Claims (14)
1. Молекула ДНК, содержащая: область, кодирующую полипептид, который представляет собой BSSL человека или ее биологически активный вариант; присоединенный к 5'-окончанию указанной области, кодирующей полипептид, участок, кодирующий сигнальный пептид, способный управлять секрецией полипептида из клеток Pichia pastoris, трансформированных указанной молекулой ДНК; операбельно-связанный с указанными кодирующими областями, определенными в (а) и (Ь), промотор метанол-оксидазы Pichia pastoris или функционально эквивалентный промотор.1. A DNA molecule comprising: a region encoding a polypeptide that is a human BSSL or a biologically active variant thereof; attached to the 5'-end of the specified region encoding the polypeptide, a section encoding a signal peptide capable of controlling the secretion of the polypeptide from Pichia pastoris cells transformed with the specified DNA molecule; operably linked to said coding regions defined in (a) and (b), the Pichia pastoris methanol oxidase promoter or a functionally equivalent promoter.
2. Молекула ДНК по п.1, в которой указанный сигнальный пептид идентичен, или существенно подобен пептиду с аминокислотной последовательностью, показанной аминокислотами от -20 до -1 в последовательности SEQ ID 2 в Перечне последовательностей. 2. The DNA molecule according to claim 1, in which the specified signal peptide is identical or substantially similar to a peptide with the amino acid sequence shown by amino acids -20 to -1 in the sequence SEQ ID 2 in the List of sequences.
3. Молекула ДНК по п.1, в которой указанный сигнальный пептид содержит сигнальный пептид инвертазы Saccharomyces cerevisiae. 3. The DNA molecule according to claim 1, wherein said signal peptide comprises a Saccharomyces cerevisiae invertase signal peptide.
4. Молекула ДНК по любому из пп. 1-3, кодирующая биологически активный вариант человеческой BSSL, в которой, по крайней мере, одна из повторяющихся единиц из 11 аминокислот, указанная в SEQ ID 1, делетирована. 4. The DNA molecule according to any one of paragraphs. 1-3, encoding a biologically active variant of human BSSL, in which at least one of the repeating units of 11 amino acids indicated in SEQ ID 1 is deleted.
5. Молекула ДНК по любому из пп. 1-4, кодирующая полипептид, обладающий BSSL-активностью и аминокислотной последовательностью, которая, по крайней мере, на 95% гомологична последовательности, соответствующей SEQ ID 3 или SEQ ID 4. 5. The DNA molecule according to any one of paragraphs. 1-4, encoding a polypeptide having BSSL activity and an amino acid sequence that is at least 95% homologous to the sequence corresponding to SEQ ID 3 or SEQ ID 4.
6. Молекула ДНК по любому из пп. 1-5, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID 3 или SEQ ID 4. 6. The DNA molecule according to any one of paragraphs. 1-5, encoding a polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID 3 or SEQ ID 4.
7. Вектор, содержащий молекулу ДНК по любому из пп. 1-6. 7. A vector containing a DNA molecule according to any one of paragraphs. 1-6.
8. Реплицируемый вектор экспрессии по п.7, который способен опосредовать экспрессию человеческой BSSL или ее биологически активного варианта в клетках Pichia pastoris. 8. The replicated expression vector according to claim 7, which is capable of mediating the expression of human BSSL or its biologically active variant in Pichia pastoris cells.
9. Вектор по п.8, который представляет собой плазмидный вектор pARC 5771 (NCIMB 40721), pARC 5799 (NCIMB 40723) или pARC 5797 (NCIMB 40722). 9. The vector of claim 8, which is a plasmid vector pARC 5771 (NCIMB 40721), pARC 5799 (NCIMB 40723) or pARC 5797 (NCIMB 40722).
10. Клетки-хозяева рода Pichia, трансформированные вектором по любому из пп. 7-9. 10. Cell hosts of the genus Pichia, transformed with a vector according to any one of paragraphs. 7-9.
11. Клетки-хозяева по п. 10, представляющие собой клетки Pichia pastoris. 11. The host cells according to claim 10, which are Pichia pastoris cells.
12. Клетки-хозяева по п. 11, представляющие собой клетки Pichia pastoris штамма GS115. 12. The host cells according to claim 11, which are cells of Pichia pastoris strain GS115.
13. Клетки-хозяева по п. 12, представляющие собой PPF-l[pARC 5771] (NCIMB 40721), GS115 [pARC 5799] (NCIMB 40723) или GS115[pARC 5797] (NCIMB 40722). 13. The host cells of claim 12, which are PPF-l [pARC 5771] (NCIMB 40721), GS115 [pARC 5799] (NCIMB 40723) or GS115 [pARC 5797] (NCIMB 40722).
14. Способ получения полипептида, представляющего собой человеческую BSSL или ее биологически активный вариант, который заключается в культивировании клеток-хозяев по любому из пп. 10-13 в условиях, когда указанный полипептид секретируется в культуральную среду, и выделении указанного полипептида из культуральной среды. 14. A method of obtaining a polypeptide representing human BSSL or its biologically active variant, which consists in culturing host cells according to any one of paragraphs. 10-13 under conditions where the specified polypeptide is secreted into the culture medium, and the selection of the specified polypeptide from the culture medium.