الخلايا المتعلقة ؛ ١ وأيضاً لا تعبر عن البروتين عندما تقيم Lov mRNA من + 3 بواسطة التوهج. an
TA
ولكن يبدو « Lov أنجزت دراسات الترسيبات المناعية لبروتين وجود كمية استثائية من التفاعلات غير المحددة مع الأمسال . المسبقة التحصسين يحتمل أن يكون غير متوفر ( بالاعتماد Lov وحقيقة أن بروتين م على تعبير خط الأساس ل يقل في تلك الخلايا ) يجعل التجارب أحزمة محاددة عند التعليم ب Y أكثر تعقيداً ¢ ومع ذلك يظهر تواجد abe al a ) F6 5112.4 )في 3575 - Methionine ) -مشيونين 5 ولكن لا تظهر في الخلايا 3 . تختفقي » ( Lov عالية التعبير للجين هذه ال 9 أحزمة بعد الإضافة التنافسية من قليل الببتيد المحدد. as يمكن أن تكون الحزمة 1177 هي Lov الأساس العام ل
Lov الشكل المسكر ل kd ٠ إنشضطار بينما تمثل الحزمة ٠١ مقال Lov استحثاث التعبير السطحي ل التالية للاستنبات Lov لقد تم اسحثاث مسويات التعبير السطحي ل vo المرافق في طبقة أحادية طلائية صعترية لمدة ؟ أيام . تم التحليل في خلايا 4 . 8112 بعد الاستنبات المرافق في طبقة أحادية FACS طلائية صعترية لمدة © أيام.
يوضح شكل Vo أن كمية البروتين Lov الممكن aa عنها على xh الخلايا 4 . 8112 كانت قابلة للحث بعد معالجة الطلائيات الصعترية. توضح الهستو جرامات المرسومة مضادات الأمصال المقابلة في م خلايا 8112.4 محفزة وغير محفزة Ln. يوضح أنه تكون النتيجة عندما تستنبت ترافقياً خلايا 4 . 8112 في TEL والمقارنة مع خلايا 4 . 5112 غير معالجة ( المنحنى البياني السفلي ) . رسمت هذه الأشكال باستخدام مقياس لوغارتيمي logarithmic . أظهرت خايا TEPI استجابة مماقلة لحث Lov ye تبدي Jd الخلية المسبق استنباتها ترافقياً في طبقات أحادية صعترية تعبيراً عالي الأساس من ٠8,9 . يُنتج الاستبات الترافقي مستويات أعلى من تعبير Lov بعض أنواع Aad عُزل عدد من Jd الخلايا من 4. 81,12 بعد الاستتبات المرافق في كل من TEL أو 12501 . تم التنسيل بتحديد التخفيف . على سيل Vo المثال “166 شي wa مشثتقة 3 al te من تجمعات ala 4 . 51,12 بعد استنباتها المرافق على طبقة أحادية من TEL لمدة ¥ أيام. نميت هذه الأنسال الخلوية في أوساط عاية بعيداً عن الطلائيات الصعترية المحفزة لعدة شهور يوضح كل من تحليل نورذرن ل RNA وتحليل FACS للبروتين السطحي في F6 أن هذا
ولا النسيل الخلوي يحتوي على مستوى أعلى ثابت من التعبير عن Lov من خلايا 4. 58112 الأصسلية ( الأشكال ١١ و ١7 ). تبدي الأنسال الأخرى المعزولة والمختبرة كميات متفاوتقة من التعبير عن »م1 . لا يُنتج الاستنبات المرافق الإضافي لتلك الأنسال هم الخلوية في الطبقات الأحادية الطلائية الصعترية لأية إضافة هامة من قدرة تعبير Lov WoO تعيين موقع الكروموزوم يحضر DNA ور اتي من خلايا مهجنة جسدية فأرية - ٠ همسترية محتوية على مجموعة محددة مكملة الكروموزومات الفأرية . تعطي الأنزيمات الحصرية الهاضمة بواسطة 1780 نماذج حصرية متباينة بين الهمستر والفأر ( شكل ١8“ ؛ المسارات ١ ١١ ). يوضح Js وطبع سزرن ل DNA للخلايا المهجنة التي تجبس ب Lov أنه يحتوي فقط على Ji من المهجنات على النموذج الفأري yo من المهجنات ( شكل (VA . بالاعتماد على تحليل سزرن على عدد من تلك السلاسل الخلوية المهجنة يحقق أفضل الربط مع الكروموزوم الفأري NT المكون الفأري الوحيد بها . يبين الجدول رقم ٠ تحليل حاسوبيا يوضح أن ا vy المهجنة المختبرة . أعلاه WAY في Lov له الأقل تطابقاً ل ١١ الكروموزوم AT في منطقة خاصة في الكروموزوم Lov على ذلك عين الموقع الخريطي لجين 0 abd جبدول في سلسلة من Lov تحليل تو افق بين لكروموزمات ووجود الجين مهجنات خلية جسدية همسترية فأرية ° ) مهجنة. / كرموزوم _. النسبة المئوية DNA توافق كروموزم | عدد مهجنات ge [em gee | Ja ¥A,4 Coy fn \ ! ا اا لا اها ال ا
YY اق ل
Cea ae |v قا ve
Cer |e ee
CYA ا eA A
Ya, v CY fae q ght | wa د Ne | ea)
Cara Lo eee 3 Ave Con 0*١ 0 4 | ° 1
Cover قا ا ew ony xy ly ne YA
CYA X
تعيين خريطة (Lov) 19.5 GENE باستعمال مهجنات خلية جسدية همسترية فأرية . توضح الرموز تواجد ) / + ( أو غياب ) / - ( من الجزء المحصور من Lov الفأري وعلاقته بتواجد ) + / ( أو غياب ) - / ( م كروموزوم الفأري يعين الموضح بواسطة AAC فشي العمود المهسر المكتشضف بالتهجين بواسطة مجس 20.5 .CDNA ويكون Ao الملاحظات المتعارضة همهو مجموع _ / + ¢ + / . * ملاحظة لم يتم تحديد النمط النووي في أي من كاربوتيبسية بل إنها صنففت طبقاً لدلالات أخرى وبذلك فإنه من ٠ المحتمل أن تكون الاستثناءات هي كروموزومات مخصصة غير صحيحة . مقثال YA الترسيب المناعي لبروتين Lov لكي نحدد مقدار بروتين Lov تنفذ دراسات ترسيب مناعية. yo لتعليم كلا البروتينات حديشة التص نيع و PL لتعليم بروتينات سطحية تحتوي الأمصال السابقة التحصين من الأرانب من كلا النوعين على حزم متشابهة غير محددة. على الرغم من تواجد العديد من الحزم الغير محددة في نواتج تطل الخلايا ؛ فإنه تم التعرف على قليل من الحزام الخاص .
VY
7؟ 1:00 تظهران بأنهما محددتان YY تقابل حزمتان الوزن الجبزئ في خلية 4. 8112 معلمة ب 8 مثيونين . لم يتواجد أي من الحزمتين في الأمصال سابقة التحصين ؛ ولا في نواتج تحلل الخلايا على أية حال ؛ لم تشاهد الحزمتان في الخلايا المعلمة . 2 3 م با ؛ ولكن بدلا من ذلك ظهرت حزمة وزنها الجبزيئ 1:1 في .5112 .3 خلية 8112.4 » ولم تظهر في
Ste) الخلفية السابقة a AY تم عمل محاولات لتقليل كمية الترسيب بواسطة سلفات الأمونيوم 150 ؛ تنقية الألفة للجسم المضاد ¢ 13% ببتيدي J موصل مع Sepharose فوق عمود سيفاروز ولكن لم تتجح جميعها في Lov باستخدام النسيلة 76 كعبر قوي ل تقليل التفاعلات غير المحددة المشاهدة. شفرة البروتين التي تبّر على Lov وبذلك ؛ يحمل الجين سطح الخلية . وعلاوة على ذلك ؛ تبدو نسب م1 مرتبطة مع حالة النضج لسلاسل خلية 7 ورم لنفاوي. لم تنتقل الخلايا 4. 8112 فقط تجاه الطراز الظامري yo بعد الاستنبات المرافق مع 004+ CD8 + المزدوج الإيجابية
SL Lov طلائيات صعترية ؛ ولكن أيضاً زيادة تتسيقية في تعبير الخلايا. an
Lov هو CDNA جديد بروتين ولا يحتوي على ey Boi J واضحة مع أي تتابعات معروفة ؛ لقد وصف العديد من الدلالات لخلية 7 الأخرى ؛ مثل Thy-1 , 2-200 » قبل تحديد وظائفها. على الرغم من أن »مآ يمكن Tai dail wl ug od ail م مصابة بورم لنفاوي إلا أن أنواعاً خلوية أخرى يمكنها التعبير عن ذلك gall ؛ يمكن أن تكفف نمااج تعبير Lov عن بعض المعلومات عن الوظيفة المحتملة . الأنسجة التي تعبر أعلى المستويات من Lov mRNA هي الغدة الصعترية ؛ الأنسجة اللنفاوية المعوية ( (GALT والمبيض . ويكون Jf موضعان من المواضع ٠ العادية حيث توجد الخلايا gall وجدير بالملاحظة أن المبيض تكون هي أول مواضع تكون الأورام السرطانية عندما تحقن خلايا 4 . 8112 إلى فأر سنجيني . علاوة على ذلك ؛ تحتوي المبايض على نظام لتفاوي مكف. ض تسمي الخايا (Peyers Patches) Lad GALT وتحافظ بواسطة ١ أوعية دموية كثيرة ؛ ولقد تم التبيان بأن acai wall 1401-14 يلزم للعبور من خلالها . تعبر الخلايا 4 . 5112 Mel-14 على أسطح خلاياها ولهذا تعتبر مرشحه للإقامة في تلك لمناطق الخاصسة في المعي الدقيق . وطالما أن »م1 يعبر عنه على أسطح الخاايا ؛ فإنه يمكن أن يلعب دوراً في الخصائص التوطينية للخلايا اللنفاوية. an
ول لم يكشف عن لهما في تجمعات WL alga ball Lal TLD A وهذه ليست بخاصية ساتئبة . يمكن أن مغل Wal 4 لخلايا صعترية عادية نادرة العدد. ٠١١ Ja 5 بناء مكتبة CDNA والمسح للجين 19.5 مثل الأنسال الأخرى ؛ بناء مكتبة ومسح CDNA للجين ٠٠,١ كما في الأمثلة ١ -- 4 . أزيلت مدخلة CDNA من عدا DNA بواسطة الهم مع أ الأنزيمات الحصرية Bglll 0 HindIII وتم leu جزئياً في الناق ل Bethesda Research Labs ( PT7 / 13 a Ul (. Yo Jia تحليل تتابع TEA § Y+,0 IDNA تم تعيين خريطة إيتندكليازات endonuclease الداخلية الحصرية yo وتم التنسيل التحتي لبعض الأجزاء في 01713 ؛ ينقي البلازميد 10 في كلوريد سيزيوم cesium chloride وتم تعيين التتابسع مباشرة بواسطة طرق التتابع ( الشركة الأمريكية للمواد الكيموحيوية ؛ كلفادند Cleveland — أوهايو ohio ( .
المعيل ومبدثات قليلة الينوكليوتيد loligonucleotide أخرى ) 17mers ) حضرت ل CDNA في مركز UCSD الأحياء وتم تعيين كافة التتابعات في تفاعلين على الأقل نفذت في عينتين لكل منها. هه استخدمت البرامج الميكروجينية للحامسوب لتجميع al atid المتداخلة ولتنفيذ التحليل الأولى لتتابع DNA مقال YY وضع خريطة ور id ل 20.5 ثم Say إنتاج ail aad مهجنات خلية iad صيني X 6 خلية جسدية فأرية مسبقاً بواسطة هوجان وغيره ٠١٠ : UY J.
Virol Y AAA ) YO — . تم الحصول على سلالة 17 / 11758 لفأر من قسم الموارد الطبيعية ¢ MD , Bethesda , NIH ثم الحصول على فئران Mus musculus musculus مخبرية مشتقة من فأر تم اصطياده في Denmark, Skive ويحافظ عليه بواسطة Vo دكتور . م . بوتير Potter (NCI, NIH, Contract 1101-0352-5584 ) في معامل هازيلتون روكفيل MD » Hazelton Rockville . تم تهجين أناث 0 M. musculus X مع ٠ ذكور musculus 14.10 لكي تنتج حيوانات التجارب.
لال أستخلص DNAs من كبد الففران « وُضم مع BamHI , Sacl ؛ فرد كهربائياً في ١,4 فولت ونقل إلى أغشضية نايلون .Hybond N+, Amersham هُجنت الأغشية مع 32p المُعلّم — CDNA 20.5 والمجبس bp £¥A 6 الذي يمثل الجين لبوليماراز CDNA polymerase 20.5 الذي يوجد في الكروموزوم A ( ماكبرايد MacBride وغيره ؛ تحت الطبع ) . تتم غسل الأغشضية وتجس كالوصف السابق. صنُتفت عينات من كلى نفس الفأر لمعرفة اكتساب الدلالات Gre , 58-1 بالوراثة يصبغها كيمو نسيجاً بعد التفريد الكهربائقي ٠ في هلام نشا ( هاريز وهو بكينسون " كتيب صغير عن التفريد الكهمربائي للأنزيمات في علم الوراثة البشرية Jas a ahaa" هولندا للنشر امسترادام (VAY) YY Je فصل وتعيين وتتابع DNA للنسيلة CDNA 20.5 yo تم مسح 406,5060 مكون من مكتبة 00178 في 0لائئع ( ٠675 ) بواسطة مجس SLI2.4 CDNA طرح مقابل .SL12.3 mRNA وفي نفس الوقت على مرشحات مع CDNA 5112.4 الكلي كالوصف أعلاه . استخدمت هذه الطريقة لتحديد خصائص الجين Yeo . بالإعتمصادد على الخصائص التعبيرين السابقة الوصوف ؛ فإنه يرمز إلى ٠ النسيلة Tea — CDNA ( الجين المبكر لتنشضيط الخلية 7 ).
YA
تم تعيين تسلسل المدخلة من هذه النسيلة بطريقة الشريط هي CDNA يوضح التتابع مدخلة ٠١9 المزدوج لكلا الشريطين والشكل قاعدة مزدوجة من حيث الطول وتحويل على إطار قراءة 74١ لا . ١764 واحد مفتوح يبدأ عند القاعدة المزدوجة £09 ويمتد إلى تتابع إشارة عديدة الأدينن م أو مسار عديد هم يتوقع CDNA م يحتوي بروتيناً متعدد العبور للغشاء. 20.5 CDNA Jul uit من ؛ حمض أميني المحتمل للبروتين or تتابع ال ١9 يوضح شكل كيلو دالتون ( غير مُعدل )يبدو £9,0V المتوقع ذي الوزن جزيئ لأن يحتوي على كل منطقة الشفرة حيث أن وافرة الطرف CDNA التتابع X حيث GXC AUG G ميشونين النيتروجين محاطاً بتتابع كوزاك 3, حيث يكون موضع بداية الترجمة (CHG, UL A يمكن أن تكون الأمثل وتحوي المناطق الغير مترجمة المتوقعة 3 , 5 على رافرات وقف متعددة في كل الثلاث إطارات المقروءة . حلت الخصاقص . PCgene ةينيجوركيملا الفهزيائية للبروتين المتوقع باستعمال البرامج تمثل * مواضع 77 - التسكرية المحتملة بواسطة نجوم كمافي yo
Ne شكل يحتوي البروتين المتوقع على 4 مناطق عالية الكراهية للماء ؛ يحتوي ا منها على خصائص ) ١4 معلم تحتها بخط في شكل ( مجالات ممتدة عبر الأغشية اعتماداً على التحليل باستخدام برامج . RAOARGOS , NOVOTNY , HELIXMEM , SOAP « العقل اليكتروني vy,
va
T بتمايز في خلايا ورم لنقفقاوي وخايا Tea الجين a ثم تقييم تعبيسر النسخ التي ٠ اللنفاوية المنشطة في طحال عادي .20.5 CDNA يتعرف عليها نسيلة تعلم المدخلة النقية . Tea تعبير الجين YF - Yo تبين الأشكال هه المحتوية على كل منطقة الشضفرة مع م بطريقة عشوائية
Ala واستخدمت لكي تجس طبع ونقل نورذرن التي يحوي كل ميكرو جم من غ5 خلوية نقية ( أو في حالة الشكل ٠١ بها على 8112.3 , 81124 سيتوبلازمي أو نوري ) من الخلايا RNA ¢ 7١ عادي. Balb سلاسل الخلايا المبينة أو الأنسجة من فأر لإضدعماعية الذ اتية بطبع ونقل نورذرن في J توضح الصور Ye
YY - ٠١ الأشكال في سلاسل Tea mRNA مقارنة بين تعبير ٠١ يوضح الشكل
RNA في Tea mRNA تعبير VY يوضح الشكل . SL12.4 خلية 5112.3 و
SL12.4 Ws خلوي كامل ¢ مسيتوبلازمي ونووي من في سلسلة من سلاسل خلية Tea cRNA تعبير YY يوضح الشكل yo أنسجة RNA على YY فأرية كالموصوفة في النص ويحتوي الشكل عبارة عن نسيج GALT يكون ( Balb/C عادية مشار إليها من فأر . ( لنفاوي معوي
ف
يوضح حجم النسخ SIL قاعدة مزدوجة في كل مخطط Ady بواسطة هجرتها النسبية مقابسل RNA 5 YA ¢ SYA BRL lc الريبوزومي .
تم تقييم التحميل بالسساوي ونقسل RNA في جميع lw)
هم بواسطة صبغة الأكريدين acridine البرتقالية وبواسطة التهجين مع
سيكلو فيليين cho - A Ld | 5(CYC) *p - cyclophyllin - م32 والمعلم .CDNA J
تعرف المجس CDNA 20.5 على نسختين تقريباً ؛ ؛ كيلو a cld مزدوجة توجد في الخلايا SL12.4 ولا A aq في الخاايا 1 ورم
.) ٠١ ا لنفاوي 5112.3 ( شكل ٠
فحص الموقع الخلوي الداخلي للنسختين لكي تحدد عما إذا كانت النسختان ناضجتان موجودة في السيتوبلازم أو عما إذا كان RNA الأكبر هو مادةأولية نووية.
تبدو كلا النسختين بأنها RNAs معالج بالكامل لأنها توجد في ينشان من بداية متناوبة من النسخ تقطيع متناوب من النسخ أو من الاستفادة المتتاوبة من أشارات عديدة الأدينين. تكون كلا النسخ السيتوبلازمية الناضجة VV) ؛ كيلو قاعدة مزدوجة ( أكبر من نسيلة Y s ¢ ) CDNA كيلو قاعدة مزدوجة .
AN
تام الطول على الرغم من أنه يبو لأن CDNA وبذلك لا يكون يحتوي على منطقة تامة الشفرة. يكف عن كلا النسسختين بمجسمات مصنعة للطرف 5 ( نيو ) 754-7٠05 ومنطقة 33 ( نيوكليوتيد ) YA+ - ١ nucleotide كليوتيد م من نسيلة CDNA موضحة أن CDNA لا يكون نتاج نسيلي غير حقيقي الذي يوصل نسختان مختلفان . بالإضافة إلى نسختى mRNA الناضجتين يوجد نسخ عديدة كبيرة ؛ أقل وفرة موجودة في تحضيرات كاملة من RNA خلوية ونووية التي يمكن أن تكون مقطعة أو مقطعة جزئياً من المواد المحلية النووية ( شكل (YE ٠١ تم اختيار سلاسل عديدة لخلية فأرية لمصسدر جنيني (PCC4,F9) ؛ طلائيات شيية (MME) ومصسدر خلية عصسية (120ه ) للقدرة على تعبر Tea RNA . لم يعبر أحد هذه السلاسل الخلوية أية كميات مقاسة من Tea RNA . وفي المقابل ؛ تحتوي السلاسل dye Wl لطلائيات Wal « (TEPI) 4 aa 0 الليغية MEF) , 313 ) على Tea mRNA « على الرغم من أنها أكثر وفرة بكثير في خلايا 7 ورم لنفاوي 4 ( شكل (YY لكي نحدد Lee إذا كانت الأنسجة العادية ونسل خلايا Gall تعبر عن جين Tea ؛ تختبر نقل وطبع نورذرن المُعدّة من MRNA .؟ نسيج فأري . ينقص الخلايا من الغدة الصعترية ؛ طحال هادئ ؛ a"
AY
نسيج لنفاوي معوي ( GALT ( والنخاع (lanl تعبير ملحوظ ل Tea mRNA ( شكل (YY على أية حال ¢ تستحث نسخ Tea في خلايا الطحال العادية المنشطة لم Concanavalin المسبب لاتقسام الخلية 1 ) شكل YY ( . : أستعمل ConA ليُحاكي Ly an خلايا 7 الطحالية التي تنخدث النسيج الوحيد الغير لنفاوي المختبر الذي عبر عن كميات متوسطة من Tea mRNA . لم يمكن الكشف عن سخ 78 في الأشاء ء؛ المعدة ¢ المبيسض ) شكل ٠ ( Yy المخ » القلب + cA al الكليةء ٠ البنكرياس أو الخصية. وبذلك تكون قدرة التعبر عن الجين Tea متصورة على أنواع خلوية قليلة مثل خلايا الطحال النشطة ؛ الخلايا الطحالية الصعترية ؛ wea 1 ورم لنفاوي والكبد .
YY مثقال Tea mRNA استحثات ١ لمزيد من البحث في استحثاتث Aa) ¢« Tea mRNA ملنن بعد 560 £A » ١لا ساعة بعد إضافة ConA إلى خاايا الطحال ٠ يوضح الشكلين YE و Yo حركية استحثاث الجين Tea في خلاايا الطحال النشطة.
AY
يُنتج تحليل نورذرن ل 8218 من خلايا طحال نشطة أو ساكنة المسبب لإنقسام ConA عند الأزمنة المشار إليها متبوعة تنشيطها ب .7 الخلية نقطة زمنية عند ؟لا ساعة »؛ يوضح مخغخطط VE يوضح شكل cyclophilin ه طبع ونقل مختلف ل 18ل سويا مع مجبس سيكلوفيللين في MRNA من de sand) لكي توضح الكمية النسبية ) CYC ( ضابط ؛ تكون حمولة 278 متساية في CYC mRNA كل مسار ؛ ليس مثل كل مسار كما هو مقوّم بواسطة صبغة الأكريدين البرتقالية اللون. الطحالية a ممكنة الكشضف في خلايا Tea — لاا تكون النسخ ساعات ؛ تصسل القمة ١ خلال Gas الهادثة ؛ والآن تصبح ممكنة ٠ ساعة. EA بعد مساوية في SERNA على الرغم من أن الكمية الكلية من ميكرو جم )كما هو مُقوماً بواسطة صبغة ٠١( ض كل مسار الريبوزومي إلى RNA الأكريدين البرتقالية يظهر بأن النسبة من
CHO - تتغير خلال تتشيط خلية 7 نظراً لأن كمية الأكتين م 08718 ٠٠ الكلية تؤداد RNA ميكرو جم من ٠١ / ونسخ سيكلوفيللين (Yo و YE الشكلين ( على أية حال ؛ يوجد استحثاث واضح لتعبير الجين 168 نسبة .1 إلى كميات 7< خلال شاط خلية ٠ an
عم مثال Yi التماثل بين CDNA 25.5 وتتابع الحموض الأمينية مع المستقبلات الإرتجاعية للفثران كشضف البحث التناظري باستخدام قاعدة بيانات ( Bionet ) عن م تشابه غير معوي في التتابعات بين تتابع CDNA 20.5 وتتابعات DNA الأخرى السابقة التقرير. على i حال ¢ p— مقارنة التتابع مع تقرير حديث ( البروتيون وغيره ؛ الخلية 7ه ؛ 336-484 (VIA) من نسيلة CDNA خاصة بالمستقبل الإرتجاعي للفيروس إيكوتروبي ecotropic ٠ فأري (BRR) ووجد أنه على مطابقة مكثفة للتابع. يرمز إلى الجين الذي يحمل شفرة المستقبل الإرتجاعي للفيروس الإيكوتروبي ب 1666-1. يُوضح الأشكال 76 و 77 مقارنة بين تتابع CDNA 20.5 وتتابع ERR CDNA . يوضح الشكلان 76 li uli YV في تتابعات ERR Y+,0 CDNA Vo . في شكل c 7١ توضح مناطق تتابعات CDNA, ERR 20.5 يُوضح الإطار المفتوح القراءة لكل CDNA . في الشفكل 7 يوضح كامل تتابع ه017 ل ٠١,5 في الخط العلوي من كل زوج من الخطوط ؛ ينقص تتابع CDNA ل 50٠ Jd (bp 175 — 460 ) ERR زوج
Ao مواضع iad تحدد الخطوط ٠. أساس ‘ وتوضح أسفل كل زوج تماثل التتابع. تم عمل المقارنة باستخد أم برامج الحاسوب مع التفاوتقات المتولدة لكي تسمح برص التتابعات العالية التماثل. 3 يكون أكثر طول عند النهاية 20.5 CDNA واضح . ويلاحظ أن .5 أكثر طولاً عند النهاية ERR CDNA ويكون CDNA أن (YY ر 77١ شكلين ( CDNA يوضح كروكي لقان من أكفر 20.5 CDNA يكون أطول عند النهاية 5 بينما يكون ERR . من حيث الطول 20.5 CDNA كلا Jalen ¢ 3 طولاً عند النهاية ٠١ لكل من الجينات السابقان بواسطة جزء a il رسمت منطقة
CDNA تعارضياً لكل نسيلة JL ae بين DNA عن 09 % من مناطق التماثل في DNA يكف رص وتكون (bp YéYo - 460 )ERR CDNA (bp ٠١47 - ١ ( 205 CDNA تتطابق المقدار (bp Y+AA - ٠١١١ ) 20.5 CDNA منطقة واحدة من yo % ٠ (bp 4٠١ =) 205 CDNA وتحتوي منطقة 5 الغير مشفرة لتتابع مافل تتابع مع '5 المتداخلة لمنطقة الشظفرة من تتابع % TA على
حم ERR CDNA مقترحة بأن الجنيان مشتقان من تتابع عام خلال تكاثر الجين الناتج. يحتوي البروتين Tea المتوقع على تماشل ly مع مناطق العبور المتعددة A ded مثل البروتينات المحولة ؛ القفوات الأيونية ؛ م مضخات لأيونات وناقلات للسكر. على أية حال ؛ لا يوجد تماثل واضح مع عائلات الجينات هذه ولا مع تتابمعات البروتينات المغرى المعروفة فيما عدا مع البروتين ERR المتوقع dill من تتابع .ERR CDNA يوضح رص البروتين Tea المتوقع مع بروتين ERR منطقتان من التشابه المكثكف في تتابع الحموض الأمينة ( الشكلين (YY SYA يوضح الشكلان YA و 1 رص تتابع بروتيني Tea المتوقع مع تتابع مستقبل مرتجع للفيروس إيكوتروبي 0020(16©. في الشكل YU ؛ يوضح خط رسم الناتجان البروتينيان المتوقهعان حيث تمت المقارنة Lad بينهما ؛ يمتد البروتين 8ع1من )= ef \o حمض أميني A lag البروتين ERR من —=Y+ .أ حمض أميني . في الشكل ك4 يوضح ua للبروتينات المتوقحان لتتابع حمض أميني متوقع بواسطة CDNA 20.5 في أعلى الشكل . وبواسطة CDNA 888 في أسفل الشكل . يبين القوسان حدود المنطقتان ذات
AY
بمقدار ١ الحموض الأمينية ؛ تطابق المنطقة da SA التطابق عبر حمضاً أمينياً. % AY . أمينياً la ea ١4 تظهر المنطقة 7 + 01,4 % تطابقاً بمقدار تطابق في % AY ؛ المحددة بين القوسين تحتوي على ١ المنطقة حمضاً أمينياً. ١57 تشابهاً عبر 96 9١ التتابع و © تشابهاً عبر 96 Vo تتابعياً و Lats 96 17 تحتوي المنطقة 7 ؛ على أمينياً. Laan ٠ . توضح الاختلافات المحافظة من الحمض الأمينية بواسطة نقطتان الأول في كيفية تحليل : « of Urfs and orfs , R « Doolittle دوتلتيل ) التتابعات للأحماض الأمينية المشضقتقة . كتب العلوم الجامعية ٠ ؛ توضح تطابقات الأحماض الأمينية بواسطة ) ١987 Mill Valley CA) قاطعة طويلة بين الأثين.
ERR يكون البروتين ٠» بالمقايلة مع المنتج الجيني 168 المتوقع منطقة محتملة متعددة العبور للغشاء VE - ١“ أكد ويحتوي على ما علاوة على ذلك ؛» فهي تحتوي على نهاية كربوكسية مُحبّة للماء ونهاية أمينية ذات طول مماثل . تظهر النهايات الكربوكسيلية والأمينية للبروتينات أكثر الأنحرافات في التتابع على نحو متشابه مع ‘ متعددة العبور عبر الأغشية YI والبروتينات ERR البروتين لا يحتوي على أي تتابع إشاري . توضح Tea فإن المنتج الجيني
AA
المقارنة مناطق مكثفة لأحماض أمينية متشابهة ومع بذلك ؛ يعتبر البروتينات نواتج جينية مميز. رسم تخطيطي للتركيب البروتيني VY =F يوضح الشكلان الخاص بالجيني لكي تفحص PC المتوقع المعد باستخدام برنامج م الخصائص الفيزيائية كما هو منقولاً ييه في شرح الفلكل. الخصائص الفيزيائية للمنتجبات البروتينيسة FY - Ye تظهر الأشكال نموذجاً *٠ JS al يعتبر . REC - 1 المتوقحة لكل من الجين 768 و المتوقع . توضح الخطوط الواضحة أن Tea لبناء ؛ محتمل لبروتين
BRR المنطقتان ذات تشابه كبير مع البروتين من all (PC) استخدمت البرامج الحاسوبية \,
RAOARGOS , NOVO TNY , HELIXMEN , SOAP , INTELLI GENETICS لكي تفحص الخصائص الفيزيائية للبروتين المتوقع ولكي تعد النموذج الموضح. منطقة البروتينات المتوقهحان حيث يوضح WY يبين الشكل تحليل مقارن للكراهية للماء ) )= £07 حمض أميني من البروتين ١
YY يوضح الشكل (BRR حمض أميني للبروتين 107 - 7١4 + Tea
ERR لبروتين MY المتوقع والشكل Tea رسم كراهية الماء للبروتين المتوقع. a
Ad يركز النموذج التخطيطي الإنتباه على المناطق شديدة التشابه مع حيث تحمل 128 شفرة بروتين خلية سطيية ؛ . ERR البروتين فإنه تم مقارنة خواص الكراهية للماء للبروتينات المتوقهحان في المتوقع و Tea لبروتين £4) - ١ مناطق التداخل . ( الحموض الأمينية .) المتوقع ERR حمض أميني لبروتين 10-7040 0 منطقة البروتينات التي قورنت في رسومات Ve يوضح الشكل الكراهية للماء . تغطي المقارنة لمنطقة ٠0؛ حمض أميني متماس وتعطي تماثل جدير بالملاحظة . وبذلك ؛ فإنه من المحتمل أن يكون ناتج الجين 168 عبارة عن بروتين خلية سطحية. قد حوفظ عليه في الفقاريات العليا . لكي Tea يبدو بأن الجين " يُحدد عما إذا كانت تتابعات الجين محافظة عليها في عملية التطوير ؛ من إنسان ؛ همستر ؛ فأر والدجاج للكفف عن التهجين DNA يختبر .20.5 CDNA المتبادل مع مجس تام الطور لكي يُجس طبع ونقل CDNA عندما يستخدم كلون سزرن ؛ يحدث التهجين القابل للكشضف مع كل 110/828 الوراثية Yo (Yo المختبرة ( شكل 4و a
يوضح الشكلان VE و YO سزرن ل 0118 من أنواع حيوانات متنوعة وتحليل DNA المعاد إتحاده لتحديد موضع جين Tea على اللوحتان مكتمل الطول لجزء 1 Bal من أوزون CDNA 20.5. يوضح الشكل VE صورة إشعاعية ذاتية موضحة لنموذج تهجين م ل DNA مهضصضوم ل 1 PST من i ¢ همستر ¢ فأر za وخّس مع جزء I 1د3 كما شو موصوف في المو a والطرق للبر اءة . Ja الشكل Vo صورة إشعاعية ذاتية ل 0118 كبد مشتقة من حيوانات معادة الاتحاد. يوضح الشكلين ؛؟ و Yo مثال لنموذج تهجين ناتج من إعادة slay ٠ حيوانات متعددة كما هو موضحاً ومن DNA أبوي NFS / N مهضوماً ب 5001]1. لكي نختبر عما إذا كان أي من أجزاء DNA المكتشفة تشتق من جين 66-1 ؛ وجد بأن مجس للمنطقة '3 نسيلة Cua) 20.5 CDNA تكون عالية التشعب من تتابع ERR CDNA ) تهجبن مع أجزاء DNA من ١١ نفس الحجم . تقتقرح تلك النتائج أن التتابعات المكتشضفة بواسطة النهاية 3 daa ill قدتمر المحافظة عليها في التطور Lag LS. التهجين مع ه077 من الأنواع الأخرى مغ التتابع المتشعب الغالب المتواجد بين نسيلتين DNA
تبين هذه البيانات عندما تأخذ البيانات السابقة أن al Tea يحمل شضفرة بروتين «a Tidy 152 و الذي يوججد في الأنواع الأخرى . يقترح التشعب لتتابع الحموض الأمينية عند الأطراف الكربوكسيلية والأمينية بأنه قد يكون للبروتينات وظيفتان مختلفتان. ° مقال Yo وضع خريطة الجين Tea في الكروموزوم A Caan ناتج الجين ERR يعمل كمستقبل فيروسي ‘ تم وضع خريطة الجين Tea لكي يحدد Lae إذا كان موجودا على كروموزوم معروفاً بأنه حامل لشفرة أحد المستقبلات الأرتجاعية الفيروسية ٠١ المعر وفة ) كوزاك ‘ ) YeV¥ ١٠١ 7 J— Virol ( Y4AY ( . تتكون مهجنات خلية جسدية متنوعة بين خلية همستر جيني وخلية فأرية حيث تحتفظ كل بعدد محدد من الكروموزومات الفأرية المختلفة . استخدمت تلك المهجنات لوضع خريطة الجين 8 ( هوجان وغيره ( ٠١١١ - ٠١٠٠: 7 J.Virol ) ١988 ). Vo يبين 3 تحليل سسزرن ل DNAs المهضومة ب Pst] من wa مهجنة بأن امن YY هجين تحتوي على أجبزاء 01708 فأرية محددة . توضح مقارنة بين محتوي الكروموزوم الفأري المعروف مع التهجين الإيجابي من أجزاء DNA خاصة فأرية بأنه تكون المقارنة ial مع الكروموزوم A الفأري ) جدول 1 ( . an ay جدول رقم تحليل توافق من كروموزومات فأرية محددة وتواجد جين 168 في سلسلة من مهجنات خلية جسدية همسترية فأرية
Ad توافق كروموزم .عد مهجنات 0108 مهجنة / كرموزوم | النسبة orm oe
BERRI A ض
رسم خريطة الجين Tea عن طريق استخدام مهجنات خلية جسدية همسترية فأرية . توضح الرموز عن تواجد (/ + ) أو غياب (/ - ) للجبزء المقيد للجين Tea الفأري وعلاقته مع تواجد )+/( أو غياب ( - / ) كروموزوم فأري مُعين. موضحاً بالرقم على يسار 4 العمود ومكشضوف عنه بواسطة التهجين مع مجبس CDNA 20.5 . يكون عدد الملاحظات المتعارضة هو مجموع -/+و +[ = Oe CT لم يتم التخطيط النووي لكل تلك المهجنات ؛ ولذا فيتم تصنيفها تبعاً لدلالات أخرى ؛ وبذلك فإنه من المحتمل أن تحتوي ٠ الخلية المهجنة - / + على أجزاء من الكروموزوم fA نسبة صغيرة من الخلايا القي تحتوي على الكروموزوم . الأستثاء - / + ويمكن أن يحتوي على جزء من الكروموزوم A ولكن Aa المنطقة المحتوية على الجين Tea لكي نُعزز ونوسع تلك الملاحظات ؛ تم تحديد موقع Tea في Yo الكروموزوم * بواسطة تحليل هجين مترافق مع أحد بنيات وراثية للآباء متبادلة بين العينات . يوضح DNA المهضوم مع 1 أن NFS / N of oll تنتج أحزمة نشطة تقاطعياً ذات ٠0. قرلا kb 0,0 . ينتج m. musculus Sa . 14 أجزاء هلال ذات مدت لمك kb ©,0 ag في فقران 20.5 CDNA نموذ ج تهجين مجس Yo يوضح شكل تموذج eh . M. m. musculus F1 mice x NFS/N تقاطع رجعي بين: الفصل لهذه القطعة ذات الطول الحصري مع علامات أخرى في
Bs—1,0r—1 بأن هذا الجين يكون موصلاً إلى A الكروموزوم .) + eV جداول ( centromere-Polb-Gr—1-Tea—Es—1 مع رتب الجين: ٠ جبدول رقم لا بواسطة أزواج الجينات المتماقة Tea عزل جزء مهجن من ذرية متقاطعة رجعياً مع أنوا ع ov في Es—1 6-1 Polb من متداخلة. | | NES/N ABLad) وراثة زوجات الجينات ٠ -_ القأد koh | Gel | Tea | عبدلفقران | نيج له علاقة بالياء + + ww YY اتحادات مفردة ا - EE I yy eee _ | + | + | + | م توريب يث من زوج الد لجينات المتماثلة. = + لا توريث من زوج الجينات المتمائلة. = -
Apdyds—a مُعادة الاتحاد gad المرقعي | vn عند المتدات / حجم العينة | der | ads ا Gee | ew or ve | een Ge Gr-1 , Tea | | لاد | ¥,o | +/- | ند oo | كا | er To | vee Ta مم Cen] ee YA YA,» | 7/7 | Gr-1 , 88-1 | | + | 0,9 أ- تكون المسافات بالسنتى مورجان ويحدد الخطاً القياسي لكل ° زوج موقعي طبقاً إلى جرين )١9( من عدد معادلات الاتحاد 0 في حجم )1( ب-تم تصنيف 1,037 إضافياً إلى Esl « Tea لعدد كلي من معارات الاتحاد في YE من ٠١ من التقاطعات الرجعية ( 77,7 سنتي مورجان +/- 5,7 ). Ye يوفر موقع الجين Tea في الكروموزوم A البرهان لأن يكون الجين متميز عن الجين 1266-1 الذي يحمل شفرة dl ERR ركز في الكروموزوم * . وهي أيضاً تتجاهل احتمالية أن يكون الجين Tea مستقبل MCF فيروس ارتجاعي ؛ والذي يتمركز في الكروموزوم ١ على الرغم من عدم وجود بيانات كافية لكي نحدد عما إذا كانت
متعلقة بالمستقبل للفيروس A/10 الذي لم يحدد موقعه الخريطي في الكروموزوم. يعرف Vo جين أو منتجات جينية تزيد من تعبيرها عندما تنشط خلايا 7 استجابة لترافق المستضد وجزيئثات التلاؤم انيجي م الذاتي على سطح الخلايا المقدمة المستضدات. ا تستطيع المنشطات لعديدة الانسال مثل للكتينات ؛ المركبات الناقلة لكالسيوم أو الأجسام المضادة لمستقبل الخلية T للمستضدات مما تشترك بعض تلك الجينات المنشطة في انتقال بين الطورين ٠ 60.0 , 61 لدورة الخلية . بعخها يحمسل شفؤفرات السيتوكينات ومستقبلاتها ؛ البروتينات النووية المنظمة وفي نقل الأيونات والمواد المغذية للخلايا لكي تعدهما للنمو. لقد تم تحديد موقع ما لا يقل عن ١؟ من نواتج الجينات ( المنتشطة ) للخلية 7 لغشاء الخلية . 0,5 هو المثال الأول لجين yo تستتسل أو CDNA الذي يحتوي على احتمالية لكي يحمل شفرة بروتين متعدد العبور للأغشضية الذي يحث تنشيط الخلية 1. بدا طريقة تتشيط خلية 7 طحالية بواسطةقم CAN أو مستضد وتبداً خلال دقائق في الملامسة مغ البكتين أو تقديم المستضد a vy لفقرة تزيد عن 7١-؛٠ يوم . تحدث التغيسرات في التعبيسسر alg الجيني خلال فترة التتنشيط. صنف كراب تري تلك التغيرات في التعبير الجيني بالمعنى مع . ( faa جينات فيروسية ) عاجل مبكر ؛ متأخفر متأخغر Ly am
OY عبارة عن جين مبكر Tea م وبمقياس كراب ترى يكون الجين يكون عملياً غير ممكن الكشف في خلايا 7 الساكنة Tea mRNA الطبيعية وتزيد النسبة الممكنة الكشضف خلال 6 ساعات وتبلغ الذرة بعد 9 ساعة. وظيفة الجين 168 غير معروفة بعد ؛ وقد تعمل على تحويل صغيرة ممدٌ له للإشارات أو قد تعمل cl fia الإشارات أو تتقل ٠ المفقرض كمحلول Tea وقد تعمل النهاية الكربوكسيلية لبروتين للإشارة على الرغم من عدم توفر حجج لدعم هذا التخمين. أن خلايا 7 57124 لتفقاوي وخلايا 7 عديدة أخغرى Lah وسلاسل خلية 3 ورم سرطاني لا تعبر عن هذا الجين ؛ فإن التعبير Yo لا يلزم لنمو الخلية . على أية حال ؛ لا تستشى Tea عن الجين لكي Tea دراستنا احتمالية احتياج خلايا 7 العادية للتعبير عن الجين . 7 الخلية hy an تخضع لتكاثر الخلية العادية الذي يرافق
AA
T قد يؤدي التداخل مع تعبير هذه الجين إعاقة تنشيط الخلية oa ao في اللأمراض المناعية الذاتية ؛ مثل الالتهاب المفصلي الحاد . 7 وأمراض مناعية أخرى ذات علاقة لخلية Sl البول أن منتج ERR Tea تقترح التماثل اللافت للنظر بين بروتينات هه الجين 1768 قد يعمل كمستقبل ارتجاعي فيروسي فأري طالما أنه قد تم تعريف على الأقل ؛ رتب من المستقبلات الإرتجاعية الفهيروسية ge الفأرية وتم التنسيل الجزئي لواحد
Tea من الاحتمالية بأن A يزيل تمركز الجين 7 في للكروموزم معاد chromosome الإيكوتروبي MCF يحمل شفرة مستقبل الفيروس الاتحاد وتزيد من احتمالية أنها تحمل شفرة المستقبل الأمفوكقروبي ٠ المرتجع للفيروس حيث يتمركز في كروموزوم + . وبالمقابلة مع جين يعبر عنه في كافة أنسجة الفأر ء mo (BRR يحمل شفرة ( Rec فإن توزيع الجين 788 يكون أكثر محدودية في الأنسجة. شفرة البروتين الذي يعمل كمستقبل Tea إذا حمل الجين فيروسي مرتجع ؛ فإن التقوزيع النسيجي المحدد قد يوفر yo تخصصية لإرتجاع الفيروسات المحصورة في النسل اللنفاوي . ومن الأمثلة السابقة بواسطة المستقبل هو الفهيروس الأرتجاعي البفشري حيث يستعمل البروتين 6104 كمستقبل أولى له.
على أية حال ؛ من غير المحتمل أن تكون المستقبلات الخاصسة بالخلبّة مسئولة كلية عن تخصصية النسيج الفأري المرتجبع للفيروسات. يحتمل أن يكون انتهاء النسيج الظاهري بواسطة الفيروسات م الإرتجاعية ؛ ناتجاً من سلسلة معقدة من العوامل مثل تخصصية النسيج LTRs ؛ تغييرات في طبيعة البروتينات الغاف 70 cgp عوامل خلوية و/ أما التعبير عن مستقبلات سطح الخلية المناسبة. عندما يتعرف على مكان ارتباط الفيروسي في 8580 al من المحتمل أن يحدد عما إذا كان الموضع يكون في منطقة عالية المماثلة 6 مع البروتين Tea . تلزم دراسات ترابط الفيروس والعدوى لكي تحدد عما إذا كان البروتين 168 يعمل كمستقبل فيروسي. على الرغم من درجة التشابه العالية للمنتج الجيني BRR ؛ فإنه توجد اختلافات فعلية في الخصائص الفيزيائية للبروتينات ERR, 8 المتوقعة . فموقعها الخريطي يوجد في كروموزومات مختلفة ١ كما أن نماذج تعبيرها النسيجي هو مختلف وبما أن الوظائف الخلوية الطبيعهة لكل من الجينين السابقين غير معلومة ؛ لذا يتطلب دراسات إضافية لكي تحدد أية تماثل وظيفي يمكن أن يوجد بين الجينين السابقين. قد يوفر تحليل الأحماض الأمينية المحفوظة والغير محفوظة ٠. الرؤية في الوظائف المتماثلة أو المتفاوتة لمنتجات البروتين ERR
Yoo والجين Tea . وعلى وجه الخصسوص فإن تعريف تلك العائلة الجينية الجديدة ومناطق تتابع DNA التي تكون عالية الحفظ بين النوعين من الجزيئثات سوف يسمح لإجراء بحوثاً للتعرف على أفراد حُدد في العائلة الجينية. ° الناقلات يُشار إليها ب 19.1 - 1713م ( رقم إبيداع 12548 ) 2 - 1713م ( رقم pT7T3 — 19.4 ¢ ) 187194 gla J ( رقم gl برخت ارامت 180707 ) ؛ 195 - 01713 ( رقم إيداع 18707 )؛ 1713-5م ( رقم إيداع 18705 ) أودعت مع تجميع مستنبت لنوع أمريكي (ATCC) ؛ دوكفيل و md الولايات المتحدة الأمريكية؛
N44 أبريل ٠ تكون المواد المودعة متوفرة طبقاً إلى قوانين البراءة ونظم الولايات المتحدة إلى البلاد الغريبة بالنسبة للولايات المتحدة حيث تحفظ النسخ المقابلة للتطبيبق . لا تشكل إمكاتنية توافر الإيداع جزئياً أو JL a ain رخصة لمزاولة البراءة لهذا التطبيق أو . استكماله ye وبذلك تكون البراءة الآن تامة الوصف + وإنه ليبدو إلى أحد الخبراء في المجال أنه يمكن عمل تغيرات وتحورات عديدة بدون الخروج عن جوهر غرض البراءة كما هو مبيناً في الصفحة التالية.
٠١١ قائمة التتابع معلومات عامه: (0 )
Vim ae) (0) a clase (9)
A خواص قاعدة مزدوجة ١٠٠: ها الطول نوع: حموضي نوو ل eRriele التضاريس: خطى متنا DNA 5 50 ب) النوع . المصد ساسى z فار : ١ الكائن A 3الفصيلة: أكري جاكسون 51.12 العزلة الفردية: خط لح ي C نوع النسيج: ورم لمفاوي 1 خلة TG
SL12.3 الخلية 51.12.4 و 2 د المصدر المباشر: 14,7 )نسيلة Yi وصف التتابع بتتابع رقم (—
TCCAATACAAAACACTTATTTGAACATTACTTTACTTAGAAAGAACCC CACTATAGCTGA 60
AGCCAAAGCAAAGTTTAGCTGAAAACCTAAGAAGATATTTTAATAGAGAACCCCTIGTCTC 120
CAAAGGAAAATATCTCCTAATGGAAACTGAATCTGCCATCAATCCTTCAGATGTTATCTC 180
GGAGGGGAGGATTTCATGAAGGGAG CCAGCTGGAGGGCCCACTGCAGGTTCCCAAGTGGG 240
AAGGTACAGGCATTGCGCATAGCCACATGGCCGGCACACTTAACATTCCCAGGATTTCTG 300
ATTAGCTAGCTTTCACTCTTCTGTGACTCTTTTGTCTTCTGTGACTCGACTTGGTGCATGG 360
AA CACTGGCTTTATGTTATCTTCTTAGATATCAGGATGAAGTGCTCAGGTGCCATCTGCC 420
CTCTACCTGGTTTTCTTCATGCCTGGAGAGATGCACAGTGCACAGATGTCTATAGCGGAT 480
TGAATAATTCCCTGGCCAAGGCTAAGGGACTGCCACAATCGTTTACCT AACTCAGTCTCA 540
CAATGTTTTACTTAATTCAATCTTATTGAATTTTTTCTATGTTGTGTATAATAAACAGAG 600
AGAAACAGATGTCCCTACCAACTGGAAAGTTGTTGTTTAAATACCCTGTTGGTTAAAATG 660
TCAAACTTACTGTTTAAACACTCAT TAGCCATATCCAACTTGAAACATATGCTATTGCTT 720
GACCATATTAAGCCAGACTTTGAACTAGGTCAATGTCCCTGGAGTATAAATGTACCATAG 780
AGCTTCCTTGCTTCTTGCAAAAAGTCCTCAGGCGAACATAACTTTGACCCCCATAAAGGT 840
CC CTCACTTCTCACAGCCTTGATTTTGCTGAAGACCTTCACACCCTGGCCCAATCTAGGA 9200
AATGTTCTACTCATGTAAGAATTCTTCATCTCTCCCACCTCATAACAAGTGTCCTTTGTC 960
CCTATAATAATGGCATAGAAAAATCCCTGAAAGACCCAAATTGGGCAA CAATACAGATCA 1020
GATCAGAGCCTTCATGGGCCCGACAATGGAGAATTGTATTTCTTAAAAAGTGTGTGATCA 1080
TATTTGTCTGAGCTGCAATAGAGACCATAGTATAAGCTCAGAAGAGAACTTTAGTGGCTC 1140 ’ CCTAATTTCCTTAGACTGGCTTATA TTTCAACCTTTTCCTGTTATTTTTTCCTGATAGGG 1200
TAGGTGTACATTTCTAACTGTAACTGATAAGGAAGTATAGAGACACCCATCACCTTCAAA 1260
ACGGGCTATTCACAATTCTGCCTATTCTATTCAGTGTGGGA 1301 (¥) للتتابع رقم S20 (0 خواص التتارٍ |الطول :10 قاعدة مزدوجة A نوع: حموضي نوو wr FINE C التضاريس: خطى mRNA" ب) النوع الجذئ »اتا إلى الكائن | : فأر A جاكسون RX ALB 81.12 ب العزلة الفردية؟ خط خلوي نوع النسيج: ورم لمفاوي “IT ل خللة
SL12.3 الخلية 81.12.4 و 2 المصدر المباشر: { ١4,1 )نسيلة Y: وصف التتابع بتتابع رقم (—
GCTGGGACCATCCCATAATGCATCAATTGGAAACCTCAATTCAAACTATGGAGGATCCAG 60
CCTTGTTACAAATAGTCGATCAGCTTCGATGGTCGGAACAC ATCGGGAAGATTCAGTCAG 120
TCTCAATGGCAATCATTCGGTCCTGTCTAGTACTGTTGCTGCCTCAAACACAGAACTGAA 180
CCATAAAACACCAGAAAATTTCAGAGGTGGTGTACAARATCAGTCTGGAAGTGTTGTTCC 240
AACAGAAATCAAGACTGAA AACAAAGAAAAAGATGAAAACCTTCATGAACCTCCTTCATC 300
AGATGACATGAAATCAGATGATGAGTCCTCCCAGAAAGACATCAAGGTCTCATCTAGGGG 360
CAGAACAAGCAGTACCAATGAAGACGAGGATCTGAATCCAGAACAGAAAATCGARAAGGGA 420
GAAGGAAAGGCGGATGGCTAACAATGCCAGAGAGCGCCTGTCGTGCGGGATATTAACGAG 480
GCGTTCAAGGAGCTTGGCCGAATGTGTCAGCTTCATTTGAAGAGTGAAAAACCTCAGACA 540
AAACTTCTCATTCTTCATCAGGCCGTGGCAGTCATCCTTAG TCTAGAACAGCAAGTGAGA 600
YoY
GAGAGGAACCTCAACCCCAAAGCAGCCTGCCTTAAGAGAAGAGAAGAAGAAAAAGTCTCT 660
GCTGCGTCACGAGCCGCCCAACACGTTGCCAGGAGCCCATCCTGGGCTTAGTGAGTCTAC 720
CAACCCTATGGGTCATCTG TAAACATCAGCCAGTTCCAGAGTCATCAGTAGGCTAAATAG 780
AAGGTGACCTCTCCTCATAAGATTTGGACAACTCAGATTATCTGAAGACACAAACCTGGC 840
AGGAGGGAGAAGAAAAAGCAAAACACTTGAAACCAGAAACTCATATGTAACCCTGTGATC S00
AAAGCAACTGGTCAGCACTTCATCAGACCTGAGCATAGGAAGCTCAGCAGAGACCGTCGG 260
CCGTGAGTGTTTGCAGCATATCACTCTGCTGTAATCAGTGTGTCGCTTCTGCACAATCAG 1020
AGACTGTCTCATCTCTCACTCAACGTGAAGTGCTTGTGCCT AAACTGAATTGACAAATGC 1080
ATTGTAACTACAAATTTTATTTATTGTTATGGAACTGTGAGGTCTACATATAAAGGGAAA 1140
AGTTCATGTGGGAAGCTGATGTACACTCAGCTGATGCCAGCATTGTTAAAGCTGTTCACA 1200
GAGCAGTGGCAACCATTGG CCCTTAGCATTCCCGGCATACCTGTTAGTGTCTTAAAAAGG 1260
AAGGGAGTCCTTTGTTGCCCTCTCCGACCTTCGCCATATGAATAGTGATTTCCATGAAAT1 320
AGGAAAAATATTACTTCGTATAGCATTTCTCTCTGTTTTTTTCACTCATTTTTATTTCCT 1380
CTTTGTGGGTGTTATATTTGACTGAGTCTGCATAGTTTATGGTCACAGTCCAGAACCCTC 1440
CTTGCAGTCCTGTATGCTTTGTCATGTCCTTGAAGTGATAAGCAGACACCATCTGTGACC 1500
ATAGCCTAGCTAATATTTTGAAAGGGGAAGTTTTGTCCCCT GGATTTGCCCCCAAATAAAR 1560
CATTGCTTTATTTCTAATAATCACTAAGACTTTTCAGGCTTCTAGGTTTCATAGTAAAGC 1620
TATAATAGCAAGAAGTGTAACTTACAAGGGAGAGTTTACTTTTTAGGAATTGCTTTGTTT 1680
TCCGAGCAGTAAGTACTAC ACAATATAGTACTTGTAAAGTGTTAGCTGATAAGTAAGCAC 1740
AGAATGCATTCAGTACAATACAAAGATGACTTTTCCTGGTGAGTCTCCGGGACAGGCAGT 1800
GTGATGAATGCACTCAACCGCTCTGAGGCTAATTACCTATGGAATCCAAGAGCAATGGTC 1860
ACGGTTCCTTACCCTAGCTTTACTTCTGTCCTTTGAGTTGGCTGGTCCGTGGGGGGTGGG 1920
GCAGGAGGGTGACTTAATCACCTGCAAACCACCTGCCCCCACCCCAAGAAGAGCCAGATT 1980
AGCACCGAGCTGTACCTGTCAGTCTGTCTTAGCATTATGCA TTAAGGCACCCTCTGTCTC 2040
TAATCCCTTACAGTTGTTTTTAAGACACAGTAATCACTTTAAACTTCCATGAAATCTGTC 2100
TTCCACCACAGCACCCTGGGAGAGAAAAACATGCTAAGCGTGATGGTCTTGGCTAAGTAA 2160
CTCCTTAAAGCCAATAGCA GTGGCAGTCTGCACAGAAGAAAAATCCCAAGTCGTTCTGTA 2220
ACTTAGAGACACCGGAGAATTTTGAAAGAACAAAAACCATGAAGACAGCACTTCAGATCC 2280
TCCATCAGGACTCTGGTGAACACGTCAGTCTTTGGCGAACTTAGTGGACTTAATTTGTAT 2340
ATGTTCTCCAGTTAGATCAGACTCTATCTGTGGCCTTGTTCTTCATTTCAGTGTTAATCA 2400
GCTAAAACAGCAGTTGTTGCTATGATGTGTGAGTGAACATAAGCCACTGCCTGGCCTTTT 2460
TTCTTCAGAGGGTGTCGTCTTTTTCGCTATATTAGACTTTG CAGTATGCCCAG 2513 )©( معمات تيع رقم )0( قاعدة مزدوجة YAYS © خض له الطول الاح مزدوجة التضاريس: خطي mRNA JNA 6 3d النوع 5 لقان لمي: نا le )الكائن الحي: فار ون Saal 51.12 الفردية: خط < ي A < “or ل SL12.3 الخلية 5112.4 و eH المصدر المباشر: : 1 )نسيلة Vial, وصف التتابع بتتابع (—=
CAGCCTGGTTAAGTCCAAGCTGGGTGATCTGTAAGACAGTGACTGAGTATGGATCATTTG 60
AACGAGGCAACT CAGGGGAAAGAACATTCAGAAATGTCTAACAATGTGAGTGATCCGAAG 120
GGTCCACCCGCCAAGATTGCCCGCCTGGAGCAGAACGGGAGCCCTCTAGGAAGAGGAAGG 180
CTTGGGAGCACAGGTGGAAAGATGCAGGGAGTGCCTTTAAAACACTCGGGCCATCTCA TG 240
AAAACCAACCTTAGGAAAGGAACCATGTTACCAGTTTTCTGCGTGGTGGAACATTATGAA 300
AACGCCATTGAGTATGATTGCAAGGAGGAGCACGCGGAATTTCTATTGGTGAGAAAGGAT 360
ATGCTTTTCAACCAGCTGATAGAGATGGCGTTGCT GTCTCTAGGCTATTCACACAGCTCT 420
GCTGCCCAAGCCAAAGGGCTCATCCAGGTTGGGAAGTGGAATCCAGTTCCACTGTCGTAT 480
GTGACAGATGCCCCTGATGCCACGGTGGCAGACATGCTTCAAGATGTGTATCATGTGGTC 540
ACCCTCAAAATT CAGTTACACAGTTGCCCTAAACTAGAAGACTTGCCTCCTGAACAATGE 600
TCGCACACCACAGTAAGGAATGCTCTGAAGGACTTACTGAAAGATATGAACCAGAGTTCG 660
TTGGCCAAGGAGTGCCCCCTTTCACAGAGCATGATCTCCTCCATTGTGAACAGCACGT AC 720
TATGCAAATGTCTCAGCAGCAAAATGTCAAGAATTTGGAAGGTGGTACAAACATTTCAAG 780
AAGACAAAGGATATGATGGTTGAGATGGATAGTCTGTCTGAACTATCCCAGCAAGGTGCC 840
AACCACGTCAATTTTGGCCAGCAGCCTGTCCCAGE AAACACAGCTCGAGCAGCCTCCATCC 900 yoy
CCTGCGCCCAGCTCTCACGGCAGTCAGCCCTCTGTCCGGACCCCTCTTCCGAACCTGCAC 960
CCTGGGCTTGTGTCAACACCGATCAGTCCTCAGCTGGTCAACCAACAGCTGGTGATGGCT 1020
CAGTTGCTGAAC CAGCAGTATGCAGTCAACAGACTCTTAGCCCAGCAGTCCTTAAACCAA 1080
CAGTACTTGAACCACCCTCCCCCTGTCAGTAGGTCTATGAACAAGCCTTTGGAGCAGCAA 1140
GTTTCCACAAACACGGAGGTCTCTTCTGAAATCTACCAGTGGGTGCGGGATGAACTGA AA 1200
CGAGCCGGAATCTCACAGGCAGTATTTGCACGCGTGGCTTTTAACCGAACTCAGGGATTG 1260
CTTTCTGAAATCCTCCGAAAGGAAGAGGACCCCAAGACTGCATCCCAGTCTCTGCTGGTA 1320
AACCTTCGGGCTATGCAGAATTTCTTACAGTTGCC GGAAGCCGAAAGAGACCGGATATAC 1380
CAGGATGAGAGGGAAAGGAGCTTGAACGCAGCCTCAGCCATGGETCCTGCCCCGCTECTG 1440
AGCACACCACCCAGCCGCCCTCCCCAGGTGAAAACAGCTACCCTTGCCACTGAGAGAAAT 1500
GGGAAGCCAGAG AACAATACTATGAACATTAATGCCTCCATTTATGACGAGATTCAGCAG 1560
GAAATGAAGCGTGCTAAAGTGTCCCAAGCACTGTTTGCAAAGGTTCEGCCGCCACAAANAGC 1620
CAGGGATGGCTGTGTGAGCTGTTGCGCTGGAAAGAAGATCCTTCTCCAGAAAACAGGA CC 1680
CTGTGGGAGAACCTGTCGATGATCCGAAGATTTCCCAGTCTGCCCAGCCGAGCGCGAGTG 1740
CCATCATATGAGCAGGAGAGCAATGCTGTGCATCACCATGGCGACAGACCTCCCCACATC 1800
ATCCACGTTCCAGCAGAACAGATTCAGCAGCAGCA ACAGCAGCAGCAGCAACAGCAGCAG 1860
CAGCAGCAGCCACCGCCGCCACCGCCGCAGCCACAGCCACAGCCCCAGGCAGGLCCCCAGT 1920
CTCCCCCCACGGCAGCCCACCGTGGCCTCCTCCGCGGAGTCCGATGAGGAAAACCGGCAG 1980
AAGACCAGGCCA CGAACCAAAATTTCCGTGGAAGCCCTGGGGATCCGCGCCCGAATAAGC 2040
CTAAGCCTCAAGCAGCATATTTGATAGTCTGGCGTAACCATCATCGAGATCTGCAGCATC 2100
CTGAAGCGGCGCAATATGCTCACTGGCTACCTGCATCAGGCTTTTTTTTGTTTCTCCC GC 2160
CTCCCGGATCTGCGCCCGAATAAGCCTCAAGCAGCATATTTGATAGTCTGGCGTAACCAT 2220
CATCGAGATCCTTCAGAGTTTCATCCAAGATGTGGGCCTGTACCCAGATCGAAGAGGCTAT 2280
CCAGACTCTGTCTGCACAGCTGGACCTCCCGAAGT ACACCATCATCAAGTTCTTTCAGAA 2340
CCAGCGGTACTACCTTAAGCACCATGGCAAGCTGAAGGACAACTCCGGCTTCCAGGTGGA 2400
TTGTGGCCGAGTACAAAGATGAGGAGTTGCTTAAGGATTTGGAAGAGAGCGTCAGGATAA 2460
AAACGCCAACAC CCTTTTCTCAGTGAAACTAGAGGAAGAGCTGTCGGTGGAAGGGAGCAC 2520
AGACGTTAATGCCGACTTGAAAGACTGAGAGAACAGTATTCTTTTCAGCCACACCACCGG 2580
TATTTCTAACAACATGAGAGTCCACCTTGTGTTCACTCAGACAAACCTTCATTGTTTA TT 2640
NNNNNNNNNNGTTGGCCAATTTGGCCAATGAATCTTCGGAAACTTGCACAAACAGGAAGG 2700
AAGTTGGAAGGACAGGACAGCCAGCACTCAAGGTTTTACTGTGTTTTCCAARAACTGCTTG 2760
GCAGCCCCGGGTGAAGCGTCAAGGACTGTTTGGTA GAATTTGTGTTCAAGGGCTGCACCC 2820
AGGTGTTGTACCCTGTCAGCATGATACCAGAAATTGGTTTTCCTTTTGATTATTATTATT 2880
CTGGAGCCTCAAATAAGCATTAAATCTTCTGTGGATTGTATTGCCTTTTCTTTAGTAACT 2940
TCTTGTAATCCC GCCACACATGCTTTGGAAACTGGCCCCTTATTTTAAAGAGAAARAAGAA 3000
AAAAAAANAGAGAGAGAGAGTTTGTTACTCGATTGTATGTTAAAAAAAAGAACTATAGAC 3060
TGTGGAATGCAGTTTAAAGATGACATATGCCAACAAATGCCTTIGTATTGTATGGCACT GC 3120
CGTAATTAAAATTTGTTTTTTTATTTTGGAAATAAAAGTTCACTGTAATTTTTTTCATCC 3180
TCATTATTACATGATTTTTTTTTTTAAGGAAAAGAAAATGTGAAACACAATTTAGTCCTT 3240
GTTATTTATTTGTAGCTCCTGCAGCATCATGTCAT AATTAAGTTTTTTGGAGATTTCTGT 3300
TAAATGTAATGTTGCTTTCCCATCCTGATTTCCTTTCTATTTATAACTGTATTTTGATGG 3360
GCAGTAAAACAAAGTGTCTTARAAGTTTTAAATAGAGAAAAATGTGCTTTACACAGTTGC 3420
CTATAAAAAGTC TATGTTATCCAAGCAATTCACTCTAGAAGCTTCGGTCTCGTTGTTGTA 3480
TGCAATTTTTACTATCATGCAAATAAGCTTAGGTAAATAAAACTAATAGATCACCTTAGA 3540
AAATTATGCAATTAATGTGAAAATAATTGATGTTTGCAATGTGTCTTCCTTTGGTTTA CA 3600
ATCAATTTTAAAGCGACATCTGTATAAAGTTTCTGTATAAAGCGTGTATTTCTTTTTTATG 3660
AGTTTATGGCTATGAAAACACCAGCTATTTTGTTACAGGGGTACCGAGCTCAGTGTATCA 3720
CAGTTTTCTTTATGCAGAAATGTGCTGATTAGGAG TGCTTATTGACTGTAAGTACACGAT 3780
TAAAATTGTTTGTATGGTAAAAAAAAAAAADNADAANADA 3819 (£) “ا للتتابع رقم (0) قاعدة مزدوجة ١١87 : dou A =
WE rn] التضاريس: خطي mRNA ب) النوع 30 5 مادا إلى eb] المصدر 2 فأر or خ)الكائن 3الفصيلة: ثري جاكسون 8112 SER Fai العزلة CUES SL12.3 1لانوح الخلية 8112.4 و
Yet sa) وصف التتابع بتتابع رقم:؛ (—o
CCTAAC TGACAAAGTGCGGAGAGTAAGGTGTGCGCAAACAGGACAAGTTGGGTCATGGGG 60
AGTTTCAAAGGACATGCTCTCCCTGGCGAGTTTCTTCTTCGCCATGGGCTTTTGGTGGACT 120
ATGAAGAACATCCTGAAATCTGTCTACAAAAGGCAARACTCGAACCTGCTAC CTTAACTCT 180
AAAACATTATTACGTCGGACAGAGATTTGGGAAGGAGTTGTTGTGCTTTTAATGTCTCTC 240
ACTGGTATAGCTGGTGAACAGTTTATCTCAGGAGGACCTGCCTTGATCTTGCATAAAGAT 300
GGCCAGTGGAACCAGATCCTGGEGCTGGCA TCACACAACCATGTACTTATTCTTTGGGCTA 360
CAGGGTATAACCCAAATCATATGTTTCACTACTAATGTACTTCCACTTTCCTCAAGCAAG 420
TTAATGTTATCAATTGCCATCTTTGTGGAGACATTTATGTTCTACAACCACACACACGGT 480
CGGGAA ATGATTGACATTTTTGTACACCAACTTCTGGTCTTCGTTGGCACATTTTCGGGT 540
CTGGTTGCCTTCTTGGAGTTCCTCEGTAAAGAACAACGCACTTCTGGAGCTCCTGCGGTGC 600
AGTCTCCTCATGTTTCAAGGAACCTGCTTCTGGCAGATGGECGTTTGTGCTG TACCCCCCA 660
TGTGGAAGTGCTACATGGAACCTGTCAGATATTCAAAATAAAATGTTTCTCTCAATGTGC 720
TTTTGCTGCGCATTATGCATCAATCCTTATCCTCATTGGAGTAAAATATGCTTTGGCCAAC 780
TGGTTAGTCAAGTCTAGGCTGAGGAAGGG CTGCACCTCAGAAGTTGGACTCCTGAAGCAT 840
GCTGACCGTGAGCAAGAATCAGAAGAAGAAGTATGATCTTGAAGTCTTTCTTGATAAGCC 900
TTCTCCCTTTGCGTTGCCTTTGTTCATGGCTTTGTTTCCTGACCTCTGGTCTCAAGAACA 960
CTTGTC TGAGGCTGACTCCATGCTGTTTGTACTTCCAGTTTTGTTAAAGTGTTGGACTTT 1020
AAGTATCTTACTTTCAGCTCTGAAAGAACCATGAGTGATAAATTCACTTTTTACACTGTG 1080
CATGCCATGTAATTCAAGACCAATCATAATTGTTTTCCAAAGTTTAGTTTC GTGTCCATT 1140
TATTAAAAATATTTTTTTTTATTTTCCGGGTAGATACCTTCAA 1183 )*( 48 See 1) |الطول : 7799 قاعدة مزدوجة A os
WE ri التضاريس: خطي.
MRNA لنوع الجا ملاتا إلى 5 c. ج المصد ساسي فار oy CASA جاكسون 6 SN 3)الفصيلة: SL12 SER العزلة الفرديةة 1 ا ل
SL12.3 الخلية 81.12.4 و el : المصدر } باشر : ١ )نسيلة ° وصف التتابع بتتابع رقم: (—
GGGTGETCTTTCCTCATCGCTGC CCTGGCCTCGGTTATGGCCGGCCTTTGCTATGCTGAAT 60
TTGGGGCCCGAGTACCCAAGACTGGATCTGCGTATCTATACACTTACGTCACGGTCGGAG 120
AGCTGTGGGCCTTCATCACTGGCTGGAATCTCATCCTGTCATATGTCATAGGTACGTCCA 180
GTGTCGCAAGAGCATGGAGTGGCACCTTTGACGAACTTCTTAATAAACAGATTGGCCAGT 240
TTTTCAAAACGTACTTCAAAATGAATTACACTGGTCTGGCAGAGTATCCAGACTTCTTTG 300
CCGTECTGCCTTGTATTACTCCTGGCAGGTCTTTTATCTTTTGGAG TAAAAGAGTCTGCTT 360
GGGTCGAATAAATTTTTACAGCTATTAATATCCTGGTCCTTCTCTTTGTCATGGTGGCTGG 420
GTTTGTGAAAGGAAATGTGGCTAACTGGAAGATCAGTGAAGAGTTTCTCAAAAATATATC 480
AGCAAGTGCTAGAGAACCACCT TCTGAGAACGGAACAAGCATCTACGGGGCTGGCGGCTT 540
TATGCCCTATGGCTTTACAGGGACGTTGGCTGGTGCTGCAACGTGCTTTTATGCCTTTGT 600
GGGCTTTGACTGCATTGCAACAACCGGTGAAGAGGTTCGGAATCCACAAAAGGCGATCCC 660
CATCGGAATAGTGACGTCCTTACTTGTCTGCTTTATGGCTTACTTTGGGGTTTCTGCAGC 720
TTTAACGCTTATGATGCCTTACTACCTCCTGGATGAGAAAAGTCCACTCCCAGTCGCGTT 780
TGAGTATGTCAGATGGGGCCCCGCCAAATACGTTGTCGCAGCAGG 00010100600 840
ATCAACAAGTCTTCTTGGATCCATTTTCCCAATGCCTCGTGTAATCTATGCTATGGCGGA 200
GGATGGGTTGCTTTTCAAATGTCTAGCTCAAATCAATTCCAAANACGAAGACACCAGTAAT 960
TGCTACTTTGTCATCGGGTGCA GTGGCAGCTGTGATGGCCTTTCTTTTTGACCTGAAGGC 1020
CCTCGTGGACATGATGTCTATTGGCACCCTCATGGCCTACTCTCTGGTGGCAGCCTGTGT 1080
GCTTATTCTCAGGTACCAACCTGGCTTGTGTTACGAGCAGCCCAAATACACCCCTGAGAA 1140
AGAAACTCTGGAATCATGTACCAATGCGACTTTGAAGAGCGAGTCCCAGGTCACCATGCT 1200
GCAAGGACAGGGTTTCAGCCTACGAACCCTCTTCAGCCCCTCTGCCCTGCCCACACGALCA 1260
GTCGGCTTCCCTTGTGAGCTTTCTGGTGGGATTCCTGGCTTTCCT CATCCTGGGCTTGAG 1320
TATTCTAACCACGTATGGCGTCCAGGCCATTGCCAGACTGGAAGCCTGGAGCCTGGCTCT 1380
TCTCGCCCTGTTCCTTGTCCTCTGCGCTGCCGTCATTCTGACCATTTGGAGGCAGCCACA 1440
١٠١
GAATCAGCAAAAAGTAGCCTTC ATGGTCCCGTTCTTACCGTTTCTGCCGGCCTTCAGCAT 0
CCTGGTCAACATTTACTTGATGGTCCAGTTAAGTGCGGACACTTGGATCAGATTCAGCAT 1560
CTGGATGGCGCTTGGCTTTCTGATCTATTTCGCCTATGGCATTAGACACAGCTTGGAGGG 1620
TAACCCCAGGGACGAAGAAGACGATGAGGATGCCTTTTCAGAAAACATCAATGTAGCAAC 1680
AGAAGAAAAGTCCGTCATGCAAGCAAATGACCATCACCAAAGAAACCTCAGCTTACCTTT 1740
CATACTTCATGAAAAGACAAGTGAATGTTGATGCTGGCCCTCGGT CTTACCACGCATACC 1800
TTAACAATGAGTACACTGTGGCCGGATGCCACCATCGTGCTGGGCTGTCGTGGGTCTGCT 1860
GTGGACATGGCTTGCCTAACTTGTACTTCCTCCTCCAGACAGCTTCTCTTCAGATGGTGG 1920
ATTCTGTGTCTGAGGAGACTGC CTGAGAGCACTCCTCAGCTATATGTATCCCCAAAACAG 1980
TATGTCCGTGTGCGTACATGTATGTCTGCGATGTGAGTGTTCAATGTTGTCCGTTATTAG 2040
TCTGTGACATAATTCCAGCATGGTAATTGGTGGCATATACTGCACACACTAGTAAACAGT 2100
ATATTGCTGAATAGAGATGTATTCTGTATATGTCCTAGGTGCGCTGGGGAAATAGTGCTGG 2160
TTTCTTTATTAGGTATATGACCATCAGTTTGGACATACTGAAARTGCCATCCCCTGTCAGG 2220
ATGTTTAACAGTGGTCATGGGTGGGGAAGGCGATAAGGAATGGGCA TTGTCTATAAATTGT 2280
AATGCATATATCCTTCTCCTACTTGCTAAGACAGCTTTCTTAAACGGCCAGGGAGAGTGT 2340
TTCTTTCCTCTGTATGACAAGATGAAGAGGTAGTCTGTGGCTGGAGATGGCCAATCC 2397 chen (1) تتا ركم )( VE: Joa == حمض أميني ال : منتوجة التضاريس: خطي (ب) النوع الجزئ ببتيد (ه) وصف التتابع بتتابع رقم: 1 Lys Gly His Ala Asp Arg Glu Gln Glu Ser Glu Glu Glu Val 5 1
Claims (1)
- ٠١ “عناصر الحماية حمض al معزول ومُتقئ مكون من polypeptide عديد ببتيد -١ ١ تحمل شفرته الجينات القي تم TA أميني من بروتين Y ( ¢ إختيارها من مجموعة مكونة من 14,0 ) تتابع مناظر رقم Y ١٠ر7 « (seq.id.No. 3) ( © تتابع مناظر رقم ( Y+,0 ¢ (seq.id.No. 4) ¢ (YB) تتابع مناظر ( ١9,4 و (seq.id No.2) ) ١ تتابع متناظر رقم ( ° .(seq.id.No. 3) 1 ؛ حيث الشسفرة ١ وفقاً لعنصر الحماية polypeptide عديد الببتيد —=Y ١ (د ن أ ) ورم DNA المذكورة تحمل بواسطة T لبروتين الخلية Y .( T lymphoma ) T لمفاوي a حيث أن +» ١ لعنصر الحماية Ls, polypeptide عديد الببتيد —Y ١ تحمل بواسطة تتابع yy SM الشفرة لتتابع الحمض الأميني - " الحممض النووي المبين في الشكل رقم ا Y أن Some) وفقاً لعنصر الحماية polypeptide 4؛4- عديد الببتيد ١ الشفرة لتتابع الحمض الأميني المذكور تحمل بواسطة الحمض v AY النووي المبين في الشكل رقم ¥٠١ حيث أن oY وفقاً لعنصر الحماية polypeptide عديد الببتيد —0 ١ الشفرة لتتابع الحمض الأميني المذكور تحمل بواسطة تتابع 0 XY و الحمض النووي المبين في الشكل رقم حيث أن oY وفقاً لعنصر الحماية polypeptide عديد الببتيد -+ ١ الشضفرة لتتابع الحمض الأميني المكور تحمل بواسطة تتابع Y YY الحمض النووي المبين في الشكل رقم r a
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US50968490A | 1990-04-13 | 1990-04-13 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SA92120348B1 true SA92120348B1 (ar) | 2004-01-24 |
Family
ID=24027673
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SA92120348A SA92120348B1 (ar) | 1990-04-13 | 1992-01-22 | أنسال ( كلونات) لخلايا cdnaلمفاوية جديدة |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5312733A (ar) |
| EP (1) | EP0527813B1 (ar) |
| JP (1) | JPH05506989A (ar) |
| KR (1) | KR100212371B1 (ar) |
| AT (1) | ATE141105T1 (ar) |
| AU (1) | AU664535B2 (ar) |
| CA (1) | CA2080018C (ar) |
| DE (1) | DE69121240T2 (ar) |
| DK (1) | DK0527813T3 (ar) |
| ES (1) | ES2093100T3 (ar) |
| FI (1) | FI108037B (ar) |
| GR (1) | GR3021478T3 (ar) |
| HK (1) | HK1006726A1 (ar) |
| IE (1) | IE75903B1 (ar) |
| IL (1) | IL97775A (ar) |
| NO (1) | NO307341B1 (ar) |
| NZ (1) | NZ237669A (ar) |
| PT (1) | PT97355B (ar) |
| RU (1) | RU2116346C1 (ar) |
| SA (1) | SA92120348B1 (ar) |
| WO (1) | WO1991016430A1 (ar) |
| ZA (1) | ZA912489B (ar) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6784163B1 (en) * | 1990-04-13 | 2004-08-31 | Macleod Carol L. | Inhibition of cationic amino acid transporter protein and uses thereof |
| WO1994004567A1 (en) * | 1992-08-21 | 1994-03-03 | La Jolla Cancer Research Foundation | A matrix-associating dna-protein, nucleic acids encoding the same and methods for detecting the nucleic acids |
| US7138500B1 (en) * | 1993-05-07 | 2006-11-21 | Immunex Corporation | Antibodies to human 4-1BB |
| US7211259B1 (en) | 1993-05-07 | 2007-05-01 | Immunex Corporation | 4-1BB polypeptides and DNA encoding 4-1BB polypeptides |
| WO1994026290A1 (en) * | 1993-05-07 | 1994-11-24 | Immunex Corporation | Cytokine designated 4-1bb ligand and human receptor that binds thereto |
| US5866329A (en) * | 1995-09-27 | 1999-02-02 | Demetriou; Achilles A. | Method and probe for detection of gene associated with liver neoplastic disease |
| US5861248A (en) * | 1996-03-29 | 1999-01-19 | Urocor, Inc. | Biomarkers for detection of prostate cancer |
| US6627199B1 (en) * | 1999-07-09 | 2003-09-30 | Amgen Inc | Isolation, identification and characterization of tmst2, a novel member of the TNF-receptor supergene family |
| US20030096355A1 (en) * | 1999-07-09 | 2003-05-22 | Ke Zhang | Isolation, identification and characterization of ymkz5, a novel member of the TNF-receptor supergene family |
| CA2381284A1 (en) * | 1999-08-04 | 2001-02-15 | Amgen Inc. | Fhm, a novel member of the tnf ligand supergene family |
| WO2001010908A1 (en) * | 1999-08-04 | 2001-02-15 | Amgen Inc. | Ntr3, a member of the tnf-receptor supergene family |
| AU2002337442A1 (en) * | 2001-09-24 | 2003-04-07 | University Of Aarhus | Novel compositions and methods for diagnosis and treatment of lymphoma and leukemia |
| EP1913401A4 (en) * | 2005-08-03 | 2009-11-18 | Astrazeneca Ab | METHOD FOR IDENTIFYING AN AGENT THAT MODULATES TRANSPORTATION OF ARGININE IN A CHONDROCYTE |
| CA2629532C (en) | 2005-11-18 | 2016-08-09 | University Health Network | Method of expanding double negative t cells |
| KR101790647B1 (ko) * | 2009-06-10 | 2017-10-26 | 스티븐 사니그 리서치 인스티튜트 리미티드 | 표현형적 유연성을 나타내는 세포 제조 방법 |
-
1991
- 1991-04-03 NZ NZ237669A patent/NZ237669A/xx unknown
- 1991-04-04 IL IL97775A patent/IL97775A/en not_active IP Right Cessation
- 1991-04-04 ZA ZA912489A patent/ZA912489B/xx unknown
- 1991-04-11 US US07/686,322 patent/US5312733A/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-04-12 KR KR1019920702504A patent/KR100212371B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1991-04-12 JP JP91508037A patent/JPH05506989A/ja active Pending
- 1991-04-12 AT AT91908417T patent/ATE141105T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-04-12 AU AU77457/91A patent/AU664535B2/en not_active Ceased
- 1991-04-12 PT PT97355A patent/PT97355B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-04-12 DK DK91908417.8T patent/DK0527813T3/da active
- 1991-04-12 CA CA002080018A patent/CA2080018C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-04-12 RU SU5053186/13A patent/RU2116346C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1991-04-12 WO PCT/US1991/002518 patent/WO1991016430A1/en active IP Right Grant
- 1991-04-12 EP EP91908417A patent/EP0527813B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-04-12 IE IE125091A patent/IE75903B1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-04-12 DE DE69121240T patent/DE69121240T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-04-12 ES ES91908417T patent/ES2093100T3/es not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-01-22 SA SA92120348A patent/SA92120348B1/ar unknown
- 1992-10-08 NO NO923918A patent/NO307341B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-10-09 FI FI924575A patent/FI108037B/fi not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-01-11 US US08/002,999 patent/US5440017A/en not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-10-24 GR GR960402837T patent/GR3021478T3/el unknown
-
1998
- 1998-06-23 HK HK98106035A patent/HK1006726A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE911250A1 (en) | 1991-10-23 |
| PT97355A (pt) | 1991-12-31 |
| FI108037B (fi) | 2001-11-15 |
| EP0527813B1 (en) | 1996-08-07 |
| IL97775A (en) | 1998-04-05 |
| NO923918D0 (no) | 1992-10-08 |
| AU7745791A (en) | 1991-11-11 |
| IL97775A0 (en) | 1992-06-21 |
| PT97355B (pt) | 1998-08-31 |
| IE75903B1 (en) | 1997-10-08 |
| ES2093100T3 (es) | 1996-12-16 |
| KR100212371B1 (ko) | 1999-08-02 |
| FI924575A (fi) | 1992-10-09 |
| US5440017A (en) | 1995-08-08 |
| US5312733A (en) | 1994-05-17 |
| AU664535B2 (en) | 1995-11-23 |
| JPH05506989A (ja) | 1993-10-14 |
| RU2116346C1 (ru) | 1998-07-27 |
| NZ237669A (en) | 1992-08-26 |
| CA2080018C (en) | 2003-10-14 |
| ZA912489B (en) | 1992-01-29 |
| EP0527813A4 (en) | 1993-05-05 |
| FI924575A0 (fi) | 1992-10-09 |
| DE69121240D1 (de) | 1996-09-12 |
| NO307341B1 (no) | 2000-03-20 |
| ATE141105T1 (de) | 1996-08-15 |
| CA2080018A1 (en) | 1991-10-14 |
| NO923918L (no) | 1992-12-01 |
| DE69121240T2 (de) | 1997-01-09 |
| WO1991016430A1 (en) | 1991-10-31 |
| GR3021478T3 (en) | 1997-01-31 |
| EP0527813A1 (en) | 1993-02-24 |
| HK1006726A1 (en) | 1999-03-12 |
| KR930700657A (ko) | 1993-03-15 |
| DK0527813T3 (da) | 1996-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Parker et al. | Expression of v-src and chicken c-src in rat cells demonstrates qualitative differences between pp60v-src and pp60c-src | |
| SA92120348B1 (ar) | أنسال ( كلونات) لخلايا cdnaلمفاوية جديدة | |
| Perona et al. | Increased p H and tumorigenicity of fibroblasts expressing a yeast proton pump | |
| Snell | Studies in histocompatibility | |
| Peter et al. | Guanine nucleotide dissociation inhibitor is essential for Rab1 function in budding from the endoplasmic reticulum and transport through the Golgi stack. | |
| CA2092916A1 (en) | Onco-fetal gene, gene product and uses therefor | |
| Pierce et al. | BALB-and Harvey-murine sarcoma virus transformation of a novel lymphoid progenitor cell. | |
| Lamont | The chicken major histocompatibility complex in disease resistance and poultry breeding | |
| Nunn et al. | The ets sequence is required for induction of erythroblastosis in chickens by avian retrovirus E26 | |
| Swanson et al. | Abundant expression of ras proteins in Aplysia neurons. | |
| Accolla et al. | The molecular biology of MHC genes | |
| Peault et al. | Phylogenetically conserved antigen on nerve cells and lymphocytes resembles myelin-associated glycoprotein. | |
| Dasch et al. | Independent regulation of IgM, IgD, and Ia antigen expression in cultured immature B lymphocytes. | |
| Rettig et al. | Differential expression of the human Thy-1 gene in rodent-human somatic cell hybrids [corrected]. | |
| Celis et al. | Human proteins IEF 58 and 57a are associated with the Golgi apparatus | |
| CA2054725A1 (en) | Ptpase vectors, diagnostics, therapeutics and uses thereof | |
| Lau | Localization of a gene for the male enhanced antigen on human and mouse chromosomes | |
| Hanson et al. | Organization of the human HLA‐class‐II region | |
| Douglas | The theta antigen of mice and its analog in rats | |
| Kronenberg et al. | Genes, structures and function of T lymphocyte antigen receptors | |
| CN112999368A (zh) | 人源化模型进行药效评价方法的建立 | |
| Louis Jr | Genetic Analysis of the Galapagos tortoise, Geochelone nigra: taxonomic relationships among subspecies and population assignment of captive individuals | |
| Allan | The use of cell hybrids to study eukaryotic gene expression | |
| De Vouge | Characterization of Transformed Phenotype and Proteins with Enhanced Expression in v-K-Ras-Transformed Normal Rat Kidney Cells | |
| Matsuzaki et al. | Inter‐and intraspecific distribution of an antigenic epitope found in an inbred strain of the Medaka, Oryzias latipes |